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Terapia gnica

2 Tipos de terapia gnica

La terapia gnica consiste en la insercin de elementos


funcionales ausentes en el genoma de un individuo. Se
realiza en las clulas y tejidos con el objetivo de tratar
una enfermedad o realizar un marcaje.

Terapia gnica somtica: se realiza sobre las


clulas somticas de un individuo, por lo que las modicaciones que implique la terapia slo tienen lugar
en dicho paciente.

La tcnica todava est en desarrollo, motivo por el cual


su aplicacin se lleva principalmente a cabo dentro de
ensayos clnicos controlados, y para el tratamiento de enfermedades severas o bien de tipo hereditario o adquirido. Al principio se plante slo para el tratamiento de enfermedades genticas, pero hoy en da se plantea ya para
casi cualquier enfermedad.

Terapia in vivo: la transformacin celular


tiene lugar dentro del paciente al que se le
administra la terapia. Consiste en administrarle al paciente un gen a travs de un
vehculo (por ejemplo un virus), el cual
debe localizar las clulas a infectar. El
problema que presenta esta tcnica es que
es muy difcil conseguir que un vector localice a un nico tipo de clulas diana.

Entre los criterios para elegir este tipo de terapia se encuentran:


Enfermedad letal sin tratamiento.

Terapia ex vivo: la transformacin celular se lleva a cabo a partir de una biopsia del tejido del paciente y luego se le
trasplantan las clulas ya transformadas.
Como ocurre fuera del cuerpo del paciente, este tipo de terapia es mucho ms fcil de llevar a cabo y permite un control
mayor de las clulas infectadas. Esta tcnica est casi completamente reducida a
clulas hematopoyticas pues son clulas
cultivables, constituyendo as un material
transplantable.

La causa sea un nico gen que est ya clonado.


La regulacin del gen sea precisa y conocida.

Aplicaciones
Marcaje gnico: El marcaje gnico tiene como objetivo, no la curacin del paciente, sino hacer un seguimiento de las clulas, es decir, comprobar si en
un determinado sitio del cuerpo estn presentes las
clulas especcas que se han marcado. Un ejemplo de ello sera la puesta a punto de vectores para
ensayos clnicos, permitiendo, por ejemplo, que en
ocasiones en las que un paciente de cncer (leucemia) y al que se le ha realizado un autotransplante
recae se pueda saber de donde proceden las clulas,
si son de clulas trasplantadas o si son clulas que
han sobrevivido al tratamiento.

Terapia gnica germinal: se realizara sobre las


clulas germinales del paciente, por lo que los cambios generados por los genes teraputicos seran hereditarios. No obstante, por cuestiones ticas y jurdicas, sta clase de terapia gnica no se lleva a cabo
hoy en da.

Terapia de enfermedades monognicas heredi- 3 Procedimiento


tarias: Se usa en aquellas enfermedades en las que
no se puede realizar o no es eciente la administra- Aunque se han utilizado enfoques muy distintos, en la
cin de la protena decitaria. Se proporciona el gen mayora de los estudios de terapia gnica, una copia del
gen funcional se inserta en el genoma para compensar el
defectivo o ausente.
defectivo. Si sta copia simplemente se introduce en el
Terapia de enfermedades adquiridas: Entre este husped, se trata de terapia gnica de adicin. Si tratatipo de enfermedades la ms destacada es el cncer. mos, por medio de la recombinacin homloga, de eliSe usan distintas estrategias, como la insercin de minar la copia defectiva y cambiarla por la funcional, se
determinados genes suicidas en las clulas tumorales trata de terapia de sustitucin.
o la insercin de antgenos tumorales para potenciar Actualmente, el tipo ms comn de vectores utilizados
la respuesta inmune.
son los virus, que pueden ser genticamente alterados pa1

4 VECTORES EN TERAPIA GNICA

ra dejar de ser patgenos y portar genes de otros organismos. No obstante, existen otros tipos de vectores de origen no vrico que tambin han sido utilizados para ello.
As mismo, el ADN puede ser introducido en el paciente
mediante mtodos fsicos (no biolgicos) como electroporacin, biobalstica...

potenciadores o secuencias especcas que permitan su


control bajo ciertas condiciones.

Las clulas diana del paciente se infectan con el vector (en


el caso de que se trate de un virus) o se transforman con el
ADN a introducir. Este ADN, una vez dentro de la clula
husped, se transcribe y traduce a una protena funcional,
que va a realizar su funcin, y, en teora, a corregir el
defecto que causaba la enfermedad.

4.1 Virus

Podemos distinguir dos categoras principales en vectores


usados en terapia gnica: virales y no virales.

Todos los virus son capaces de introducir su material gentico en la clula husped como parte de su ciclo de
replicacin. Gracias a ello, pueden producir ms copias
de s mismos, e infectar a otras clulas.

Algunos tipos de virus insertan sus genes fsicamente en


el genoma del husped, otros pasan por varios orgnulos
4 Vectores en terapia gnica
celulares en su ciclo de infeccin y otros se replican directamente en el citoplasma, por lo que en funcin de la
La gran diversidad de situaciones en las que podra apli- terapia a realizar nos puede interesar uno u otro.
carse la terapia gnica hace imposible la existencia de un Algo comn a la mayora de estrategias con virus es la nesolo tipo de vector adecuado. Sin embargo, pueden de- cesidad de usar lneas celulares empaquetadoras o virus
nirse las siguientes caractersticas para un vector ideal helpers, que porten los genes que les eliminamos a nuesy adaptarlas luego a situaciones concretas:
tros vectores y que permiten la infeccin.
Que sea reproducible.

4.1.1 Retrovirus

Que sea estable.


