Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Biológicas
BIO 050-2014

Metabolismo y
Crecimiento Bacteriano

Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Ciencias Biológicas
BIO 050-2014

Metabolismo

Metabolismo y Necesidades energéticas.

Nutrientes para
la síntesis

Productos de desecho

Anabolismo
Energía
(Biosíntesis)
para biosíntesis

Macromoléculas y
otros componentes

Energía
para la movilidad,
Transporte
de nutrientes
Catabolismo

Productos químicos, luz
(fuente de energía)

Metabolismo bacteriano. Catabólicas: Son reacciones degradativas. . proporcionan componentes estructurales. Anabólicas: Son reacciones sintéticas. Rx. proporcionan energía. “Conjunto de reacciones bioquímicas que se realizan al interior del organismo” Biodegradación Catabolismo Generación de energía Anabolismo Consumo de energía Biosíntesis Rx.

Catalizador Sustancia que disminuye la energía de activación de una reacción química. Enzimas. Las enzimas son proteínas catalíticas (biocatalizadores) que disminuyen la energía de activación requerida para que ocurra una reacción química. H2O2 H2O2 E H2O + O2 > años H2O + O2 < seg . El catalizador no se ve alterado permanentemente durante la reacción.Metabolismo bacteriano. (se regenera al final del proceso o reacción). aumentando su velocidad de una reacción química. Energía de activación: energía necesaria para juntar las moléculas reactantes (sustratos) de la manera adecuada de modo que alcancen el estado de transición.

Metabolismo bacteriano. Etapas de una reacción enzimática: 1. Unión específica a un sustrato Ubicación del sustrato en el sitio activo de la enzima (complejo E-S) Generación de productos Regeneración de la enzima Vías enzimáticas Ejemplo: Ciclo catalítico de la Aldolasa . 4. 2. Ciclo catalítico de las enzimas. 3.

Metabolismo. Papel del ATP. .

Cobre.Metabolismo. Calcio. Fósforo. Oxígeno. Manganeso. Vanadio y Zinc. Sodio y Fierro) • Micronutrientes: Son requeridos en pequeña cantidad… (Ej. Níquel.Hidrógeno. Catabolismo. Potasio. Selenio. Azufre.: Carbono. Molibdeno.) . Degradación de moléculas de hidratos de carbono para obtener energía (síntesis de ATP).: Cromo. Tungsteno. Cobalto. Nitrógeno. Magnesio. Nutrientes Bacterianos: • Macronutrientes: Son requeridos en gran cantidad… (Ej.

Metabolismo. Nutrientes bacterianos. .

2.Glicólisis o glucólisis. Catabolismo.Metabolismo. 3.Sistema de transporte de electrones o Fosforilación Oxidativa.Ciclo de Krebs o ácidos tricarboxílicos (ATC). . 1.

Visión general Glucosa Gliceraldehído 3-fosfato Piruvato .Catabolismo. Glicolisis.

Catabolismo. Glicolisis. Ecuación general: Balance energético: Gasto: 2 ATP Producción: 4 ATP + 2 NADH 2 ATP 2 NADH = 6 ATP 8 ATP .

Fermentación del ácido pirúvico.Respiración anaerobia. Alcohólica Fosforilación oxidativa CO2 + H2O . Glucosa Glicólisis Ácido Pirúvico (piruvato) Fermentación anaeróbica Piruvato lactato deshidrogenasa Respiración aeróbica Piruvato piruvato descarboxilasa Acetaldehido Lactato alcohol deshidrogenasa Etanol F. Láctica Ciclo de Krebs F.

Fermentación alcohólica. Alcohol deshidrogenasa 2 Etanol Fermentación anaeróbica La fermentación alcohólica es ampliamente usada en la fabricación de alimentos como vino. . cerveza.Respiración anaerobia. pan.

Respiración anaerobia. Lactato deshidrogenasa 2 x Lactato • El lactato acumulado baja el pH. Fermentación anaeróbica • Fermentación usada por los lactobacilos (Bacillus lactis): Utilizan la lactosa (azúcar de la leche). . Fermentación láctica. lo que hace que las proteínas de la leche precipiten en el proceso de fabricación del queso.

Ciclo de Krebs. 2 Piruvato 2 Acetil.CoA + 2 NADH Balance energético: Producción: 8 NADH + 2 FADH2 + 2 GTP 2 GTP ó 2 ATP 8 NADH = 24 ATP 2 FADH2 = 4 ATP 30 ATP .Catabolismo.

