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Pgina

ndice
Prlogo

Material de Laboratorio

Preparacin de soluciones

smosis

11

Obtencin de muestras de sangre

14

Protenas totales y albmina sricas

18

Emulsificacin de aceite

24

Amilasa srica

27

Fosfatasa alcalina srica

31

Glucosa plasmtica

36

Lactato plasmtico

40

Triacilgliceroles sricos

44

Colesterol srico

48

Colesteroi-LBD y Colesteroi-LAD sricos

53

Transaminasas sricas

60

Urea srica

67

Capacidad amortiguadora del plasma sanguneo

72

Cuantificacin de Hemoglobina glicada

78

Examen general de orina

83

Creatinina srica y depuracin

93

Hematocrito, hemoglobina y concentracin media de hemoglobina celular

99

Identificacin de grupos sanguneos

104

Recuento plaquetario

109

Bilirrubinas sricas

115

cido rico srico

120

Fosfatasa cida srica

125

PRLOGO

La Bioqumica es una ciencia que explica la naturaleza qumica de muchos y muy diversos procesos que
forman parte esencial de lo que determina la vida de una clula y del organismo en su conjunto.
Para el estudiante de Medicina, la Bioqumica es una disciplina fundamental de apoyo para la comprensin
de los fenmenos fisiolgicos cuyas alteraciones presentan relacin directa con las manifestaciones clnicas
de las patologas.
El conocimiento bioqumico, igual que ocurre con otras disciplinas, avanza gradualmente conforme se
desarrolla la investigacin. Esto ha permitido entender los fundamentos bioqumicos relacionados con las
manifestaciones clnicas de mltiples patologas, pudiendo interpretar la presentacin de signos y sntomas
desde la perspectiva bioqumica. Sin embargo, existen todava casos en los cules la

informacin es

insuficiente para establecer dichas relaciones y en ellos las asociaciones de las patologas con sus
expresiones clnicas se catalogan como empricas.
Los programas de Bioqumica de las escuelas y facultades de Medicina de las universidades mexicanas
deberan estar orientados fundamentalmente a que los conocimientos que construyan los alumnos vinculen
cada vez ms los contextos bsico y clnico. Este es el camino que hemos seguido en nuestro programa
durante muchos aos.
En este contexto se enmarca el presente Manual de Prcticas de Bioqumica, cuyos propsitos
fundamentales son que el alumno reafirme los conocimientos adquiridos con el programa terico 1

relacionndolos con aspectos fisiolgicos y patolgicos relevantes, que aprenda el manejo bsico del
laboratorio de Bioqumica Clnica, y de manera muy especial, que aprenda la pertinencia de las pruebas de
laboratorio para la obtencin de datos que le permitan fundamentar diagnsticos con un criterio cientfico.
Aunque se ha realizado un esfuerzo serio para que tanto los contenidos como la presentacin de este
trabajo sean congruentes con las necesidades acadmicas de gran competitividad que prevalecen en la
actualidad en el mundo de la Medicina, sin duda es una obra perfectible y ser bienvenida toda sugerencia
que permita mejorarlo.

Los autores

MATERIAL DE LABORATORIO

OBJETIVO
El alumno identificar y explicar la utilidad del equipo y de los distintos materiales comnmente
utilizados en el laboratorio de Bioqumica.

GENERALIDADES
La tecnologa del laboratorio de anlisis clnicos se emplea para realizar con la mayor exactitud las
diversas pruebas qumicas a fin de que los resultados generados sean correctos, dada la
importancia que esto tiene para que la interpretacin que haga el mdico permita un diagnstico
confiable. Para lograr este propsito, el alumno debe seguir cuidadosamente el mtodo de cada
prctica, utilizando los materiales y equipo apropiados.
Por otra parte, es muy importante que el alumno preste mucha atencin en lo que est realizando
a fin de evitar accidentes que podran ser graves. Debe tener presente en todo momento las
posibles causas de accidentes para poder evitarlos oportunamente y disminuir as la probabilidad
de sufrir daos en su integridad fsica.
Peligros a los que se encuentra expuesto el alumno al trabajar en el laboratorio:

l.

Quemaduras y escaldaduras (quemaduras producidas por lquidos o por vapor)

2.

Laceraciones por vidriera rota

3.

Infecciones diversas

4.

Intoxicacin por reactivos venenosos o custicos

CLASIFICACIN Y USO DE MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO


Medicin de masa (peso)

Balanza granataria. Se utiliza para medir cantidades de masa relativamente grandes (> 0.5 g) de sustancias
generalmente slidas

Balanza analtica. Se utiliza para medir con exactitud cantidades de masa relativamente pequeas
(aproximadamente 5 a 500 mg), aunque tambin pueden medirse masas mayores.

Medicin de volumen

Pipetas graduadas. Son tubos con dimetro interno uniforme, de diferentes capacidades y
calibradas. Son muy utilizadas debido a que con una misma pipeta se pueden medir diferentes
volmenes. Debe utilizarse la pipeta que sea ms adecuada al volumen por medir. Per ejemplo,
para medir 2.5 ml se utiliza una pipeta de 5 ml, para medir 0.5 ml, una de 1 ml, etc. Deben
cargarse mediante dispositivos especiales que eviten pipetear con la boca (propipetas), evitando
as el riesgo de contacto de la solucin con la boca.

Pipetas Pasteur. Son tubos de vidrio con una punta delgada y larga. No tienen graduacin y se
utilizan fundamentalmente para transferir a un tubo limpio el suero o el plasma de una muestra
de sangre despus de centrifugada, y para llenar con sangre completa los tubos de Wintrobe para
la determinacin del hematocrito.

Micropipetas. Son instrumentos muy tiles para la medicin de volmenes pequeos con un alto
grado de exactitud. Existen micropipetas con diferentes capacidades, siendo las ms comunes las
que miden 1-10 .tl, 10-250 .tl y 100-1000 .tl.

Probetas. Son contenedores cilndricos de vidrio, graduados y de diferentes capacidades. Se


utilizan para medir volmenes aproximados ya que son materiales de baja exactitud.

Matraces aforados o volumtricas. Son contenedores de vidrio que tienen un tallo relativamente
delgado que presenta una marca denominada afore, la cual indica el nivel al que debe llevarse el
lquido para que el volumen medido corresponda al indicado en el matraz. Se utiliza para la
preparacin de soluciones con concentracin porcentual(% p/v), molar, osmolar o normal.

Matraces Erlenmeyer. Son contenedores de vidrio de forma cnica y fondo plano que se utilizan
para medir volmenes aproximados de lquidos y si es necesario, para calentarlos con bajo grado
de evaporacin.

Vasos de precipitados. Son recipientes de vidrio utilizados para medir volmenes de lquidos, con
muy baja exactitud. Tambin se utilizan para calentar o hervir lquidos cuando no importa que se
evaporen en grado importante, o simplemente como contenedores de sustancias lquidas.

Tubos de ensayo. Son tubos de vidrio con diferentes dimensiones que se utilizan para llevar a cabo
las reacciones qumicas.
Materiales varios

Mechero de Bunsen. Es un dispositivo que se utiliza para calentar lquidos, mediante la combustin
de gas.

Gradillas. Dispositivos generalmente metlicos utilizados para mantener los tubos de ensayo en
posicin vertical

Esptulas. Dispositivos generalmente metlicos, planos, sin filo y con el extremo romo, utilizados
para transferir sustancias slidas, tpicamente al medir determinadas masas de ellas.

Equipo

Centrfuga. Es un instrumento que contiene un rotor capaz de girar varios miles de revoluciones
por minuto. Presenta espacios en los que se colocan los tubos que contienen el material que se
desea centrifugar para lograr la separacin de sus componentes. Tpicamente se utiliza para
separar el suero del cogulo o el plasma del paquete globular, en muestras de sangre.

Potencimetro. Es un instrumento electrnico que cuenta con un electrodo sensible a la


concentracin de hidrogeniones de cualquier medio lquido. Antes de medir el pH de la solucin
que interese, debe calibrarse con un amortiguador de pH 7.0. Proporciona la lectura directamente
como un valor de pH.

Espectrafotmetra. Es un aparato electrnico capaz de medir la cantidad de luz que pasa a travs
de una solucin (transmitancia) o la que absorbe dicha solucin (absorbancia, extincin o densidad
ptica). La luz que incide en la solucin tiene una longitud de onda especfica que se selecciona
con una perilla u otro dispositivo del aparato. Se utiliza para la determinacin de la concentracin
de solutos generalmente coloridos, bajo el principio de que mientras ms concentrado se
encuentra el so luto, menor es la transmitancia de la solucin y mayor su absorbancia si se utiliza
luz con la longitud de onda adecuada.
EJERCICIOS

1. Compare la exactitud de un matraz volumtrico de 100 ml y de una probeta de 100 ml,


midiendo 100 ml de agua en la probeta y pasando el lquido al matraz. Anote sus
observaciones.
2.

Mida los siguientes volmenes de agua: 25 .L, 40 .L, 0.2 ml, 0.7 ml, 1.5 ml, 2.8 mL, 4.5
ml, 7.5 ml y 9.5 ml, indicando qu pipeta utiliz en cada caso.

3. Transforme los volmenes que se mencionan en el punto 2, de manera que cada uno
quede expresado en micro litros, mililitros y litros.

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

PREPARACIN DE SOLUCIONES
OBJETIVO
l.

El alumno preparar varias soluciones, para lo cual calcular previamente las cantidades
de so luto y/o solvente necesarias.

2.

El alumno ejercitar la interconversin de unidades para expresar la concentracin de


soluciones.

GENERALIDADES

Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms sustancias. En una solucin, el so luto es la
sustancia disuelta y el solvente es la sustancia que disuelve. En el campo de la Biologa, el solvente
ms comn es el agua, la cual disuelve sustancias polares, es decir sustancias cuya estructura
molecular presenta cargas formales (positivas, negativas o ambas), y/o dipolos. Por ejemplo, el
cloruro de sodio (NaCI), consta de iones Na y

cr;

los azcares, como la glucosa, tienen gran

cantidad de grupos oxhidrilo (-OH), los cuales son estructuras dipolares (presentan y -. En
cualquier caso, el principio de disolucin est dado por la capacidad de interaccin elctrica entre
las molculas de agua y las molculas de soluto. Las sustancias hidrofbicas, que carecen de
grupos polares, no son solubles en agua. Entre ellas se encuentran el aceite, la gasolina, el ter,
etc.

La concentracin de las soluciones puede expresarse en diversas formas: porcentaje peso/

volumen (% p/v), que es el nmero de gramos de soluto disueltos en cada 100 mL de solucin (100
mL = 1 dL); molaridad (M), que es el nmero de moles de soluto disueltos en cada litro de
solucin; osmolaridad (OsM), que es el nmero de osmoles de soluto disueltos en cada litro de
solucin; normalidad (N), que es el nmero de equivalentes qumicos de soluto disueltos en cada
litro de solucin; molalidad (m), que es el nmero de moles de soluto disueltos en cada kilogramo
de solvente; y osmolalidad (Osm), que es la cantidad de osmoles de soluto disueltos en cada
kilogramo de solvente.
IMPORTANCIA CLNICA

En su mayora, los nutrientes se hacen llegar a los distintos tejidos disueltos en el plasma
sanguneo y por el mismo medio se canalizan los productos de desecho hacia las vas de excrecin.
Desde este punto de vista, el plasma sanguneo es una solucin que contiene muy diversos so lutos
7

a concentraciones variables. En muchos casos la determinacin de la concentracin de estos


so lutos tiene gran importancia diagnstica. En la clnica, la concentracin de los so lutos se expresa
en las unidades ms convenientes de acuerdo con las concentraciones normales correspondientes.
As, la concentracin de albmina se expresa en % p/v o en g/l, con un intervalo normal de 3.6 a
4.7 g/dL o 36 a 47 g/L. En cambio, la concentracin de glucosa, urea y otras sustancias, se
expresa en mg/dl o en milimolaridad (mM ' nmero de milimoles de soluto por cada litro de
solucin) debido a que la concentracin de estos solutos es relativamente baja en condiciones
normales: 55 a 110 mg/dL (3.0 a 6.1 mM) y 20 a 45 mg/dL (3.3 a 7.5 mM) para glucosa y urea,
respectivamente.
En el plasma existen solutos con concentraciones normales an menores, debiendo utilizarse para
tales casos una unidad menor, como .tg/dL (microgramos por decilitro) o .tmoles/L (micromoles
por litro o micromolaridad). Por ejemplo, la concentracin normal de hierro en la sangre de
hombres adultos es de 80 a 180 .tg/dL o 14 a 32.tM.
La concentracin total de solutos en el plasma sanguneo se expresa en unidades de
miliosmolalidad (mOsm), la cual depende fundamentalmente del sodio y sus aniones, de la

glucosa y de la urea. Los lmites normales de dicha concentracin son de 280 a 300 mOsm
aproximadamente.

MATERIAL

1. Balanza granataria

2. Esptulas
3. 1 matraz volumtrico de 50 mL
4. 3 matraces volumtricos de 100 mL
5. 1 matraz volumtrico de 250 mL
6. 1 vaso de precipitados de 100 mL
7. 1 vaso de precipitados de 250 mL
8. Glucosa, cloruro de sodio y sulfato de sodio

PROCEDIMIENTO

l. Calcular la cantidad de soluto (en gramos) y/o solvente (en mililitros) necesaria para

preparar cada una de las soluciones propuestas.


2.

Pesar el so luto con la mayor exactitud posible, utilizando una balanza granataria.

3. Transferir la masa de soluto al recipiente correspondiente. Si se trata de un matraz


volumtrico, aadir un poco de agua destilada para disolver el soluto y aforar enseguida.
En caso de que exista riesgo de que se tire el soluto al momento de pasarlo al matraz, es
preferible poner el soluto en un vaso de precipitados, disolverlo ah y posteriormente
pasarlo al matraz.
4. Al preparar una solucin con molalidad u osmolalidad definida, aadir al vaso de
precipitados que contenga al so luto la cantidad total de solvente necesaria, medida con el
recipiente graduado ms adecuado y disolver agitando con una varilla de vidrio.
PREPARE LAS SIGUIENTES SOLUCIONES:

l.

50 ml de solucin de glucosa al 5% p/v

2.

100 ml de solucin de cloruro de sodio al 0.9% p/v

3.

100 ml de solucin de sulfato de sodio 0.05 M

4. 100 ml de solucin de sulfato de sodio 0.1 N


5.

250 ml de solucin de cloruro de sodio 0.1 OsM

6.

solucin 0.2 m de glucosa, utilizando 2g de so luto

7.

solucin 0.5 Osm de cloruro de sodio, utilizando 3g de soluto

EJERCICIOS

a)

Calcule la molaridad de las soluciones 1 y 2

b)

Calcule la osmolaridad de la solucin 3

e)

Calcule la molaridad y la osmolaridad de la solucin 4

d)

Calcule la molaridad y la normalidad de la solucin 5

e)

Si en lugar de preparar la solucin del punto 6 aadiera 100g de agua a la cantidad de


soluto indicada, qu molalidad producira?

f)

Si la solucin 7 se pasa integra a un matraz volumtrico de 1 litro y se afora, qu


concentracin molar y osmolar tendra la solucin resultante?

g)

Calcule la milimolaridad de las soluciones 1 a 5 y la miliosmolalidad de las soluciones 6 y 7


9

BIBLIOGRAFA

Mendoza-Medelln, A. Nociones de Qumica para las reas mdica y biolgica, UAEM 2007
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

10

SMOSIS

OBJETIVOS

1.

El alumno demostrar el fenmeno de la smosis en un dispositivo experimental

2.

El alumno explicar la importancia de la smosis en la distribucin de lquidos en los


distintos compartimentos del organismo

GENERALIDADES

Los sistemas separados por membranas, en donde existen diferencias en la concentracin de


solutos no difusibles, tienden a equilibrar las concentraciones de soluto a ambos lados de la

membrana transfiriendo solvente del compartimiento ms diluido al ms concentrado. Este


fenmeno se conoce como smosis y, se diferencia de los procesos de difusin en que en estos
ltimos es el soluto el que se transfiere a travs de la membrana en el sentido en que las
concentraciones de so luto tienden a igualarse en ambos compartimientos.
La presin osmtica es una medida de la fuerza con que ocurre la smosis y depende del
gradiente de concentracin osmolal de los solutos no difusibles, de manera que a mayor gradiente
corresponde mayor presin osmtica. La presin osmtica que ejercen los solutos coloidales,
como son las protenas, se conoce como presin onctica.

IMPORTANCIA CLNICA

La distribucin de los lquidos en los diversos compartimentos del organismo humano se regula
por eventos de smosis que dependen de la concentracin de los solutos no difusibles.
En el espacio intravascular los principales solutos no difusibles son las protenas, siendo por tanto
responsables de la presin osmtica intravascular que acta como contraparte de la presin
hidrosttica debida al impulso cardiaco, permitiendo el retorno del lquido al lecho vascular.
La protena plasmtica que ejerce el principal efecto onctico es la albmina, la cual es sintetizada
en el hgado a una tasa de aproximadamente 12 g diarios.
De esta manera, dicha protena se encuentra sujeta a un recambio elevado, presentando una vida
promedio normal de 17 a 20 das en el plasma. Al parecer, el sitio donde se cataboliza la albmina
es el mismo hgado, tanto en los hepatocitos como en las clulas de Kpffer.

11

La manifestacin clnica de la hipoalbuminemia (ver sus causas en la prctica de protenas


plasmticas) es la extravasacin de lquido o edema, lo cual ocurre como consecuencia directa de
la disminucin de la concentracin del principal agente que ejerce presin osmtica intravascular.
MATERIAL

1.

Un huevo de gallina

2.

Un popote

3.

Un vaso de precipitados de SO mL

4.

Cera de Campeche, plastilina o parafina

S.

Un bao de agua termo-regulado

PROCEDIMIENTO

1. Se remueve el cascarn en una zona aproximadamente circular del extremo ms ancho de


un huevo de gallina, cuidando de no romper la membrana subyacente.
2.

En el extremo ms angosto del huevo se practica una abertura en el cascarn (incluyendo


la membrana) apenas suficiente para que pase un popote a travs de ella.

3.

Se introduce el popote y se fija al cascarn mediante cera de Campeche, plastilina o


parafina, cuidando que no queden grietas y que el popote no toque la yema del huevo.

4.

El huevo as preparado se asienta sobre un vaso de precipitados de SO mL y todo el


dispositivo se introduce en un bao de agua termo-regulado a 37

e, de tal manera que el

nivel del agua sobrepase apenas el nivel del vaso de precipitados, asegurando as que la
membrana expuesta quede en contacto con el agua.
S.

Se deja el dispositivo en esas condiciones durante el tiempo necesario para observar la


elevacin del nivel de lquido en el interior del popote debido al efecto osmtico que
propicia la transferencia de agua al interior del huevo.

NOTA: El proceso osmtico puede llevarse a cabo usando agua a temperatura ambiente, pero

puede ser algo ms lento.

12

BIBLIOGRAFA
Mendoza-Medelln, A. Nociones de Qumica para las reas mdica y biolgica, UAEM 2007

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

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OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE


OBJETIVO
El alumno aprender la tcnica precisa para la obtencin de muestras de sangre venosa
GENERALIDADES
Las muestras de sangre generalmente se obtienen por puncin venosa ya que se trata de un
mtodo sencillo que permite obtener un volumen suficiente de sangre para la determinacin de
los diversos parmetros de inters. Si se debe obtener suero, la muestra de sangre se deja
coagular y posteriormente se centrifuga 5-10 minutos a 3500 r. p. m., lo cual permite que el suero
quede como sobrenadante y el cogulo en el fondo del tubo (debido a que el cogulo se adhiere al
vidrio, se debe separar de l cuidadosamente con un palillo antes de la centrifugacin). Si se
requiere sangre completa, se aade un anticoagulante al tubo en el que se va a verter la muestra
obtenida y una vez con la sangre, se mezcla por inversin suavemente, tapando previamente el
tubo con parafilm. Debe evitarse la agitacin vigorosa y la formacin de espuma ya que esto
produce hemlisis. Si se requiere plasma sanguneo, se aade anticoagulante al tubo y se mezcla
como se ha indicado, centrifugando posteriormente.

MATERIAL
1.

Jeringa estril de 5-10 mL o sistema vacutainer

2. Torundas de algodn con alcohol


3.

Tubos de ensayo limpios y secos o tubos vacutainer (con vaco)

4.

Ligadura

PROCEDIMIENTO
1.

El paciente debe estar sentado en una posicin cmoda que le permita colocar el brazo
sobre una superficie plana adecuada para mantenerlo extendido e inmvil sin mayor
esfuerzo.

2.

Se prepara el brazo frotando la regin anterior del antebrazo con una torunda de algodn
humedecida con alcohol etlico (96).

3.

Se aplica un torniquete con la ligadura aproximadamente 7 cm por arriba del pliegue del
codo. La puncin suele hacerse en la vena mediana ceflica, la cual es fcilmente
localizable en casi todas las personas. Si por alguna razn no se observa dicha vena, debe
indicarse al paciente que abra y cierre su puo al tiempo que se aplica masaje en la cara

14

anterior del antebrazo, con lo cual frecuentemente se logra que resalte la vena. En
ocasiones ser necesario utilizar las venas del dorso de la mano, lo cual deber hacerse
con cuidados especiales ya que dichas venas son mviles por carecer de fijacin.
4.

Se comprueba que el mbolo se deslice adecuadamente en la jeringa y se lleva hasta el


fondo de esta para minimizar el contenido de aire. Se toma la jeringa de manera que el
bisel de la aguja quede hacia arriba, se sujeta la parte posterior del brazo del paciente (a
nivel del codo) con la otra mano y manteniendo la jeringa paralela al trayecto de la vena se
perfora la piel, se introduce la aguja 0.5-1.0 cm en el tejido subcutneo y se perfora
entonces la pared de la vena. En este momento puede observarse que la sangre empieza a
fluir hacia la jeringa. En caso contrario se retrae ligeramente el mbolo. Si no fluye la
sangre a la jeringa significa que la aguja no se halla bien posicionada. Una vez que fluye la
sangre, se retrae el mbolo lentamente hasta que se ha recolectado la cantidad requerida
de sangre.

S.

El torniquete se suelta en cuanto se asegura la posicin adecuada de la aguja si se tiene la


destreza suficiente para evitar que se pierda la vena. Si no, se suelta hasta que se termine
de obtener la muestra, siempre y cuando no sea demasiado tiempo.

6.

Una vez que se concluy la sangra se coloca la torunda sobre el sitio de la puncin y se
retira la aguja. Se mantiene la torunda presionando el sitio de la puncin unos segundos
ms y se coloca sobre dicho sitio un parche redondo tipo curita.

7.

Se separa la aguja de la jeringa y se vierte la sangre lentamente sobre la pared interna de


un tubo de ensayo debidamente etiquetado.

8.

La jeringa y la aguja se depositan en recipientes especialmente destinados a ese uso.

ANTICOAGULANTES

Existe cierto nmero de anticoagulantes, Los cuales en general actan impidiendo que el calcio
desempee su funcin en el proceso de la coagulacin. Por ejemplo, el oxalato de amonio o de
potasio se combina qumicamente con el calcio disuelto,

ca', con lo cual se precipita. La ausencia

de calcio disuelto impide la activacin de diversos factores de la coagulacin.


De manera similar actan el citrato y la sal sdica o potsica del EDTA (etilendiaminotetracetato).
El EDTA (secuestreno) permite adems que los elementos formes de la sangre se mantengan en
buenas condiciones hasta por 4 horas despus de haber obtenido la muestra y evita que las
plaquetas se adhieran a la superficie del tubo.

