Diagnostico Virologico Julio Ruiz

UNMSM
FACULTAD DE FARMACIA Y
BIOQUMICA
INMUNOLOGA Y VIROLOGA
DIAGNSTICO DE LABORATORIO DE LAS
ENFERMEDADES VIRICAS
JULIO REYNALDO RUIZ QUIROZ

PROFESOR AUXILIAR DPTO. MICROBIOLOGIA
GENERALIDADES
Las pruebas vricas de laboratorio pretenden:
1) Confirmar el diagnstico identificando el agente
vrico de la infeccin
2) Seleccionar un tratamiento antivrico adecuado
3) Definir el cuadro patolgico
4) Hacer un seguimiento epidemiolgico de la
enfermedad, y
5) Educar a mdicos y pacientes.
GENERALIDADES
Mtodos de laboratorio para diagnosticar
infecciones vricas
Examen citolgico
Microscopia electrnica
Aislamiento y cultivo del virus
Deteccin de protenas vricas (antgenos y enzimas)
Deteccin de material gentico vrico
Serologa
GENERALIDADES
Muestras para diagnstico vrico
Virus patgenos habituales
Muestras para cultivo
Comentarios
Lavado nasal, hisopo de

garganta, hisopo nasal,
esputo
Los enterovirus tambin se eliminan por

las heces
Heces, hisopo rectal
Las muestras se analizan por microscopa

electrnica y deteccin de antgeno
(ELISA); los virus no se cultivan
Tracto respiratorio
Adenovirus; virus de la gripe;
enterovirus
(picornavirus); rinovirus;
paramixovirus;
virus de la rubola; VHS
Tubo digestivo
Reovirus; rotavirus; adenovirus;
virus Norwalk;
calicivirus
Exantema maculopapular
Adenovirus; enterovirus
(picornavirus)
Hisopo de garganta,
hisopo rectal
Virus de la rubola; virus del

sarampin
Orina
Exantema vesicular
Virus Coxsackie; echovirus; VHS;

VVZ
Lquido de vesculas,
raspado o hisopo,
enterovirus en heces
El diagnstico inicial del VHS y VVZ se

puede obtener con un raspado vesicular
(frotis de Tzanck)
CMV, citomegalovirus; ELISA, anlisis de inmunoabsorcion unida a enzimas; PCR, reaccin en cadena de la
polimerasa; PCR-TI, PCR con transcriptasa inversa; VHS, virus herpes simple; VIH, virus de inmunodeficiencia
humana; VVZ, virus varicela zster.
GENERALIDADES
Muestras para diagnstico vrico
Virus patgenos habituales
Muestras para cultivo
Comentarios
Sistema nervioso central (meningitis asptica, encefalitis)

Enterovirus (picornavirus)
Heces
PCR
Arbovirus (p. ej., togavirus,

bunyavirus)
Raramente se cultiva
Diagnstico mediante anlisis serolgicos
Virus de la rabia
Tejido, saliva, biopsia

cerebral
Diagnstico mediante anlisis de

inmunofluorescencia
del antgeno
VHS; CMV; virus del sarampin, virus

de la parotiditis
Lquido
cefalorraqudeo
PCR, se intenta el aislamiento del virus y del

antgeno
Orina
El CMV se puede eliminar sin enfermedad

aparente
Sangre
Se hace una deteccin del antgeno o

anticuerpo en
suero (ELISA), PCR y PCR-TI
Aparato urinario
Adenovirus; CMV
Sangre
VIH; virus de la leucemia de linfocitos
T humana;
virus de la hepatitis B, C y D
CMV, citomegalovirus; ELISA, anlisis de inmunoabsorcion unida a enzimas; PCR, reaccin en cadena de la
polimerasa; PCR-TI, PCR con transcriptasa inversa; VHS, virus herpes simple; VIH, virus de inmunodeficiencia
humana; VVZ, virus varicela zster.
CITOLOGIA
El examen citolgico de las muestras permite
elaborar un diagnstico inicial rpido de las
infecciones vricas que producen unos Efectos
Citopatolgicos (ECP) caractersticos.
Entre estos ECP observados habitualmente en las

muestras tisulares o los cultivos celulares figuran:
Modificaciones de la morfologa celular
Lisis celular
Formacin de vacuolas
Sincitios
Cuerpos de inclusin.
CITOLOGIA
SINCITIOS
Los sincitios son clulas gigantes multinucleadas formadas

como consecuencia de la fusin vrica de clulas individuales.
Formacin de sincitios provocada por el virus del sarampin.