El genoma de los retrovirus est constituido por ARN de
cadena sencilla, en el cual se distinguen tres zonas claramente denidas: una intermedia con genes estructurales,
Que permita la transduccin tanto en clulas en di- y dos anqueantes con genes y estructuras reguladoras.
visin como en aquellas que no estn proliferando. Cuando un retrovirus infecta a una clula husped, introduce su ARN junto con algunas enzimas que se en Que posibilite la integracin del gen teraputico en cuentran en la matriz, concretamente una proteasa, una
transcriptasa inversa y una integrasa.
un sitio especco del genoma.
Que permita la insercin de material gentico sin lmite de tamao.

La accin de la retrotranscriptasa permite la sntesis del


Que se integre una vez por clula, para poder con- ADN genmico del virus a partir del ARN. A continuacin, la integrasa introduce este ADN en el genoma del
trolar la dosis.
husped. A partir de este punto, el virus puede permane Que reconozca y acte sobre clulas especcas.
cer latente o puede activar la replicacin masivamente.
Que la expresin del gen teraputico pueda ser re- Para usar los retrovirus como vectores vricos para terapia
gnica inicialmente se eliminaron los genes responsables
gulada.
de su replicacin y se reemplazaron estas regiones por el
Que carezca de elementos que induzcan una res- gen a introducir seguido de un gen marcador.
puesta inmune.
Del genoma vrico quedaban las secuencias LTR; y los
elementos necesarios para producir los vectores a gran
Que pueda ser caracterizado completamente.
escala y para transformar las clulas son aportados des Que sea inocuo o que sus posibles efectos secunda- des otros vectores, bien plasmdicos o bien en lneas cerios sean mnimos.
lulares especcas. En el caso de usar vectores plasmdicos, estrategias como cotransformar con varios plsmi Que sea fcil de producir y almacenar.
dos distintos que codiquen para las protenas del retro Que todo el proceso de su desarrollo tenga un coste virus, y que la transcripcin de sus secuencias est sometida a promotores eucariotas puede contribuir a minimirazonable.
zar el riesgo de que por recombinacin se generen virus
[1]
Los vectores van a contener los elementos que quera- recombinantes.
mos introducir al paciente, que no van a ser slo los ge- Actualmente se buscan estrategias como la anterior para
nes funcionales, sino tambin elementos necesarios para conseguir una mayor seguridad en el proceso. La adicin
su expresin y regulacin, como pueden ser promotores, de colas de poliadenina al transgn para evitar la trans-

4.1

Virus

cripcin de la segunda secuencia LTR es un ejemplo de 4.1.3 Virus Adenoasociados (AAV)


esto[cita requerida] .
Los retrovirus como vector en terapia gnica presentan Los AAV son virus pequeos con un genoma de ADN
un inconveniente considerable, y es que la enzima inte- monocatenario. Pueden integrarse especcamente en el
grasa puede insertar el material gentico en cualquier zo- cromosoma 19 con una alta probabilidad. Sin embargo,
na del genoma del husped, pudiendo causar efectos dele- el VAA recombinante que se usa como vector y que no
treos como la modicacin en el patrn de la expresin contiene ningn gen viral, solo el gen teraputico, no se
(efecto posicional) o la mutagnesis de un gen silvestre integra en el genoma. En su lugar, el genoma vrico recombinante fusiona sus extremos a travs del ITR (repepor insercin.
ticiones terminales invertidas), apareciendo recombinaEnsayos de terapia gnica utilizando vectores retrovira- cin de la forma circular y episomal que se predice que
les para tratar la inmunodeciencia combinada grave li- pueden ser la causa de la expresin gnica a largo plazo.
gada al cromosoma X (X-SCID) representan la aplicacin ms exitosa de la terapia hasta la fecha. As, ms Las desventajes de los sistemas basados en AAV radican
de veinte pacientes han sido tratado en Francia y Gran principalmente en la limitacin del tamao de DNA reBretaa, con una alta tasa de reconstitucin del sistema combinante que podemos usar, que es muy poco, dado
inmunitario. Sin embargo, ensayos similares fueron res- el tamao del virus. Tambin el proceso de produccin e
tringidos en los Estados Unidos cuando se inform de la infeccin resultan bastante complejos. No obstante, coaparicin de leucemia en pacientes.[cita requerida] Hasta hoy mo se trata de un virus no patgeno en la mayora de los
se conocen cuatro casos de nios franceses y uno brit- pacientes tratados no aparecen respuestas inmunes para
nico que han desarrollado leucemia como resultado de eliminar el virus ni las clulas con las que han sido tratamutagnesis por insercin de los vectores retrovirales, y dos.
todos menos uno de estos nios respondieron bien al tra- Muchos ensayos con VAA estn en curso o en preparatamiento convencional contra la leucemia. [cita requerida] En cin, principalmente en el tratamiento de msculos y enla actualidad, la terapia gnica para tratar SCID contina fermedades oculares, los dos tejidos donde el virus pasiendo exitosa en Estados Unidos, Gran Bretaa, Italia y rece ser particularmente til[cita requerida] . Sin embargo, se
Japn.[cita requerida]
estn comenzando a realizar pruebas clnicas, donde vectores basados en el VAA son utilizados para introducir
los genes en el cerebro[cita requerida] . Esto es posible porque
VAA pueden infectar clulas que no estn en estado de
divisin, tales como las neuronas.
4.1.2

Adenovirus

4.1.4 Herpes virus

Los adenovirus presentan un genoma de ADN bicatenario, y no integran su genoma cuando infectan a la clula
husped, sino que la molcula de ADN permanece libre
en el ncleo celular y se transcribe de forma independiente. Esto supone que el efecto posicional o la mutagnesis
por insercin no se dan en estos vectores, lo cual no quiere
decir que no tengan otros inconvenientes. Adems, debido al hecho de que en su ciclo natural se introducen en
el ncleo de la clula, pueden infectar tanto clulas en
divisin como clulas quiescentes.