15

La heparina es un polisacrido natural que se une a la antitrombina 111, lo cual potencia el efecto
anticoagulante de esta ltima sustancia.

SISTEMAS VACUTAINER
El sistema vacutainer es un dispositivo alternativo para la toma de muestras de sangre,
consistente en una pieza de plstico (adaptador) con forma de jeringa a la que se enrosca una
aguja con doble punta. La parte larga de esta aguja queda por afuera del adaptador y es la que se
utiliza para llevar a cabo la puncin del vaso. El otro extremo de la aguja queda por adentro del
adaptador. Una vez que se ha practicado la puncin de la vena, se introduce en el adaptador un
tubo vacutainer, que tiene un tapn de hule blando, fcilmente perforable por la aguja dentro del
adaptador. Debido a que el tubo vacutainer se halla sellado con cierto grado de vaco, en cuanto la
aguja perfora el tapn de hule empieza a fluir la sangre hacia el tubo. Al momento de perforar el
tapn de hule debe mantenerse al adaptador tan inmvil como sea posible para evitar que la
aguja se salga de la vena o se introduzca ms en ella. Despus de tomada la muestra, se remueve
el tubo del adaptador antes de sacar la aguja de la vena.
Los tubos vacutainer pueden tener ciertos aditivos, como anticoagulantes (EDTA, heparina, citrato,
oxalato, etc.), inhibidores enzimticos (fluoruro) para evitar que disminuya la concentracin de
glucosa, etc. El color del tapn corresponde al aditivo que contiene. Por ejemplo, los tubos con
tapn violeta contienen EDTA, los de tapn azul claro contienen citrato, etc. Los tubos con tapn
color rojo no contienen ningn aditivo.

NOTA.- Se recomienda a los alumnos que se habiten a extremar las precauciones en el manejo de
la sangre, con el fin de evitar cualquier contacto con la misma. Deben utilizarse guantes
quirrgicos para hacer la toma de muestras y tener todos los cuidados para minimizar el riesgo de
picaduras con agujas que han sido utilizadas y que por lo tanto pudieran estar contaminadas con
agentes biolgicos, como son los virus productores de hepatitis, el VIH, etc.

16

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

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PROTENAS TOTALES Y ALBMINA S RICAS


OBJETIVOS

l.

El alumno determinar la concentracin de protenas en una muestra de plasma


sanguneo

2.

El alumno explicar la importancia de la concentracin normal de las protenas


plasmticas y las principales causas de su variacin

GENERALIDADES

En el plasma sanguneo existen ms de 100 protenas diferentes, adems de los mltiples


anticuerpos, generando una concentracin total de 6 a 8 g/dL bajo condiciones normales.
Mediante electroforesis en acetato de celulosa las protenas plasmticas se resuelven en 5
fracciones. Una de ellas se halla constituida exclusivamente por albmina, y las restantes 4 se
conocen como globulinas a 1, a2,

y y. Cada una de estas fracciones se halla constituida por un

conjunto de protenas diferentes que presentan una movilidad electrofortica similar.


La albmina es la ms abundante de las protenas plasmticas y aunque solo representa alrededor
del 52% de la masa total de dichas protenas, ejerce aproximadamente del 80% de la presin
onctica intravascular debido a que su osmolaridad representa el 80% de la osmolaridad total de
las protenas plasmticas.
Adems, la albmina desempea una funcin de transporte de sustancias hidrofbicas que se
encuentran normalmente en la sangre, como los cidos grasos libres, la bilirrubina indirecta, el
urato, etc., y cuando se ingieren, diversos medicamentos.
Entre las globulinas a1 se hallan las lipoprotenas de alta densidad (LAD), involucradas en el
transporte inverso de colesterol (de tejidos perifricos al hgado); la globulina fijadora de tiroxina
(transporte de dicha hormona); globulina fijadora de corticosteroides, tambin llamada
transcortina (transporte de cortisol) y la antitripsina a1 (hidrlisis de enzimas proteolticas
liberadas a partir de los leucocitos en los procesos de defensa que desarrollan estas clulas,
particularmente en los pulmones, contra agentes biolgicos infecciosos que penetran por esa va).
Entre las globulinas a2 se hallan la haptoglobina, que transporta hemoglobina liberada en el lecho
vascular, al sistema reticuloendotelial; ceruloplasmina, que acta como ferroxidasa, es decir oxida
Fe+2 a Fe+ 3; las lipoprotenas de muy baja densidad (LMBD), involucradas en el transporte de
triacilgliceroles y colesterol del hgado a otros tejidos; y la macroglobulina a2 (a pesar de que es la

18

protena mayoritaria de esta fraccin de protenas plasmticas no se ha definido su funcin,


habindose encontrado solamente que presenta actividad inhibitoria de endopeptidasas).
Entre las globulinas

!3

se hallan las lipoprotenas de baja densidad (LBD), las cuales se forman a

partir de las lipoprotenas de densidad intermedia (LDI) y llevan colesterol del hgado a otros
tejidos; la transferrina (transporte plasmtico de hierro), la hemopexina (transporte del hemo
liberado en el lecho vascular al sistema reticuloendotelial); el fibringeno (precursor de la fibrina
en el proceso de la coagulacin sangunea) y los factores del complemento.
Las globulinas y corresponden a los anticuerpos, siendo su funcin unirse a antgenos en
reacciones especficas como parte de la respuesta inmune.
La gran mayora de las protenas plasmticas que no son globulinas y se sintetizan en el hgado. Las
globulinas y se forman en clulas especializadas del aparato inmunocompetente.

IMPORTANCIA CLNICA
l.

Hiperproteinemia con cociente A/G (albmina/ globulinas), normal. Solamente se presenta

en procesos que producen hemoconcentracin, como son: choque, vmitos y diarreas


intensas, quemaduras, coma diabtico, etc. Se consideran hiperproteinemias falsas.
2.

Hipoalbuminemia. Se presenta en casos de patologa heptica, particularmente cuando es

crnica (esto se relaciona con el hecho de que la vida promedio de la albmina en la


sangre es de aproximadamente 20 das) as como en casos de desnutricin. En la mayora
de las enfermedades renales se presenta proteinuria, pero slo en el sndrome nefrtico
disminuye significativamente la concentracin plasmtica de albmina pues la prdida de
protenas en esta enfermedad es superior a S g/ da.
3.

Transferrina.

Su funcin es el transporte de hierro en el plasma sanguneo. Su

concentracin aumenta en estados de deficiencia de hierro. En casos de hemocromatosis


puede estar baja o normal. La ingestin de medicamentos puede alterar esas relaciones.
Por ejemplo, el cloranfenicol produce disminucin de la transferrina y las pldoras
anticonceptivas producen su aumento por efectos metablicos no bien definidos. Por lo
tanto deben tenerse en cuenta estos factores para interpretar adecuadamente los
resultados de la cuantificacin de transferrina.
4.

Haptoglobina. Su funcin es el transporte de hemoglobina liberada a partir de los

eritrocitos en el lecho vascular. Se practica su determinacin cuando se sospecha de


anemia hemoltica en el paciente o para distinguirla de otros tipos de anemia. En el caso

19

de anemia hemoltica disminuye la concentracin plasmtica de haptoglobina. La anemia


hemoltica se asocia tambin con el incremento del recuento de reticulocitos y
disminucin del nmero de eritrocitos, del hematocrito y de la hemoglobina en sangre. La
concentracin de haptoglobina disminuye en la enfermedad de Wilson (patologa
hereditaria que cursa con retencin de cobre por el organismo. A travs de los alimentos
el intestino absorbe cobre pero el hgado no lo transfiere a la bilis como ocurre
normalmente y su acumulacin lesiona al hgado. Eventualmente el cobre heptico se
libera a la circulacin y se distribuye por todo el organismo, produciendo dao
principalmente en riones, cerebro y ojos. Si no se instituye el tratamiento adecuado
puede presentarse dao cerebral severo, insuficiencia heptica y muerte. Su tratamiento
es a largo plazo con penicilamina u otras sustancias que se combinan con el cobre,
promoviendo su excrecin, o bien con acetato de zinc, que impide la absorcin de cobre
por el intestino). En algunos casos la disminucin de la haptoglobina en la enfermedad de
Wilson se debe a que la patologa se acompaa de una fase temprana de anemia
hemoltica, pero en realidad esto no es comn, por lo cual debe suponerse que en esta
enfermedad se altera el metabolismo heptico y entre las manifestaciones de dichas
alteraciones se encuentra la baja produccin de haptoglobina. Esta protena plasmtica
aumenta

durante

el

embarazo

y disminuye

en

mujeres

que

toman

pldoras

anticonceptivas, sin que se cuente con la explicacin de dichos efectos.


5.

Macroglobulina a 2 Aumenta notoriamente en pacientes con sndrome nefrtico y en


algunos pacientes con cirrosis. Presenta actividad antifibrinolitica similar a la de la
antiplasmina a 2, la cual se manifiesta solamente cuando la capacidad inhibitoria de esta se
ha saturado.

6.

Globulinas y. Tambin conocidas como anticuerpos, pueden hallarse disminuidas en


patologas genticamente determinadas (hipogammaglobulinemia) o adquiridas (leucemia
linftica crnica y SIDA). Su incremento ocurre en infecciones agudas pero ms
notoriamente en las crnicas, en enfermedad heptica crnica, como la cirrosis, y en
enfermedades

autoinmunes

como

el

lupus

eritematoso

(trastorno

autoinmune

inflamatorio y crnico que puede afectar la piel, las articulaciones, los riones y otros
rganos. Afecta ms a las mujeres que a los hombres, en proporcin de 9 a 1, y puede
presentarse a cualquier edad) y la tiroiditis crnica. Tambin ocurre incremento de la
concentracin de globulinas y en algunos procesos malignos como el mieloma mltiple

20

(proliferacin de clulas plasmticas y sus precursoras) y la macroglobulinemia de


Waldenstr6m (proliferacin de linfocitos ms que de clulas plasmticas, con gran
producci6n de lgM, a tal grado que puede aumentar la viscosidad de la sangre).

PROCEDIMIENTO (Randox)

Fundamento: las protenas en solucin bsica de sulfato cprico y tartrato forman un complejo
azul violeta cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas.
La albmina se une cuantitativamente con el indicador 3, 3', 5, 5' tetrabromo-m-cresol
sulfoneftalena (verde de bromocresol, VBC). La intensidad del color del complejo albmina-VBC es
proporcional a la concentracin de albmina.

Protenas totales
Pipetear en tubos de ensayo:

Agua destilada

20 .rL

Suero (o plasma)
Patrn
Reactivo de trabajo

1.0 mL

1.0 mL

1.0 mL

Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos y medir la absorbancia


(A) a 546 nm de la muestra y del patrn frente al blanco.

CLCULO

(A moesua/A patcool X 5.2- ___ g/dL Protenas totales

VALORES DE REFERENCIA

Neonatos:
5.3-8.9 g/dL
Nios (hasta 6 aos): 5.6-8.5 g/dL
Adultos:
6.6-8.7 g/dL

21

Albmina
Pipetear en tubos de ensayo:

Agua destilada

10 .L

Suero (o plasma)

10 .L

Patrn

10 .L

Reactivo de trabajo
Mezclar e incubar entre 20 y 25

3.0ml
2(

3.0 ml

3.0 ml

durante S minutos y medir la absorbancia (A) a 578

nm de la muestra y del patrn frente al blanco.

CLCULO
(A m"'""/A ''"0,)

x 4.8 = ___ g/dl Albmina

VALORES DE REFERENCIA
Adultos: 3.4-4.8 g/dl

BIBLIOGRAFA
Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989
Gornall, A. G. Applied Biochemistry of Clinical Disorders. Harper & Row, 1980
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with c/inical correlations,

s'h

edition. Wiley-Liss,

2002
H. Lehr, M. Pauschinger, E. Pittke, E. Kurrle and H. Heimpel (1988). Haemolytic anaemia as initial
manifestation of Wilson's disease. Annals of Hematology: 56 (1)
http://digestive.niddk.nih.gov/ddiseases/pubs/wilson/ (enfermedad de Wilson)
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000435.htm

22

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

23

EMULSIFICACIN DE ACEITE
OBJETIVOS

1.

El alumno comparar la capacidad de la bilis, de un detergente y del agua para emulsionar


muestras de aceite de cocina

2.

El alumno explicar la relevancia fisiolgica y clnica de la emulsificacin de la grasa


dietaria

GENERALIDADES

La emulsificacin de la grasa dietara es el proceso mediante el cual los componentes lipdicos de


los alimentos sufren la accin del peristaltismo intestinal y de las sustancias antipticas presentes
en la bilis, resultando de ella la generacin de partculas pequeas de grasa dietara que
interaccionan can relativo grado de estabilidad con el medio acuoso.
Los cidos grasos y otros productos de la digestin estimulan la secrecin de la hormona
colecistocinina-pancreocimina, la cual provoca la contraccin de la vescula biliar, necesaria para
que la bilis fluya hacia el duodeno. La bilis contiene, entre otras sustancias, sales biliares y
fosfolpidos, que coadyuvan a emulsionar la grasa debido a su naturaleza antiptica, en conjuncin
con el movimiento peristltico del intestino, aunque este ltimo factor es el fundamental para el
proceso emulsificante. La grasa emulsionada consiste en partculas de 200-5000 nm de dimetro
de materiallipdico, principalmente triacilgliceroles, colesterol esterificado y vitaminas liposolubles
(A, D, E y K), que en su superficie interaccionan con las partes hidrofbicas de las molculas
antipticas, quedando las hidroflicas interaccionando a su vez con el agua del ambiente.
La emulsificacin es un proceso importante debido a que permite una accin adecuada de las
enzimas digestivas con actividad lipoltica, fundamentalmente la lipasa pancretica y la colesterol
esterasa. Los productos de la digestin de los triacilgliceroles (cidos grasos y monoacilgliceroles)
y de los esteres de colesterol (cidos grasos y colesterol libre), en asociacin con las sales biliares y
los fosfolpidos, configuran estructuras esferoidales de 3 a 10 nm de dimetro, denominadas
micelas mixtas, las cuales contienen en su parte interna las regiones hidrofbicas de sus
componentes, y en la superficie las hidroflicas. Las vitaminas liposolubles tambin se encuentran
presentes en la parte interna de dichas m ice las.
Las micelas mixtas se desplazan por el intestino y en el borde en cepillo liberan sus componentes
de origen dietario, los cuales penetran a las clulas del epitelio intestinal. En el leon se reabsorbe
la mayor parte de las sales biliares y participan en la circulacin enteroheptica

24

IMPORTANCIA CLNICA

la ausencia de sales biliares y fosfolpidos en el intestino puede ocurrir debido a problemas


obstructivos de las vas biliares. En estas condiciones los lpidos dietarios se emulsionan en grado
importante por efecto de la peristalsis, lo cual permite la accin digestiva de las enzimas
pancreticas, pero la ausencia de materiales antipticos impide la formacin de micelas mixtas y
por lo tanto no se absorben los productos de la digestin de los lpidos dietarios, ocasionando el
sndrome de malabsorcin de grasa, conocido tambin como esteatorrea.
La permanencia de la grasa en el intestino tiene algunos efectos adicionales. Por ejemplo, la grasa
puede interaccionar con otros componentes de la dieta, impidiendo la accin digestiva apropiada
sobre ellos; y la absorcin deficiente de grasa puede provocar que las vitaminas liposolubles
tampoco se absorban apropiadamente.

MATERIAL

1. Bilis de pollo o de bovino

2 mL

2. Aceite vegetal

Sml

3. Detergente extrn

2 mL

4. Tubos con tapn de rosca

S. Pipeta graduada de 10 ml

6. Pipeta graduada de S ml

7. Pipeta graduada de 1.0 ml

8. Agua destilada

10ml

9. Agitador "vortex"

PROCEDIMIENTO

Control

3 ml

1 ml

Bilis

3 ml

1 mL

Extrn

3 mL

1 ml

1 mL
1 ml

Mezclar el contenido de cada tubo en el agitador vrtex durante 15


segundos y observar y anotar los resultados inmediatamente y

despus de algunos minutos.

2S

BIBLIOGRAFA
Mathews, C. K. & K. E. Van Holde. Bioqumica, 2a. ed. McGraw-Hili, 1998
Devlin, T. M. (Editor) Textbaok of Biochemistry with clinical correlations,

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

26

s'h edition.

AMI LASA SRICA


OBJETIVOS

1. El alumno determinar la actividad de amilasa en una muestra de suero sanguneo


2. El alumno explicar la importancia clnica de la determinacin de la amilasa srica
GENERALIDADES

La amilasa es una enzima que participa en la digestin del almidn y del glucgeno dietarios.
Cata liza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos al-4 que unen a las molculas de glucosa entre s
en dichos polisacridos.
La amilasa se produce en las glndulas salivales, principalmente en las partidas, y en el pncreas,
nombrndose amilasa salival (ptialina) y amilasa pancretica, respectivamente. La actividad de la
amilasa salival es limitada debido al corto periodo de tiempo que permanece el bolo alimenticio
en la boca, ya que poco despus de que este pasa al estmago se pierde la actividad amilsica
debido al pH cido del jugo gstrico.
La funcin de la ami lasa salival es iniciar la hidrlisis del almidn y del glucgeno presentes en los
alimentos, generando como productos fundamentalmente dextrinas y en menor proporcin
maltosa. Las dextrinas son oligosacridos o polisacridos de peso molecular variable que resultan
de la hidrlisis al azar de los enlaces al-4 del almidn o del glucgeno.
La amilasa pancretica se vierte a travs del jugo pancretico al intestino, donde transforma los
productos generados por la amilasa salival, en maltosa y dextrinas lmite. Las dextrinas lmite son
oligosacridos ramificados que contienen un enlace

a 1-6. Ninguna de las dos amilasas es capaz de

hidrolizar estos enlaces.


Se han documentado casos de personas que carecen de amilasa salival y no presentan ninguna
alteracin en el proceso digestivo de los polisacridos mencionados, lo cual indica que se trata de
una enzima no indispensable. Evidentemente, la explicacin de esto es que la amilasa pancretica
acta en la misma forma que la salival y puede por lo tanto digerir por s misma al almidn y al
glucgeno.
En el suero de los lactantes no se detecta actividad amilsica sino hasta uno o dos meses de edad,
alcanzndose el lmite inferior del intervalo normal del adulto hasta el primer ao de edad.

27

IMPORTANCIA CLNICA

SE PRESENTA AUMENTO DE LA AMILASEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:


l.

Pancreatitis aguda. Se registran elevaciones de hasta 5 veces los niveles normales. En caso

de que se mantengan los valores elevados por ms de 5 das, puede pensarse en una
necrosis continuada del pncreas o en la formacin de un pseudoquiste (acumulacin de
tejido, lquido, residuos, enzimas pancreticas y sangre, que se puede desarrollar despus
de una pancreatitis aguda. Con frecuencia ocurre cuando se rompen los conductos
pancreticos por efecto de la inflamacin propia de la pancreatitis). En muchos casos la
pancreatitis aguda se encuentra asociada con ingesta aguda de etanol.

2.

Pancreatitis secundaria a hepatitis viral.

3.

Afecciones txicas del pncreas, debidas a infecciones como la tifoidea, el paludismo, la

neumona, el sarampin y la meningitis meningoccica.


4.

lcera gstrica penetrante de pncreas, en cuyo caso los aumentos son menores a los

registrados en la pancreatitis aguda.


5.

Padecimientos abdominales como lcera duodenal perforada, gastritis, peritonitis y


obstruccin abdominal. Son cuadros que cursan con incrementos discretos de la
amilasemia.

6.

Parotiditis, particularmente cuando es bilateral. El aumento de la amilasemia se detecta al

5 o r da despus de iniciado el padecimiento.


7.

Insuficiencia renal. El incremento de la amilasemia en estos casos se debe a la

disminucin de la excrecin de la amilasa, apareciendo negativa la amilasuria.


Normalmente alrededor del 25% de la ami lasa plasmtica se excreta por los riones.
8.

Administracin de frmacos como morfina, codena y otros opiceos. En estos casos la

hiperamilasemia es muy marcada, posiblemente por espasmo del esfnter de Oddi.


PROCEDIMIENTO (Hycel)

Fundamento: Se mide la hidrlisis del almidn por la amilasa srica mediante la formacin de
un complejo colorido (azul-verde) entre el almidn y el yodo, cuya intensidad es directamente
proporcional a la cantidad de almidn. Mientras ms se hidroliza el almidn (por mayor
actividad amilsica), menos complejo colorido se forma con el yodo, por lo tanto la intensidad
del color vara en proporcin inversa con la concentracin de ami lasa en la muestra.

28

Marcar 2 matraces volumtricos de 50 mL como "problema" y "blanco"


l.

Transferir exactamente 5.0 ml de solucin de sustrato de almidn a cada matraz.

2.

Incubar el matraz problema en un bao de agua a 37"C durante S minutos.


No es necesario incubar el matraz blanco.

3.

Transferir exactamente 0.1 ml de suero al matraz problema, mezclar bien y regresarlo al


bao de agua, donde deber estar 7.5 minutos exactos.

4. Aadir 5.0 ml de solucin de yodo N/100 a cada uno de los matraces e inmediatamente
despus atorarlo con agua destilada. Mezclar bien por inversin y agitar.

S.

Leer de inmediato la absorbancia a 660 nm del problema y del blanco contra agua
destilada.

CLCULO

[(A bleoco- A pcoblem,)/A bleocol

X 800

=---unidades de amilasa/dL

NOTA: Una unidad de amilasa se define como la cantidad de enzima que hidroliza 10 mg de
almidn en 30 minutos a un grado tal que el yodo no produzca ningn color.

VALORES DE REFERENCIA

60-160 unidades de amilasa/dL

BIBLIOGRAFA

Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989


Mathews, C. K. & K. E. Van Holde. Bioqumica, 2a. ed. McGraw-Hill, 1998
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with c/inical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002

29

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

30

FOSFATASA ALCALINA SRICA


OBJETIVOS

l.

El alumno determinar la actividad de fosfatasa alcalina en una muestra de suero


sanguneo

2.

El alumno explicar la importancia clnica de la cuantificacin de la actividad de fosfatasa


alcalina en el suero

GENERALIDADES

Fosfatasa alcalina (FAL) es el nombre con que se conoce un grupo de enzimas que presentan
actividad ptima para hidrolizar fosfosteres en un intervalo de pH de 9.0 a 10.5. Como productos
de las reacciones que catalizan se obtienen los alcoholes correspondientes y fosfato inorgnico,
segn indica la siguiente reaccin general:
R-0-PO,W + H20

R-OH

H2Po.-

La FAL se encuentra distribuida ampliamente en los tejidos del organismo. Durante el crecimiento
se encuentra en mayor cantidad en los osteoblastos (clulas productoras de tejido seo) y

condroblastos (clulas embrionarias que dan origen al cartlago) del tejido seo. En el adulto, la
mayor proporcin se encuentra en la mucosa intestinal, el hgado, los pulmones y el bazo, aunque
tambin se produce en el endotelio vascular, los t bulos renales, el epitelio tiroideo, el epitelio del
conducto biliar, placenta y clulas de la serie mieloide. Se localiza en el citosol, microsomas y
lisosomas. Su funcin bioqumica precisa no se conoce aunque al parecer en el hgado y el hueso
participa en el transporte de membrana pues en dichos tejidos la actividad de fosfatasa alcalina se
halla asociada a la membrana celular.
La FAL srica es principalmente de origen heptico y seo, y los incrementos se deben ms al
aumento de su sntesis que a incremento de su liberacin por los tejidos lesionados o necrticos
Las isoenzimas de la FAL son distinguibles por sus propiedades fisicoqumicas, segn indica el
siguiente cuadro:
Propiedades de las isoenzimas de la fosfatasa alcalina
PROPIEDAD

HIGADO
1

HUESO

INTESTINO

RAPIDEZ ELECTROFORTICA*

PLACENTA
2

DESACTIVACIN A 56 C

S0-70

90-100

S0-60

INHIBICIN CON FENILALANINA (%)

0-10

0-10

7S

75

*A MENOR NMERO, MAYOR RAPIDEZ

31

IMPORTANCIA CLNICA
LA FAL AUMENTA EN LOS SIGUIENTES CASOS:
l.