Clulas gigantes multinucleadas (flecha) visibles en un corte histolgco de una biopsia
pulmonar de una neumona de clulas gigantes, producida por un virus del sarampin
en un nio inmunodeprimido.
CITOLOGIA
CUERPOS DE INCLUSIN
Los cuerpos de inclusin constituyen cambios histolgicos de las clulas
provocados por componentes vricos o bien alteraciones de las estructuras
celulares inducidas por los virus.
cuerpos nucleares de inclusin en ojo de buho presentes en las clulas de tejidos

infectados por citomegalovirus
CITOLOGIA
CUERPOS DE INCLUSIN
ECP inducido por VHS. Una muestra de biopsia de un hgado infectado por VHS
muestra un cuerpo de inclusin eosinoflico de Cowdry de tipo A (A) rodeado
de un halo y un anillo de cromatina marginal en la membrana nuclear.
Una clula infectada (B) presenta un ncleo condensado ms pequeo
(picntico).
ECP: efecto citopatolgico
VHS: virus del herpes simple.
CITOLOGIA
CUERPOS DE INCLUSIN
Cuerpos de Negri producidos por el virus de la rabia.
A. Un corte de cerebro de un
paciente con rabia presenta cuerpos
de Negri (flecha).
B. Imagen con aumento de otra

muestra de biopsia.
CITOLOGIA
CUERPOS DE INCLUSIN
Neurona
Cuerpos de Negri
producidos por el
virus de la rabia.
Cuerpos
de Negri
Cuerpos
de Negri
MICROSCOPIA ELECTRNICA
La microscopa electrnica no es una tcnica de laboratorio
estndar en la clnica, si bien se puede utilizar para detectar e
identificar algunos virus cuando existe un nmero suficiente de
partculas vricas.
La adicin de un anticuerpo especfico del virus a una muestra
puede hacer que las partculas vricas se agrupen, facilitando as
la
deteccin
e
identificacin
simultneas
del virus
(inmunomicroscopia electrnica).
Este mtodo es til para la deteccin de los virus entricos,
como los rotavirus, que se producen en abundancia y que tienen
una morfologa caracterstica.
Tambin se puede examinar si un tejido adecuadamente

procesado, procedente de una biopsia o una muestra clnica,
contiene estructuras vricas.
AISLAMIENTO Y PROLIFERACIN DE VIRUS

Formas de transmisin de virus
Personas
Animales: vacas (p. ej., vacuna de la viruela de Jenner),
pollos, ratones, ratas, ratones lactantes
Huevos embrionarios
Cultivos de rganos
Cultivos tisulares:
Primarias
Lneas celulares dipliodes
Lneas celulares tumorales o inmortalizadas

Crecimiento de virus en huevos embrionados
El periodo optimo de inoculacin: 5 14 das despus de la fertilizacin. Este

mtodo es actualmente usado para la propagacin del virus de la influenza

Crecimiento de virus en huevos embrionados

CULTIVO CELULAR
Utiliza tipos especficos de clulas de cultivo tisular.
Los cultivos de clulas primarias se obtienen por tratamiento de algn
rgano animal especfico con tripsina o colagenasa.
Las clulas obtenidas con este mtodo se cultivan en monocapa
(fibroblastos o clulas epiteliales) o en suspensin (linfocitos) en medios
artificiales complementados con suero bovino u otra fuente de factores de
crecimiento.
Las clulas primarias se pueden separar con tripsina, se diluyen y crecen
en nuevas monocapas (subcultivos) para convertirse en cultivos celulares
secundarios.
Las lneas de clulas diploides son cultivos de un nico tipo de clula con
los que se puede hacer un gran nmero de pases, aunque finito, antes de
presentar signos de senescencia o experimentar cambios significativos
en sus caractersticas.