Catabolismo. Fosforilación oxidativa. 1 Glucosa = 38 ATP Rendimiento energético final: Glicólisis = 8 ATP Ciclo de Krebs = 30 ATP . Cadena Transportadora de electrones.

.

Respiración Aeróbica y Anaeróbica. Respiración aeróbica Respiración anaeróbica . coli es capaz de realizar ambos tipos de respiración. dependiendo si esta creciendo en presencia o ausencia de oxígeno. E.

proteínas y ácidos nucleicos. DNA. etc.  Esta oxidación provoca la destrucción de estructuras biológicas.  Los radicales superóxido (O2-) e hidroxilo (HO•) reaccionan rápidamente oxidando diversas macromoléculas orgánicas como lípidos. como membranas.  Los radicales libres de O2 se generan durante el metabolismo normal de las bacterias en la respiración aeróbica. Formas tóxicas del oxígeno. .Respiración Aeróbica. complejos multiproteicos.

Enzimas detoxificantes. Catalasa (-) Catalasa (+) Prueba de la presencia de catalasa: Colonia suspendida en agua oxigenada (30%) ( 2H2O2  2H2O + O2 ) . La presencia de enzimas capaces de degradar los derivados tóxicos del O2 le permite a un determinado microorganismo utilizar esta molécula como aceptor final de electrones durante el proceso de la respiración aeróbica.Formas tóxicas del oxígeno.

Metabolismo. Identificación bacteriana. Cultivo puro Morfología de colonia y de tinción de Gram Propiedades Bioquímicas Fermentación de glucosa Utilización de citrato Producción de H2S etc. Propiedades Antigénicas Reacciones serológicas Anticuerpos específicos Características de crecimiento Temperatura Aerobiosis Anaerobiosis etc. .

. Ej. No soportan presiones de O2 > al 0.  Anaerobias estrictas: Carecen de SOD. Leuconostoc spp.Clasificación bacteriana. catalasa y peroxidasa por lo que el O2 es muy tóxico para ellas.  Anaerobias moderadas: Soportan presiones de O2 de 2 .5%. Ej. Según tolerancia al oxígeno. Ej. .  Anaerobias aerotolerantes: Poseen algún nivel de enzimas detoxificantes. Pueden estar expuestas al aire por 60-90 minutos sin perder viabilidad.8%. Clostridium haemolyticum. Lactobacillus spp. Bacteroides fragilis.

Son capnofílicas (requieren CO2).  Anaerobias facultativas: Pueden realizar metabolismo anaerobio o aerobio dependiendo del ambiente. Ej. . Escherichia coli y otras enterobacterias. Pseudomonas sp. Ej.  Aerobias estrictas: Sólo crecen en presencia de O2. Según tolerancia al oxígeno.  Microaerofílicas: Sobreviven a presiones de O2 menores a la atmosférica (<21%). Ej. Campylobacter spp.Clasificación bacteriana.

coli (Enterobacteria) 2.Clasificación bacteriana. 1. Quimiotróficas o Quimiosintéticas: “Son aquellas que obtienen su energía a partir de reacciones químicas” E. Fototróficas o Fotosintéticas: “Son aquellas que obtienen su energía captándola de la luz solar” Oscillatoria (Cianobacteria) . Según fuente de energía.

Según fuente de energía... 1.Sustancia química orgánica (trophos: alimento) “Obtienen su energía a través de la utilización de sustancias químicas orgánicas” . Quimiotróficas o Quimiosintéticas: a) Quimioorganotróficas Quimioorgano.Clasificación bacteriana.

. Quimiotróficas o Quimiosintéticas: b) Quimiolitotróficas Quimiolito.Sustancia química inorgánica (lithos: piedra. 1. Según fuente de energía.Clasificación bacteriana. trophos: alimento) “Obtienen su energía a través de la utilización de sustancias químicas inorgánicas” ..

Metabolismo Quimiolitotrófico. Oxidación del Fe2+ por el acidófilo Acidithiobacillus ferrooxidans .

2. Fotosintéticas o Fototróficas: Membrana plasmática de una cianobacteria fotosintética.Clasificación bacteriana. . generándose un gradiente de protones que se acopla a la síntesis de ATP. Según fuente de energía. La luz solar aporta la energía requerida para el proceso de transferencia de electrones en la membrana.

Obtención de Energía Glicólisis Ciclo de Krebs Sistema de transporte de electrones Fermentaciones:  láctica  alcohólica Tolerancia al O2 Anaerobios estrictas Anaerobios moderadas Anaerobios aerotolerantes Microaerófilos Anaerobios facultativas Aerobios estrictas Fuente de Energía Quimiotróficos Fototróficos Quimiotróficos:  Quimioorganotróficos  Quniolitotróficos .Resumen Catabolismo.