Los herpesvirus son virus de ADN capaces de establecer


latencia en sus clulas husped. Son complejos genticamente hablando, pero para su uso como vectores tienen
la ventaja de poder incorporar fragmentos de DNA exgeno de gran tamao (hasta unas 30 kb). Adems, aunque
su ciclo ltico lo realizan en el lugar de infeccin, establecen la latencia en neuronas, las cuales estn implicadas en
numerosas enfermedades del sistema nervioso, y son por
ello dianas de gran inters.

Por ello, los ltimos vectores basados en adenovirus prcticamente han sido desprovistos de la mayor parte de sus
genes, con la excepcin de las regiones ITR (regiones repetidas de forma invertida), y la zona necesaria para la
encapsidacin.

miento, y su introduccin en estirpes celulares bien coinfectadas con virus silvestres o bien portadoras del resto
de genes del mismo implicados en la encapsidacin y replicacin, para permitir la formacin de partculas virales
recombinantes con las que realizar el tratamiento.

Los vectores herpesvricos puestos en marcha han usado


A los vectores de primera generacin se les elimin parte dos estrategias principales:
del gen E1, bsica para la replicacin, y a los de 2., se - La recombinacin homloga entre el genoma del virus
les eliminaron otros genes tempranos en el ciclo del vi- completo y el contenido en un plsmido que llevaba el
rus. En ambos casos, cuando se realiza una infeccin con transgn en la zona que codica para genes no esenciales
una concentracin elevada de virus, se produce la expre- en lo que se reere a replicacin e infeccin.
sin de otros genes que provocan una respuesta inmune - El uso de vectores con orgenes de replicacin del virus
considerable.
as como las correspondientes secuencias de empaqueta-

4 VECTORES EN TERAPIA GNICA

No obstante, el uso de vectores basados en el HSV (virus 4.2.1 ADN desnudo


del herpes simple), slo puede llevarse a cabo en pacientes que no hayan sido infectados previamente por l, pues ste es el mtodo ms simple de la transfeccin no viral.
pueden presentar inmunidad.
Consiste en la aplicacin localizada de, por ejemplo, un
plsmido con ADN desnudo. Varios de estos ensayos dieron resultados exitosos[cita requerida] . Sin embargo, la expre4.1.5 Protena pseudotyping de vectores virales
sin ha sido muy baja en comparacin con otros mtodos
de transformacin. Adems de los ensayos con plsmiLos vectores virales descritos anteriormente tienen po- dos, se han realizado ensayos con productos de PCR, y
blaciones naturales de clulas husped que ellos infectan se ha obtenido un xito similar o superior. Este logro, sin
de manera eciente. Sin embargo, algunos tipos celulares embargo, no supera a otros mtodos, lo que ha llevado a
no son sensibles a la infeccin por estos virus.
una investigacin con mtodos ms ecientes de transforLa entrada del virus a la clula est mediada por protenas macin, tales como la electroporacin, la sonicacin, o el
de su supercie externa (que pueden formar parte de una uso de la biobalstica, que consiste en disparar partculas
cpside o de una membrana). Estas protenas interaccio- de oro recubiertas de ADN hacia las clulas utilizando
nan con receptores celulares que pueden inducir cambios altas presiones de gas.
estructurales en el virus y contribuir a su entrada en la
clula por endocitosis.
En cualquier caso, la entrada en las clulas husped requiere una interaccin favorable entre una protena de la
supercie del virus, y una protena de la supercie de la
clula. Segn la nalidad de una determinada terapia gnica, se podra limitar o expandir el rango de clulas susceptibles a la infeccin por un vector. Por ello, se han
desarrollado vectores conocidos como pseudotyped, en
los cuales la cubierta vrica de protenas silvestre ha sido
remplazada por pptidos de otros virus, o por protenas
quimricas, que constan de las partes de la protena vrica necesarias para su incorporacin en el virin, as como
las secuencias que supuestamente a interaccionar con receptores especcos de protenas celulares.
Por ejemplo, el vector retrovrico ms popular para el uso
en pruebas de terapia gnica ha sido el virus de la inmunodeciencia en simios revestido con la cubierta de protenas G del virus de la estomatitis vesicular. Este vector
se conoce como VSV y puede infectar a casi todas las
clulas, gracias a la protena G con la cual este vector es
revestido[cita requerida] .

4.2.2 Oligonucletidos
El uso de oligonucletidos sintticos en la terapia gnica
tiene como objetivo la inactivacin de los genes implicados en el proceso de la enfermedad.
Existen varias estrategias para el tratamiento con oligonucletidos
Una estrategia, la terapia antisentido utiliza oligonucletidos con la secuencia complementaria al RNAm del
gen diana, lo que activa un mecanismo de silenciamiento gnico. Tambin se puede usar para alterar la transcripcin del gen defectuoso, modicando por ejemplo su
patrn de edicin de intrones y exones.
Tambin se hace uso de molculas pequeas de RNAi para activar un mecanismo de silenciamiento gnico similar
al de la terapia antisentido
Otra posibilidad es utilizar oligodesoxinucletidos como
un seuelo para los factores que se requieren en la activacin de la transcripcin de los genes diana. Los factores
de transcripcin se unen a los seuelos en lugar de al promotor del gen defectuoso, lo que reduce expresin de los
genes diana. Adems, oligonucletidos de ADN monocatenario han sido utilizados para dirigir el cambio de un
nica base dentro de la secuencia de un gen mutante.