CULTIVO CELULAR
Cultivos de clulas primarias
+ enzimas
tiempo

CULTIVO CELULAR
Subcultivos
enzimas
tiempo

CULTIVO CELULAR
Primaria
Heterogneo - muchos tipos de clulas
Ms cercanos a los animales
Problemas tcnicos
Cepa de clulas diploides
Relativamente homognea - menos tipos de clulas
Adems de los animales
Tcnicamente, menos problemas
La lnea celular continua
Immortal
Ms homognea
Genticamente raro - ms alejados de los animales
Sin complicaciones
Suspensin o monocapa

CULTIVO CELULAR
Las lneas celulares tumorales y las lneas celulares inmortalizadas,
iniciadas a partir de tumores de pacientes o por efecto de virus o
compuestos qumicos respectivamente, se componen de clulas de un
solo tipo que pueden ser sometidas a pases continuos sin envejecer.
Lnea continua de clulas

epiteliales humanas (HeLa)

CULTIVO CELULAR
Las clulas primarias de rion de mono son muy adecuadas para
llevar a cabo el aislamiento del virus de la gripe, paramixovirus,
muchos enterovirus y algunos adenovirus.
Las clulas diploides fetales humanas, que generalmente son
fibroblastos, permiten el crecimiento de un amplio abanico de
virus (p. ej., VHS, VVZ, CMV, adenovirus, picornavirus).
Las clulas HEp-2, una lnea continua de clulas epiteliales

derivada de un cncer humano, son excelentes para aislar el virus
respiratorio sincitial, los adenovirus y los VHS.
Muchos virus con importancia clnica se pueden aislar, al menos,
con alguno de estos cultivos celulares.

DETECCIN VRICA
Un virus se puede detectar e identificar inicialmente mediante la
observacin de los ECP por l inducidos en la monocapa celular
o bien mediante tcnicas de inmunofluorescencia o de anlisis
genmico del cultivo celular infectado.
Por ejemplo, un nico virus infecta, se disemina, y destruye las
clulas circundantes (placa).
El tipo de cultivo celular, las caractersticas de los ECP y la
rapidez del crecimiento vrico se pueden utilizar para identificar
inicialmente muchos virus clnicamente importantes.
Este planteamiento de la identificacin de los virus es parecido
al que se utiliza en la identificacin de bacterias, que se basa en
la proliferacin y la morfologa de las colonias en medios
diferenciales selectivos.

DETECCIN VRICA
Efectos Citopatolgicos de los virus

DETECCIN VRICA
ECP de una infeccin

por VHS.
A. Cultivo de clulas
Vero (estirpe celular de
rion de mono verde
africano) no infectadas.
B. Imagen de clulas Vero

infectadas por VHS-1 en la que se
aprecian clulas redondeadas,
clulas
multinucleadas
y
desaparicin de la monocapa.

DETECCIN VRICA
EN QU CASOS NO SE PUEDE USAR LA CITOLOGA?
Virus que
PARA ESTOS USAR

Serologa
Deteccin de genomas o antgenos vricos
Crecen lentamente
No crecen en absoluto
No provocan ningn ECP en las lneas celulares
Suponen un riesgo para el personal de laboratorio.
Las propiedades vricas caractersticas se pueden utilizar

para identificar virus:
Interferencia heterloga Virus de la rubola impide la multiplicacin

de los picornavirus
Hemadsorcin
Hemaglutinacin.
Inhibicin de la hemaglutinacin (IH).

DETECCIN VRICA
Algunos virus poseen HEMAGLUTININA (glucoprotena
vrica) que aglutina los hemates de determinadas
especies animales en la superficie de la clula infectada,
a este fenmeno se conoce como HEMADSORCIN
virus de la gripe, virus paragripal, virus de la parotiditis y togavirus

DETECCIN VRICA
HEMADSORCIN
Adicionar hematies

DETECCIN VRICA
Cuando estos virus se liberan en el medio de cultivo celular, se
pueden detectar gracias a la aglutinacin de los hemates, un
proceso denominado HEMAGLUTINACIN.
La cepa de virus se puede identificar por medio de anticuerpos

especficos que bloquean la hemaglutinacin, a esto se le conoce
como INHIBICIN DE LA HEMAGLUTINACIN (IH).
Un mtodo innovador de deteccin del virus del herpes simple

emplea clulas de cultivo tisular modificadas genticamente que
expresan el gen de la -galactosidasa y adquieren una coloracin
azulada al ser infectadas por el VHS (sistema ligado a enzimas
inducible por virus).