Padecimientos del hueso asociados con aumento de la actividad de los osteoblastos

2.

Enfermedad de Paget. Tambin conocida como ostetis deformante, ataca primeramente


los huesos del crneo, con aumento bilateral y algo asimtrico del tamao de la cabeza.
Aparece osteoporosis y el sntoma ms constante es el dolor reumatoide, especialmente
en las tibias. Se presentan frecuentemente calambres musculares, incurvacin de tibias y
cifosis (desviacin anormal de la columna vertebral), pudiendo presentar fracturas que
consolidan rpidamente. No se altera la calcemia. Se atribuye a una alteracin del
metabolismo seo, en especial en la pelvis, el crneo y el fmur. Los huesos pueden ser
tan blandos que pueden cortarse con un bistur. Los pacientes registran disminucin de
estatura de hasta 20 cm y se presenta con mayor frecuencia en hombres de edad
avanzada. En el suero de los pacientes se eleva en grado importante la FAL (10 a 100 veces
mayores al lmite superior normal) debido a un exceso de actividad de los osteoblastos. Se
inicia con resorcin sea excesiva e incremento en el nmero de osteoclastos (elemento
celular gigante multinucleado de la mdula sea cuya funcin es la resorcin o destruccin
del hueso). Simultneamente a la resorcin se produce hueso nuevo por activacin de los
osteoblastos, lo cual genera un patrn de depsitos seos que constituye un mosaico
caracterstico de resorcin y formacin de hueso. Se trata de un padecimiento de causa no
definida aunque algunos estudios sugieren que se inicia por una infeccin viral. Llega a
afectar hasta el3% de la poblacin de ms de 40 aos.

3.

Raquitismo y osteomalacia. Producidas por deficiencia de vitamina D, estas patologas se


caracterizan por formar depsitos de matriz sea no calcificada, lo que aumenta la
actividad de los osteoblastos

4.

Tumores seos primarios, como el sarcoma osteognico, producen incrementos variables


de la FAL srica dependiendo del grado de afeccin. La actividad de la enzima se utiliza
para vigilar la evolucin de la enfermedad y su recurrencia.

S.

Metstasis seas derivadas de neoplasias de prstata, pulmn y glndula mamaria. La


presencia de actividad elevada de FAL es signo de afeccin sea.

6.

Hiperparatiroidismo. En esta patologa aumenta excesivamente la secrecin de la


hormona paratiroidea, lo cual altera el metabolismo del calcio y del fsforo y por lo tanto

32

la integridad sea. Los incrementos de la actividad srica de la FAL se registran solamente


cuando el hueso se encuentra muy afectado.
7.

Reparacin sea por recuperacin de fracturas. El aumento de la FAL se debe a la


formacin de hueso nuevo.

8.

Crecimiento. Durante el crecimiento es normal que la actividad s rica de FAL se encuentre


aumentada respecto a las cifras normales del adulto. Los incrementos son ms notables en
adolescentes de sexo masculino. Las y los jvenes alcanzan los niveles del adulto a los 15 y
18 aos, respectivamente.

9.

Embarazo. El incremento se registra en el segundo y tercer trimestres debido a que es


entonces cuando se estimula el desarrollo seo del producto. El incremento tambin se
debe a la presencia de la isoenzima placentaria. Las cifras se normalizan aproximadamente
a las seis semanas posparto.

10. Menopausia. El aumento significativo de la actividad de FAL se relaciona con la prdida de


hueso secundaria al descenso de los niveles de estrgenos. Las cifras de FAL en mujeres
mayores aumentan hasta en un 40% respecto al intervalo normal
11. Enfermedades hepticas. En la mayora de estas enfermedades se registra un aumento de
FAL, pero cuando el incremento es mayor al triple del lmite superior normal es ms
probable que se trate de una patologa obstructiva, ya que los padecimientos que cursan
con necrosis de los hepatocitos por lo general no registran incrementos altos de FAL
srica, excepto si tambin ocurre necrosis en los canalculos o en los conductos biliares. Si
un paciente ictrico presenta niveles normales de FAL se descarta la obstruccin biliar.
12. Tratamiento con corticosteroides. Se ha observado incremento generalmente pequeo
de la actividad de FAL y de las transaminasas despus del tratamiento con
corticosteroides, revirtiendo luego de suspenderse el tratamiento.
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: la hidrlisis del p-nitrofenilfosfato, catalizada por la FAL, produce fosfato y p-nitrofenol. Este ltimo es un compuesto colorido. La intensidad del color es directamente
proporcional a la actividad de FAL.

33

l.

Transferir 20 JlL de suero a una celdilla del espectrofotmetro

2.

Aadir 1.0 mL del reactivo de trabajo

3.

Mezclar y leer la absorbancia (A0 ) a 405 nm frente al aire (celdilla vaca)

4.

Sin sacar la celdilla leer nuevamente la absorbancia al cabo de 1 (A1 )

2 (A2 ) Y 3 (A3 )

minutos

CLCULO

Obtener los 3 valores de M de la muestra como sigue: A1 - A0, A2 - A1 y A3 - A2 y promediarlos.

pmmod;o

x 2760 = _ _ U/L Fosfatasa alcalina

Los sueros hemolticos interfieren con la determinacin.

VALORES DE REFERENCIA

Hombre/ Mujer: 73-207 U/L


BILBLIOGRAFA

Balcells,A. La clnica y el Laboratorio. Ed. Marn


Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
http://www.facmed.unam.mx/bmnd/plm 2k8/src/prods/34930.htm (efecto de corticosteroides)

34

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

35

GLUCOSA PLASMTICA
OBJETIVOS
1.

El alumno determinar la concentracin de glucosa en una muestra de suero sanguneo

2.

El alumno explicar la importancia clnica de la determinacin de la glucemia

GENERALIDADES
La glucosa es el monosacrido de mayor importancia que utilizan las clulas para la obtencin de
energa. El origen de la glucosa puede ser exgeno, cuando se obtiene a partir de los carbohidratos
dietarios (almidn, glucgeno, sacarosa y lactosa), y endgeno, cuando se sintetiza en el
organismo a travs de la va gluconeognica.
La glucemia (glucosa en sangre) se halla regulada fundamentalmente por dos hormonas, el
glucagon y la insulina. La hipoglucemia es el efector para la secrecin de glucagon, el cual
estimula la glucogenlisis en el hgado. La glucosa liberada a partir del glucgeno pasa entonces a
la sangre, restableciendo la normoglucemia. En la hiperglucemia en cambio, la insulina activa el
mecanismo que permite la incorporacin de la glucosa a los tejidos adiposo y muscular,
reduciendo as la concentracin de glucosa sangunea hasta lograr la normoglucemia. Aunque la
insulina se requiere para la incorporacin de glucosa por los hepatocitos, s interviene en forma
importante estimulando la glucognesis.
La concentracin normal de glucosa en la sangre o normoglucemia despus de un ayuno de al
menos 8 horas vara dentro de un intervalo de aproximadamente 75 a 115 mg/dL o 4.16 a 6.39
mmoi/L, pudiendo variar segn el mtodo utilizado.
En condiciones normales la glucemia posprandial raramente supera los 140 mg/dL, recuperndose
la normoglucemia antes de 2.5 horas. Si el grado de glucemia en ayuno supera el lmite superior
del intervalo normal o bien si la hiperglucemia posprandial se mantiene durante ms tiempo del
indicado, muy probablemente se trata de alguna patologa que cursa con hiperglucemia.
Se considera que en el ayuno los mnimos valores de glucemia tolerables por el organismo sin que
se presente dao cerebral son de 40 a 50 mg/dL, sin embargo esto no es aplicable a todas las
personas debido a que la sensibilidad es muy variable entre los distintos individuos, de tal manera
que debe procurarse en todos los casos mantener normoglucmico al paciente para prevenir
cualquier efecto de la hipoglucemia.

36

IMPORTANCIA CLNICA
SE PRESENTA AUMENTO DE LA GLUCEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:

l.

Hiperglucemia fisiolgica. Se trata de un incremento discreto y transitorio que no se


acompaa de glucosuria. Se presenta como resultado de la exposicin a baos calientes,
excitaciones psquicas y ocasionalmente por efecto del periodo menstrual.

2.

Asfixia e intervenciones quirrgicas, probablemente debido a descargas de adrenalina,


con efectos pasajeros.

3.

Diabetes mellitus. Es la causa ms comn de hiperglucemia, debindose a la ausencia


total o parcial de insulina, o bien a un efecto insuficiente de dicha hormona.

4.

Sndromes diabetoides extrainsulares, pudiendo ser hipofisiario, como en la enfermedad


de Cushing (adenoma hipofisiario que cursa con hipercorticismo crnico), suprarrenal, por
presencia de feocromocitoma (tumor de la mdula adrenal) que provoca aumento de la
secrecin de adrenalina, y tiroideo, por hiperfuncin de la glndula tiroides. En este caso
la hiperglucemia es muy discreta.

S.

Traumatismo cerebral.

6.

Infarto al miocardio, registrndose la hiperglucemia slo en los primeros dos das. En


ocasiones se acompaa de glucosuria.

7.

Tratamiento con ciertas hormonas esteroides, debido a su efecto gluconeognico.

SE PRESENTA DISMINUCIN DE LA GLUCEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:

l.

Esfuerzos musculares agotadores

2.

Hiperinsulinismo, debido a insulinoma (neoplasia pancretica)

3.

Sobredosis de insulina, pudiendo presentarse coma hipoglucmico

4.

Insuficiencia heptica grave, por alteracin del metabolismo del glucgeno

5.

Trastornos digestivos que cursan con malabsorcin intestinal, como vmitos y diarrea

6.

Hipoglucemia de la lactancia, que afecta a las madres lactantes por alimentacin


insuficiente

7.

Alcoholismo agudo, por el efecto inhibidor del alcohol sobre la gluconeognesis.

PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: la glucosa reacciona con oxgeno y agua, transformndose en gluconato y perxido
de hidrgeno mediante la glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno producido reacciona con
fenal y 4-aminofenazona, formando quinoneimina y agua, por catlisis de la peroxidasa. La

37

quinoneimina es un compuesto colorido cuya concentracin es proporcional a la de glucosa en la


muestra.
Pipetear en tubos de ensayo:

Plasma o suero

20 j.!L

Patrn
Reactivo de trabajo

2.0 mL

2.0mL

2.0 mL

Mezclar e incubar a 3r e durante al menos 10 minutos y medir la absorbancia (A) de la


muestra y del patrn frente al blanco a 500 nm. El color es estable durante 60 min.

CLCULO
(A m"""'/ A pwn)

100 = _ _ _ mg/dL Glucosa

El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dl. Si la concentracin de glucosa es superior a este
valor, debe diluirse la muestra 1:2 con solucin salina, multiplicando al final la concentracin
obtenida por el factor 2

VALORES DE REFERENCIA
75 a 115 mg/dL

BIBLIOGRAFA
Balcells,A. La clnica y el Laboratorio. Ed. Marn
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumico

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Scriver, C. R., A. L. Beaudet, W. S. Sly & D. Valle (Ed.) The Metabolic Bases of lnherited Disease,

7'h

ed. McGraw-Hill, 1995


Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 51h edition. Wiley-Liss,
2002

38

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

39

LACTATO PLASMTICO
OBJETIVOS

1.

El alumno determinar la concentracin de lactato en una muestra de plasma sanguneo

2.

El alumno explicar los contextos terico-clnicos en que es relevante la cuantificacin del


lactato en la sangre

GENERALIDADES
La glucosa se cataboliza en todos los tejidos a travs de la gluclisis, va que transforma la glucosa
en piruvato (glucosa ---+ 2 piruvato). Si ocurre en condiciones aerbicas, el piruvato ingresa a las
mitocondrias y ah es catabolizado hasta C0 2 y H20, lo cual permite la liberacin de cantidades
importantes de energa til para la formacin de ATP y otras sustancias a travs de las cuales se
aporta energa a los procesos celulares que la requieren.
En tipos celulares en los que la glucosa no se cataboliza aerbica sino anaerbicamente
(eritrocitos, clulas de gla, clulas de la mdula renal, etc.), o bien en aquellos otros que, teniendo
normalmente un metabolismo aerbico entran a una fase de limitacin o ausencia de oxgeno (el
comn de los tipos celulares, de manera importante las clulas del msculo esqueltico y los
cardiomiocitos), el piruvato producido a partir de la glucosa se reduce a lactato de acuerdo con la
siguiente reaccin:
Piruvato + NADH + H' ---+ Lactato+ NAD'
Esta reaccin es catalizada por la enzima denominada lactato deshidrogenasa, de amplsima
distribucin en el organismo humano.
El lactato que se forma en las clulas pasa a la circulacin por un transportador de la membrana
celular que en realidad es un simportador de lactato e hidrogeniones, con lo cual se preserva la
electroneutralidad. De esta manera, conforme se produce puede ir pasando a la circulacin.
Bajo las condiciones apropiadas, el hgado y en menor proporcin el rin, captan y metabolizan el
lactato de la sangre, transformndolo en glucosa a travs de una va conocida como
gluconeognesis. En condiciones normales, la concentracin de lactato se mantiene baja (menos
de 20 mg/dL de plasma) gracias a este proceso metablico.

40

IMPORTANCIA CLNICA

El incremento en la concentracin de lactato puede ocurrir porque se produzca en cantidades


mayores a lo normal o porque el hgado se halle insuficiente para metabolizarlo, especialmente si
concurre una condicin de sepsis o de etilismo.
SE REGISTRA INCREMENTO DE LACTATO EN SANGRE EN LOS SIGUIENTES CASOS:

l. Insuficiencia cardiaca congestiva


2.

Choque de cualquier origen (hipovolmico, anafilctico, etc.)

3.

Necrosis heptica aguda y cirrosis heptica

4.

Insuficiencia respiratoria avanzada

5. leo paraltico (prdida de la actividad motora intestinal, con isquemia)

6. Algunos

tipos

de

tumores,

como

linfomas

(cncer

del

sistema

linftico)

hemangioblastomas (neoplasias vasculares benignas localizadas principalmente en el


cerebelo).

PROCEDIMIENTO (Randox)

Fundamento: el lactato se oxida a piruvato mediante la enzima lactato oxidasa, produciendo


adems perxido de hidrgeno (H 20 2). El perxido de hidrgeno reacciona con 4-clorofenol y 4aminoantipirina para producir quinoneimina, agua y cido clorhdrico mediante una reaccin que
cataliza una enzima peroxidasa. La intensidad de la coloracin producida es directamente
proporcional a la concentracin de quinoneimina y sta a su vez es directamente proporcional a la
concentracin de lactato.

Pipetear en tubos de esnayo:

Plasma

10 .tL

Patrn
Reactivo de trabajo

10 .tL

1.0 mL

1.0 mL

1.0 mL

Mezclar e incubar a 37, C durante 5 minutos y medir la absorbancia (A) de la muestra y


del patrn frente al blanco a 550 nm. El color es estable durante 30 min.

41

CLCULO

(Amuestr,/Apotco)

40 = _ _ mg/dL Lactato

VALORES DE REFERENCIA

4.5-20 mg/dL
BIBLIOGRAFA

Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989


Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlotions, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
http://www.ranc.com.ar/pdf/2003/Volumen 2/utilidades resonancia _magnetica. pdf
?PHPSESSID=42f6bba09d0b75fb6cc50891ea8fc5f1 (tumores asociados con incremento de lactato)
http://www.neurocirugia.com/anatpat/hemangioblastoma/hemangioblastoma.htm (significado y
localizacin de hemangioblastomas)

42

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

43

TRIACILGLICEROLES S RICOS
OBJETIVOS

l.

El alumno determinar la concentracin de triacilgliceroles en una muestra de suero


sanguneo.

2.

El alumno explicar el contexto clnico en que es relevante la determinacin de


triacilgliceroles sricos

GENERALIDADES

Los triacilgliceroles (triglicridos) son lpidos formados por la esterificacin de tres molculas de
cidos grasos con una de glicerol. Se encuentran presentes en los aceites y las grasas que forman
parte de las dietas comunes y en el tejido adiposo, donde constituyen la principal forma de
almacenamiento energtico. Los triacilgliceroles dietarios se digieren por accin de la lipasa
pancretica, generando principalmente monoacilgliceroles y cidos grasos, productos capaces de
ser absorbidos por el intestino.
En los enterocitos los monoacilgliceroles se reesterifican con los cidos grasos, y los
triacilgliceroles resultantes se asocian con otros componentes para estructurar las lipoprotenas
conocidas como quilomicrones, los cuales son secretados hacia la linfa, a travs de la cual son
llevados a la circulacin general. En los capilares sanguneos de diversos tejidos, principalmente
del adiposo y del muscular, la lipoprotena lipasa (LPL) hidro liza ms del 80% de los triacilgliceroles
de los quilomicrones, y la mayor parte de los cidos grasos liberados penetran a las clulas del
tejido correspondiente, mientras que el glicerol es captado y meta bol izado por el hgado.
Despus de que acta la LPL sobre los quilomicrones, stos quedan convertidos en lipoprotenas
pequeas de relativo alto contenido de colesterol, llamadas remanentes de quilomicrones, cuyo
destino es ser endocitadas por los hepatocitos.
El hgado forma triacilgliceroles a partir de los carbohidratos dietarios cuando stos se hallan en
exceso. Debido a que el hgado normalmente no almacena grasa, sus triacilgliceroles se asocian
con otros componentes lipdicos y protenicos para estructurar las lipoprotenas de muy baja
densidad (LMBD), las cuales secreta a la sangre. De manera similar a lo que ocurre con los
quilomicrones, la LPL hidroliza la mayor parte de los triacilgliceroles presentes en las LMBD,
penetrando los cidos grasos liberados, a las clulas del tejido correspondiente.

44

IMPORTANCIA CLNICA
La elevacin de la concentracin plasmtica de triacilgliceroles constituye un factor de riesgo
aterognico. La concentracin normal es menor a 200 mg/dL, aunque se considera sospecha de
hipertriacilglicerolemia entre 150 y 200 mg/dL. Aquellos pases con dietas altas en grasas animales
tienen elevada prevalencia de aterosclerosis y sus complicaciones. Por el contrario, en pases con
ingesta baja de grasa saturada, como es el caso de Japn y de algunos pases mediterrneos, la
prevalencia de aterosclerosis es baja.
Se ha documentado que las campaas exitosas para disminuir la ingesta de grasa animal en pases
con alta prevalencia de aterosclerosis y cardiopata isqumica, logran reducir la mortalidad por
esta causa.
El hombre primitivo requera el almacenamiento de grasa en su cuerpo debido a lo incierto de
cundo podra tomar su prximo alimento, sin embargo, en la mayora de las sociedades actuales
es innecesario el almacenamiento de grasa, dada la disponibilidad de alimentos a cualquier hora
del da y a que el esfuerzo fsico cada vez es menor.
Las grasas insaturadas son de origen vegetal, aunque tambin existen en proporciones
importantes en los alimentos de origen animal. La ingestin de grasas de origen vegetal no se halla
asociada por s misma a la ingesta de colesterol. Adems, dicha fuente proporciona los cidos
grasos esenciales, que no pueden sintetizarse en el organismo humano.
La hipertriacilglicerolemia endgena primaria es una patologa genticamente determinada que
se presenta aproximadamente en 1 de cada 100 individuos en la poblacin adulta y se hereda
como rasgo autosmico dominante. El defecto molecular es desconocido aunque al parecer
determina una sobreproduccin heptica de triacilgliceroles.
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: la hidrlisis de los triacilgliceroles produce cidos grasos y glicerol por accin de la
lipasa. El glicerol formado reacciona con ATP, produciendo glicerol-fosfato y ADP por catlisis de la
glicerolcinasa. El glicerol-fosfato a su vez reacciona con oxgeno y produce dihidroxiacetonafosfato y perxido de hidrgeno, en una reaccin catalizada por la glicerol-fosfato oxidasa. El
perxido de hidrgeno reacciona con 4-aminofenazona y 4-clorofenol, generando quinoneimina
(compuesto colorido), cido clorhdrico y agua. La concentracin del compuesto colorido es
proporcional a la concentracin de triacilgliceroles.

45

Pipetear en tubos de ensayo:

Patrn
Reactivo de trabajo

1.0mL

1.0 mL

1.0 mL

Mezclar e incubar a 37" C durante S min. y medir la absorbancia (A) de la muestra y del
patrn frente al blanco a 500 nm. El color es estable durante 60 min.

CLCULO

(A muestcafA '"'")

X 200 = _ _

mg/dL Triacilgliceroles

VALORES DE REFERENCIA

Sospecha de hipertriacilglicerolemia:

a partir de 150 mg/dL

Hipertriacilglicerolemia:

a partir de 200 mg/dL

BIBLIOGRAFA

Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989


Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segad e & A. Snchez Pozo. Bioqumica

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations,

2002

46

s'h edition. Wiley-Liss,

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

47

COLESTEROL SRICO
OBJETIVOS

1. El alumno determinar la concentracin de colesterol total en una muestra de suero


sanguneo tomada despus de ayuno de 12 horas.
2.

El alumno explicar el contexto clnico relevante para la determinacin de la


colesterolemia

GENERALIDADES

El colesterol es un derivado del ciclopentanoperhidrofenantreno. Es una molcula insoluble en


agua que se encuentra en todos los tejidos corporales, especialmente en cerebro, hgado, mdula
sea y piel.
CONTENIDO DE COLESTEROL DE ALGUNOS ALIMENTOS COMUNES

ALIMENTO (100 g)

COLESTEROL (mg)

RIN DE RES

700

HGADO DE RES

440

CARNE DE RES O CEROO

8S

CARNE DE BORREGO

9S

POLLO O PAVO

80

CAMARONES

1SO

ALMEJAS

6S

PESCADO MAGRO*

43

OSTIONES*

40

QUESO O CREMA

111
19

REQUESN

S40

YEMAS DE HUEVO (2)

ClARA DE HUEVO

LECHE ENTERA (1 TA2A))

33

VEGETALES

* alimentos cocidos
En el hgado se produce la mayor parte del colesterol endgeno. Este rgano tambin participa en
la excrecin de colesterol transformndolo en sales biliares, las cuales son llevadas por la bilis
hacia el intestino, donde funcionan como agentes emulsionantes de la grasa dietara, en
conjuncin con el movimiento peristltico. En el leon una gran parte de las sales biliares se
reabsorbe, participando en la circulacin enteroheptica. La pequea fraccin que no se
reabsorbe sufre la accin de la flora bacteriana, dando como resultado coprostanol y colestanol,

48

que son eliminados en las heces fecales. La dieta promedio suministra alrededor de 0.3 g de
colesterol diariamente.
El colesterol se encuentra en todas las clulas animales formando parte de las membranas.
Tambin se encuentra formando parte de los distintos tipos de lipoprotenas, siendo precursor de
las sales biliares, de la vitamina O y de toda la familia de hormonas esteroides.

IMPORTANCIA CLNICA
SE PUEDE ENCONTRAR HIPERCOLESTEROLEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS Y SITUACIONES:
l.