Se ha intentado en numerosas ocasiones limitar el


tropismo (capacidad de infectar a muchas clulas) de los
vectores virales.Este avance podra permitir la administracin sistemtica de una cantidad relativamente pequea del vector. La mayora de los intentos han utilizado
protenas quimricas para la envuelta[cita requerida] , las cua- Al igual que los mtodos de ADN desnudo, requieren de
les incluan fragmentos de anticuerpos.
tcnicas de transformacin para introducirse en la clula.

4.2

Mtodos no virales

Estos mtodos presentan ciertas ventajas sobre los mtodos virales, tales como facilidades de produccin a gran
escala y baja inmunogenicidad. Anteriormente, los bajos niveles de transfeccin y expresin del gen mantenan
a los mtodos no virales en una situacin menos ventajosa; sin embargo, los recientes avances en la tecnologa de vectores han producido molculas y tcnicas de
transfeccin con eciencias similares a las de los virus.

4.3 Cromosomas articiales


La creacin de cromosomas humanos articiales (HACs)
estables es una de las posibilidades que se baraja en la
actualidad como una de las formas de introducir ADN
permanentemente en clulas somticas para el tratamiento de enfermedades mediante el uso de la terapia gnica.
Presentan una elevada estabilidad, adems de permitir introducir grandes cantidades de informacin gentica.

4.4
4.3.1

Mtodos hbridos

Lipoplexes y poliplexes

liberar su ADN cargado al citoplasma, por lo que requieren de la contransfeccin con agentes que contribuyan a
la liss del endosoma. Existen otros elementos formadores
El vector de ADN puede ser cubierto por lpidos forman- de poliplexes, como el quitosano o la polietilamina, que
do una estructura organizada, como una micela o un li- si son capaces de liberarse del endosoma.
posoma. Cuando la estructura organizada forma un complejo con el ADN entonces se denomina lipoplexe.
Hay tres tipos de lpidos: aninicos, neutros, o catinicos.
Inicialmente, lpidos aninicos y neutros eran utilizados
en la construccin de lipoplexes para vectores sintticos.
Sin embargo, estos son relativamente txicos, incompatibles con uidos corporales y presentan la posibilidad de
adaptarse a permanecer en un tejido especco. Adems,
son complejos y requieren tiempo para producirlos, por
lo que la atencin se dirigi a las versiones catinicas. stos, debido a su carga positiva, interaccionan con el ADN,
que presenta carga negativa, de tal forma que facilita la
encapsulacin del ADN en liposomas. Ms tarde, se constat que el uso de lpidos catinicos mejoraba la estabilidad de los lipoplexes. Adems, como resultado de su
carga, los liposomas catinicos interactan tambin con
la membrana celular, y se cree que la endocitosis es la
principal va por la que las clulas absorben los lipoplexes.

4.4 Mtodos hbridos


4.5 Dendrmeros
Un dendrmero es una macromolcula muy ramicada
con forma esfrica o variable. Su supercie puede ser funcional de muchas formas y de sta derivan muchas de sus
propiedades. Adems, su tamao, en la escala nano-, permite su uso en biomedicina.
En particular, es posible construir un dendrmero catinico, es decir, con carga supercial positiva. De esta forma,
interacciona con el cido nucleico, cargado negativamente, y forma un complejo que puede entrar por endocitosis
en la clula. Esto es til en terapia gnica, para introducir
genes exgenos.

Los costes de produccin son elevados, pero se estn


desarrollando tcnicas que permiten abaratarlo, puesto
Los endosomas se forman como resultado de la que se trata de una tcnica con una toxicidad muy baja,
endocitosis. Sin embargo, si los genes no pueden liberarse y su principal desventaja es a nivel productivo.
al citoplasma por rotura de la membrana del endosoma,
los liposomas y el ADN contenido sern destruidos. La
eciencia de ese escape endosomal en el caso de liposo5 Clulas diana
mas constituidos solo por lpidos catinicos es baja. Sin
embargo, cuando lpidos de ayuda (normalmente lpidos electroneutrales, tales como DOPE) son aadidos, la Las clulas diana se seleccionan en funcin del tipo de teecacia es bastante mayor. Adems, ciertos lpidos (lpi- jido en el que deba expresarse el gen introducido, y deben
dos fusognicos) tienen la capacidad de desestabilizar la ser adems clulas con una vida media larga, puesto que
membrana del endosoma. El uso de ciertos compuestos no tiene sentido transformar clulas que vayan a morir a
qumicos, como la cloroquina, permite al ADN exgeno los pocos das. Igualmente, se debe tener en cuenta si la
escapar del lisosoma, si bien deben usarse con precau- diana celular es una clula en divisin o quiescente, porcin, ya que es txico y debe usarse en dosis pequeas que determinados vectores virales, como los retrovirus,
slo infectan a clulas en divisin.
para no afectar a la clula diana de transfeccin.
No obstante, los lpidos catinicos presentan efectos t- En funcin de estas consideraciones, las clulas diana
xicos dependientes de dosis, lo que limita la cantidad que ideales seran las clulas madre, puesto que la insercin
de un gen en ellas producira un efecto a largo plazo. Dede ellos se puede usar y por tanto la terapia en s.
bido a la experiencia en transplante de mdula sea, una
El uso ms comn de los lipoplexes es la transferencia de las dianas celulares ms trabajadas son las clulas made genes en clulas cancerosas, donde los genes suminis- dre hematopoyticas. La terapia gnica en estas clulas
trados activan genes supresores del tumor en la clula y es tcnicamente posible y es un tejido muy adecuado padisminuyen la actividad de los oncogenes.
ra la transferencia ex vivo. Otras dianas celulares con las
Estudios recientes han mostrado que lipoplexes son ti- que se ha trabajado son:
les en las clulas epiteliales del sistema respiratorio
[cita requerida]
, por lo que pueden ser utilizados para el trata Linfocitos: son clulas de larga vida media y fcil acmiento gentico de las enfermedades respiratorias como
ceso (se encuentran en la sangre perifrica). Constila brosis qustica.
tuyen un blanco para terapias ex vivo de melanomas
e inmunodeciencias.
Los complejos de polmeros de ADN se denominan poliplexes y la mayora consisten en polmeros catinicos,
Epitelio respiratorio: son clulas de divisin muy
regulados por interacciones inicas.
lenta y en ellas no es posible la transferencia ex viUna gran diferencia entre los mtodos de accin de poliplexes y lipoplexes es que algunos poliplexes no pueden

vo, pero s su transformacin mediante adenovirus


y lipoplexes.