DETECCIN VRICA
HEMAGLUTINACIN
GR

DETECCIN VRICA
1:8
HEMAGLUTINACIN: Mtodo
1:2
1:2
1:2
1:2
1:2
virus
Dilucin serial
8
16
32
64
128
Mezclar con
glbulos rojos
vista lateral
vista
superior
Ttulo = 32 HA unidades/ml
256

DETECCIN VRICA
HEMAGLUTINACIN: virus influenza
TTULO
VIRUS
DILUCIN

DETECCIN VRICA
Los virus se pueden cuantificar mediante la determinacin
de la dilucin mayor que conserva las siguientes
propiedades (ttulo):
1. Dosis de cultivo tisular (DTCS0): ttulo de virus que

provoca efectos citopatolgicos en la mitad de las clulas de
cultivo celular.
2. Dosis letal (DL50): ttulo de virus que destruye el 50% de
un conjunto de animales incluidos en la prueba.
3. Dosis infecciosa (DI50): ttulo de virus que provoca un
sntoma identificable, la formacin de anticuerpos u otra
respuesta en el 50% de un conjunto de animales
participantes en la prueba.
Recuento de las placas producidas por diluciones de la muestra a la
dcima parte (unidades formadoras de placas).

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS DE LOS CULTIVOS
La deteccin de cualquier virus en los tejidos, LCR, sangre o lquido
vesicular del organismo hallazgo altamente significativo.
La diseminacin vrica tambin puede estar inducida por cualquier
trastorno subyacente (p. ej., otra infeccin, inmunosupresin,
estrs) no guarde relacin con los sntomas de la enfermedad.
Otros virus pueden eliminarse de forma intermitente ...asintomticos
- unas semanas (enterovirus en las heces)
- meses o aos
- VHS o CMV en la bucofaringe y la vagina
- Adenovirus en la bucofaringe y en el tubo digestivo.
Por qu no se podra aislar un virus a partir de una muestra?

Mala manipulacin
Contenga anticuerpos neutralizantes
Se haya obtenido con anterioridad al comienzo de la diseminacin
de las partculas vricas.
DETECCIN DE PROTENAS VRICAS

Durante la multiplicacin vrica se sintetizan enzimas y otras
protenas . las que se detectan por:
Mtodos bioqumicos
Mtodos inmunolgicos
Mtodos de biologa molecular
ANLISIS DE PROTENAS
Patrones protenicos (electroforesis)
Actividades enzimticas (p. ej. Transcriptasa inversa)

Hemaglutinacin y hemadsorcin
Deteccin de antgenos (fluorescencia directa e indirecta, ensayo
inmunoabsorbente unido a enzimas, transferencia Western)

ANTICUERPOS
Los anticuerpos
instrumentos sensibles y
especficos para detectar, identificar y cuantificar virus y
antgenos vricos en muestras clnicas o cultivos
celulares (inmunohistoqumica).
Los anticuerpos monoclonales son tiles para
distinguir entre cepas vricas y mutaciones.
Los antgenos vricos de la superficie celular o el interior

de la clula se pueden detectar mediante:
Tcnicas de inmunofluorescencia
Enzimoinmunoanlisis (EIA)


Localizacin por inmunofluorescencia de clulas nerviosas

infectadas por virus del herpes simple (VHS) en una seccin cerebral
de un paciente con encefalitis por herpes.

