El segundo paso

en el diagnstico citolgico:

La coloracin

Dra Laura Denzoin Vulcano

Facultad de Ciencias Veterinarias
UNICEN-Tandil

Los pasos del diagnstico citolgico

Toma de
muestras

Coloracin

Interpretacin

Los pasos del diagnostico citolgico

Toma de
muestras
Extendidos de clulas
sanas dispuestas en
monocapa

Coloracin
Uniforme

CALIDAD

Interpretacin

PASO 1: TOMA DE MUESTRAS Y EXTENDIDO

Biopsia por Aspiracin con Aguda Delgada/Biopsia con Aguja
Delgada/Improntas/Hisopados

Aguda Delgada

Aguda Delgada

PASO 1: TOMA DE MUESTRAS Y EXTENDIDO

Importante
El extendido debe ser delgado para que las clulas se
dispongan en monocapa y estn sanas.
Los portaobjetos deben ser nuevos y se deben dejar en
alcohol para desengrasar.

Es conveniente siempre realizar varios extendidos por

paciente

TOMA DE MUESTRAS Y EXTENDIDO

Objetivo: Monocapa

Siempre se utiliza un portaobjetos nuevo,

limpio y desengrasado
Los portas se mantienen en un frasco con en
alcohol al cual se le agrega unas gotas de xileno

No
olvidar!
Portaobjetos nuevo,
limpio y desengrasado

PARA QUE SE USAN LAS COLORACIONES?

1. Identificar las clulas
2. Identificar sus estructuras
Densidad de la cromatina
Nuclolos
Granulacin
Caractersticas del citoplasma

PASO 2 : COLORACIN
Objetivo: Uniforme

Coloraciones

Romanowsky

No
olvidar!

Giemsa

Papanicolaou

Wrigth

Buena calidad de colorantes

Diff Quik

Papanicolaou
Compleja
Fijacin hmeda
No tie bien
citoplasmas, ni
microorganismos
Exelente para la
evaluacin de los
ncleos

Giemsa

La mas usada
Muy simple
Fijacin con aire
Buen detalle del
citoplasma
Tie
microorganismos

Diff Quick
No la recomiendo
Inferior calidad
No tie bien los
grnulos de los
mastocitos!!!!!
No tie bien los
grnulos de
eosinfilos

Papanicolaou

Giemsa

Diff Quick

Coloracin rpida
Frasco 1: Color verde plido. Solucin de fijacin compuesto por Fast Green y metanol.
Frasco 2: Color rojo. Solucin de Eosina G en buffer.
Frasco 3: Color azul. Solucin de Triazina C en buffer

Procedimiento de coloracin rpida

Se colocan las soluciones que vienen comercialmente en botellas dentro de contenedores de boca
ancha que se van a utilizar para el pasaje de los preparados. Recordar renovar peridicamente el
contenido de los frascos.
1. Secar los extendidos al aire durante 30 a 60 minutos dependiendo del espesor de la muestra
2. Sumergir el extendido en la solucin 1 (Solucin verde plido) cinco veces
3. Escurrir el extendido sobre un papel absorbente.
4. Sumergir el extendido en la solucin 2 (Solucin roja) cinco veces
5. Escurrir el extendido sobre un papel absorbente.
6. Sumergir el extendido en la solucin 3 (Solucin azul) cinco veces
7. Enjuagar con agua destilada
8. Dejar secar

Coloracin rpida: El
citoplasma adquiere
coloracin azul (Forma
amarilla). El ncleo
toma coloracin
prpura ( Forma roja).
La flecha negra indica el
nuclolo que adquiere
un color violeta oscuro
y permite diferenciarlo
de la coloracin del
ncleo. La flecha
violeta seala un
eritrocito que adquiere
tonalidad rosa
anaranjada.

Precauciones
Escurrir bien entre los pasajes por los colorantes, de manera que estos no se
mezclen
Renovar los colorantes cuando la coloracin pierde intensidad.
Renovar los colorantes si se contaminan. Una contaminacin muy frecuente es
cuando se colorean hisopados de odo de muestras con levaduras.

Recordar
Con la coloracin rpida en ocasiones no se tien bien las granulaciones de
mastocitos y eosinfilos
Con la coloracin rpida no se tien bien los detalles nucleares

Diff Quick

Giemsa

Diff Quick

Por favor no lo
uses..

Coloraciones
Hematolgicas

Wright

Giemsa

May -Grnwald
Giemsa

Procedimiento de coloracin de
Giemsa

Procedimiento de la coloracin de Giemsa

1.
2.
3.
4.