.Resumen Catabolismo.

Ej. Según su fuente de carbono. aminoácidos. Ej. lípidos. Anabolismo.  Autótrofas: Obtienen el carbono a partir de moléculas simples.Metabolismo. La gran mayoría de las bacterias de interés clínico son heterótrofas . CH4.: hidratos de carbono. Na2SO4. Síntesis de componentes estructurales (Biosíntesis de macromoléculas). las bacterias se clasifican en:  Heterótrofas: Obtienen el carbono a partir de moléculas más complejas. N2.: CO2. etc.

Anabolismo.Metabolismo. Los microorganismos son la base de todas las cadenas alimenticias .

Anabolismo. Fijación de Carbono (CO2) Ciclo de Calvin: Es realizado por todas las bacterias fototróficas. . Fijación de moléculas simples. Fijación de 3 moléculas de CO2 (una por cada vuelta del ciclo) Producción de 1 molécula de gliceraldehído 3 fosfato que abandona el ciclo para producir glucosa.

Fijación de moléculas simples.  Fosforilación Oxidativa: Formación de ATP desde ADP y Pi durante la cadena transportadora de electrones.  Fosforilación a Nivel de Sustrato: Ej.Anabolismo. Fijación de Fósforo (P)  Fotofosforilación: Formación de ATP desde ADP y Pi durante la fotosíntesis. Durante la glicólisis Gliceraldehido-3-P + Pi + NAD+ 1.3-Bisfosfoglicerato + NADH + H+ .

Fijación de Azufre (S) SO42H2S + Serina ATP H2S Cisteína + H2O . Fijación de moléculas simples.Anabolismo.

Anabolismo. Fijación de moléculas simples.
Fijación de Nitrógeno (N)
Desnitrificación
NO3- + H+ + NADH

NO2- + NAD+ + H2O

Nitrificación- desnitrificación-fijación del nitrógeno
NO2-

NH3

Desnitrificación-fijación del nitrógeno
N2

NH3

NH3 + ác. glutámico
ATP
Glutamina
Reacciones de Oxidación
Reacciones de Reducción

Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Ciencias Biológicas
BIO 050-2014

Crecimiento Bacteriano

División Bacteriana. Fisión Binaria.
Se requiere coordinación espacial
y temporal (secuencial) en la
síntesis de macromoléculas:
DNA
Proteínas
Hidratos de Carbono
Lípidos
Reflejado
(poblacionalmente) por
un aumento en el
número de organismos
presentes.

Resultado: dos células idénticas o clonales . Fisión Binaria. Se inicia la división de la célula y la formación del tabique que separa las células hijas 4. Luego la célula aumenta en tamaño 3. La bacteria duplica su Cromosoma 2.División Bacteriana. 1.

O. • Tiempo de generación (g): Tiempo requerido para que se formen dos células hijas a partir de una célula parental.O. Es el tiempo necesario para que la población bacteriana se duplique.O.) en una población. por unidad de tiempo. (Implica la duplicación de todos los componente estructurales de la célula) .) • Velocidad de crecimiento: Crecimiento de un M. (Implica un aumento de la biomasa del M. Definiciones.División Bacteriana. • Crecimiento: Aumento del número de individuos (M.

División Bacteriana. Crecimiento Logarítmico (Progresión Geométrica) 20 21 22 23 24 . Crecimiento Exponencial.

División Bacteriana. Crecimiento Exponencial. .

hambruna) • Fase de decaimiento: Muerte celular (agotamiento del cultivo) . • • Fase lag: Crecimiento lento (etapa de acondicionamiento ambiental) Fase exponencial o logarítmica: Crecimiento bacteriano a máxima capacidad • Fase estacionaria: Detención del crecimiento. no del metabolismo (estrés.División Bacteriana. Curva de Crecimiento.

Medición del Crecimiento Bacteriano.Recuento total de células: Conteo directo bajo el microscopio usando una muestra (diluida) de cultivo bacteriano y una cámara de recuento calibrada (Petroff-Hausser). 1. Este método no discrimina la viabilidad de las bacterias en la muestra.. .

14 células FD 1.250.500.000 Recuento total: 14XFD 17.000 .Medición del Crecimiento Bacteriano.