Dietas ricas en colesterol. El consumo de alimentos ricos en colesterol propicia una


hiperconcentracin de colesterol en los hepatocitos, lo cual inhibe la exposicin de los
receptores para las LBD en su superficie celular. Esto ocasiona que cantidades importantes
y crecientes del colesterol circulante (de origen dietario o endgeno) no tengan acceso a
dicho tejido.

2.

Ictericia obstructiva. En este padecimiento se obstruyen los canalculos biliares o el


coldoco, dificultndose por tanto la eliminacin del colesterol. En estos casos los niveles
de colesterol sanguneo pueden aumentar al doble o al triple de lo normal.

3.

Cirrosis biliar. Este padecimiento cursa con deterioro crnico de la excrecin de bilis. Se
observan datos morfolgicos de destruccin progresiva de Jos conductos biliares
intrahepticos. La enfermedad puede deberse a colestasis crnica intraheptica o a la
obstruccin del coldoco.

4.

Sndrome

nefrtico.

Padecimiento

renal

que

se

caracteriza

por

proteinuria,

hipoalbuminemia, edema e hiperlipidemia. Puede cursar con eliminacin urinaria de


colesterol y otros lpidos. Este sndrome es ocasionado por lesin de Jos glomrulos. El
efecto hiperlipidmico aparentemente se debe a la mayor produccin de lipoprotenas
para compensar la prdida de albmina por la va urinaria, reduciendo as la alteracin de
la presin onctica intravascular.
5.

Mixedema (hipotiroidismo). En este caso hay insuficiencia de la glndula tiroides y el


efecto se atribuye a la disminucin de receptores hepticos para las LBD.

6.

Diabetes sacarina (Diabetes mellitus). La hipercolesterolemia se presenta frecuentemente


en

esta

enfermedad.

Al

disminuir

hipercolesterolemia.

49

la

hiperglucemia

tambin

disminuye

la

7.

Hipercolesterolemia familiar. Padecimiento genticamente determinado, causado por

falta de receptores hepticos para LBD, lo que ocasiona que los niveles de colesterol
circulante se incrementen.

8. Enfermedad cardiovascular y aterosclerosis. Epidemiolgicamente esta patologa es la


ms importante que se asocia con hipercolesterolemia, siendo la causa fundamental de la
presentacin de infarto agudo al miocardio.
Existen datos que indican que las concentraciones de colesterol plasmtico superiores a 200
mg/dl se asocian con una mayor frecuencia de aterosclerosis, de manera tal que a mayor
concentracin, la aterosclerosis aparece a una edad menor. Par tanto, como medida preventiva
debe tenerse cuidado de que las cifras de colesterol se mantengan por debajo de dicho lmite.

PROCEDIMIENTO (Randox)

Fundamento: Para determinar el colesterol total, primeramente se hidrolizan sus esteres


mediante colesterol esterasa, liberando colesterol y cidos grasos. Enseguida se oxida el colesterol
mediante colesterol oxidasa, generndose como productos colesten-3-ona y perxido de
hidrgeno. Este ltimo reacciona con fenal y 4-aminoantipirina por catlisis de la peroxidasa,
produciendo quinoneimina (compuesto colorido). La concentracin de quinoneimina es
proporcional a la concentracin de colesterol total.

Pipetear en tubos de ensayo:

Agua destilada

10 Jll

Patrn
Suero o plasma
Reactivo de trabajo

1.0 ml

1.0 ml

1.0 ml

Mezclar e incubar a 3r C durante S min. y medir la absorbancia (A) de la muestra y del


patrn frente al blanco a 546 nm. El color es estable durante 60 min.

50

CLCULO
(A m""'"/A potc,)

200 = _ _ mg/dL Colesterol

VALORES DE REFERENCIA
Deseable:
Lmite alto:

< 200 mg/dL


200-239 mg/dl

Hipercolesterolemia: ~ 240 mg/dl

BIBLIOGRAFA
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McGraw-Hill, 1998
Guadalajara, J. F. Cardiologa. 5'. Ed., Mndez Editores, 1990
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations,
2002

51

s'"

edition. Wiley-Liss,

RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES

52

COLESTEROL-LBD Y COLESTEROL-LAD S RICOS


OBJETIVOS

1.

El alumno determinar la concentracin de colesteroi-LBD y colesteroi-LAD en una


muestra de suero sanguneo despus de ayuno de 12 horas.

2.

El alumno explicar la relevancia clnica del colesterol asociado a LBD y a LAD

GENERALIDADES

LBD. Las lipoprotenas de baja densidad transportan en la sangre la mayor cantidad del
colesterol liberado por el hgado y lo llevan hacia los tejidos perifricos, aunque despus su mayor
parte regresa al tejido heptico. Las clulas que captan LBD poseen receptores membranales
capaces de reconocer a dichas lipoprotenas siempre y cuando stas contengan apoprotena B-

100. Una vez incorporadas las LBD por endocitosis, el colesterol queda libre y se integra al
metabolismo celular, pudiendo almacenarse previa esterificacin catalizada por la enzima acil CoA
colesterol aciltransferasa {ACAT).

El hgado segrega normalmente lipoprotenas de muy baja densidad (LMBD), las cuales se
convierten en lipoprotenas de densidad intermedia (LDI) al perder una buena parte de sus
triacilgliceroles por efecto de la enzima lipoprotena lipasa {LPL) en los capilares de los tejidos
perifricos. Aproximadamente la mitad de las LDI del plasma son captadas por el hgado, y las que
no, se convierten en LBD por accin de la lipasa heptica. Los individuos que padecen
hipercolesterolemia familiar tienen receptores para LBD con alteraciones estructurales y
funcionales genticamente determinadas. Los individuos normales que ingieren dietas con alto
contenido de colesterol tienen en su hgado un exceso de colesterol, lo cual hace que disminuya el
nmero de receptores para LBD en la superficie celular, con el consecuente aumento de la
concentracin plasmtica del colesterol LBD.
La regulacin del metabolismo de las LBD y por tanto del colesterol, depende de su concentracin
plasmtica, ya que si se presenta una reduccin de las LBD del plasma y por tanto del colesterol
heptico, se activa la HMGCoA reductasa, enzima reguladora de la sntesis heptica de colesterol.
Con la mayor produccin de colesterol se restituye la concentracin plasmtica de LBD y
colesterol. Por el contrario, si aumenta la concentracin plasmtica de las LBD se incrementa la
captacin heptica del colesterol y este inhibe a la HMGCoA reductasa con la consiguiente
disminucin de la sntesis de colesterol heptico. Adicionalmente, disminuye la sntesis de
receptores para LBD, lo cual se traduce en menor nmero de receptores en la superficie celular, lo

53

que a su vez reduce la captacin heptica de las LBD plasmticas. En las personas sanas este
mecanismo mantiene dentro de los intervalos normales la concentracin de LBD circulantes y su
colesterol.
El aumento de la concentracin plasmtica de colesteroi-LBD es uno de los factores de riesgo ms
importantes para generar aterosclerosis.

Por el

contrario,

la terapia

que reduce sus

concentraciones sanguneas reduce tambin la probabilidad de aparicin de afecciones coronarias.


Se consideran cifras normales por debajo de 160 mg/dL, aunque son deseables cifras menores a
130 mg/dl.

LAD. Las lipoprotenas de alta densidad se forman en el hgado y en el intestino. Recin secretadas
se les denomina LAD nacientes y son una especie de vesculas planas. En la circulacin adquieren
apoprotena A y apoprotena C provenientes de las LMBD y de los quilomicrones. Las LAD reciben
fosfolpidos y colesterol no esterificado a partir de la superficie celular en los tejidos perifricos y a
partir de otras lipoprotenas. En dichas lipoprotenas ocurre la esterificacin del colesterol ya que
contienen la enzima lecitina colesterol acil transferasa (LCAT). A esto se debe que normalmente
2/3 del colesterol sanguneo se encuentre esterificado.
Las LAD llevan al hgado el colesterol esterificado, lo cual constituye en su conjunto un proceso
que se conoce como transporte inverso de colesterol, el cual es un mecanismo importante para
evitar la hipercolesterolemia y la aterosclerosis. Todos aquellos factores que disminuyen las LAD
(tabaquismo, obesidad, vida sedentaria, andrgenos, beta-bloqueadores, hipertriacilglicerolemia,
anablicos esteroides, diabetes mellitus, etc.) son promotores de la aterosclerosis. Se considera
conveniente una concentracin de colesteroi-LAD mayor a 55 y 65 mg/dL para hombres y mujeres,
respectivamente y como factor de riesgo aterognico elevado, una concentracin menor a 35 y a
45 mg/dL en hombres y mujeres, respectivamente.
El colesterol, las LBD Y LAD deben cuantificarse en sujetos sanos despus de los 20 aos de edad,
por lo menos cada 5 aos y con mucha mayor razn si presentan uno o ms factores de riesgo
aterognico.

54

IMPORTANCIA CLNICA

SE REGISTRA INCREMENTO DE LA CONCENTRACIN DE LBD EN LAS SIGUIENTES SITUACIONES O


PATOLOGAS:
Dietas ricas en colesterol. El consumo rutinario de alimentos como huevo, leche entera, queso,
vsceras, camarones y carnes rojas, estimula el aumento de estas lipoprotenas en la sangre. En el
caso del huevo, ciertos estudios sugieren que su ingesta no influye significativamente sobre la
colesterolemia, supuestamente por la presencia de un inhibidor (lecitina) de la absorcin intestinal
del colesterol, presente en dicho producto.
Hipercolesterolemia familiar. Es un padecimiento de origen gentico causado por disminucin o
falta de receptores hepticos para las LBD o mutaciones de la apoprotena B-100
Dietas ricas en carbohidratos. En el hgado el exceso de carbohidratos de la dieta se transforma en
grasa y colesterol, los cuales se envan a la circulacin en forma de LMBD, dando lugar
parcialmente a la formacin de LBD por intermedio de las LDI.
Tabaquismo. El efecto se observa en sujetos que fuman ms de 20 cigarrillos al da y se atribuye a
una accin oxidante de algunos componentes del humo del tabaco sobre las LBD, alterando el
metabolismo de stas.
Aterosclerosis. Se llama ateroesclerosis a la presencia de placas en la ntima arterial en vasos como
la aorta, las coronarias, la cerebral, la cartida interna, la ilaca, la femoral y las mesentricas.
Aquellas con un dimetro menor a 300 .tm no son afectadas. No se trata de una enfermedad
sistmica, sino que afecta ciertos sitios con gran predileccin. En estos sitios el endotelio vascular
presenta mayor permeabilidad a diversos componentes del plasma, entre los cuales destacan las
LBD y los monocitos, que tienden a acumularse en el espacio subendotelial. En este espacio los
monocitos se transforman en macrfagos, los cuales, al igual que las clulas endoteliales y las del
msculo liso, forman radicales libres. Estos propician la peroxidacin de los cidos grasos
insaturados de las LBD. Los macrfagos fagocitan a las LBD oxidadas y se transforman en clulas
espumosas. La necrosis de las clulas espumosas provoca un proceso inflamatorio que promueve
la sntesis de colgena y la proliferacin de clulas de msculo liso, las cuales migran hacia el
espacio subendotelial y dan lugar a la formacin de una placa en el endotelio vascular que es
llamada estra grasa. Si la hipercolesterolemia persiste, el proceso mencionado se perpeta y la
placa sigue creciendo. Con frecuencia, en etapas tardas la placa arterial se fisura, con lo que se
activa la generacin de un trombo sobre la placa, precipitndose as la oclusin vascular.

55

VARIACIONES DE LA CONCENTRACIN DE LAD


Comida grasa. Despus de ingerir comidas ricas en grasa su concentracin puede disminuir entre

lO y 20%.
Ejercicio. El ejercicio fsico rutinario produce su aumento

PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR COLESTEROL-LBD (Randox)


Fundamento: consta de 2 fases, aclaramiento y reaccin
FASE DE ACLARAMIENTO
Los quilomicrones, las LMBD y las LAD se destruyen mediante detergentes especficos, liberando
sus steres de colesterol y su colesterol libre. Las LBD quedan intactas con este tratamiento. Los
steres de colesterol se hidrolizan enzimticamente, produciendo colesterol y cidos grasos libres.
Posteriormente el colesterol libre se oxida enzimticamente para producir colestanona y perxido
de hidrgeno y finalmente este ltimo se reduce, produciendo agua y liberando oxgeno.

COLESTEROL ESTERASA

steres de colesterol - - colesterol+ cido graso


COLESTEROL OXIDASA

Colesterol+ 0 2 ---+colestenona + H20 2


CATAlASA

2 H20 + 0 2

H20 2
FASE DE REACCIN

El propsito de la fase de aclaramiento es eliminar todo el colesterol asociado a las lipoprotenas


antes mencionadas. Una vez cubierto esto, se repite el procedimiento hasta la produccin de
perxido de hidrgeno para posteriormente hacer que reaccione enzimticamente con ciertas
sustancias para generar quinoneimina, que tiene color. La intensidad del color producido es
proporcional a la concentracin de colesteroi-LBD
PEROXIDASA

H20 2 + 4-AA + HDAOS ---.quinoneimina +4 H2 0 2

56

Pipetear en tubos de ensayo:

Patrn

10 11L

Suero
Reactivo 1

750 11L

750 11L

Mezclar e incubar S minutos a 37" e y medir la absorbancia A1 de la


muestra y del patrn a 578 nm frente a agua destilada
Despus agregar:

Reactivo R2

0.25 mL

0.25 mL

Mezclar e incubar S minutos a 37 2C y medir la absorbancia (A 2 ) de la


muestra y del patrn a 578 nm frente a agua destilada

CLCULO
[(Az- Adm"'""/(A,- A,)pwol x concentracin del patrn = ___ mg/dL colesteroi-LBD

VALORES DE REFERENCIA

ADULTOS

SIN RIESGO

RIESGO MODERADO

RIESGO AlTO

< 130 mg/dL

130-1S9 mg/dl

2160 mg/dl

PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR COLESTEROL-LAD (Randox)


El fundamento y la tcnica son iguales a los del colesteroi-LBD, excepto que en la fase de
aclaramiento se utiliza un detergente adecuado para destruir quilomicrones, LMBD y LBD.

CLCULO

[(A 2 - A1 )m"""'/(A2 - A1 )p,,,l x concentracin del patrn = _ _ _ mg/dL colesteroi-LAD

57

VALORES DE REFERENCIA

SIN RIESGO

RIESGO MODERADO

RIESGO ALTO

HOMBRES

>55 mg/dl

35-55 mg/dl

<35 mg/dl

MUJERES

>65 mg/dl

35-55 mg/dl

<45 mg/dl

BIBLIOGRAFA
Balcells, A.

La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989

Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segad e & A. Snchez Pozo.

Bioqumica

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Devlin, T. M. (Editor)

Textbook of Biochemistry with clinical correlations, s'h edition. Wiley-liss,

2002
Scriver, C. R., A. L. Beaudet, W. S. Sly & D. Valle (Ed.)
ed. McGraw-Hill, 1995

58

The Metobolic Bases of lnherited Disease, 7'h

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

59

TRANSAMINASAS SRICAS
OBJETIVOS

1.

El alumno determinar la actividad de las enzimas TGO y TGP en una muestra de suero
sanguneo

2.

El alumno explicar los contextos clnicos en que es relevante la cuantificacin de


transaminasas s ricas

GENERALIDADES

Las transaminasas o aminotransferasas son enzimas que participan en el metabolismo de los


aminocidos, tanto en su degradacin como en su biosntesis, con un requerimiento estricto por
fosfato de piridoxal, coenzima derivada de la vitamina B6 . Cuando los aminocidos se catabolizan
para liberar energa o se transforman en sustancias utilizables energtica mente, como la glucosa o
los cuerpos cetnicos, la primera reaccin que sufren es la prdida de su grupo amino, lo cual
ocurre principalmente mediante reacciones de transaminacin.
La transaminacin es una reaccin reversible en la que un aminocido y un cetocido
intercambian recprocamente sus grupos amino y ceto, produciendo, a partir del aminocido, un
cetocido y a partir del cetocido, un aminocido, como lo indica la siguiente reaccin general:
Aminocido A + Cetocido A

""' Aminocido B + Cetocido B

Una vez que los aminocidos pierden su grupo amino, se integran a las vas que los catabolizan o
que los transforman en glucosa y/o cuerpos cetnicos.
El cetocido que participa de manera preponderante para que los aminocidos pierdan su grupo
amino es el a-cetoglutarato, el cual se transforma en glutamato en la reaccin transaminante al
perder su grupo ceto y adquirir el amino, de tal manera que este aminocido porta el grupo amino
que perteneci a otros aminocidos.
A fin de que este proceso pueda seguir ocurriendo se hace necesario que el glutamato se
reconvierta en su cetocido por una reaccin no transaminante. La regeneracin de acetoglutarato a partir de glutamato es catalizada por la glutamato deshidrogenasa y se trata de un
proceso de desaminacin oxidativa que libera el grupo amino del glutamato como amonio, al
tiempo que reduce NAO+ como lo indica la siguiente reaccin:
Glutamato + NAO+ + H2 0

""' a-cetoglutarato + NADH + H+ + NH;

Debido a que las tranasaminasas catalizan reacciones reversibles, pueden sintetizar los distintos
aminocidos no esenciales a partir de sus respectivos cetocidos y glutamato.

60

IMPORTANCIA CLNICA
En el plasma sanguneo se encuentran dos transaminasas de relevancia diagnstica, la
transaminasa glutmico-oxalactica (TGO), tambin conocida como aspartato aminotransferasa
(AST), y la transaminasa glutmico-piruvica (TGP) o alanina aminotransferasa (ALT).
La TGO abunda en hgado, corazn y msculo esqueltico, encontrndose tanto en el citosol como
en las mitocondrias de las clulas en dichos tejidos. La TGP presenta una distribucin ms
restringida, encontrndose casi exclusivamente en el citosol de los hepatocitos. Las reacciones que
catalizan estas enzimas son las siguientes:
AST(TGO)
Aspartato + a.-cetoglutarato ,: Oxalacetato + Glutamato
ALT (TGP)
Alanina + a.-cetoglutarato ,: Piruvato + Glutamato
SE PRESENTA INCREMENTO OE LAS TRANSAMINASAS EN LOS SIGUIENTES CASOS:

1.

Infarto al miocardio. Se detecta elevacin de la TGO en el suero sanguneo 6 a 12 horas

despus del infarto y aumenta rpidamente hasta un mximo entre 24 y 48 horas


posteriores al inicio de los sntomas. En casos sin complicaciones la actividad de TGO
empieza a disminuir al poco tiempo, regresando a los valores de referencia hacia el quinto
da o incluso antes. La actividad mxima es del orden de 4 a 8 veces el lmite superior del
intervalo normal, pero esto depende de algunos factores como el tamao del infarto y el
grado del choque. En casos muy severos puede detectarse en el suero la isoenzima
mitocondrial de la TGO, lo cual puede contribuir a definir un pronstico. En los casos
tpicos sin complicaciones, la TGP no se eleva o slo lo hace moderadamente. Sin
embargo, si se presenta insuficiencia cardiaca o choque severo, la TGP generalmente
aumenta y puede hacerlo incluso por arriba de la TGO, lo cual se atribuye al dao heptico
secundario a la anoxia tisular generalizada. Oe esta manera, la determinacin de TGP tiene
poco valor diagnstico en casos de infarto al miocardio, pero puede ser muy til para la
deteccin de sus complicaciones.
2.

Enfermedad hepatobiliar. De manera caracterstica ambas transaminasas se elevan en el

suero de pacientes con hepatitis viral, registrndose mximos de 10 a 30 veces los valores
normales cuando aparece la ictericia. Sin embargo, la elevacin se registra desde la fase
prodrmica, incluso 10 das antes de que se evidencie la ictericia. La elevacin de las

61

transaminasas se presenta en casi todos los tipos de enfermedad hepatobiliar pues el


aumento correlaciona tanto con la regurgitacin biliar como con la necrosis hepatocelular,
de manera que con excepcin de los casos de hiperbilirrubinemia preheptica, los
pacientes ictricos manifestaran incremento de ambas enzimas en el suero. La cirrosis
biliar primaria o secundaria produce incrementos iguales y moderadamente marcados en
ambas transaminasas, aproximadamente 4 veces los valores normales mximos.

La

obstruccin hepatobiliar cursa en casi todos los pacientes con elevacin de ambas
transaminasas, con un intervalo de 2 a 8 veces la actividad superior normal.
3.

Embolia. Si se presenta con infarto y necrosis tisular de cualquier localizacin (excepto el

cerebro) produce incrementos discretos, inconstantes y de corta duracin de las


transaminasas sricas.
4. Afecciones musculares. Se produce incremento de las transaminasas sricas en casos de
distrofia muscular, traumatismos musculares extensos, triquinosis, etc.
S.

Kwashiorkor. Forma grave de desnutricin por carencia de nutrientes vitales bsicos


y deficiencia importante de protenas. El trastorno se inicia comnmente cuando el nio es
destetado y no recibe una dieta apropiada, sino cantidades importantes de carbohidratos.
En estas condiciones los nios son ms vulnerables a padecer procesos infecciosos,
ofreciendo poca resistencia frente a ellos pues de hecho se trata de pacientes
inmunodeficientes que fallecen frecuentemente vctimas de infecciones generalizadas. A
primera vista los nios con kwashiorkor no parecen enfermos pues tienen cara redonda
con grosor de miembros aparentemente adecuado, aunque con abdomen prominente.
Estas caractersticas se deben a la presencia de edema por la baja concentracin de
protenas plasmticas. Los msculos sin embargo se hallan debilitados al no disponer de
aminocidos para soportar el recambio natural de sus protenas. La prominencia
abdominal es el resultado del edema, la ascitis y la hepatomegalia que acompaan a la
patologa. Los nios afectados pueden mostrar cifras relativamente altas de la TGP s rica
(aproximadamente el 40% de los pacientes afectados alcanzan actividades de hasta 10
veces los valores normales), las cuales se mantienen hasta dos semanas despus de
empezar a tomar una alimentacin normal.

62

PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR ACTIVIDAD DE AST (Randox)

Fundamento: se pone la muestra en contacto con aspartato y a-cetoglutarato para que


reaccionen transaminando y produzcan glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido
reacciona con 2, 4-dinitro-fenihidracina y produce oxalacetato hidrazona, que es un compuesto
que tiene color. la intensidad del color es proporcional a la actividad de la AST.

Pipetear en tubos de ensayo:

Suero

0.1 ml

Tampn (R1-AST)

0.5 ml

Mezclar e incubar a 3r
Despus agregar:

0.5 ml

e durante exactamente 30 minutos.

2, 4-DNP (R2)

0.5 ml

Suero

0.1 ml

0.5 ml

Mezclar, dejar reposar durante exactamente 20 minutos entre 20


C. Despus agregar:

Hidrxido sdico (R3)

5.0ml

y 25

5.0ml

Mezclar y despus de S minutos leer la absorbancia (A) a 546 nm de la


muestra frente al blanco

CLCULO

Obtener la actividad de la ASTa partir de la siguiente tabla:


ABSORBANCIA

AST{U/L)

ABSORBANC!A

AST(U/L)

0.020
O.D30

7
10
13
16
19
23
27
31

0.100
0.110
0.120
0.130
0.140
0.150
0.160

36
41
47
52
59
67
76
89

0.040

0.050
0.060
0.070
0.080
0.090

0.170

63

VALORES DE REFERENCIA

Hasta 12 U/L AST

PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR ACTIVIDAD DE ALT (Randox)

Fundamento: se pone la muestra en contacto con alanina y a-cetoglutarato para que reaccionen
transaminando y produzcan glutamato y piruvato. El piruvato producido reacciona con 2, 4dinitro-fenihidracina y produce piruvato hidrazona, que es un compuesto que tiene color. La
intensidad del color es proporcional a la actividad de la ALT.