Tcnicas de
inmunofluorescencia
Deteccin del Virus del Herpes

Simple 1 usando la tcnica del shell
vial e inmunofluorescencia
Clulas de cultivo de tejidos se cultivan

en portaobjetos en la parte inferior de un
shell vial

Enzimoinmunoanlisis (EIA)
Cromforo
Precipitado
Luz
Anticuerpos no
fijados se eliminan
por lavado
Enzimoinmunoanlisls para
cuantificacin de anticuerpos
EIA: para
antigenos
Anticuerpos no
fijados se eliminan
por lavado
Cromforo
Precipitado
Luz

El virus o el antgeno desprendido de las clulas
infectadas se puede detectar mediante:
Anlisis de inmunoabsorcin ligada a
enzimoinmunoanlisis (ELISA)
Radioinmunoanlisis (RA)
Aglutinacin con ltex (LA)
Se han comercializado algunas pruebas de deteccin

de patgenos vricos especficos.
ELISA
ELISA
ELISA
ELISA: HIV
DETECCIN DE MATERIAL GENTICO VRICO

La estructura del genoma y la secuencia gentica son
caractersticas diferenciales de la familia, tipo y cepa de virus
ANLISIS DE MATERIAL GENTICO VRICO
Patrones de digestin con endonucleasa de restriccin
Tamao del ARN segmentado de origen vrico (electroforesis)

Hibridacin del ADN del genoma in situ (citoqumica)
Transferencia de Southern y Northern
PCR (ADN)
RT-PCR
PCR a tiempo real

Cadena ramificada de ADN y otras pruebas relacionadas (ADN, ARN)
PCR: Reaccin en cadena de la polimerasa

Los patrones electroforticos del cido ribonucleico (ARN)
(virus de la gripe, reovirus) o las longitudes de los fragmentos
de restriccin resultantes de la digestin del ADN del genoma
vrico por una endonucleasa son semejantes a las huellas
dactilares genticas de estos virus.
Las distintas cepas de VHS-1 y VHS-2 se pueden distinguir
mediante el polimorfismo de la longitud de los fragmentos de
restriccin.
Los nuevos mtodos de deteccin de genomas vricos emplean

sondas genticas especficas de secuencias y mtodos de
amplificacin del ADN semejantes a la tcnica de PCR

SONDAS DE ADN
Las sondas de ADN con secuencias complementarias a regiones
especficas del genoma vrico se pueden utilizar como herramientas
sensibles y especficas para detectar un virus, igual que los
anticuerpos.
Estas sondas son capaces de detectar el virus incluso en ausencia
de multiplicacin vrica.
til para detectar:
Virus de replicacin lenta o no productivos (como el CMV y
papilomavirus humano)
Cuando no se puede detectar el antgeno vrico por medio de
pruebas inmunolgicas.

SONDAS DE ADN

HIBRIDACIN IN-SITU
HIBRIDACIN IN SITU: Permite detectar secuencias genticas

vricas especficas en muestras de biopsia de tejido fijadas y
permeabilizadas
Localizacin in situ de una infeccin por citomegalovirus
(CMV) utilizando una sonda gentica. La infeccin por CMV de los tbulos renales de un
rion se localiza con una sonda ADN especfica para CMV marcada con biotina y se
visualiza por medio de la conversin del sustrato con avidina conjugada con peroxidasa de
rbano picante de manera similar al enzimoinmunoanlisis.

TRANSFERENCIA PUNTUAL O DE SOUTHERN
El genoma vrico o los fragmentos del genoma digeridos por una
endonucleasa de restriccin y separados electroforticamente se
aplican sobre filtros de nitrocelulosa y posteriormente se detectan
mediante sondas de ADN que se hibridan con ellos.
TRANSFERENCIA NORTHERN: HIBRIDACIN DE SONDA ARN:ADN
El ARN vrico separado por electroforesis y aplicado sobre un filtro
de nitrocelulosa se puede detectar de forma similar.
Las sondas de ADN se detectan
autorradiografa, fluorescencia o EIA.
mediante
mtodos
de
En la actualidad se ha comercializado un amplio abanico de sondas

vricas y equipos de reactivos para la deteccin de virus.