No es un método recomendable cuando la suspensión de células está muy diluida.Medición del Crecimiento Bacteriano. Las células pequeñas son difíciles de ver al microscopio. Se requiere tiempo y habilidad para conseguir precisión por este método. Se requiere un microscopio de contraste de fases cuando la muestra no está teñida. .Recuento total de células DESVENTAJAS • • • • • No permite distinguir células muertas de las vivas. 1..

2.1.Recuento de células viables: 2. .Medición del Crecimiento Bacteriano..Dilución seriada de la muestra en medio o buffer estéril y siembra (“plaqueo”) sobre medio sólido..

.Medición del Crecimiento Bacteriano.Recuento de células viables: 2... 2.Dilución de la muestra y siembra (“plaqueo”) de la muestra incluida en el medio sólido.2.

Medición del Crecimiento Bacteriano. .

. también depende de: • Medio de cultivo • Condiciones de incubación • Tiempo de incubación • Colonias pequeñas pueden ser ignorada • No siempre las colonias son del mismo tamaño: Las colonias pequeñas pueden ser ignoradas.Recuento de células viables (vivas) VENTAJAS • • En condiciones adecuadas. 2.. es sensible El uso de medio selectivos y diferenciales permite contar bacterias específicas DESVENTAJAS • El número de colonias no depende sólo del tamaño del inóculo.Medición del Crecimiento Bacteriano.

3..Medición del Crecimiento Bacteriano. . fotométrica o turbidimétrica de un cultivo bacteriano líquido.Medición espectrofotométrica.

rápido y barato DESVENTAJAS • No discrimina entre células vivas y muertas • El crecimiento celular es una estimación de la biomasa • A elevadas concentraciones celulares (alta turbidez) se pierde precisión ..Medición espectrofotométrica VENTAJAS • Esta técnica no distorsiona a las muestras • Generalmente muy precisas • Fácil.Medición del Crecimiento Bacteriano. 3.

lisis térmica. Temperatura.Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Desnaturación de proteínas. el transporte es tan lento que no hay crecimiento. Las reacciones enzimáticas van aumentando su velocidad de reacción. Consecuencias moleculares de la temperatura en el crecimiento bacteriano Las reacciones enzimáticas ocurren a la máxima velocidad posible. . Congelación de la membrana. colapso de la membrana citoplasmática.

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Temperatura.  Psicrófilos: Temperatura óptima baja (<1 a 15ºC)  Mesófilos: Temperatura óptima en rango medio (25 a 42ºC)  Termófilos: Temperatura óptima alta (50 a 70ºC)  Hiper termófilos: Temperatura óptima muy alta (80 a >100ºC) .

Hipertermófilos Aguas termales del Parque Nacional Yellowstone Thermus aquaticus Extremófilo.Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. T° óptima de crecimiento 70°C Fuente de la enzima Taq Polimerasa (PCR) . Temperatura. de la familia arquea.

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano.  No halófilos: No toleran ni siquiera concentraciones moderadas de sal.  Halófilos extremos: 15 a 30% NaCl. .  Halotolerantes: Toleran concentraciones moderadas de sal  Halófilos: Leves (1 a 6% NaCl) y Moderados (6 a 15% NaCl). Salinidad.

Lago poblado por Halobacterium salinarum Halobacterium salinarum Necesita 12 a 15% de NaCl en el medio para crecer. Mar: 3% NaCl Sangre: 0. Salinidad.85% NaCl .Factores que afectan el crecimiento Bacteriano.

.Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Acidez (pH).

Chile . CuS (covelita) y Cu5FeS4 (bornita). Acidithiobacillus ferrooxidans En medio altamente ácido (en H2SO4 concentrado. Región de Antofagasta. produciendo CuSO4 (soluble) Mina de cobre de Chuquicamata.Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Cu2S (chalcocita). pH  1) es capaz de oxidar minerales de cobre insolubles como CuFeS2 (calcopirita). Acidez (pH).

coli Anaerobios Aerotolerantes Estrictos Dañina o Letal Respiración. pyogenes Aerobios Estrictos Facultativos Microaerofílicos E.Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. fermentación P. volutans No requerido (Peor con O2) Fermentación S. luteus No requerido (Mejor con O2) Respiración. fermentación Requerido (Bajos niveles) Respiración aeróbica S. Oxígeno. Grupo Relación con el O2 Metabolismo Ejemplo Requerido Respiración aeróbica M. gingivalis Resazurina (Indicador de presencia de oxígeno) (a) Aeróbica (b) Anaeróbica (c) Facultativa (d) Microaerofílica (e) Anaerobia aerotolerante .