Pipetear en tubos de ensayo:

Suero
Tampn (R1-ALT)

0.1 mL
0.5 mL

0.5 mL

Mezclar e incubar a 37 C durante exactamente 30 minutos.


Despus agregar:

2, 4-DNP (R2)

0.5 mL

Suero

0.1 mL

0.5 mL

Mezclar, dejar reposar durante exactamente 20 minutos entre 20 y 25


!!C. Despus agregar:

Hidrxido sdico (R3)

5.0 mL

5.0mL

Mezclar y despus de S minutos leer la absorbancia (A) a 546 nm de la

muestra frente al blanco

64

CLCULO
Obtener la actividad de la ALTa partir de la siguiente tabla:
ABSORBANCIA

ALT (U/L)

ABSORBANCIA

ALT (U/l)

0.025
0.050

4
8
12
17
21
25
29
34
39
43

0.275
0.300
0.325
0.350
0.375
0.400
0.425
0.450
0.475

48
52
57
62
67
72

0.075

0.100
0.125

0.150
0.175
0.200
0.225
0.250

o.soo

77

83
88
94

VALORES DE REFERENCIA
Hasta 12 U/L ALT

BIBLIOGRAFA
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segad e & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McG raw-Hill, 1998
Devlin, T. M. (Editor) Textbaok of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
http ://www .m o nografias.com/tra bajos 15/desn utricion-c1ases/ desnutricionclases.shtm 1
(kwashiorkor)

65

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

66

UREA S RICA
OBJETIVOS

1.

El alumno determinar la concentracin de urea en una muestra de suero sanguneo

2.

El alumno explicar el contexto clnico relevante de la cuantificacin de urea srica

GENERALIDADES

El catabolismo de las protenas es un proceso que ocurre de continuo por el recambio normal a
que se encuentran sometidas la protenas y por el recambio celular en los tejidos con capacidad de
divisin celular. Tambin ocurre en forma importante durante el ayuno, para activar la sntesis de
glucosa, sustancia fundamental para el cerebro y otros tejidos o tipos celulares. Los productos del
catabolismo de las protenas son los aminocidos libres, los cuales mediante el proceso conocido
como transdesaminacin se transforman en los cetocidos correspondientes, con la liberacin
concomitante del nitrgeno aminoacdico en forma de ion amonio.
El amonio es una sustancia txica para el organismo, especialmente para el sistema nervioso

central, por lo que, luego de liberarse en los diversos tejidos, llega al hgado formando parte de
diversas molculas, fundamentalmente alanina y glutamina, las cuales se descomponen para
liberar un nitrgeno como amonio.
En el hgado el amonio se transforma en urea a travs del ciclo de la urea o ciclo de KrebsHenseleit. La urea es una sustancia de muy bajo peso molecular, sin carga elctrica formal y capaz

de permear fcilmente las membranas. Es un producto de desecho que se elimina principalmente


por la va renal y es notoriamente menos txico que el amonio.
La insuficiencia heptica limita la transformacin de amonio en urea, de lo cual puede resultar
hiperamonemia, condicin bajo la cual el cerebro sufre desarreglos metablicos que se traducen

en alteraciones neurolgicas potencialmente severas.


En condiciones normales, la concentracin de urea en la sangre se halla influenciada por la
magnitud del aporte dietario de protenas y por el estado de hidratacin general. En este ltimo
caso, la deshidratacin se asocia con hemoconcentracin y consecuentemente se registra
incremento aparente de la concentracin de urea. El exceso de lquidos, por el contrario, se asocia
con hemodilucin y baja en la concentracin de urea.
El trmino azoemia o azotemia se utiliza en ocasiones para referirse a la presencia de nitrgeno
de origen protenico en la sangre, es decir a la urea.

67

IMPORTANCIA CLNICA
EL AUMENTO DE LA CONCENTRACIN DE UREA EN LA SANGRE PUEDE OCURRIR DEBIDO A CAUSAS
COMO LAS SIGUIENTES:
PRERRENALES, las cuales se deben a un descenso en la perfusin renal por diferentes factores,
entre los cuales se encuentran:

1.

Deshidratacin, causada por quemaduras, hemorragia digestiva, diarrea, vmito, lavado


gstrico y terapia a base de diurticos.

2.

Secuestro de lquidos, como ocurre en la pancreatitis y la peritonitis

3.

Insuficiencia circulatoria, la cual se puede presentar en la insuficiencia cardiaca congestiva,


vasodilatacin perifrica, sndrome hepatorrenal (condicin clnica que ocurre en
pacientes con patologa heptica avanzada, caracterizada por el deterioro de la funcin
renal, apareciendo una notoria vasoconstriccin que da lugar a reduccin importante de la
filtracin glomerular) y en el estado de choque.

4.

Infecciones, debido al aumento de la protelisis, como ocurre en la neumona, la difteria y


la escarlatina.

RENALES O NEFROPTICAS, las cuales incluyen patologas y condiciones que cursan con
insuficiencia renal aguda o crnica. Entre ellas se encuentran las siguientes:

1.

Uremia y glomerulonefritis agudas. Grupo de enfermedades que cursan con inflamacin


de las estructuras internas del rin, en particular de los glomrulos. Frecuentemente su
causa es una respuesta inmunitaria desencadenada por infecciones. Cursa con hematuria
micro o macroscpica, proteinuria en grado variable, hipertensin, insuficiencia renal
aguda

edema

hipervolmico.

Un

buen

ejemplo

es

la

glomerulonefritis

postestreptoccica, que se presenta en nios despus de que sufrieron un episodio de


faringitis por estreptococo (3-hemoltico. Los antgenos de la bacteria se depositan en los
glomrulos durante la infeccin y posteriormente la respuesta inmunolgica produce
anticuerpos que generan complejos con los antgenos, alterando la permeabilidad de la
membrana basal glomerular.
2.

Nefropata anrica. Insuficiencia renal en que se pierde la capacidad de producir orina.


Puede deberse a traumatismos, anoxia u otras causas. Por ejemplo puede presentase en
pacientes con hiperuricemia extrema (> 15 mg/dL) por precipitacin de cristales de cido
rico en los t bulos colectores, favorecida por un pH urinario bajo.

68

3.

Uremia crnica, debida a lesiones renales avanzadas, glomerulonefritis crnica, esclerosis

renal, tuberculosis renal, pielonefritis y sndrome nefrtico (combinacin de alteraciones


clnicas y de laboratorio caracterizadas por proteinuria severa e hipoalbuminemia. En
forma variable aparecen edema, hiperlipidemias y lipiduria).
4.

Administracin

de

frmacos

nefrotxicos,

tales

como

furosemida,

rifampicina,

antiinflamatorios no esteroides, etc.


POSTRENALES, las cuales dificultan la excrecin de urea debido a obstruccin de vas como ocurre
en los siguientes casos:

1. Cncer de prstata
2.

Anuria obstructiva, debido a la presencia de clculos ureterales, en particular si la

obstruccin es bilateral o si no existe el rin contra-lateral


3.

Accidentes quirrgicos, por ejemplo ligadura ureteral

PROCEDIMIENTO (Randox)

Fundamento: la hidrlisis de la urea produce amoniaco y dixido de carbono por catlisis de la


ureasa. El amoniaco generado reacciona con salicilato e hipoclorito, produciendo 2, 2dicarboxilindofenol, que tiene color verde. La intensidad del color obtenido es directamente
proporcional a la concentracin de urea.

Pipetear en tubos de ensayo:

10 .tl

Patrn

10 .tl

Suero o plasma
Reactivo de trabajo

1.0ml

1.0 ml

1.0 ml

Mezclar e incubar durante 3 minutos a 37 C. Despus, aadir:

Hipoclorito sdico

200 .tl

200 .tl

200 .tl

Mezclar e incubar a 37 C durante 5 min. y medir la absorbancia (A) a 600 nm de la

muestra y del patrn frente al blanco. El color es estable durante 2 horas

69

CLCULO

(A muew,/A ,,,;,)X 50= _ _ mg/dl Urea


VALORES DE REFERENCIA

15-45 mg/dl

BIBLIOGRAFA

Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989


Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
Borrego, J. Nefrologa, Corporacin para investigaciones biolgicas, 2003, p. 442
http://www.sepeap.org/imagenes/secciones/lmage/ USER /Giomerulonefritis aguda(1)pdf
http://www.bago.com/BagoArg/Biblio/urolog148web.htm

70

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

71

CAPACIDAD AMORTIGUADORA DEL PLASMA SANGUNEO


OBJETIVOS

1.

El alumno comparar una muestra de plasma sanguneo con una muestra de solucin
salina fisiolgica en cuanto a su capacidad de amortiguamiento

2.

El alumno explicar el contexto fisiolgico y clnico relevante del amortiguamiento del pH


en el organismo humano

GENERALIDADES

Los cambios en la concentracin de hidrogeniones afectan la estructura de las protenas. Si se


trata de enzimas, es posible que pierdan o disminuyan significativamente su actividad cataltica. Si
se trata de protenas membranales, pueden sufrir alteraciones severas en su estructura, con
potencial impacto en la actividad de diversos sistemas de transporte y sealizacin que actan en
la membrana.
El amortiguamiento del pH es la propiedad que tienen ciertas soluciones de no modificar
significativamente su pH al recibir cantidades moderadas de cido o de lcali, cantidades que,
aadidas a muestras equivalentes de agua o soluciones no amortiguadas, produciran cambios
significativos de pH.
El pH sanguneo normal es de 7.4 (intervalo 7.35-7.45). La importancia de que no vare de manera
significativa se aprecia al considerar la informacin emprica de que virtualmente nadie sobrevive
a valores de pH sanguneo menores a 7.0 ni mayores a 7.8. El mantenimiento del pH normal
depende de la presencia de sistemas amortiguadores, de los cuales los ms importantes en la
sangre son el de bicarbonato/C0 2 y el de hemoglobinato/ hemoglobina.
IMPORTANCIA CLNICA

Las alteraciones del pH sanguneo pueden ser las siguientes:


Acidosis metablica. Consiste en la disminucin del pH por aumento en la produccin de cidos

no carbnicos. Por ejemplo, en la Diabetes mellitus tipo

puede producirse acidosis por la

produccin incrementada de cuerpos cetnicos, de los cuales los principales son el cido
acetoactico y el cido ~ -hidroxibutrico. En pacientes con hipoxemia intensa se producen
cantidades excesivas de cido lctico, lo cual tambin puede producir acidosis metablica

72

La acidosis metablica puede resultar de las diarreas graves debido a que el lquido de los
intestinos delgado y grueso posee cantidades importantes de bicarbonato.
En la uremia debida a casi todas las formas de enfermedad renal crnica se produce acidosis
metablica debido a que la secrecin renal de hidrogeniones y de amoniaco es deficiente. El
amonaco (NH 3 ) que se produce en los riones se combina con hidrogeniones del medio y se
convierte en amonio (NH;), de manera tal que cada ion amonio que se excreta por la orina
equivale a la eliminacin de un hidrogenin.
Alcalosis metablica. Consiste en el incremento de pH debido generalmente a la prdida de cido
no carbnico, como ocurre en los casos de vmito prolongado o intenso, y en casos en los que se
practica aspiracin gstrica. En ambas condiciones se pierde el cido clorhdrico presente en el
jugo gstrico y se pierde el equilibrio cido-bsico a favor de la alcalosis.
En los casos en los que el rin retiene Na y HC0 3, como ocurre con el uso teraputico excesivo
de hormonas esteroides suprarrenales o en enfermedades que cursan con hiperproduccin de
dichas hormonas, puede presentarse alcalosis metablica debido al exceso de concentracin de
bicarbonato.
El rin deja pasar con cierta facilidad al potasio (K), y aunque con dietas normales es improbable
una deficiencia de este elemento, en pacientes alimentados con sonda nasogstrica o por va
intravenosa durante tiempos prolongados, puede presentarse dficit si no se incorpora en esas
formas de alimentacin.
Debido a que el potasio se encuentra fundamentalmente en el medio intracelular, su prdida por
el intestino y/o por el rin, produce su deplecin intracelular. La respuesta a esto es el ingreso de
hidrogeniones y sodio a las clulas. Si a la deplecin de potasio acompaa una disminucin del
volumen extra celular, el rin retiene sodio y empieza a excretar abundante e inadecuadamente
iones hidrgeno para neutralizar las cargas negativas de iones poco reabsorbibles, como son
fosfato, sulfato y aniones de cidos orgnicos. Dicha excrecin de hidrogeniones explica la
alcalosis metablica que puede asociarse con la deplecin de potasio.
Acidosis respiratoria. Consiste en la disminucin del pH debida a la incapacidad de la ventilacin
alveolar para excretar C0 2 a una velocidad apropiada, producindose en consecuencia un exceso
de cido carbnico. La hipoventilacin se puede producir si el centro respiratorio se halla
deprimido por agentes anestsicos, sedantes o hipoxia y en alteraciones del sistema nervioso
central de diversos tipos, como traumatismo, isquemia o presin elevada del lquido
cefalorraqudeo.

73

La hipoventilacin alveolar tambin puede producirse en las enfermedades de los msculos


respiratorios as como en las afecciones que limitan significativamente los movimientos del trax,
como artritis, deformidades torcicas y obesidad. El movimiento de los pulmones puede verse
restringido por acumulacin intratorcica de lquido pleural o de sangre, y por neumotrax
(acumulacin de aire o gas en la cavidad pleural). Las enfermedades pulmonares, como bronquitis
crnica, enfisema, asma, insuficiencia cardiaca congestiva, tumores infiltrativos y obstrucciones de
vas respiratorias altas par estenosis traqueal, cuerpo extrao o tumor, tambin se asocian con
hipoventilacin alveolar.
Alcalosis respiratoria. Consiste en el aumento del pH debido a una ventilacin alveolar excesiva

con relacin a los requerimientos de eliminacin de C0 2 La hiperventilacin se produce, entre


otras causas, por sobredosis de medicamentos como los salicilatos, 2,4-dinitrofenol y paraldehdo.
La ventilacin pulmonar tambin puede aumentar por efecto de lesiones del SNC como meningitis,
encefalitis, hemorragia cerebral o traumatismos. La fiebre, el choque, la bacteriemia por gram
negativos y el hipertiroidismo tambin se acompaan por hiperventilacin. Asimismo, la
hiperconcentracin de hormonas como la adrenalina y la progesterona puede producir
hiperventilacin, presumiblemente por accin sobre el sistema nervioso central. Otra causa de la
alcalosis respiratoria es la hiperventilacin histrica.

MATERIAL

1.

Vasos de precipitados de 50 mL (2)

2.

Plasma sanguneo (40 mL)

3.

Solucin salina fisiolgica (20 ml)

4.

Solucin de HCI 0.1 N

5.

Solucin de Na OH 0.1 N

6.

Solucin amortiguadora con pH 7.0

7.

Pipetas de 1 mL (2)

8.

Potencimetro

9.

Agitador magntico

10. Regla geomtrica

74

PROCEDIMIENTO

1. Transfiera 20 mL de plasma sanguneo a un vaso de precipitados de 50 mL


2.

Transfiera 20 mL de solucin salina fisiolgica a otro vaso de 50 mL

3.

Registre el pH basal de ambas muestras con el potencimetro debidamente calibrado

4.

Aada a cada muestra 1.0 mL de solucin 0.1 N de HCI en fracciones de 0.2 mL, mezclando
bien despus de cada adicin mediante el agitador magntico. Registre cada vez el pH.

5.

Grafique el pH en funcin del volumen aadido de la solucin de cido

6.

Repita el experimento con otra muestra de plasma aadiendo 1.0 mL de solucin 0,1 N de
Na OH en fracciones de 0.2 mL, como en el primer experimento, y grafique los resultados

BIBLIOGRAFA
Krupp, M. A, L. M. Tierney, E. Jawetz, R. L. Roe & C. A Ca margo. Manual de Diagnstica Clnica y de

Laboratorio, 8'. Ed. El Manual Moderno, 1986


Masora, E. J. & P. D. Siegel. Equilibrio cido-Base. Ed. Panamericana, 1973
1

Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical corre/ations, 5 h edition. Wiley-Liss,


2002

75

12

11

10

pH

0.2

0.4

0.6

Volumen de solucin 0.1 N de HCI o NaOH (ml)

0.8

l. O

RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES:

77

CUANTIFICACIN DE HEMOGLOBINA GLICADA


OBJETIVOS

1. El alumno explicar qu es la hemoglobina glicada y de qu depende su formacin


2.

El alumno explicar el contexto clnico en que es relevante la cuantificacin de


hemoglobina glicada

GENERALIDADES

La glucosa es una sustancia fundamental para el metabolismo del organismo humano. Los
distintos tipos celulares se hallan dotados de transportadores para este importante combustible
biolgico, teniendo acceso por lo tanto al ambiente intracelular en todos los tejidos. En el caso
particular de los eritrocitos el transportador de la glucosa es el GluTl, que, como todos estos
transportadores para glucosa, acta con un mecanismo de difusin facilitada.
La glucosa es una sustancia reactiva, capaz de combinarse qumicamente con grupos amino. En el
caso particular de la hemoglobina A1 1a glucosa se combina con el grupo amino libre de las cadenas
~ de la protena, formando la

hemoglobina glicada conocida como HbA1c (tambin llamada

glicohemoglobina o hemoglobina glucosilada), sustancia totalmente estable que no desaparece


sino hasta que los eritrocitos son captados por el sistema retculoendotelial como parte del
proceso de recambio celular.
La reaccin entre la glucosa y la hemoglobina ocurre en mayor medida mientras mayor es la
concentracin de glucosa circulante, por lo cual se utiliza como medio de monitorizar el nivel de
glucemia en las ltimas semanas previas a la toma de muestra. Aunque existe correlacin entre la
proporcin de hemoglobina glicada y la glucemia que ha tenido el paciente 1 a 3 meses antes del
anlisis, la mejor correlacin se tiene con la glucemia de 2 a 4 semanas previas a la toma de
muestra.
IMPORTANCIA CLNICA

La utilidad de la cuantificacin de hemoglobina glicada se tiene principalmente en el marco de la


diabetes mellitus tipos 1 y 2. La diabetes mellitus tipo 2 es una patologa de amplsima distribucin
mundial en la actualidad. En Mxico la Encuesta Nacional de Salud 2006 revel que en promedio
7% de las personas adultas (20 o ms aos de edad) eran diabticas con diagnstico previamente

78

establecido, siendo mayor la prevalencia al aumentar la edad, de manera que en el grupo de edad
de 50 a 59 aos era de 13.5% y en el de 60 a 69 aos era de 19.2%, observndose en general una
tendencia mayor en el sexo femenino.
La diabetes mellitus es una patologa que en funcin de tiempo impacta en la funcionalidad de la
micro y vasculatura, lo cual produce patologas derivadas de gran relevancia como son la
insuficiencia renal, las retinopatas y las neuropatas, as como la insuficiencia cardiaca y el infarto
al miocardio.
La presencia de 9-9.5% o ms de hemoglobina glicada se asocia con una progresin muy rpida de
las complicaciones microvasculares que produce la hiperglucemia, habindose encontrado en
estudios de alto nivel que disminuyendo la proporcin de hemoglobina glicada, disminuye el
desarrollo y progreso de alteraciones en ojos, riones y nervios, tanto en la diabetes tipo 1 como
en la tipo 2. Se ha establecido que en los pacientes diabticos el riesgo de sufrir las complicaciones
microvasculares se reduce en 10% por cada punto porcentual que disminuya la concentracin de
hemoglobina glicada, de manera que si un paciente con un valor de 10% lo reduce a 8, tendr un
20% menos riesgo de sufrir las complicaciones, debiendo disminuir la hemoglobina glicada por
debajo de 7% para prevenir la patologa microvascular.
Recientemente la hemoglobina glicada ha sido integrada como criterio diagnstico de la diabetes
mellitus por la Asociacin Americana para la Diabetes (AAD). Una concentracin de 6.5 %o ms de
hemoglobina glicada es diagnstica de dicha patologa, como lo son otros criterios de la AAD entre
los cuales se encuentran la concentracin de glucosa de 126 mg/dL o ms en plasma despus de
ayuno de al menos 8 horas o el registro de 200 mg/dL o ms a las 2 horas en prueba de tolerancia
a la glucosa.
La cuantificacin peridica de hemoglobina glicada permite saber el grado de control de la
glucemia en los ltimas semanas antes de realizarse la prueba, permitiendo al profesional de la
salud darse cuenta con un criterio fidedigno del apego que ha tenido el paciente a las
prescripciones dietticas y medicamentosas que recibi. La AAD recomienda la cuantificacin de
HBA1c al menos 2 veces al ao.

79

PROCEDIMIENTO (NycoCard)
Fundamento: los eritrocitos se lisan al ponerse en contacto con una solucin amortiguada de
glicinamida que contiene tambin un detergente y cido brico conjugado con un colorante. La
solucin produce que la hemoglobina liberada se precipite y en esas condiciones la hemoglobina
glicada HbA1c une al conjugado de cido brico en forma especfica. Posteriormente se transfiere
una alcuota de la solucin a una membrana porosa que retiene la hemoglobina libre o conjugada
y filtra el conjugado de cido brico, se lava el precipitado pare eliminar el conjugado de cido
brico residual que no se uni y se cuantifica con un lector especial la hemoglobina glicada.

1.- Aadir S .tL de sangre al tubo de prueba con reactivo (R1)


2.- Mezclar bien
3.- Incubar por 2 minutos
4.- Mezclar otra vez
5.- Aplicar 25.tL de combinacin de reaccin al centro de la placa de membrana
6.- Esperar de 15-20 segundos a que filtre
7.- Aadir 25uL de solucin de lavado (R2)
8.- Esperar 10 segundos a que filtre
9.- Leer el resultado usando el lector de NycoCard Reader 11, colocando el lpiz
sobre la membrana y bajando el capuchn del mismo.

VALORES DE REFERENCIA

4.5-6.3%

80

BIBLIOGRAFA

Bunn, HF, Haney, DN, Gabbay, KH and Gallop, PM. (1975). Further identification of the nature and
linkage ofthe carbohydrate in Hemoglobin A1c Biochem Biophys Res Commun 67: 103-109
Encuesta Nacional de Salud y Nutricin 2006, Instituto Nacional de Salud Pblica y Secretara de
Salud
Executive summary: standards of medical ca re in diabetes-2010. Diabetes Ca re 2010; 33: 54-60
Hermoglobin A1 Fact Sheet, Michigan Diabetes Research and Training Center. University of
Michigan Health System 2011:
http:flwww.med.umich.edu/mdrtc/cores/ChemCore/hemoalc.htm
Mathur, R. (2009) Hemoglobin A1 test.
http:flwww.medicinenet.com/hemoglobin ale test/index.htm

81

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

82

EXAMEN GENERAL DE ORINA

OBJETIVOS
1.

El alumno realizar el anlisis general de una muestra de orina

2.

El alumno explicar la relevancia clnica del examen general de orina

GENERALIDADES
El examen general de orina (EGO) se ha practicado con fines diagnsticos durante siglos y
probablemente es el ms antiguo de los procedimientos de laboratorio utilizados en Medicina.
El estado nutricional del paciente, el estado de sus procesos metablicos y la capacidad renal para
manejar selectivamente las sustancias que recibe, constituyen los tres factores principales que
determinan la composicin de la orina
Con la introduccin de tcnicas sencillas en las que se utilizan tiras impregnadas con ciertos
reactivos, se ha facilitado la realizacin del EGO.