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA
(Polymerase Chain Reaction: PCR)
La deteccin de genomas vricos mediante PCR, PCR con
transcriptasa inversa (PCR-TI) y otras pruebas relacionadas se
usan para deteccin e identificacin de diversos virus.
El uso de cebadores adecuados para PCR puede facilitar la
amplificacin de hasta un milln de veces de la secuencia diana
en pocas horas.
retrovirus, virus del herpes, papilomavirus y
papovavirus
CUNDO USARLA?
Para detectar secuencias latentes e integradas de virus
secuencias de virus presentes a bajas concentraciones y los
virus cuyo aislamiento resulta complejo o peligroso a partir
de cultivos celulares.
La PCR-TI utiliza una transcriptasa inversa de origen retrovrico
para convertir el ARN vrico en ADN y permite la amplificacin por
PCR de las secuencias de cido nucleco vrico.
ReaccinDE
enMATERIAL
cadena de la
polimerasaVRICO
- PCR
DETECCIN
GENTICO
Para controlar el proceso, necesitamos controlar la temperatura
Desnaturalizacin Hibridizacin
50-60C
95C
Primer Ciclo
Extensin de
La cadena
75C
2do Ciclo
95C
50 - 60C
75C
Si repetimos el ciclo, tendremos cuatro copias

Mltiples ciclos darn un incremento exponencial en
el nmero de copias


La cuantificacin de la cantidad de VIH de un paciente (carga vrica)
se lleva a cabo a travs de la PCR en tiempo real.
La concentracin de genoma de este virus en una muestra srica es

proporcional a la tasa de amplificacin por PCR del ADN genmico.
La amplificacin basada en la transcripcin emplea una transcriptasa
inversa y cebadores especficos para secuencias vricas con el
propsito de sintetizar ADN complementario (ADNc), el cual contiene
tambin una secuencia reconocida por la polimerasa de ARN
dependiente de ADN del bacterifago T7.
Una RNAsa H digiere el ARN, y la polimerasa de ARN T7 transcribe el

ADN en ARN. A continuacin, las nuevas secuencias de ARN
participan de nuevo en la reaccin para amplificar la secuencia
relevante.

Otras tcnicas son semejantes al mtodo de ELISA.
Estos abordajes emplean secuencias inmovilizadas de ADN que son
complementarias para una secuencia genmica vrica relevante y
permiten capturar el genoma vrico.
Posteriormente se unen a otra secuencia complementaria que
contiene un sistema de deteccin.
La secuencia de ADNc se puede unir a una cadena muy ramificada
de ADN, que amplifican la seal hasta hacerla detectable
Otra variacin de esta tcnica utiliza un anticuerpo capaz de

reconocer complejos ADN-ARN con el fin de capturar hbridos
formados por una sonda de ARN con el ADN vrico en un pocillo de
la placa.
A continuacin se efectan pruebas con anticuerpos marcados con
enzimas y de ELISA con el propsito de detectar la presencia del
genoma vrico.
Tcnica de amplificacin de seal basada en bDNA (branched DNA)
Tcnica de amplificacin de seal basada en bDNA (branched DNA)

TCNICAS MOLECULARES PARA VIROLOGA
TCNICA
PROPSITO
EJEMPLOS CLNICOS
PLFR
Comparacin de ADN
Epidemiologa molecular, cepas de VHS-1
Electroforesis de ADN
Comparacin de ADN
Diferencias en cepas de virus (hasta 20,000 b)
Hibridacin in situ
Deteccin y localizacin de secuencias de

ADN en tejidos
Deteccin de virus de ADN que no se estn

replicando (CMV, papilomavirus)
Transferencia puntual
Deteccin de secuencias de ADN en sol.
Deteccin de ADN vrico
Transferencia Southern
Deteccin y caracterizacin de secuencias

de ADN por su tamao
Identificacin de cepas vricas especficas
Transferencia Northern
Deteccin y caracterizacin de secuencias

de ARN por su tamao
Identificacin de cepas vricas especficas
PCR
Amplific. de muestras muy diludas de ADN
Deteccin de virus ADN
PCR-TI
Amplific. de muestras muy diludas de ARN
Deteccin de virus ADN
PCR a tiempo real
Cuantificacin de muestras muy diludas de