PRINCIPALES ACONTECIMIENTOS EN EL DESARROLLO DE LA TERAPIA GNICA

Hepatocitos: su transformacin en posible tanto ex


vivo (es factible cultivar las clulas y transplantarlas por la circulacin portal) como in vivo (se estn desarrollando receptores proteicos especcos
de hepatocitos).

6.2 2003

Un equipo de investigadores de la Universidad de California, en Los ngeles, insert genes en un cerebro utilizando liposomas recubiertos de un polmero llamado
polietilenglicol (PEG).[6] La transferencia de genes en es Fibroblastos drmicos: son clulas de fcil acceso y te rgano es un logro signicativo porque los vectores vicultivo, y pueden transformarse tanto ex vivo como rales son demasiado grandes para cruzar la barrera hemain vivo, pero suelen tener efectos transitorios.
toenceflica. Este mtodo tiene el potencial para el tratamiento de la enfermedad del Parkinson.
Clulas musculares: pueden transformarse mediante inyeccin in vivo de ADN y tambin mediante Tambin en ese ao se plante la interferencia por ARN
adenovirus, pero con un xito muy limitado en este para tratar la enfermedad de Huntington.[7]
ltimo caso.

6.3 2006

6
6.1

Principales acontecimientos en el
desarrollo de la terapia gnica
2002 y anteriores

Cientcos del NIH tratan exitosamente un melanoma


metastsico en dos pacientes, utilizando clulas T para
atacar a las clulas cancerosas. Este estudio constituye la
primera demostracin de que la terapia gnica puede ser
efectivamente un tratamiento contra el cncer.[8]

La terapia gnica apareci a partir de la dcada de 1970


para intentar tratar y paliar enfermedades de carcter gentico y se dieron las primeras pruebas con virus, las cuales fracasaron. Aos ms tarde, en la dcada de 1980, se
intent tratar la talasemia usando betaglobina. En este caso fue un xito en modelos animales aunque no se pudo
usar un humanos.

En marzo del 2006, un grupo internacional de cientcos


anunci el uso exitoso de la terapia gnica para el tratamiento de dos pacientes adultos contagiados por una enfermedad que afecta a las clulas mieloides. El estudio,[9]
publicado en Nature Medicine, es pionero en mostrar que
la terapia gnica puede curar enfermedades del sistema
mieloide.

En 1990, W. French Anderson propone el uso de clulas de mdula sea tratadas con un vector retroviral que
porta una copia correcta del gen que codica para la enzima adenosina desaminasa,[2] la cual se encuentra mutada.
Es una enfermedad que forma parte del grupo de las inmunodeciencias severas combinadas (SCID). Realiz la
transformacin ex-vivo con los linfocitos T del paciente,
que luego se volvieron a introducir en su cuerpo. Cinco
aos ms tarde, publicaron los resultados de la terapia,[3]
que contribuy a que la comunidad cientca y la sociedad consideraran las posibilidades de esta tcnica.

En mayo del 2006, un equipo de cientcos dirigidos por


el Dr. Luigi Naldini y el Dr. Brian Brown del Instituto
de San Raaele Telethon para la Terapia Gnica (HSRTIGET) en Miln, informaron del desarrollo de una forma de prevenir que el sistema inmune pueda rechazar la
entrada de genes.[10] Los investigadores del Dr. Naldini
observaron que se poda utilizar la funcin natural de los
microRNA para desactivar selectivamente los genes teraputicos en las clulas del sistema inmunolgico. Este trabajo tiene implicaciones importantes para el tratamiento
de la hemolia y otras enfermedades genticas.

No obstante, el apoyo a la terapia fue cuestionado


cuando algunos nios tratados para SCID desarrollaron
leucemia.[4] Las pruebas clnicas se interrumpieron temporalmente en el 2002, a causa del impacto que suposo
el caso de Jesse Gelsinger, la primera persona reconocida
pblicamente como fallecida a causa de la terapia gnica. Su muerte se debi al uso del vector adenoviral para
la transduccin del gen necesario para tratar su enfermedad, lo cual caus una excesiva respuesta inmune, con un
fallo multiorgnico y muerte cerebral. Existe una bibliografa numerosa sobre el tema, y es destacable el informe
que la FDA emiti sealando el conicto de intereses de
algunos de los mdicos implicados en el caso as como
los fallos en el procedimiento. En el ao 2002, cuatro ensayos en marcha de terapia gnica se paralizaron al desarrollarse en un nio tratado una enfermedad similar a la
leucemia.[5] Posteriormente, tras una revisin de los procedimientos, se reanudaron los proyectos en marcha.

En noviembre del mismo ao, Preston Nix de la Universidad de Pensilvania inform sobre VRX496,[11] una inmunoterapia para el tratamiento del HIV que utiliza un vector lentiviral para transportar un DNA antisentido contra
la envuelta del HIV. Fue la primera terapia con un vector
lentiviral aprobada por la FDA para ensayos clnicos. Los
datos de la fase I/II ya estn disponibles.[12]

6.4 2007
El 1 de mayo del 2007, el hospital Moorelds Eye y la universidad College Londons Institute of Ophthalmology,
un ao despus el Hospital de Nios de Filadela anunciaron el primer ensayo de terapia gnica para la enfermedad hereditaria de retina. La primera operacin (en Inglaterra) se llev a cabo en un varn britnico de 23 aos
de edad, Robert Johnson, a principios de este ao.[13] .