Jarra Anaeróbica (GasPack) Diseñada para el crecimiento de bacterias anaeróbicas. posee un catalizador químico que consume todo el oxígeno dentro del recipiente. Mecanismo hermético.Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Cámara Anaeróbica . Oxígeno.

pH neutro (7.0 . fuente de carbono. Condiciones de los Medios de Cultivos. fuente de nitrógeno.Medios de Cultivo.7. condición atmosférica (10% CO2) • Estar protegidos del medio ambiente (Evitar su contaminación con microbiota ambiental y/o comensal) .2 ). sales minerales. • Esterilidad • Tener todos los nutrientes esenciales (agua. vitaminas. etc. micronutrientes.) • Cumplir con requisitos físicos: temperatura (37ºC).

Esterilización. Autoclave .Medios de Cultivo.

Filtración Radiación .Medios de Cultivo. Esterilización.

• Formación de colonias Colonia: Multiplicación de una bacteria que forma una masa visible a ojo desnudo .Medios de Cultivo. • Enturbiamiento • Aparición de grumos • Formación de un velo o película en la superficie En medio sólido. ¿Cómo se observa desarrollo bacteriano en los medios de cultivo? En medio líquido.

secreciones. etc. • Conservación de cepas.Medios de Cultivo. • Fabricación de sueros. para el estudio de propiedades fisiológicas e identificación. . alimentos. muestras clínicas). • Pruebas de esterilidad. • Evaluación de antibióticos. aire. vacunas. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo? • Aislamiento de bacterias a partir de una muestra (agua. • Obtención de cultivos puros.

1.Medios de Cultivo.5%) Medio semi sólido (agar 0.8%) Medio líquido . Clasificación. Medio sólido (agar 1.Según su estado físico..

Medios de Cultivo. Clasificación. Medio de cultivo en tubo Medio de cultivo en placa . 2..Según su presentación.

Medios complejos (indefinidos): No poseen una formulación precisa. extracto de levadura). caseína..Según su contenido de nutrientes. soya. Reúnen los requerimientos nutricionales para el desarrollo de un determinado microorganismo. lo que facilita su preparación. Clasificación. Se preparan en base a infusiones de digeridos proteicos (carne. 3. La mayoría de estos medios se venden deshidratados. . Medios definidos (químicamente): Contienen cantidades precisas y bien formuladas de diversos componentes inorgánicos y orgánicos.Medios de Cultivo.

Ej. 4.Corriente (básicos): Contienen sólo los elementos nutritivos esenciales. 1. . Clasificación.Medios de Cultivo...: caldo Luria (medio líquido) y agar corriente (medio sólido).Según su utilidad.

: Agar sangre (medio sólido). suero. . Thayer Martin para N.Especiales: Mejorados o enriquecidos: Son medios corrientes adicionados de sustancias de alto valor nutritivo (sangre. Ej. TSI. agar chocolate (medio sólido). que permiten el desarrollo de bacterias más exigentes. Clasificación. Ej.: Agar SS para Salmonella y Shigella. extractos de levaduras).Según su utilidad. 2.: Citrato de Simmons. MIO.. vitaminas.. Medios diferenciales: Permiten establecer si una bacteria desarrolla una determinada función metabólica que la diferencia de otras bacterias. 4. Caldo urea. gonorrhoeae y Agar MacConkey para Gram (-). Medios selectivos: Contienen sustancias inhibidoras para determinadas bacterias.Medios de Cultivo. Ej. LIA.

Enriquecidos Agar Chocolate con Agar Sangre con Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis . Clasificación.Medios de Cultivo.

Enriquecido y diferencial: Agar Sangre. -hemólisis: Parcial (se observa halo verdoso) -hemólisis: Total (se observa halo transparente) -hemólisis: No produce hemólisis . Clasificación.Medios de Cultivo.

lac- S. E. marca diferencias.Medios de Cultivo. coli Gram (-). Typhimurium Gram (-). En este caso los que utilizan lactosa como fuente de carbono (lac+) de los que no (lac-) . lac+ S. Clasificación. en éste caso sólo Gram (-) debido a la presencia de cristal violeta y sales biliares. Diferencial: Dentro de lo que crece. aureus Gram (+) Selectivo: “Selecciona” lo que crece. Selectivo y diferencial: Agar Mc Conkey.

Medios de Cultivo. Es selectivo por su alta concentración de sal. epidermidis Gram + No utiliza manitol . Clasificación. Selectivo y diferencial: Agar Manitol Salado. aureus Gram + Utiliza manitol S. En éste medio sólo crecen Staphylococcus. Diferencia según la capacidad de utilizar manitol S.