MATERIAL

1. Tubos de 13 X 100 mm
2. Probeta
3. Porta y cubreobjetos
4. Densmetro
S. Microscopio
6. Pipeta graduada de 10 mL
7. Tiras reactivas
8. Muestra reciente de orina
9. centrfuga clnica

Obtencin de la muestra. En condiciones ideales la obtencin de la muestra de orina debe


hacerse como sigue: en el hombre se limpia el glande y el meato urinario con un algodn
humedecido con agua tibia. La mujer debe separar los labios vaginales para limpiar
adecuadamente con el mismo material la regin del orificio uretral con movimientos de adelante
hacia atrs.

83

Una vez realizada la limpieza, se colecta la primera orina de la maana en un recipiente limpio,
seco y de ser posible estril. Por el grado de concentracin de esa orina es ms probable detectar
alguna anormalidad en su composicin. En caso de que no se tenga disponible la primera orina de
la maana, conviene concentrar el sedimento por centrifugacin secuencial de unas 3 alcuotas de
5 ml en el mismo tubo. De esta manera se aumenta la probabilidad de detectar alguna anomalfa
que presente la muestra.
Es necesario revisar la historia clnica del paciente a fin de constatar si recientemente ha ingerido
medicamentos que pudieran afectar los resultados del anlisis.
Caractersticas macroscpicas normales de la orina y determinacin de la densidad. las
caractersticas macroscpicas normales de la orina son las siguientes:

Color

pajizo

Olor

sui generis

Aspecto

cristalino

Para determinar su densidad se transfieren 20 ml de orina a la probeta especial para medir dicho
parmetro. Posteriormente se introduce cuidadosamente el densmetro y al tiempo que se suelta
se hace girar con un movimiento rpido, con lo que se logra que flote libremente sin adherirse a
las paredes de la probeta. Una vez que se estabiliza el densmetro, se toma la lectura registrando
directamente el valor marcado por el nivel de la superficie de la orina en la escala localizada en el
tallo del densmetro.
Tiras reactivas. Diversos parmetros de importancia pueden analizarse a travs de las tiras
reactivas {Combur 10 test), para lo cual solo se introduce la tira reactiva en una muestra de orina
fresca del paciente. la tira reactiva presenta varias zonas impregnadas con reactivos especficos
para la deteccin de dichos parmetros. la lectura se hace por comparacin de la tira humedecida
con la orina, con un patrn de colores que aparece en el envase de las tiras.

84

Parmetros que se analizan mediante tiras reactivas y su resultado normal

Densidad

1.003 -1.030

pH

4.5-8.0

Leucocitos

O- 4 por campo

Nitritos

negativo

Protenas

negativo

Glucosa

negativo

Cuerpos cetnicos

negativo

Urbilingeno

negativo

Bilirrubina

negativo

Sangre oculta

negativo

Examen microscpico del sedimento urinario.


El sedimento se obtiene por centrifugacin de 5 ml de orina en un tubo de 13 x 100 mm, a 1800 r.
p. m. durante 5-10 minutos. Se decanta la orina y se resuspende el sedimento en la gota residual
que queda en el tubo. Posteriormente se transfiere una alcuota de la suspensin as preparada a
un portaobjetos, colocando sobre ella un cubreobjetos. Enseguida se observa el sedimento al
microscopio.
Los elementos que pueden observarse en el sedimento son los siguientes:

1.

Eritrocitos.

2.

Neutrfilos.

3.

Clulas de los t bulos renales.

4.

Epitelio vesical.

5.

Clulas escamosas.

6.

Cilindros hialinos.

85

7.

Cilindros granulados.

8.

Cilindros leucocitarios.

9.

Cilindros epiteliales tubulares.

10. Cilindros creos.


11. Cilindros de eritrocitos.
12. Cristales de oxalato de calcio
13. Cristales de uratos
14. Cristales de fosfatos

Fotografas de algunos elementos que pueden encontrarse en el sedimento urinario:

Eritrocitos en la orina (tipo estrella por prdida de LIC)

Cristales de oxalato de calcio

86

Cilindro leucocitario

Clulas escamosas

Cristales de fosfato triple

87

Cilindro granuloso

Cristales de cido rico


IMPORTANCIA CLNICA

Color. Los cambios de color pueden ser consecuencia de la dieta, de frmacos o de diversos

trastornos metablicos o infecciosos.


Olor. En la diabetes sacarina (diabetes mellitus), la inanicin y la deshidratacin, la orina puede

presentar un olor frutal caracterstico debido a la presencia de cuerpos cetnicos. En la infeccin


de vas urinarias es comn un olor ftido, especialmente si el agente etiolgico es E. coli.
Aspecto. La turbidez de la orina puede deberse a la presencia de cantidades anormales de

leucocitos, eritrocitos, bacterias, grasa o clulas de descamacin, pudiendo denotar infeccin


renal.
Densidad. La disminucin de la densidad (hipostenuria), esto es de 1.001 a 1.003, constituye un

signo que puede estar asociado con diabetes inspida central o nefrognica, glomerulonefritis,

88

pielonefritis, insuficiencia renal, o ingestin excesiva de agua. El incremento de la densidad


acompaa a los trastornas hepticos, insuficiencia cardiaca congestiva, deshidratacin y sndrome
nefrtico (nefrosis).
pH. Entre otras causas, el pH alcalino de la orina puede deberse a infeccin de las vas urinarias
por Proteus (hidroliza la urea, con liberacin de amonaco), alcalosis metablica, alcalosis
respiratoria, etc. El pH cido se observa en casos de tuberculosis renal, pirexia, fenilcetonuria,
infeccin de vas urinarias por E. coli y en todas las formas de acidosis.
Protenas. Normalmente la orina no contiene cantidades demostrables de protenas. En las
enfermedades del rin se pierden por la orina protenas plasmticas, particularmente albmina.
Por Jo tanto, la proteinuria sugiere la presencia de nefropatas como glomerulonefritis aguda o
crnica, glomeruloesclerosis, nefrolitiasis, rin poliqustico e insuficiencia renal aguda o crnica.
Tambin se presenta proteinuria en el mieloma mltiple, si bien en este caso no se trata de
albmina sino de una protena de bajo peso molecular capaz de atravesar el filtro glomerular
normal, conocida como protena de Bence-Jones, que corresponde a las cadenas ligeras de las
globulinas y, mismas que se sobreproducen en dicha patologa.
Azcares. La glucosuria suele denotar la presencia de diabetes mellitus, pero tambin suele ser
una consecuencia de la presencia de feocromocitoma, sndrome de Cushing o hipertensin
intracraneal. La fructosuria, la galactosuria y la pentosuria denotan trastornos metablicos
hereditarios poco frecuentes. Sin embargo, despus de la ingestin de pentosas (cerezas, uvas,
ciruelas, etc.) o fructosa (diversas frutas y productos dulces industrializados), puede presentarse
pentosuria o fructosuria de origen alimentario, debido a que el hgado no tiene la suficiente
capacidad para metabolizar rpidamente estos azcares. Los tbulos renales no reabsorben dichos
monosacridos, razn por la cual pueden excretarse por la orina.
Cuerpos cetnicos. La aparicin de estas sustancias en la orina constituye un signo caracterstico
de la diabetes mel/itus tipo 1, en la cual el aporte insuficiente de insulina permite la
activacin de la liplisis en el tejido adiposo, el cual libera cantidades muy importantes de
cidos grasos de cadena larga que en buena medida convierte el hgado en cuerpos
cetnicos.
Los cuerpos cetnicos tambin pueden aparecer en la orina en la diabetes mellitus tipo 2, en la
inanicin y en situaciones que aumentan extraordinariamente las necesidades metablicas, como
es el caso de ejercicio intenso de larga duracin, desnutricin, diarrea y vmito.

89

Nitritos. La mayora de los grmenes patgenos que pueden encontrarse en la orina reducen el

nitrato a nitrito, pudiendo determinarse de esta manera indirecta la presencia de grmenes como

E. coli, Proteus, Klebsiella, Aerobacter, Salmonellas y Citrobacter.


Bilirrubina. La bilirrubina libre o no conjugada es incapaz de atravesar la barrera glomerular del

rin puesto que no se encuentra libre sino asociada con albmina. Cuando la bilirrubina libre se
conjuga en el hgado con glucuronato, se hace soluble en agua y entonces s es capaz de atravesar
el glomrulo puesto que se desplaza por s misma en la sangre. La bilirrubina conjugada
normalmente se excreta por la bilis, de manera que la orina normal no contiene bilirrubina. La
bilirrubina conjugada se elimina por la orina en cuadros de ictericia obstructiva o hepatocelular,
produciendo el signo de coluria (orina oscura).
Por efecto de toxinas y ciertos frmacos tambin se encuentra bilirrubina en la orina debido al
aumento de la presin intracanalicular por inflamacin periportal o fibrosis y a causa de la
inflamacin de los hepatocitos. La bilirrubina puede aparecer en la orina en la hepatitis antes de
que se manifieste ictericia. La positividad de bilirrubina en orina puede ser un indicio precoz de
afeccin heptica.
Urobilingeno. La bilirrubina se reduce a mesobilirrubina, estercobilingeno y urobilingeno por

accin de las bacterias intestinales. Normalmente el urobilingeno absorbido por el intestino se


excreta por el hgado (circulacin entero heptica), apareciendo nicamente 4 mg en la orina de 24
horas. La concentracin aumentada de urobilingeno en la orina puede deberse al deterioro de la
funcin heptica como ocurre en la hepatitis viral, la cirrosis, la hepatitis txica, etc. o a la
sobrecarga del hgado con bilirrubina indirecta, como ocurre en los sndromes hemolticos (lcterus

neonatorum, ictericia transfusional, policitemia, paludismo, etc.).


Sangre oculta. Tambin conocida como hematuria microscpica, se trata de la presencia de

cantidades pequeas de sangre en la orina, que pueden estar asociadas con afecciones renales o
de vas urinarias. Por ejemplo puede tratarse de tuberculosis renal, glomerulonefritis o procesos
inflamatorios de vas urinarias como la cistitis. La sangre oculta tambin puede ser expresin de
procesos sistmicos como el dengue hemorrgico o la prpura trombocitopnica, ya que en
ambas condiciones se reduce el nmero de plaquetas y se facilita la hemorragia. Existen
condiciones no patolgicas en que se presenta sangre oculta en la orina, como puede ser el caso
de las mujeres menstruantes, o despus de realizar ejercicio fsico intenso o incluso el baile
intenso y prolongado.

90

Eritrocitos. Por alteraciones osmticas, en la orina concentrada se observan dentados y en la

diluida se encuentran aumentados de volumen. Si existen en grandes cantidades se obtendrn


pruebas positivas para protena. Los eritrocitos se cuentan por campo microscpico de gran
aumento o con hemocitmetro. La hematuria macro o microscpica puede ser ocasionada por
ejercicio exhaustivo, glomerulonefritis, sndrome nefrtico, infecciones, clculos, tumores de
rin, vejiga o uretra, etc. Es normal encontrar 0-3 eritrocitos por campo.
Leucocitos (piocitos): estas clulas se encogen en la orina muy cida; en la alcalina se observan

aumentados de volumen y adheridos unos con otros. Los leucocitos se cuentan por campo de gran
aumento o colocando una pequea gota de orina directamente en el hemocitmetro; se observan
en grandes cantidades en presencia de cualquier infeccin urogenital. Es normal encontrar 0-4
leucocitos por campo
Cilindros. Se originan por la precipitacin de !as mucoprotenas en las paredes de los tbulos y

generalmente se encuentran en las nefropatas; se pueden identificar distintas clases de


elementos y su significado se valorara de acuerdo con los probables sitios de origen: la
enfermedad glomerular activa origina la formacin de cilindros eritrocitarios en el extremo
proximal de la nefrona; la inflamacin tubular asociada con las enfermedades degenerativas
pueden originar cilindros grasos, cilindros creos, cilindros hialinos y granulosos de menor
trascendencia; los tbulos colectores producen cilindros creos o granulares anchos cuando el
flujo urinario a travs de ellos est reducido. Los cilindros se disuelven en la orina diluida o
alcalina; se cuentan por campo de baja resolucin.
Otros componentes. Las levaduras y los parsitos en el sedimento urinario denotan infeccin de

las vas genitourinarias. El parsito ms comn en el sedimento es Trichomonas vagina/is, un


protozoo flagelado que suele ocasionar vaginitis, uretritis y prostatovesiculitis (inflamacin de la
prstata y vesculas seminales).
BIBLIOGRAFA

Balcells, A. La Clnico y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989


Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McGraw-Hill, 1998

91

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

92

CREATI NI NA SRICA Y DEPURACIN


OBJETIVOS

l.

El alumno cuantificar la depuracin de creatinina en una persona sana.

2.

El alumno explicar la relevancia clnica de la cuantificacin de creatinina


plasmtica y de la depuracin de dicha sustancia

GENERALIDADES
la creatinina es una sustancia de bajo peso molecular que filtra libremente por el glomrulo. Se
forma en el msculo a partir de la fosfocreatina, la cual reacciona con ADP para formar ATP en el
microambiente de las sarcmeras. Entre 1 y 2% de la fosfocreatina se transforma cada da en
creatinina +fosfato sin que en ello participe ninguna enzima. la creatinina, que es un producto de
desecho, pasa a la sangre y se excreta por la va renal. la cantidad de creatinina que se produce
cada da, y por lo tanto su concentracin sangunea, es muy constante y depende de la masa
muscular de cada persona.
En la prctica, la determinacin de la concentracin plasmtica de creatinina es la prueba simple
ms utilizada para valorar la funcin glomerular. Como se mencion antes, la concentracin de
creatinina en el plasma se encuentra relacionada con la masa muscular, por Jo cual, un mismo
valor puede tener significados diferentes en cuanto a la funcin glomerular en personas con
diferente masa muscular. Debe tenerse cuidado al interpretar los valores encontrados de
creatinina plasmtica pues la velocidad de filtracin glomerular puede estar muy disminuida sin
que la creatinina plasmtica salga del intervalo normal.
De esta manera, una concentracin de creatinina plasmtica dentro del intervalo normal no
significa necesariamente una funcin glomerular normal. Sin embargo, un valor por arriba del
intervalo normal generalmente indica alteracin de la funcin renal. Si un paciente registra un
incremento de la concentracin srica de creatinina respecto a determinaciones previas de l
mismo, puede significar alteracin de la VFG, aunque ninguno de los valores se halle fuera del
intervalo normal. En general, en los pacientes en los que se ha documentado la enfermedad renal,
es suficiente la determinacin de la creatinina srica para su seguimiento, sin necesidad de
cuantificar su depuracin.
la velocidad de filtracin glomerular (VFG) es un importante parmetro de la funcin renal y
consiste en el volumen de plasma que pasa en determinado tiempo a travs de los glomrulos
renales. la VFG depende de tres factores: l. la presin neta que se ejerce sobre la membrana
93

glomerular, 2. el estado fsico de la membrana, y 3. el rea de la membrana glomerular, que a su


vez depende del nmero de glomrulos funcionales. As, en ausencia de alteraciones significativas
en la presin sangunea y en la estructura de la membrana glomerular, la VFG es proporcional al
nmero de glomrulos funcionales.
Para valorar la VFG se utiliza el procedimiento conocido como depuracin.
La depuracin de una sustancia presente en el plasma sanguneo es una medida de la eficiencia
con la que los riones la excretan y suele definirse como el volumen plasmtico que se depura por
completo de tal sustancia cada minuto por efecto de la actividad renal. Evidentemente, la
depuracin es un dato calculado, ya que la funcin renal disminuye gradualmente la
concentracin de los so lutos en la totalidad del volumen plasmtico. Por ejemplo, si una sustancia
se encuentra en el plasma a una concentracin de 7 mg/mL y en la orina producida durante un
minuto aparecen 14 mg, la depuracin ser de 2 mL/min.
La depuracin renal de una sustancia es directamente proporcional a la concentracin de dicha
sustancia en la orina (mientras mayor concentracin tenga la orina significa que ms se depura) e
inversamente proporcional a su concentracin en la sangre (mientras ms concentracin
plasmtica, menos se depura).
La depuracin se plantea matemticamente mediante la siguiente frmula:

e,
Donde

e, es

= U,V/P,

la depuracin de la sustancia X (se acostumbra utilizar la letra

debido a que el

trmino depuracin corresponde en ingls a clearance), U, es la concentracin de X en la orina


colectada (U por urine, orina en ingls), P, es la concentracin de X en el plasma y V es el volumen
de orina que se produce por minuto (mL/min). Aplicando a U, y P, las mismas unidades (mg/dL,
g/L, etc.), la depuracin adquiere las unidades de V, es decir mL/min. Por ejemplo, si U, es 70
mg/dL, P, es 1 mg/dL y V es 1.4 mL/min, la depuracin renal seria igual a 98 mL/min.
La creatinina satisface en general las condiciones necesarias para medir la depuracin renal,
ofreciendo una buena aproximacin de la VFG.
A pesar de las ventajas que en principio tiene la depuracin de creatinina sobre su sola
determinacin srica, se trata de un procedimiento que, por requerir la recoleccin de orina de 24
hrs, no es fcil de llevar a cabo con toda confiabilidad pues los pacientes no siempre recolectan
todas las emisiones de orina. Por otra parte, como en cualquier otra determinacin analtica,
existe un margen de error. De hecho, la variabilidad que se obtiene en la depuracin de creatinina

94

en pacientes bajo condiciones ideales puede ser de hasta el 10%, considerndose que en
condiciones ordinarias puede ser de hasta 30%.
Por lo anterior, la depuracin solo se practica en casos en que se encuentre claramente indicada,
incluyendo la valoracin de donadores potenciales de rin, el estudio de pacientes con
alteraciones menores de la funcin renal, y para el clculo de las dosis de medicamentos
potencialmente txicos que se eliminan por va renal, como ocurre con los aminoglucsidos
(antibiticos) y la digoxina (glucsido cardiotnico).

IMPORTANCIA CLNICA

El incremento de la concentracin srica de creatinina o la disminucin de su depuracin se


presentan en una amplia serie de patologas que afectan al funcionamiento renal. Entre otros, se
encuentran las siguientes:
Perfusin renal insuficiente. Esta condicin puede ser secundaria a disminucin de la

presin sangunea, prdida de lquido o estenosis de la arteria renal.


Patologas renales. Alteraciones en las cuales va disminuyendo el nmero de nefronas

funcionales, particularmente los procesos crnicos.


Incremento de presin tubular. Se trata de patologas de carcter obstructivo que provocan el

aumento de la presin intratubular, como es el caso de la obstruccin de vas urinarias secundaria


a hiperplasia prosttica.

Durante el embarazo aumenta la VFG, lo cual comnmente supera al incremento en la produccin


de creatinina que tambin ocurre en dicha situacin, por lo cual disminuye la concentracin srica
de creatinina.
PROCEDIMIENTO (Randox)
Cuantificacin de creatinina

Fundamento: al reaccionar la creatinina con picrato alcalino se produce un complejo de color


anaranjado, en cantidad directamente proporcional a la de creatinina. Adaptando la reaccin a un
procedimiento cintico se logra un mayor grado de especificidad debido a que la creatinina
reacciona con el picrato alcalino con mayor rapidez que otras sustancias que tambin son
reactivas.

95

De esta manera, midiendo el incremento de color (absorbancia) en un perodo breve de tiempo al


iniciar la reaccin, se estar valorando principalmente la creatinina, con poca influencia de los
dems cromgenos inespecficos.

Pipetear en cubetas:

Patrn

100 llL

Suero

100 llL

Reactivo de trabajo

1.0 mL

1.0 mL

Se trabaja la muestra y el patrn uno a la vez. Mezclar y a los 30


segundos medir la absorbancia A 1 de la muestra y del patrn a 492 nm
frente al aire. Exactamente 2 minutos despus leer la absorbancia A2 de

la muestra y del patrn. Para la cuantificacin de creatinina en orina,

debe diluirse sta 1 a 50 con agua bidestilada.

CLCULO
Suero
/lA

m""'"

''""

(/lA

Orina
=A,- A1 de la muestra
= A2 - A1 del patrn

m,.,,,/!lA '"'o) x 2 = _

mg/dL Creatinina

/lA

m""'"

/lA

'"'"

=A,- A, de la muestra
= A2 - A, del patrn

(/lA m,.,,,/!lA

pwo) x 100 = _

VALORES DE REFERENCIA

SUERO

ORINA

HOMBRES

0.6-1.1 mg/dl

1 ~1.5 g/24 Hrs.

MUJERES

O. S -0.9 mg/dl

1-1.5 g/24 Hrs.

96

mg/dL creatinina

Depuracin de creatinina

1.

Recolectar orina de 24 horas de acuerdo con lo siguiente: vaciar la vejiga al levantarse por
la maana (p. ej. 8:00AM) y desechar la orina. Recolectar en un recipiente apropiado toda
la orina que se produzca durante el da y la noche. A la misma hora del siguiente da,
volver a vaciar la vejiga pero esta vez aadindola al recipiente. Llevar la orina al
laboratorio lo ms pronto posible.

2.

Tomar una muestra de sangre del paciente al entregar la orina. Dejar coagular y separar el
suero

3.

Medir con la mayor exactitud el volumen de orina de 24 hrs.

4.

Cuantificar la creatinina en la muestra de suero y en la orina

S.

Aplicar la frmula para calcular la depuracin

VALORES DE REFERENCIA

80-130 ml/minuto
BIBLIOGRAFA

Braunwald, E., A. S. Fauci, D. L. Kasper, S. L. Hauser, D. L. Langa and J. L. Jameson (Editors).


Harrison's Principies of Interna/ Medicine, 15th edition, McGraw Hill,2001

Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
Guyton, A. C. and J. E. Hall. Textbook of Medica/ Physio/ogy, 10th edition, W. B. Saunders Company,
2000
Marshall, W. C. and S. K. Bangert. Clinical Chemistry. 5th edition, Mosby, 2004
Gaw, A., R. A. Cowan, D.St..J. O'Reilly, M. J. Stewart and J. Shepherd. C/inical Biochemistry, an
illustrated colar text, 2"' edition, Churchill Livingston, 1999.

97

RESULTADOS, DISCUCIN Y CONCLUSIONES

98

HEMATOCRITO, HEMOGLOBINA Y CONCENTRACIN CELULAR MEDIA DE HEMOGLOBINA

OBJETIVOS

1.

El alumno determinar el hematocrito, la concentracin de hemoglobina y la


concentracin celular media de hemoglobina en una muestra de sangre.

2.

El alumno explicar la relevancia clnica del hematocrito, de la concentracin de


hemoglobina en sangre y de la concentracin celular media de hemoglobina

GENERALIDADES

El hematocrito es un parmetro hematolgico fundamental que corresponde al volumen


porcentual que representa el paquete eritroctico en la sangre completa. En el hombre y la mujer
adultos los valores de referencia son 40 a 54% y 34 a 47%, respectivamente. En los recin nacidos
el hematocrito es relativamente muy alto (aproximadamente 56%), decreciendo gradualmente
hasta un valor cercano a 35% al primer ao de vida. Posteriormente se eleva paulatinamente
durante la infancia hasta los valores sealados para el adulto. Debe tomarse en cuenta que el
hematocrito es un parmetro que vara en funcin de la altitud del lugar donde reside la persona,
de tal manera que a mayor altitud se registra mayor valor del hematocrito.
La hemoglobina es una protena intraeritrocitaria cuya principal funcin es el transporte de
oxgeno de los pulmones a los tejidos. La liberacin de oxgeno a partir de la oxihemoglobina es un
proceso influido por varios factores, como son la concentracin eritroctica de 2, 3bisfosfoglicerato, el pH y la concentracin de dixido de carbono del ambiente tisular.