6.8

Porcentajes de ensayos de terapia gnica en la actualidad

Mientras que en Filadela Corey Haas fue el primer nio miento para un extrao desorden gentico - la deciencia
en obtener este tipo de terapeutica. La Amaurosis con- de lipoproteinlipasa(LPL).
gnita de Leber es una enfermedad hereditaria que causa
la ceguera por mutaciones en el gen RPE65. Los resultados de la Moorelds/UCL se publicaron en New En- 6.8 Porcentajes de ensayos de terapia gnica en la actualidad
gland Journal of Medicine. Se investig la transfeccin
subretiniana por el virus recombinante adeno-asociado
llevando el gen RPE65, y se encontraron resultados positivos. Los pacientes mostraron incremento de la visin,
y no se presentaron efectos secundarios aparentes.[14]
Los ensayos clnicos de esta terapia se encuentran en fase II.[15] Una de las etapas a realizar es la determinacin del tipo molecular que atie cada enfermedad (o
http://es.wikipedia.org/wiki/Distrofias_de_la_retina). A
nivel retiniano se realiza en Amrica Latina por la corporacin Virtual Eye Care MD, conocida y de renombre
por su calidad a realizar este trabajo de relacin entre fenotipo y genotipo. www.virtualeyecaremd.com

6.5

2008

Investigadores de la Universidad de Mchigan en Ann Arbor (Estados Unidos) desarrollaron una terapia gentica que ralentiza y recupera las encas ante el avance de
la enfermedad periodontal, la principal causa de prdida
de dientes en adultos.[16] Los investigadores descubrieron una forma de ayudar a ciertas clulas utilizando un
virus inactivado para producir ms cantidad de una protena denominada receptor TNF. Este factor se encuentra
en bajas cantidades en los pacientes con periodontitis. La
protena administrada permite disminuir los niveles excesivos de TNF, un compuesto que empeora la destruccin
sea inamatoria en pacientes que sufren de artritis, deterioro articular y periodontitis. Los resultados del trabajo
mostraron que entre el 60 y el 80 por ciento de los tejidos periodontales se libraban de la destruccin al utilizar
la terapia gnica[cita requerida] .

6.6

2009

En septiembre de 2009, se public en Nature que unos


investigadores de la Universidad de Washington y la
Universidad de Florida fueron capaces de proporcionar visin tricromtica a monos ardilla usando terapia
gnica.[17]
En noviembre de ese mismo ao, la revista Science
public resultados alentadores sobre el uso de terapia
gnica en una enfermedad muy grave del cerebro, la
adrenoleucodistroa, usando un vector retroviral para el
tratamiento.[18]

6.7

2012

7 Enfermedades y terapia gnica

El 2 de noviembre la Comisin Europea autorizo a Glybe- Son numerosas las enfermedades objeto de la terapia gra, una empresa alemana(Amsterdam), a lanzar un trata- nica, siendo las ms caractersticas las tratadas a conti-

nuacin:

7.1

ADA

El primer protocolo clnico aprobado por la FDA para el


uso de la terapia gnica fue el utilizado en el tratamiento
de la deciencia en adenosn deaminasa (ADA) que provoca un trastorno de la inmunidad, en 1990. En estos pacientes no se ha podido retirar el tratamiento enzimtico
exgeno necesario para su supervivencia, sino slo disminuirlo a la mitad y se ha detectado la persistencia en la
expresin del gen an despus de cuatro aos de iniciado
el protocolo. Aunque no se haya logrado la completa curacin de los pacientes (que consistira en retirar todo el
aporte enzimtico exgeno) este constituye un hecho indito en la historia teraputica. En 2009 se hace un nuevo
experimento en el que extraen clulas hematopoyticas
de la mdula sea para la introduccin del gen ADA ex
vivo mediante un retrovirus modicado (GIADA). Las
clulas modicadas se vuelven a introducir en el paciente.
Los resultados de este experimento fueron exitosos porque ninguno de los pacientes desarrollo leucemia (como
si haba ocurrido con el empleo de retrovirus). Adems,
todos los pacientes desarrollaron una expresin correcta del gen ADA durante los aos de seguimiento que se
les hizo y consiguieron un aumento de clulas sanguneas.
De esta manera 8 de los nueve pacientes no necesita tratamiento enzimtico exgeno para complementar la terapia
gnica.

7.2

Cncer

El tratamiento del cncer hasta el momento ha implicado la destruccin de las clulas cancerosas con agentes
quimioteraputicos, radiacin o ciruga. Sin embargo, la
terapia gnica es otra estrategia que en algunos casos ha
logrado que el tamao de tumores slidos disminuya en
un porcentaje signicativo. Los principales mtodos que
utiliza la terapia gnica en el cncer son:
1. Aumento de la respuesta inmune celular antitumoral
(terapia inmunognica). Est basada en la habilidad
del sistema inmune para atacar contra el cncer. Para ello, se introducen antgenos en clulas tumorales
permitiendo que las clulas inmunes puedan reconocer a las clulas tumorales. As, se puede transformar las clulas tumorales con la protena CD80,
glicoprotena de membrana de clulas presentadoras
de antgenos que se une a linfocitos T potenciando
la respuesta inmune.
2. Introduccin de genes activadores de drogas dentro
de las clulas tumorales o terapia de genes suicidas.
Consiste en la introduccin selectiva de genes en clulas tumorales y no en las dems, que codican para la susceptibilidad a drogas que de otra manera no
seran txicas. Esto lleva a la insercin de enzimas;