ADN y ARN
Cuantificacin del genoma de VIH; carga

vrica
ADN de cadena
ramificada
Amplificacin de muestras muy diludas de

ADN o de ARN
Cuantificacin de virus ADN y ARN
DSS-GEPA
Separacin de prot. por su peso molecular
Epidemiologa molecular del VHS
DSS-GEPA, electroforesis con dodecil sulfato sdico en gel de poliacrilamida; PCR, reaccin en cadena de la polimerasa;
PCR-TI, reaccin en cadena de la polimerasa por transcriptasa inversa; PLFR, polimorfismo de longitud de fragmentos de
restriccin; VHS, virus del herpes simple.
SEROLOGA VRICA
La respuesta inmunitaria humoral contiene los antecedentes de
cuadros infecciosos del paciente.
CUNDO USARLA?
Identificar los virus difciles de aislar y cultivar en cultivos
celulares
Virus que provocan enfermedades de larga duracin
PARA QU?
Para identificar un virus y su cepa o serotipo.
Determinar si se trata de una enfermedad aguda o crnica.
Definir si la infeccin es de tipo primario o reinfeccin.
Los datos serolgicos sobre una infeccin vrica los proporcionan el

tipo y el ttulo de anticuerpos y la naturaleza de las dianas
antignicas.
SEROLOGA VRICA
VIRUS DIAGNOSTICADOS POR SEROLOGA*
SEROLOGA VRICA
La seroconversin est indicada por un incremento de por lo menos
el cudruple entre el ttulo de anticuerpos del suero obtenido durante
la fase aguda de la enfermedad y el obtenido por lo menos dos o tres
semanas despus durante la fase de convalecencia.
Por ejemplo, las muestras con 512 unidades y 1023 unidades de anticuerpos
generaran una seal en una dilucin de 1:512, pero no en una de 1:1024, y en
ambas el ttulo se considerara 512. Por otro lado, las muestras con 1020 y
1030 unidades no son significativamente diferentes, pero se identificaran
como ttulos de 512 y 1024, respectivamente.
El curso crnico de la infeccin tambin puede determinarse a partir

de un perfil serolgico.
til para el diagnstico de las enfermedades vricas de evolucin
lenta (p. ej., hepatitis B, mononucleosis infecciosa producida por el
virus de Epstein- Barr).
Primera etapa: anticuerpos contra
los antgenos ms accesibles:
virin o superficie
Segunda etapa: anticuerpos contra

protenas y enzimas vrica intracelulares
SEROLOGA VRICA
IgM: Primera exposicin
IgG: Segunda exposcin
SEROLOGA VRICA
MTODOS DE ANLISIS SEROLGICO
Los anlisis serolgicos utilizados en virologa son:
Inmunofluorescencia (virus de la rabia, virus del herpes simple)
Enzimoinmunoanlisis (similar que la inmunofluorescencia)
ELISA (antgeno vrico:rotavirus; anticuerpo vrico: anti-VIH)
Transferencia de Western (confirmacin seropositividad anti-VIH)
Radioinmunoanlisis (similar a ELISA)
Fijacin de complemento (anticuerpos vricos)
Inhibicin de la hemaglutinacin (serocorversin e identif. gripe)
SEROLOGA VRICA

Los anlisis de neutralizacin e IH estudian los anticuerpos
basndose en el reconocimiento y la unin a los virus.
Los anticuerpos que recubren el virus inhiben su unin a las
clulas indicadoras.
La neutralizacin implica que el anticuerpo inhibe la infeccin y los
efectos citopatolgicos del virus en las clulas del cultivo tisular.
La respuesta de neutralizacin del anticuerpo es especfica del

virus y de la cepa.
La IH se emplea para identificacin de virus que pueden aglutinar
de manera selectiva los hemates de distintas especies animales
(p. ej., pollo, cobaya, humanos).
Los anticuerpos del suero impiden que una cantidad estandarizada

de virus se una y aglutine los hemates.
SEROLOGA VRICA
MTODOS DE
ANLISIS
SEROLGICO
ANLISIS DE
NEUTRALIZACIN,
HEMADSORCIN E INH.
HEMAGLUTINACIN
El ttulo del anticuerpo en el
suero era de 100.
ufp, unidades formadoras de
placa.
SEROLOGA VRICA