Fijar al aire la muestra durante 30 a 60 minutos dependiendo del espesor de la misma

Cubrir con metanol durante 5 minutos
Enjuagar con agua corriente
Cubrir con solucin de Giemsa recin preparada durante 15 minutos. Preparacin de la
solucin de Giemsa: Se toma 1 parte de la solucin comercial de Giemsa y se le agregan 9
partes de agua destilada.
5. Enjuagar con agua corriente
6. Secar al aire

Colocar las muestras a

teir sobre un juego de
varillas colocadas en una
superficie nivelada. Es
importante que est bien
nivelada para que el
colorante no se escurra
por un extremo. De esta
manera, se garantiza que
la coloracin resulte
pareja en todo el
extendido

Cubrir las muestras con

metanol durante 5
minutos. Luego aclarar con
agua corriente.

Cubrir las muestras con la

solucin de Giemsa 1 en 10
recin preparada. Preparar slo
lo que se va a usar. Con 10 ml
de solucin recin preparada se
pueden cubrir 5 extendidos.
Dejar actuar 15 minutos y
enjuagar con agua coriente.
Dejar secar.

Grueso: Ms tiempo

Fino: Menos tiempo

No
olvidar!

Colorante que sobra SE TIRA

MONOCAPA

Tonalidades adquiridas por la coloracin de Giemsa

Ncleos
Prpura
Nuclelos
Prpura intenso
Citoplasma
Azul plido traslcido
Protenas
Rosado
Grnulos de Eosinfilos
Rojizo
Grnulos de Mastocitos
Prpura
Mucina
Rosado a Prpura brillante
Colgeno
Prpura brillante a magenta
Cuerpos linfoglandulares
Azul plido
Plaquetas
Rosado

Apariencia de la
coloracin de
Giemsa. Grupo de
clulas mesoteliales
100X
Forma roja: ncleo
color prpura
Forma amarilla :
citoplasma azul
trasnparente.

Ncleo prpura

Citoplasma azulado

Sedimento proteico

Apariencia de la
coloracin de Giemsa.
Inflamacin purulenta.
100X
Flechas rojas :
Bacterias. Flechas
negras ncleos de
neutrfilos. Flecha azul:
Hilos de cromatina

Apariencia de la
coloracin de Giemsa.
Clulas sanguneas de
gato 100 X. Fecha negra
eritrocitos. Flecha
violeta:neutrfilo.
Flecha roja : eosinfilo,
se puede observar el
tono rosado de las
granulaciones
citoplasmticas. Flecha
celeste: Plaqueta.

Apariencia de la coloracin
de Giemsa. Mastocitoma
100X. Ncleos de
mastocitos sealados con
la flecha negra, en los
cuales se distingue
nuclelos grandes ms
oscuros. Las granulaciones
de los mastocitos estn
sealas con flechas rojas.
Flecha verde eosinfilo

pH 6,8

pH 7,4

Plaquetas
Eritrocitos

Artefactos

Artefactos. 100x .La

flecha negra indica un
grano de polen, que es
una contaminante
ambiental que puede
aparecer al dejar las
muestras sin protejerlas
del medio ambiente. Las
flechas rojas indican
precipados del colorante.

Polen

Imagen de un proceso
inflamatorio purulento
10x. El crculo azul
encierra un grupo de
neutrfilos. Las flechas
azules muestran hilos de
cromatina. Este
artefacto se produce por
la ruptura de las clulas
por aplastamiento
durante el proceso de
extencin de la muestra.
La forma punteada
encierra clulas
superpuestas

Restos de cromatina

Extendido de sangre de
gato.100x. Las flechas
sealan precipitados de la
coloracin que pueden ser
confundidos con bacterias,
la forma de diferenciarlo
es que no tienen una
morfologa bien definida
en tanto que las bacterias
claramente tienen forma
de coco o forma de bacilo.

Extendido de
sangre de
gato.100x. Las
flechas sealan
artefactos debidos
a la falta de
fijacin. Este
artefacto aparece
cuando se tien
muestras
hmedas, no
esperando el
tiempo suficiente
para que se
encuentren
totalmente secas.

Efecto de los vapores

de formol sobre el
extendido.100X. Este
artefacto se produce
cuando la muestra es
transportada en
forma conjunta con
muestras fijadas en
formol para
histopatologa.
Puede verse un
efecto esmerilado
que no permite la
diferenciacin de las
clulas

Normal and Benign Cervical Cytopathology

Deborah Reich BSc MEd CTASC CTIAC

Recomendaciones prcticas para que tus coloraciones sean perfectas

Usar solo colorantes de la mejor calidad
Usar solo portaobjetos nuevos, limpios y desengrasados
Usar slo colorante recin preparado
Dejar secar las muestras nunca teir muestras hmedas
No exponer las muestras a vapores de formol
Tiempo de coloracin
Si usas coloraciones rpidas
Proteger los extendidos

Efecto Malachowski-Romanowsky-Giemsa

Laura Denzoin-Vulcano
laura@vet.unicen.edu.ar

Muchas Gracias