ENFERMEDADES Y TERAPIA GNICA

como por ejemplo HSV-tk [Herpex simplex virus timidina kinasa]) y citosina desaminasa, que son enzimas inofensivas para las clulas de mamferos y convierten prodrogas (vg ganciclovir y 5-uorocitosina)
en metabolitos citotxicos que destruyen a las clulas tumorales en proliferacin.
3. Normalizacin del ciclo celular. Consiste en la inactivacin de oncogenes mutados, como el ras, o en la
reexpresin de antioncogenes o genes supresores de
tumor inactivos como el p53. Se han llevado a cabo ensayos clnicos en los que se inyecta en clulas
tumorales retrovirus que expresan p53. El problema
es que se necesitan grandes cantidades de virus para
tratar los tumores muy extendidos y los retrovirus
presentan una baja eciencia de trasfeccin.
4. Manipulacin de las clulas de la mdula sea. Es
utilizada principalmente en la terapia gnica de desrdenes hematolgicos, y consiste en transferir a
las clulas progenitoras hematopoyticas genes de
quimioproteccin o de quimiosensibilizacin, entre
otros. Este es el caso del gen MDR1 estudiado en el
cncer de mama que, trasplantado en clulas precursora de linfocitos T y NKs ( clulas CD34 positivas),
hace que las clulas transfectadas sean ms resistentes a altas dosis de quimioterapia.
5. Uso de ribozimas y tecnologa antisentido o antisense. Las ribozimas son ARN con actividad cataltica que actuaran incrementando la degradacin
del ARN recin traducido, disminuyendo protenas
especcas no deseadas, factor que a veces se asocia
a alteraciones tumorales. La tecnologa antisentido
se reere a oligonucletidos de ARN que no tienen
actividad cataltica, sino que son complementarios a
una secuencia gnica y que pueden actuar bloqueando el procesamiento del RNA, impidiendo el transporte del mRNA o bloqueando el inicio de la traduccin.

7.3 Sndrome de Wiskott-Aldrich (WAS)


El sndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una enfermedad recesiva ligada al cromosoma X caracterizada por eczema, trombocitopenia, infecciones recurrentes, inmunodeciencia as como una gran tendencia a los linfomas y
a las enfermedades autoinmunes. Tambin hay una versin ms suave de esta enfermedad conocida como trombocitopenia ligada al cromosoma X o XLT caracterizada por microtrombocitopenia congnita con plaquetas de
pequeo tamao. Ambas enfermedades estn producidas
por mutaciones en el gen WAS que codica para una protena multidominio que slo se expresa en clulas hematopoyticas, WASP. Por lo tanto, la mayora de los que
padecen este sndrome sufren una muerte prematura debido a una infeccin, hemorragia, cncer o anemia grave
autoinmune. Actualmente, se han realizado tratamientos
ecaces en pacientes con el sndrome de Wiskott-Aldrich

9
por medio de trasplantes de mdula sea o sangre del cordn umbilical de un donante HLA idntico o compatible.
En 2010 se publica un estudio que muestra importante
mejoras en dos nios diagnosticados con la enfermedad.
La terapia consisti en extraer las clulas madre hematopoyticas y volvrselas a trasferir tras integrarles el gen
WAS en el genoma. Tras la terapia gnica, detectaron niveles signicativos de la protena WASP en las diferentes
clulas del sistema inmune de los pacientes. El resultado
fue que los pacientes tuvieron varias mejoras signicativas: uno de ellos se recuper por completo de la anemia
autoinmune y el otro paciente redujo el eczema que sufra.

trao como un virus o una secuencia de ADN exgena.


Adems, esta respuesta se refuerza en las sucesivas aplicaciones de un mismo agente.
Problemas relacionados los vectores virales. Podran
contaminarse tanto por sustancias qumicas como por virus con capacidad de generar la enfermedad. Implican
tambin riesgos de respuesta inmune
Trastornos multignicos: representan un reto muy
grande para este tipo de terapia, ya que se trata de enfermedades cuyo origen reside en mutaciones en varios
genes, y aplicar el tratamiento se encontrara con las dicultades clsicas de la terapia multiplicadas por el nmero
de genes a tratar.

Posibilidad de inducir un tumor por mutagnesis. Esto


puede ocurrir si el ADN se integra por ejemplo en un
gen supresor tumoral. Se ha dado este caso en los ensayos
La -talasemia constituye un desorden gentico con mu- clnicos para SCID ligada al cromosoma X, en los cuales
taciones en el gen de la -globulina que reduce o bloquea 3 de 20 pacientes desarrollaron leucemia.[20]
la produccin de esta protena. Los pacientes con esta enfermedad padecen anemia severa y requieren trasfusiones
de sangre a lo largo de toda su vida. La terapia gnica
tiene como objetivo sanar las clulas madre de la mdula sea mediante la transferencia de la -globina normal o gen de -globina en clulas madre hematopoyticas
(CMH) para producir de forma permanente los glbulos
rojos normales. Para llevarlo a cabo se pretende emplear
lentivirus porque varios estudios muestran la correccin 9 Terapia gnica en otros animales
de la -talasemia en modelos animales. Los objetivos de
la terapia gnica con esta enfermedad son: optimizar la
transferencia de genes, la introduccin de una gran cantidad de CMH modicadas genticamente y reducir al m- El primer ejemplo de terapia gnica en mamferos fue
de
nimo las consecuencias negativas que pueden derivarse la correccin de la deciencia en la produccin
[cita requerida]
la
hormona
del
crecimiento
en
ratones.
La
de la integracin al azar de los vectores en el genoma.
mutacin recesiva little (lit) produce ratones enanos. A
pesar de que estos presentan un gen de la hormona del
crecimiento aparentemente normal, no producen mARN
8 Problemas de la terapia gnica y a partir de este gen.