La hemoglobina se sintetiza en las clulas precursoras de los eritrocitos, inicindose en los


normoblastos basfilos y terminando en los reticulocitos. La sntesis del grupo hemo ocurre en

dichas clulas a partir de succiniiCoA (intermediario del ciclo de Krebs) y de glicina, generndose
sucesivamente 6-aminolevulinato, porfobilingeno, uroporfirinogno 111, coproporfiringono 111,
protoporfiringeno IX, protoporfirina IX y hemo. Este ltimo es un tetrapirrol asociado con un
2

tomo de hierro 11 (Fe+ ) central.


Cada grupo hemo se une a una cadena protenica u o

p formndose

luego la hemoglobina por la

asociacin de 4 cadenas, 2 de cada tipo, de tal manera que la molcula de hemoglobina contiene 4
grupos hemo y es capaz de portar 4 molculas de oxgeno simultneamente.

99

La oxihemoglobina aporta oxgeno suficiente a los tejidos para que se lleve a cabo la oxidacin de
los combustibles biolgicos, proceso normalmente acoplado a la produccin de molculas de alta
energa, fundamentalmente el ATP.
La concentracin celular media de hemoglobina (CCMH) se calcula dividiendo la concentracin de
hemoglobina (en g/dL) entre el hematocrito y multiplicando el resultado por 100. Como puede
apreciarse, este clculo corresponde al % de hemoglobina en el paquete celular rojo, es decir el
nmero de gramos de hemoglobina que estaran presentes en 100 mL de paquete eritrocitario y
equivale al% de hemoglobina dentro de cada eritrocito. La CCMH normal es de aproximadamente
35%. Se consideran hipocromas las anemias cuya CCMH es inferior a 30%.

IMPORTANCIA CLNICA
Las anemias constituyen la manifestacin clnica de diversas alteraciones, las cuales pueden
agruparse como sigue:
Insuficiencia de la mdula sea. Se producen cantidades bajas de eritrocitos debido a deficiencias
de la eritropoyesis, alteraciones endocrinas, factores nutricio na les, etc. Por ejemplo, la deficiencia
de hierro produce anemia hipocrmica (CCMH disminuida) y microctica (tamao eritroctico
menor al normal); la deficiencia de vitamina B12 y/o de folato, produce anemia megaloblstica
(abundancia de clulas grandes precursoras de los eritrocitos).
Insuficiencia renal crnica. En la fase terminal de esta patologa el rin deja de producir
eritropoyetina y en consecuencia se presenta anemia normoctica y normocrmica.
Hemlisis aumentada.

La anemia

hemoltica puede deberse a factores genticamente

determinados, como ocurre en la anemia de clulas falciformes, patologa en la que se sintetiza


una hemoglobina alterada en su estructura (cambio de un residuo de glutamato por uno de valina
en cierta posicin de las cadenas

p,

alteracin que produce precipitacin de la hemoglobina

cuando la presin parcial de oxgeno es baja, lo cual provoca que los eritrocitos adquieran una
rigidez tal que se rompen con facilidad al transitar por capilares muy estrechos.
La hemlisis aumentada puede deberse tambin a la presencia de anticuerpos contra los
eritrocitos, como ocurre en la eritroblastosis fetal, enfermedad en la cual la madre Rh- produce
anticuerpos contra los eritrocitos del feto Rh +.
La anemia hemoltica puede deberse tambin a infecciones como el paludismo, proceso en el que
el agente infeccioso, Plasmodium, lleva a cabo su ciclo vital en el interior de los eritrocitos,
lisndolos al cabo del mismo.

100

Policitemia. Es el aumento de la cantidad de eritrocitos. Ocurre naturalmente cuando la

disponibilidad de oxgeno es limitada, como mecanismo compensatorio. En adultos mayores


puede presentarse como resultado de la prdida del control sobre la mdula sea. La policitemia
puede ser secundaria a otros procesos que cursan con hipoxia tisular, como la insuficiencia
respiratoria y las cardiopatas congnitas. La llamada policitemia vera consiste en el incremento de
clulas sanguneas, principalmente eritrocitos, debida a una produccin excesiva de clulas por la
mdula sea. Su causa no se conoce pero se sabe que afecta principalmente a hombres con edad
superior a los 40 aos

PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR EL HEMATOCRITO

Para determinar el hematocrito se requiere un tubo graduado especial conocido como tubo de
Wintrobe, el cual est hecho de vidrio grueso que soporta bien la centrifugacin. El tubo se carga
hasta la graduacin superior (10) con sangre tratada con anticoagulante, utilizando una pipeta
Pasteur de punta larga, la cual, una vez cargada con sangre se introduce hasta el fonda del tubo de
Wintrobe y entonces se descarga gradualmente conforme se va sacando del tubo, minimizando el
riesgo de formar burbujas. En caso de que se haya formado una burbuja, debe sacarse con golpes
suaves dados al tubo con un dedo. Una vez cargado debidamente el tubo de Wintrobe, se
centrifuga durante 30 minutos a 3000 r. p. m. y se toma la lectura directamente de la graduacin
del tubo. a nivel de la lnea que separa el paquete rojo del blanco .
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA (Randox).

Fundamento: la oxidacin de fa hemoglobina con ferricianuro de potasio en solucin alcalina


forma metahemoglobina. sta reacciona con cianuro de potasio y forma cianometahemoglobina,
que es un compuesto colorido cuya intensidad es directamente proporcional a la concentracin de
hemoglobina.
1.

Transferir 5 mL de solucin de drabkin a un tubo de 13 x 100mm.

2.

Transferir 20 11L de sangre con anticoagulante a la solucin anterior.

3.

Mezclar bien y dejar reposar al menos durante 3 minutos a temperatura ambiente.

4.

Medir la absorbancia a 540 nm de la muestra frente a agua destilada. El color es estable


durante varias horas.

S.

Determinar la concentracin de hemoglobina multiplicando la absorbancia por el factor


36.77. El resultado se reporta en g/dL

101

VALORES DE REFERENCIA
Hombres Adultos:

13 -18 g/dl

Mujeres adultas:

11-16 g/dl

Recin nacidos:

14 -23 g/dl

NOTA: Puede haber variaciones fuera de los intervalos indicados por efecto de la edad, la raza, el
ejercicio, la altitud y la estacin del ao.
BIBLIOGRAFA
Bennington, Fouty & Hougie. El Laboratorio en el Diagnstico Clnico. La Prensa Medica Mexicana,
1977, 2'. Ed.
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodrguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica
Clnica. McGraw-Hill, 1998

Voet, D. & J.Voet. Bioqumica. Ed. Omega, 1992

102

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

103

IDENTIFICACIN DE GRUPOS SANGUNEOS

OBJETIVOS

l.

El alumno identificar el grupo sanguneos ABO y el carcter Rh de una muestra de sangre

2.

El alumno explicar la relevancia clnica de los grupos sanguneos ABO y del carcter Rh

GENERALIDADES

Las sustancias que determinan los grupos sanguneos son componentes de la membrana de los
eritrocitos (y en muchos casos de otros tipos celulares) cuya variedad se debe a polimorfismos
genticos.
En el hombre se han reconocido ms de 200 variantes genticas de antgenos de los eritrocitos,
producidas por al menos 20 sistemas de grupos sanguneos, pudiendo haber en cada sistema dos o
ms fenotipos distintos. En el sistema ABO, por ejemplo, existen cuatro fenotipos (A, B, AB Y 0),
que corresponden a cuatro grupos sanguneos en dicho sistema.
El sistema ABO es de gran importancia por su alto poder de inmunogenicidad. Los individuos
pertenecientes al grupo A poseen el antgeno A en sus clulas rojas, los del grupo B poseen el
antgeno B, los del grupo AB poseen ambos antgenos y los del grupo O no poseen ninguno de los
dos. Una caracterstica notable de los grupos ABO es la relacin recproca entre los antgenos
presentes en los eritrocitos y los anticuerpos que se encuentran en el plasma de los mismos
individuos, de acuerdo con la siguiente tabla:
GRUPO SANGUNEO
(FENOTIPO)

GENOTIPO
0/0

ANTfGENOS EN
ERITROCITOS
NINGUNO

ANTICUERPOS EN EL
PLASMA
ANTI-A, ANTI-8

A/ A

ANTI-B

A/0

ANTI-B

B/B

ANTI-A

B/0

ANTI-A

A/B

A, B

NINGUNO

B
AB

La razn de esta relacin reciproca no se conoce pero se cree que la formacin de anticuerpos
anti-A y anti-B puede ser la respuesta al contacto con las sustancias A y B que se encuentran de
manera natural en el ambiente.
Las especificidades antignicas de estos grupos sanguneos se deben a variaciones en el azcar
terminal del oligosacrido de cierto glicolpido membrana!. En el caso del grupo A, el azcar

104

terminal del oligosacrido es Nacetilgalactosamina, mientras que en el grupo Bes O-galactosa. La


presencia de uno u otro azcar en esa posicin depende de que exista la N-acetilgalactosamina
transferasa o la O-galactosa transferasa, lo cual a su vez depende de que un determinado locus
presente el alelo A o el alelo B, respectivamente. Cuando la informacin del gen no produce
ninguna de las dos enzimas, dicho /ocus presenta el alelo O, y entonces el oligosacrido no tiene ni
N-acetilgalactosamina ni O-galactosa. El componente membrana! correspondiente al alelo O se
denomina sustancia H, de manera tal que si a la sustancia H se adiciona N-acetilgalactosamina,
resulta el grupo A; si se le adiciona O-galactosa, resulta el grupo B, y si no se le adiciona ninguno de
los dos azcares, resulta el grupo O.
En la poblacin caucsica, aproximadamente 40-45% de los individuos tienen dos copias del alelo
O, otro 40-45% tienen al menos una copia del alelo A. EllO% tiene al menos una copia del alelo By
el 5% tiene una copia del alelo A y una del alelo B.
Otro grupo sanguneo de importancia comparable con el del sistema ABO es el factor Rh (por
haber sido descubierto en los monos rhesus). Genticamente, los grupos Rh son complejos, pero
de una manera introductoria puede considerarse que el sistema consta de dos alelos, O y d, con
tres posibles genotipos, DIO, Dld y d/d. D/D y 0/d son fenotpicamente Rh positivos, mientras que

d/d es fenotpicamente Rh negativo.


A diferencia de lo que ocurre con el sistema ABO, en el sistema Rh no se encuentran de manera
natural anticuerpos anti-Rh en personas Rh negativas, aunque en determinadas condiciones s se
forman dichos anticuerpos. Los anticuerpos anti-Rh tambin se conocen como anti-0
IMPORTANCIA CLNICA

La importancia de los grupos sanguneos en general tiene relacin con el proceso de transfusin
pues considerando la posible presencia de anticuerpos en la sangre del receptor puede propiciarse
la generacin de una reaccin inmunolgica si no se tiene el cuidado de ensayar previamente la
compatibilidad de la sangre del donante con la del receptor. El individuo con sangre tipo A puede
recibir eritrocitos de tipo A u O, mientras que el individuo con sangre tipo B puede recibir
eritrocitos de tipo Bu O. En cambio, quien tiene tipo AB puede recibir eritrocitos de cualquier tipo
y quien es tipo O puede recibir solo eritrocitos de tipo O. La compatibilidad o incompatibilidad de
una combinacin determinada se halla en funcin de la presencia o ausencia de anticuerpos en la
sangre del receptor, segn indica la tabla anteriormente presentada.

105

La transfusin de eritrocitos incompatibles (por ejemplo tipo B a un receptor tipo A o tipo O)


provoca una reaccin de aglutinacin de los eritrocitos transfundidos, activacin del complemento
y hemlisis intravascular. La reaccin a la transfusin se manifiesta clnicamente por fiebre,
hipotensin, dolor en la regin inferior de la espalda, sensacin de compresin en el pecho,
nusea y vmito. La destruccin de los eritrocitos puede provocar choque circulatorio y la
liberacin del contenido de dichas clulas, principalmente la hemoglobina, la cual puede producir
necrosis tubular aguda.
Antes de practicar la transfusin deben llevarse a cabo las pruebas cruzadas para asegurar la
compatibilidad. En la llamada prueba mayor, se mezclan dos gotas de suero del receptor con una
gota de suspensin de eritrocitos lavados del donador y en la prueba menor se mezclan dos gotas
de plasma o suero del donador con una gota de eritrocitos del receptor. La ausencia de
aglutinacin indica compatibilidad.
La enfermedad hemoltica del recin nacido (EHRN) aparece en neonatos cuyas madres fueron
sensibilizadas por antgenos de los eritrocitos fetales. Los anticuerpos que en respuesta produce la
madre, atraviesan la placenta y reaccionan con los eritrocitos fetales, causando su destruccin. La
sensibilizacin de la madre Rh negativa a las clulas Rh positivas del producto ocurre usualmente
durante el nacimiento del primer hijo Rh positivo, cuando algunas clulas rojas del producto se
escapan a travs de la placenta hacia la sangre materna, donde son reconocidas por el aparato
inmunocompetente de la madre. Debido a esto, el primer hijo Rh positivo usualmente no resulta
afectado, pero a partir del segundo hijo Rh positivo el riesgo es creciente de ser afectado debido a
la inmunizacin reiterada de la madre. Despus de que nace un hijo Rh positivo de una madre Rh
negativa, puede administrarse a est anticuerpos anti-Rh, lo cual permitir eliminar los eritrocitos
fetales que en subsiguientes embarazos pudieran pasar a la sangre materna, antes de que activen
la produccin cada vez mayor de anticuerpos. Esto ha permitido una disminucin de la frecuencia
con la que se presenta la EHRN.
Tambin puede presentarse incompatibilidad cuando una madre tipo O tiene un producto A o B,
sin embargo, en la gran mayora de los casos no aparece la eritroblastosis fetal, presentndose un
cuadro ms bien benigno que se ha atribuido a la presencia del antgeno A o B en la placenta, con
lo que se neutralizan los anticuerpos maternos.

106

PROCEDIMIENTO
l.

Se obtiene una muestra de sangre mediante una puncin con lanceta del dedo pulgar

2.

Se colocan tres gotas de sangre en diferentes espacios de una placa de aglutinacin

3.

A cada gota de sangre se agrega una gota de uno de los sueros anti-A, anti-B o anti-D

4.

En cada caso se mezclan las muestras con un palillo durante aproximadamente un minuto

5.

La reaccin positiva se manifiesta por aglutinacin observable a ojo. Si en el ensayo del


sistema ABO se obtiene reaccin positiva solamente con anti-A, el grupo de la sangre es A;
si solo se obtiene aglutinacin con anti-B, se trata de sangre tipo B; si se obtiene reaccin
positiva con ambos antisueros, se trata de sangre tipo AB y si en ambos casos la reaccin
es negativa, el tipo de sangre es O.

6.

En lo concerniente al sistema Rh, la reaccin positiva con anti-D indica que la sangre es Rh
positiva y la no aglutinacin de los eritrocitos implica que el tipo de sangre es Rh negativo.

BLIBLIOGRAFA
Meissenberg, G. and W. H. Simmons. Principies of Medica/ Biochemistry. Mosby, 1998
Roith, 1, Brostoff, J. And Male, D. lmmuno/ogy, 3'' edition. Mosby, 1993
Thompson, J. S. and Thompson, M. W., Genetics in Medicine, 2"' edition, W. B. Saunders Co., 1973
Bonilla-Zavala, R. (2005) Pruebas pretransfusionales. Rev Med lnst Mex Seguro Soc 43: 13-15
Incompatibilidad feto-materna por el grupo sanguneo ABO:
http://www.pruebadepaternidad.info/?p=197

107

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

108

RENCUENTO PLAQUETARIO

OBJETIVOS
El alumno determinar la concentracin de plaquetas en una muestra de sangre
El alumno explicar el contexto clnico relevante del recuento plaquetario
GENERALIDADES
El sistema hemosttico del organismo humano tiene como funcin evitar la prdida de sangre
mediante la formacin de un cogulo que ocluye la solucin de continuidad, preservando el
estado lquido dentro de los vasos sanguneos. Los principales componentes del sistema
hemosttico son:
1.

Plaquetas

2.

Componente endotelial vascular

3.

Protenas plasmticas, tanto las que participan en la coagulacin como las que actan en
la fibrinlisis.

Estos tres componentes interrelacionan entre s para generar el efecto hemosttico. La pared
interna de los vasos sanguneos se encuentra recubierta por clulas endoteliales y cuando stas se
lesionan, dejan expuestas fibras de colgena y otras sustancias del medio subyacente, a las cuales
se adhieren algunas plaquetas que entonces se activan e inducen la agregacin plaquetaria, que
termina formando un tapn primario; por otra parte, la solucin de continuidad permite la
activacin de las vas de la coagulacin (extrnseca, por exposicin al factor tisular, e intrnseca,
por la exposicin de una superficie extraa, de manera relevante la colgena), a lo que sigue la
cascada de reacciones que conduce a la formacin del cogulo.
Plaquetas. Tambin llamadas trombocitos, son clulas enucleadas en forma discoidal de 2 a 4 .m
de dimetro, derivadas de los megacariocitos. Su vida promedio es de aproximadamente 7 .S das y
su concentracin normal en la sangre oscila entre 150,000 y 400,000/mm 3 Normalmente, del total
de plaquetas presentes en el organismo, 2/3 se encuentran circulando y 1/3 se encuentra en el
bazo. La participacin de las plaquetas consta de cuatro fases:
1.

Adhesin de las plaquetas a superficies extraas que quedan expuestas por efecto de la
lesin endotelial. Este proceso depende de la presencia de glucoprotenas membranales a
las que se enlazan los trombocitos y es fundamental para contener la hemorragia.

109

2.

Luego de la adhesin de las plaquetas, su activacin produce que se contraigan y formen


estructuras similares a seudpodos, concentrando sus compuestos qumicos en el centro
de ellos.

3.

Liberacin de grnulos al medio inmediato

4.

Los productos liberados (ADP, serotonina, trombina, etc.) estimulan la agregacin


plaquetaria y la coagulacin.

Endotelio vascular. Normalmente libera xido ntrico (vasodilatador) y prostaglandina PGI 2

(antiagregante plaquetario), que hacen que el flujo sanguneo se mantenga normal. Las protenas
adhesivas fibronectina, vitronectina, tromboespondina y el factor Von Willebrand, tambin se
elaboran en este sitio y participan en el proceso de agregacin plaquetaria. Al continuar el proceso
de la coagulacin, las clulas endoteliales intactas que se encuentran en las proximidades del sitio
lesionado limitan la formacin de fibrina a partir de fibringeno, activando a los inhibidores de la
trombina.
Protenas plasmticas. Entre ellas se encuentran las protenas necesarias para los procesos de
coagulacin y fibrinlisis. La mayor parte de las que participan en la hemostasia, son

glucoprotenas que se activan secuencialmente hasta llegar a la reaccin en que el fibringeno se


transforma en fibrina, protena activa que al polimerizarse forma redes insolubles en donde
quedan atrapadas las plaquetas y otros elementos formes de la sangre.
El recuento plaquetario es una prueba importante, ya que permite detectar la trombocitopenia
(disminucin del nmero de plaquetas), la cual es la enfermedad hemorrgica ms comn.
Adems, los recuentos precisos son de suma importancia para seguir el curso de enfermedades
relacionadas con la mdula sea como son la leucemia y la anemia aplstica. Esta determinacin
es tambin un valioso auxiliar para la evaluacin de la teraputica con anticoagulantes, frmacos
txicos, quimioterapia y radioterapia.

IMPORTANCIA CLNICA
EL AUMENTO DEL NMERO DE PLAQUETAS PUEDE SER DE DOS TIPOS:

A. TROMBOCITOSIS. En esta condicin el nmero de plaquetas no es superior a 800,000/mm'. El


aumento es pasajero, asintomtico y de escasa importancia clnica. Solo valores superiores por lo
menos en 100,000/mm' al lmite superior de las cifras normales suelen clasificarse dentro de este
grupo. Se presenta en los siguientes casos y situaciones:

110

l.

Esfuerzo corporal intenso, ascenso a grandes alturas y estado post-parto

2.

Anemia post-hemorrgica

3.

Infecciones agudas como escarlatina, fiebre reumtica, clera y algunas septicemias.

4.

Perodo posoperatorio de intervenciones quirrgicas importantes

5.

Esplenectoma. En este caso puede presentarse un incremento importante de las

plaquetas.
6.

Adrenalina. Por administracin de la hormona. El efecto dura una hora.

7.

Leucemia mielgena crnica.

B. TROMBOCITEMIA. Presenta cifras de hasta millones de plaquetas/mm 3 en forma permanente y


se clasifica como sigue:
l.

Esencial o primaria, llamada tambin trombocitemia hemorrgica, se acompaan de

trombosis. Es una enfermedad rara.


2.

Secundaria. Como consecuencia de enfermedades por lo general mieloproliferativas,

como policitemia vera, mieloesclerosis (enfermedad evolutiva crnica en que la mdula


sea es reemplazada por tejido fibroso y la sangre se produce en el hgado y el bazo en
lugar de la mdula sea. Se caracteriza por agrandamiento del bazo y anemia evolutiva,
carcinosis (tendencia al desarrollo de cncer) medular o de colon, entre otras.

DISMINUCIN DE NMERO DE PLAQUETAS


TROMBOCITOPENIA O TROMBOPENIA. As se clasifica la deficiencia de plaquetas cuando los

recuentos plaquetarios son menores a 150,000/mm 3, aunque nicamente cifras inferiores a


3

30,000/mm cursan con manifestaciones hemorrgicas. Se presenta en los siguientes casos y


situaciones:

l.

Prpura trobocitopnica idioptica

2.

Anemia perniciosa, aplstica (disminucin de clulas sanguneas por hipocelularidad de la

mdula sea)
3.

Neumonas

4.

Alergias

5.

Quimioterapia contra el cncer

6.

Lesiones de la mdula sea

111

7.

Medicamentos. Ciertos medicamentos administrados en altas dosis y por tiempos

prolongados:

quinidina

(antiarrtmico),

sulfas

(antibacteriano),

clorpropamida

(hipoglucemiante), clorotiazida (diurtico), etc. producen trombocitopenia.

MATERIAL

l. Sangre venosa (1 ml)

2.

Solucin de oxalato de amonio al 1% y azul de metileno (al preparar la solucin se aaden


20 gotas de azul de metileno a cada 100 ml de la solucin de oxalato de amonio y se filtra
la solucin).

3.

Anticoagulante EDTA

4.

Cmara de recuento celular (hemocitmetro) con cubreobjetos

5.

Caja de Petri

6.

Microscopio

7.

Agitador tipo vrtex

8.

Papel filtro

PROCEDIMIENTO

l.

Verter la sangre extrada en un tubo de ensayo que contenga una gota de anticoagulante y
mezclar suavemente por inversin.

2.

Inmediatamente despus, medir 20 .tl de sangre con una micropipeta apropiada

3.

Transferir la alcuota de sangre a un tubo que contenga 4.0 ml de oxalato de amonio y


azul de metileno

4.

Agitar durante 70 segundos con el vrtex a alta velocidad

5.

Colocar el cubreobjetos sobre el hemocitmetro

6.

Cargar una micropipeta con la preparacin y depositar una gota en la orilla del
cubreobjetos, a nivel de una de las hendiduras del hemocitmetro.

7.

Colocar el hemocitmetro en una caja de Petri cubrindolo con la tapa en la que,


previamente, se habr colocado un papel filtro hmedo. Dejar en reposo durante 10
minutos.

8.

Enfocar la cuadrcula con el seco dbil, luego con el seco fuerte e identificar las plaquetas.
Una vez identificadas, hacer el recuento de las plaquetas utilizando la cuadrcula central

112

del hemocitmetro. Dicha cuadrcula consta de 25 cuadros con una distribucin de 5 x 5.