El anlisis de fluorescencia indirecta de anticuerpos y los
inmunoanlisis en fase slida como LA, ELISA y RA se utilizan
habitualmente para detectar y cuantificar el antgeno vrico y el
anticuerpo antivrico.
La prueba de ELISA se utiliza para cribar las donaciones de sangre
(excluir a las personas seropositivas para los virus de la hepatitis
B, la hepatitis C y el VIH).
El anlisis de la transferencia de Western es muy importante para

confirmar la seroconversin y, por tanto, la infeccin por VIH.
La capacidad de los anticuerpos del paciente de identificar ciertas
protenas vricas separadas mediante electroforesis, transferidas
(depositadas) a un papel de filtro (p. ej., nitrocelulosa, naylon) y
visualizadas por medio de un anticuerpo antihumano conjugado con
una enzima.
SEROLOGA VRICA
Anlisis de transferencia de Western

las protenas se separan por electroforesis con dodecil sulfato sdico
en gel de poliacrilamida (DSS-GEPA), se transfieren a un filtro de
nitrocelulosa (NC) y se incuban con antisuero especfico del antgeno o
el paciente (1. Ab) y posteriormente con suero antihumano conjugado
con enzimas (2. Ab). La conversin enzimtica del sustrato identifica el
antgeno.
SEROLOGA VRICA
(b)
(c)
SEROLOGA VRICA
Anlisis de transferencia de Western de antgenos y anticuerpos del VIH.

Estos datos ponen de manifiesto la seroconversin de un sujeto infectado por el VIH con suero
obtenido los das 0 (D0) a 30 (D30) en comparacin con un control positivo (CP) y un control
negativo (CN).
SEROLOGA VRICA
LIMITACIONES DE LA SEROLGIA
La presencia de un anticuerpo antivrico indica una infeccin
previa, pero no basta para indicar cundo se produjo la misma.
Infeccin reciente:
IgM especfica del virus
El incremento del ttulo de anticuerpos al cudruple entre el
suero de la fase aguda y la fase convaleciente, o
perfiles de anticuerpos especficos
Asimismo, en los anlisis se producen resultados falsos positivos

o falsos negativos que tambin pueden confundir el diagnstico.
La formacin de inmunocomplejos impide la deteccin de
anticuerpos por ej. en los pacientes con hepatitis B
SEROLOGA VRICA
LIMITACIONES DE LA SEROLGIA
Las reacciones serolgicas cruzadas entre los distintos virus tambin
pueden generar confusin con respecto a la identidad del agente
infectante
Ejemplo: los virus paragripal y del sarampin expresan antgenos
similares
El anticuerpo utilizado en el anlisis puede ser excesivamente
especfico (como sucede en el caso de un gran nmero de
anticuerpos monoclonales) y es posible que no reconozca otros virus
de la misma familia y d lugar a un resultado falso negativo (p. ej.,
rinovirus).
Una buena comprensin de la sintomatologa clnica y el
conocimiento de las limitaciones y las posibles dificultades de los
anlisis serolgicos facilitar el proceso de elaboracin del
diagnstico.
julioruizquiroz@gmail.com

Diagnostico Virologico Julio Ruiz

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UNMSM

JULIO REYNALDO RUIZ QUIROZ

Muestras para cultivo

Lavado nasal, hisopo de

Los enterovirus tambin se eliminan por

Heces, hisopo rectal

Las muestras se analizan por microscopa

Virus de la rubola; virus del

Virus Coxsackie; echovirus; VHS;

El diagnstico inicial del VHS y VVZ se

Muestras para cultivo

Sistema nervioso central (meningitis asptica, encefalitis)

Arbovirus (p. ej., togavirus,

Diagnstico mediante anlisis serolgicos

Tejido, saliva, biopsia

Diagnstico mediante anlisis de

VHS; CMV; virus del sarampin, virus

PCR, se intenta el aislamiento del virus y del

El CMV se puede eliminar sin enfermedad

Se hace una deteccin del antgeno o

Entre estos ECP observados habitualmente en las

Los sincitios son clulas gigantes multinucleadas formadas

Formacin de sincitios provocada por el virus del sarampin.

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