7.4

Beta Talasemia

de sus aplicaciones
Un concepto muy importante del que radican algunos aspectos de la seguridad de la terapia gnica es el de la barrera Weismann. Se reere al hecho de que la informacin
hereditaria slo va de clulas germinales a clulas somticas, y no al revs.

El primer paso en la correccin del defecto consisti en la


inyeccin de cinco mil copias de un fragmento de ADN
lineal portador de la regin estructural del gen de la hormona del crecimiento de la rata fusionado al promotor
del gen de la metalotionena de ratn, en huevos lit. La
funcin normal de la metalotionena es la destoxicacin
de los metales pesados, por lo que la regin reguladora
responde a la presencia de metales pesados en el animal.
Los huevos inyectados fueron implantados en hembras.
El 1% de los ratones de la descendencia resultaron ser
transgnicos, y alcanzaron mayor tamao.

La terapia gnica en clulas germinales es mucho ms


controvertida que en clulas somticas, pero aun as, si la
barrera Weismann fuera permeable a algn intercambio
de informacin, como algunos autores sealan,[19] incluso la terapia en clulas somticas podra tener problemas Se ha creado una tecnologa similar para generar vaticos y de seguridad que antes no habran sido conside- riedades transgnicas de salmn del Pacco con una
tasa rpida de crecimiento y, los resultados han sido
rados.
espectaculares.[cita requerida] Se microinyect en huevos de
La naturaleza de la propia terapia gnica y sus vecto- salmn un plsmido portador del gen de la hormona del
res, implica que en muchas ocasiones los pacientes deben crecimiento regulado por el promotor de la metalotiorepetir la terapia cada cierto tiempo porque sta no es es- nena y una pequea porcin de peces resultantes fueron
table y su expresin es temporal.
transgnicos, pesando once veces ms que los no transLa respuesta inmune del organismo ante un agente ex- gnicos.

10

10

11

Terapia gnica en la cultura popular

En series de televisin como Dark Angel, el tema de la


terapia gnica se menciona como una de las prcticas realizadas en nios transgnicos y sus madres. Tambin en
la serie Alias, aparece la terapia gnica molecular como
explicacin a dos individuos idnticos.

REFERENCIAS

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M.D., Abdulaziz Al Ghonaium, M.D.,Alina Ferster, M.D., Andrea Duppenthaler, M.D., Luigi Notarangelo, M.D., Uwe Wintergerst, M.D.,Rebecca H.
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Enlaces externos

Genes que Curan: la Terapia Gnica en el Museo


Virtual Leyendo el Libro de la Vida
Gene Therapy Clinical Trials Worldwide - Base de
datos de ensayos clnicos en terapia gnica a nivel
mundial

12

14 TEXTO E IMGENES DE ORIGEN, COLABORADORES Y LICENCIAS

14
14.1

Texto e imgenes de origen, colaboradores y licencias


Texto

Terapia gnica Fuente: https://es.wikipedia.org/wiki/Terapia_g%C3%A9nica?oldid=83618294 Colaboradores: Youssefsan, Gonis, Joseaperez, Moriel, Zwobot, Sms, Cookie, Cinabrium, Porao, Fmariluis, Reignerok, Yurik, Airunp, Natrix, Rembiapo pohyiete (bot), Orgullobot~eswiki, Caiserbot, Gerkijel, Yrbot, BOT-Superzerocool, FlaBot, Varano, Maleiva, YurikBot, Mortadelo2005, Ummowoa, Folkvanger,
CEM-bot, Retama, Montgomery, Thijs!bot, Juanramon 89, JuanPaBJ16, Xavigivax, CommonsDelinker, TXiKiBoT, Plux, LauraFarina, Ssaman, VolkovBot, Technopat, Matdrodes, DJ Nietzsche, Posible2006, Muro Bot, SieBot, Ctrl Z, Drinibot, Hu12, Sebeat, Mel 23,
Manw, YHIM, Javierito92, HUB, Quijav, Eduardosalg, Leonpolanco, Petruss, Alexbot, Raulshc, Camilo, UA31, Shalbat, ArmandoMartin, AVBOT, Cvicgar, Diegusjaimes, Arjuno3, Andreasmperu, Luckas-bot, William1509, Er MaKy, Majofab, ArthurBot, Jordi domenech~eswiki, SuperBraulio13, Xqbot, Jkbw, Marco Gerardo, BOTrychium, UPO 0809 aparrod, UPO 0809 amormor, UPO 0809 sgonher,
UPO 0809 mcalocan, Botarel, AstaBOTh15, UPO 0809 mbonagu, UPO 0809 adelcan, TiriBOT, Halfdrag, Abece, Leugim1972, Ganmedes, HermanHn, Jorge c2010, Foundling, AVIADOR, Jomago, ZroBot, Allforrous, Sergio Andres Segovia, UPO666 0910 clmilneb,
Alrik, UPO666 0910 cpercal, Grillitus, Waka Waka, Hauiito, UPO649 1011 clmilneb, Javimpra, Nimado, KLBot2, Sir Electron, UPO666
1011 mrebama, UPO666 1011 emversiv, UPO666 1011 pcalgar, UPO666 1011 pgrofer, UPO666 1011 gvilfom, UPO666 1011 aaredav, UPO666 1011 mtmeddom, UPO666 1011 mptolfon, Elvisor, UPO666 1112 salode, UPO666 1112 rarrhor, UPO666 1112 jmriod,
Makecat-bot, UPO649 1213 sgarmar1, Prosimio, Dlarios94, Addbot, Jarould, Andrea JIbar, BenjaBot, Doublephyton17, Woooop, Alejandra valdes y Annimos: 165

14.2

Imgenes

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14.3

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