Cada uno de dichos cuadros contiene a su vez 16 subcuadros (4 x 4)
9.

El conteo debe hacerse con todo cuidado, detectando las plaquetas en cada uno de los 16
subcuadros de cada uno de los 25 cuadros.

10. La cifra obtenida se multiplica por 2000 y el resultado corresponde al nmero de


plaquetas por mm

Hemocitmetro o cmara de Newbauer

Cargando el hemocitmetro

Cuadrcula del hemocitmetro

113

VALORES DE REFERENCIA

150,000- 400,000/mm 3

BIBLIOGRAFA
Balcells, A, La Clnica y el Laboratorio. Ed. Marn, 1989
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. Rodguez-Segade & A. Snchez Pozo. Bioqumica

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlotions,

2002
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

114

s'h

edition. Wiley-Liss,

BILIRRUBINAS S RICAS

OBJETIVOS
1.

El alumno determinar las concentraciones de bilirrubina directa, indirecta y total en una


muestra de suero sanguneo

2.

El alumno explicar los contextos clnicos en que es relevante la cuantificacin de


bilirrubina

GENERALIDADES

La bilirrubina es un compuesto de color amarillo anaranjado cuando se encuentra en solucin,


originndose en un 80 a 85% a partir del catabolismo del grupo hemo de la hemoglobina y el resto
a partir del catabolismo del grupo hemo que forma parte de otras protenas como la mioglobina,
los citocromos, la cata lasa, etc.
Los

eritrocitos

senescentes

son

captados

por

el

sistema

reticuloendotelial,

presente

fundamentalmente en el bazo y en el hgado. Al catabolizarse la hemoglobina liberada de los


eritrocitos, se producen aminocidos libres a partir de la parte protenica de la hemoglobina
(globina), y bilirrubina a partir de la fraccin no protenica (hemo). La bilirrubina producida por el
sistema reticuloendotelial se conoce como bilirrubina indirecta o no conjugada y es una sustancia
marcadamente insoluble en agua, asocindose con albmina a fin de ser transportada por la
sangre. Al pasar los complejos de bilirrubina indirecta y albmina por el hgado, los hepatocitos
captan la bilirrubina indirecta.
En el interior de los hepatocitos la bilirrubina indirecta se combina con glucuronato por la accin
cataltica de la glucuronil transferasa, generndose as la bilirrubina directa o conjugada, la cual
en un 85% corresponde a diglucurnido de bilirrubina y el 15% restante a monoglucurnido de
bilirrubina. Finalmente, la bilirrubina directa es transferida a la luz de los canalculos biliares

mediante un mecanismo de transporte activo para pasar luego al intestino formando parte de la
bilis. En ltima instancia la bilirrubina se excreta en su mayor parte despus de haber sufrido
algunas modificaciones qumicas, en forma de urobilina por la orina y como estercobilina por las
heces fecales.
IMPORTANCIA CLNICA

La cuantificacin de bilirrubinas directa e indirecta en el suero tiene relevancia diagnstica. El


aumento de la concentracin sangunea de bilirrubina o hiperbilirrubinemia puede generarse por
115

incremento en la produccin de bilirrubina o por limitaciones en su excrecin. Cuando la


concentracin srica de bilirrubina alcanza la cifra de 2 a 2.5 mg/dL se presenta ictericia
(pigmentacin amarillenta de la piel y mucosas). La ictericia se detecta primeramente en las
esclerticas debido a que stas son ricas en elastina, protena que presenta gran afinidad par la
bilirrubina.
La hiperbilirrubinemia puede producirse por tres tipos de patologas:

l.

Ictericia preheptica. Se produce en las enfermedades que cursan con destruccin

incrementada de eritrocitos, como son la ictericia neonatorum, policitemia, transfusin de


sangre incompatible, paludismo, deficiencia de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, etc. La
hiperbilirrubinemia se explica en funcin de la hiperproduccin de bilirrubina indirecta. Su
acumulacin en la sangre ocurre debido a que la capacidad de conjugacin heptica es
limitada. Sin embargo, si se trata de una patologa hemoltica pura, nicamente se registra
un incremento no muy importante de bilirrubina indirecta, alcanzando una concentracin
de unos 4 mg/dl. Si la hemlisis se presenta dentro de un cuadro de enfermedad
sistmica con compromiso heptico, se registrar tambin incremento de la bilirrubina
directa. Los cuadros clnicos con hemlisis prolongada pueden propiciar la precipitacin de
la bilirrubina en la vescula biliar, produciendo clculos de esa sustancia. El sndrome de
Gilbert es una hiperbilirrubinemia indirecta que se debe a deficiencia en la captacin de la
bilirrubina indirecta por los hepatocitos, y al parecer tambin por un defecto en la
conjugacin. Su prevalencia segn varios estudios es de al menos 8% en la poblacin
general, con predominio notable del sexo masculino. La bilirrubina generalmente es
menor a 3 mg/dL y todas las pruebas de funcionamiento heptico son normales. La
ictericia neonatal fisiolgica ocurre frecuentemente entre los das 2 y 5 posteriores al
nacimiento, presentando una bilirrubinemia de 5 a 10 mg/dl. La causa es la falta de
desarrollo de la fisiologa heptica al momento del nacimiento, lo cual es normal. Antes
del nacimiento la bilirrubina fetal pasa a travs de la placenta y se procesa por el
organismo materno. Los mecanismos implicados en el metabolismo de la bilirrubina
maduran rpidamente y dentro de las primeras dos semanas se normalizan las
concentraciones s ricas de bilirrubina.
2.

Ictericia hepatocelular. Se produce en las enfermedades que cursan con insuficiencia

heptica como son los casos de tumores hepticos, hepatitis viral, cirrosis, congestin
heptica por insuficiencia cardiaca, hepatitis medicamentosa, hepatitis alcohlica, etc.

116

Puede detectarse incremento en las dos fracciones, directa e indirecta de la bilirrubina,


aunque fundamentalmente aumenta la bilirrubina directa puesto que a pesar del dao
heptico, la bilirrubina indirecta continua conjugndose en proporcin importante. La
elevacin de la bilirrubina directa se explica en funcin de que su transferencia a los
canalculos biliares depende de energa, proceso que se limita severamente bajo
condiciones de insuficiencia heptica. La acumulacin de bilirrubina directa en los
hepatocitos produce lo que se conoce como "regurgitacin" para denotar su retroceso a la
circulacin.
3. Ictericia posheptica. Se produce en obstrucciones totales de las vas biliares,
encontrndose elevada claramente la fraccin directa, aunque puede presentarse
incremento discreto de la indirecta. Puede deberse a colangitis (inflamacin de las
vas biliares), neoplasia o clculos. Las proporciones de bilirrubina directa e
indirecta entre la ictericia hepatocelular y la pos heptica no permiten distinguir el
tipo de patologa.
PROCEDIMIENTO (Randox)

Fundamento: la bilirrubina total se determina en presencia de cafena mediante la


reaccin con cido sulfanlico diazotado. La bilirrubina directa se determina en ausencia
de cafena
Bilirrubina total

Pipetear en cubetas:

Reactivo Rl

200 11L

Reactivo R2

200 !lL
1 gota (50 !lL)

Reactivo R3

1.0 mL

1.0 mL

Muestra

200 11L

200 !lL

Mezclar y dejar reposar durante 10 minutos entre 20 y 25 C. Aadir:

Reactivo 4

1.0 mL

1.0 mL

Mezclar y dejar reposar 5~30 minutos entre 20 y 25 C y leer la


absorbancia (Asrl a 578 nm de la muestra frente al blanco

117

Bilirrubina directa

Pipetear en cubetas:

Reactivo R1

200 llL

Reactivo R2

200 llL
1 gota {50 11L)

NaCI 0.9%

2.0 mL

2.0 mL

Suero

200 llL

200 llL

Mezclar y dejar reposar durante S minutos exactos entre 20 y 25 C.


leer la absorbancia (A80 ) a 546 nm de la muestra frente al blanco

CLCULOS
Bilirrubina total (BT)
Asr X 10.8 = _ _ _ mg/dL

Bilirrubina directa (BD)


A80 X 14.4 = _ _ _ mg/dL
Bilirrubina indirecta (BI)
Se obtiene por diferencia entre la bilirrubina total y la directa
VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina total:

hasta 1.0 mg/dL

Bilirrubina directa

hasta 0.25 mg/dL

BIBLIOGRAFA
Berk, P. D., and A. W. Wolkoff {2001). Bilirubin metabolism and hyperbilirubinemias. En:
Braunwald, E, A. S. Fauci, D. L. Kasper, S. L. Hauser, D. L. Longo and J. Larry Jameson (Eds).
Harrison's Interna/ Medicine, 15th ed., McGraw-Hill, New York, N. Y., USA. P.1715-1720
Guyton, A. C. And J. E. Hall. Textbook of Medica/ Physiology, 101h edition, W. B. Saunders Company,
2000
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002

118

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

119

CIDO RICO SRICO

OBJETIVOS

l.

El alumno determinar la concentracin de cido rico en una muestra de suero


sanguneo

2.

El alumno explicar los contextos clnicos relevantes de la cuantificacin de cido rico en


suero

GENERALIDADES

El cido rico es el producto final del metabolismo de las bases nitrogenadas purnicas, proceso
que se lleva a cabo principalmente en el hgado y en la mucosa intestinal. En estos tejidos se
registra gran actividad de la xantina oxidasa, enzima que produce directamente el cido rico. En
otros tejidos solo se encuentran indicios de dicha enzima.
El contenido total de cido rico en el adulto es de aproximadamente 1.2 g y se origina tanto de
los nucletidos de purinas ingeridos en los alimentos como de los endgenos. Las concentraciones
de cido rico y de su base conjugada, el urato, dependen del pH. La primera disociacin del cido
rico tiene un pK de aproximadamente 5.8, por lo que en el plasma (pH 7.4) y en el lquido sinovial
el urato representa el 98% y el cido rico solo el 2%.
La cantidad de urato en el organismo es el resultado de la cantidad que se produce y de la que se
excreta. Normalmente entre 2/3 y 3/4 del urato se excreta por la va renal y el resto por la
intestinal.
El urato filtra libremente a travs del glomrulo, enseguida es reabsorbido casi ntegramente,
luego los t bulos proximales secretan aproximadamente el 50% del absorbido y de esa cantidad se
vuelve a reabsorber un 80%. La excrecin neta es de 8 a 12% del total filtrado por los glomrulos.
Mientras ms cida es la orina mayor ser la proporcin cido rico/urato.
La concentracin srica de cido rico se halla influenciada por el sexo y la edad. En los nios
oscila normalmente entre 3 y 4 mg/dl. A partir de la pubertad aumenta en los hombres pero no
en las mujeres debido en parte a que las mujeres excretan una mayor cantidad de urato, por lo
cual los valores normales de los hombres adultos son mayores a los de las mujeres. En los
hombres los valores oscilan entre 3.4 y 7.0 mg/dL y en las mujeres entre 2.4 y 5.7 mg/dl.

120

IMPORTANCIA CLNICA

La hiperuricemia puede definirse como una concentracin de urato superior a 7 mg/dl. A partir de
este valor aumenta el riesgo de sufrir artritis gotosa o uro litiasis. Entre el 2 y el13 %de los adultos
ambulatorios presenta hiperuricemia. En la hiperuricemia se tiene la condicin propicia para que
se precipite el urato, aunque intervienen factores adicionales que hacen que no ocurra en
personas con elevadas concentraciones de urato. Se considera que esto se debe a la presencia de
algunas sustancias presentes en el plasma normal. Cuando llega a ocurrir, se forman cristales que
tienden a acumularse en las articulaciones formando los llamados tofos, que constituyen la causa
de la artritis gotosa aguda, la cual puede progresar a artritis gotosa crnica. El 90% de las personas
hiperuricmicas deben tal condicin a deficiencia en el manejo renal del cido rico. El exceso de
cido rico favorece la precipitacin de cristales, que pueden observarse en la orina. Alrededor del
13% de los clculos renales son de cido rico.
Numerosas enfermedades y factores sociales y de comportamiento se asocian a modificaciones de
la concentracin de cido rico en el plasma. El aumento de la concentracin srica de urato es
ms frecuente y clnicamente ms significativo que su disminucin.
SE PRESENTA AUMENTO DE CIDO RICO EN:

1.

Insuficiencia renal. La retencin de urato refleja una disminucin de la secrecin tubular,

una reabsorcin tubular aumentada o ambos factores.


2.

Nefropata crnica por plomo, patologa que se asocia con gota (gota saturnina).

3.

Medicamentos. Algunos frmacos interfieren con la excrecin renal de urato, por

ejemplo: furosemida (diurtico de asa), tiazidas (diurticos que actan en el t bulo distal),
salicilato (aspirina) y fenilbutazona (antiinflamatorio no estero id e de accin muy potente
pero con efectos colaterales muy importantes, ya que puede suprimir la produccin de
leucocitos y puede producir anemia aplstica).
4.

Alimentos. La ingesta de alimentos ricos en purinas, como carne, hgado, rin,

leguminosas y otros vegetales, provoca hiperuricemia ligera con efecto uricosrico.


S.

Fructosa. El exceso en la ingestin de fructosa puede alterar el metabolismo heptico, el

cual produce mayores cantidades de cido rico derivado de la adenosina. La adenosina se


deriva del AMP, el cual aumenta de concentracin cuando abunda el ADP ya que en tales
condiciones ste se combina consigo mismo para formar ATP, coproducindose el AMP (2
ADP -MTP + AMP). La elevada concentracin de ADP se debe a que la fructosa se fosforila

121

en el hgado a partir de ATP y la fructosa 1-fosfato resultante se metaboliza muy


lentamente, generndose un dficit de ATP que termina provocando la formacin de AMP,
meta bolito que es muy lbil y se descompone fcilmente en adenosina y fosfato.
6.

Deficiencia de hipoxantina-guanina fosforribosil transferasa {HGFT). La HGFT interviene


en una va metablica alterna de la sntesis de nucletidos de purinas. La enzima cata liza la
combinacin de las bases hipoxantina y guanina con un derivado que contiene la ribosa y
el fosfato (fosforribosil pirofosfato) para formar los ribonucletidos correspondientes (IMP
y GMP). La deficiencia de la enzima hace que se acumulen las bases y entren a fase
catablica, produciendo cido rico. Cuando se encuentra activa la enzima, se retarda el
catabolismo de las bases purnicas, lo cual resulta en una tasa menor de formacin de
cido rico.

7.

Neoplasias como linfomas, leucemia, macroglobulinemia de Waldenstrom (tambin se


conoce como linfoma linfoplasmactico, correspondiendo a un cncer de linfocitos B en el
que se producen grandes cantidades de globulinas lgM, en un grado tan alto que la sangre
de hace hiperviscosa, dificultndose la circulacin sangunea en los vasos ms pequeos),
policitemia, mieloma mltiple y otras.

8.

Etanol. La ingesta de grandes cantidades propicia la degradacin del ATP en el hgado y la


mayor produccin de cido rico. Por otra parte, la acidosis lctica que puede presentarse
secundaria a la ingestin etlica abundante favorece la precipitacin de cristales de cido
rico

9.

Radiacin ionizante, que produce alteraciones en la estructura del DNA, lo cual aumenta
su tasa de degradacin a cido rico.

10. Acidosis. El acetoacetato, el 13-hidroxibutirato, el lactato o los salicilatos se acumulan en


estados metablicos acidticos y en tales condiciones compiten con el cido rico para ser
secretados por los t bulos renales, lo cal lleva a menor excrecin de ste.

122

PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: el cido rico se transforma en alantona y perxido de hidrgeno en presencia de
uricasa. El perxido de hidrgeno reacciona con cido 3, 5-dicloro-2 hidroxibencensulfnico y 4aminofenazona, por catlisis de la peroxidasa, produciendo quinoneimina, que es un compuesto
colorido. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin de cido rico.

Pipetear en tubos de ensayo:

Patrn

20 .L

Suero o plasma
Reactivo de trabajo

20 .L
1.0 mL

1.0 mL

1.0 mL

Mezclar e incubar a 37 C durante S minutos. Medir la absorbancia a 546 nm del patrn y


la muestra frente al blanco. El color es estable durante 15 minutos

CLCULO
(A m,.,,,./ A blooco) X 10 = _ _ mg/dL cido rico

VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 3.4-7 .O mg/dL
Mujeres: 2.4-5.7 mg/dL

BIBLIOGRAFA
Balcells, A. La Clnica y el Laboratorio. Ed Marn, 1989
Grases, F., A. l. Villacampa, A. Costa-Bauza and O. Sohnel (1999). Uric acid calculi. Scanning
Microscopy 13: 223-234
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical carrelations, 5th edition. VViley-Liss,

2002
Wortmann, R. L (2001). Disorders of purine and pyrimidine metabolism. En:
Braunwald, E, A. S. Fauci, D. L Kasper, S. L. Hauser, D. L Longo and J. Larry Jameson (Eds). Harrison's
Interna! Medicine, 15th ed., McGraw-Hill, New York, N. Y., USA. P. 2268-2273

123

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

124

FOSFASATA CIDA S RICA

OBJETIVOS

l.

El alumno determinar la actividad de fosfatasa cida total y prosttica en una


muestra de suero sanguneo

2.

El alumno explicar el contexto clnico en que es relevante la cuantificacin de la fosfatasa


cida total y de su fraccin prosttica

GENERALIDADES

La fosfatasa cida (FAC) es el nombre que recibe un grupo de enzimas cuya funcin es hidrolizar a
pH cido una serie amplia de esteres de fosfatos (combinaciones de alcoholes con cido fosfrico),
tales como las hexosas fosfato, el glicerol-fosfato y los nucletidos. Su mxima actividad se
despliega a un pH de 4.9. Los productos de la reaccin catalizada por esta enzima son fosfato
inorgnico y el alcohol correspondiente, como se muestra en la siguiente reaccin general:
R-O- P0 3 H- + H20 -

R- OH + H2 P04

Existe una serie de isoenzimas de la FAC en el organismo, de tal manera que virtualmente todas
las clulas la contienen, y aunque se detecta esta actividad en el citosol, la localizacin intracelular
predominante es la lisosomal. Desde el punto de vista clnico son importantes las fosfatasas cidas
de la prstata, de los eritrocitos y de las plaquetas.
La FAC de origen prosttico se inhibe en presencia de l-tartrato, aunque algunas de otros tejidos
tambin son sensibles a dicho reactivo, como lo demuestra el hecho de que tanto en hombres
prostatectomizados como en mujeres, se detecta actividad de FAC sensible al tartrato. La FAC de
los eritrocitos se inhibe en presencia de formaldehido, por lo cual, si una muestra de sangre se
hemoliza, puede aadrsele dicha sustancia para evitar alteraciones de la actividad real de FAC en
el suero. Esto resulta particularmente til cuando se dificulta o no existe forma de obtener otra
muestra de sangre del paciente.

IMPORTANCIA CLNICA

l.

Cncer prosttico. La principal utilidad de determinar la actividad de la FAC srica tiene


relacin con el cncer prosttico. Cuando la enfermedad se ha diseminado a los huesos
adyacentes, aumenta grandemente la actividad de FAC srica (en condiciones normales la
FAC prosttica no se vierte a la sangre sino al semen). La diseminacin del cncer
prosttico a tejidos blandos tambin se acompaa par actividad srica alta pero slo en

125

una proporcin menor de pacientes. Cuando el tumor se ha mantenido como un ndulo


discreto y no se ha extendido ms all de la cpsula prosttica, slo en el 50% de los
pacientes se registran valores anormales de FAC prosttica. El cncer de prstata tiene
una prevalencia de 35 por cada 100,000 hombres blancos y de 65 por cada 100,000
hombres de raza negra. La incidencia de esta enfermedad aumenta despus de los 50 aos
de edad y casi nunca se presenta en menores de 40 aos. En algunas personas el masaje
prosttico que ocurre durante la exploracin rectal puede provocar una elevacin
transitoria de la FAC prosttica en el suero sanguneo, por lo cual es recomendable extraer
la muestra de sangre antes de practicar dicho procedimiento.
2.

Enfermedades seas. Estas enfermedades registran incremento de la FAC srica. Se

incluyen

hiperparatiroidismo

primario

metstasis

carcinomatosas

de

diversas

procedencias.
3.

Lquido vaginal. Debido a que el semen contiene FAC prosttica, en caso de sospecha de

violacin puede determinarse la actividad de la enzima en el lquido vaginal. Se observa


una mayor actividad en las primeras 12 horas despus del contacto sexual pero puede
detectarse incluso a las 48 h.
4.

Enfermedades diversas. La actividad de FAC srica puede encontrarse aumentada en la

enfermedad de Gaucher (enfermedad genticamente determinada que se presenta con


mayor frecuencia en mujeres de origen judo, caracterizada por esplenomegalia, anemia,
leucopenia y lesiones del esqueleto, con pronstico grave, debida a una deficiencia
enzimtica para degradar cierto tipo de lpidos, los cuales se acumulan en varios tejidos),
en nefropatas, afecciones hepatobiliares y enfermedades del sistema reticuloendotelial.
La fiebre puede causar falsas elevaciones.
PROCEDIMIENTO (Randox)

Fundamento: la hidro lisis del1-naftil-fosfato, catalizada par la FAC, da como productos fosfato y 1naftol. El1-naftol reacciona a su vez con 4-cloro-2-metilfenildiazonio, y forma colorante azo, cuya
concentracin es directamente proporcional a la actividad de la FAC.
Para determinar la fosfatasa cida prosttica (FAP) se realiza un ensayo igual al que se sigue para
la fosfatasa cida total, pero se aade tartrato a la mezcla de reaccin. Dicha sustancia inactiva a la
FAP, de manera que la actividad obtenida en el ensayo corresponde a la fosfatasa cida total

126

menos la FAP, es decir la fosfatasa cida no prosttica (FANP). Para obtener la actividad de la FAP,
se resta la FANP de la total.

Pipetear en cubetas:

Suero

100 !!L

Reactivo FAT

1.0 mL

Reactivo FANP

100 !lL

1.0 mL

Las preparaciones FAT y FANP se procesan una a la vez. La cubeta se


incuba en bao de agua a 37 C durante S minutos. Sacar y secar la
cubeta y tomar una primera absorbancia (Ao) a 405 nm frente al aire y
sin sacar la celdilla del espectrofotmetro, tomar lecturas adicionales a
1 (A1 ) , 2 (A 2 ) y 3 (A3 ) minutos

FAT = fosfatasa cida total


FANP = fosfatasa cida no prosttica

CLCULO
Obtener los 3 valores de M en cada muestra (FAT y FANP) como sigue: A 1 - A0, A2

A 1 y A3

promediarlos.

pmmedio de FAT X

~A

pcomediode FANP

743 = _ _ U/L Fosfatasa cida total

x 743 = _ _ U/L Fosfatasa cida no prosttica

Fosfatasa cida prosttica= fosfatasa cida total- fosfatasa cida no prosttica

VALORES DE REFERENCIA
Fosfatasa cida total:

Hombres: hasta 4.7 U/L


Mujeres: hasta 3.7 U/L

Fosfatasa cida prosttica:

hasta 1. 6 U/L

127

A2 y

BILBLIOGRAFA
Gonzlez de Buitrago, J. M., E. Arillo Ferreiro, M. RodrguezSegade & A. Snchez Pozo. Bioqumica

Clnica. McGraw-Hill, 1998


Mathews, C. K. & K. E. Van Holde. Bioqumica, 2a. ed. McGraw-Hill, 1998
Devlin, T. M. {Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

128