Tema 7 Biorreactores Enzimas - Microorg 14 - 15

Unidad didctica 2
INGENIERA DE BIOPROCESOS
Tema 7. Reactores con enzimas y
microorganismos
Tema 8. Separacin y recuperacin de
productos
Tema 9. Diseo de bioprocesos
Tema 7
REACTORES CON ENZIMAS Y
MICROORGANISMOS
ndice
REACTORES CON ENZIMAS Y MICROORGANISMOS

Biorreactores: definicin, tipos y diseo
Biorreactores ideales: balances de materia
Biorreactores ideales con enzimas
Biorreactores ideales microbianos
Biorreactores no ideales (reales)
Aireacin en biorreactores
Mezcla en biorreactores
Transmisin de calor en biorreactores
Equipos de bioprocesos
Caso prctico: Produccin de etanol
Biorreactores: Definicin y tipos

Un biorreactor es, de forma genrica, todo recipiente en
el que tiene lugar una reaccin biolgica que permite
obtener un producto de inters a escala industrial.
Se pueden clasificar segn varios criterios:
Segn su geometra:
Tanque / tubulares / air-lift
Segn su forma de operacin:
Discontinua / Discontinua alimentado / continua
Segn el biocatalizador presente:
Enzimticos / Celulares (fermentadores)
Geometra de biorreactores
Tipo tanque
H/D= 1.5
Tipo tubular
H/D= 5
Tipo air-lift
Modos de operacin de biorreactores
Discontinua
Discontinua alimentado
Continua
Modos de operacin de biorreactores
Biorreactores
en serie
Biorreactor con
recirculacin
Biorreactores discontinuos frente a continuos

Modo de operacin
Ventajas
Inconvenientes
Discontinuo
Equipamiento simple
Altos tiempos de
carga y limpieza
Continuo
Altas productividades
Equipamiento que
requiere control
Condiciones
constantes de
reaccin
Biorreactores en la industria
El biorreactor de tanque agitado es el mas empleado en
la industria.
Se puede operar de forma:
- Discontinua (RDTA)
- Discontinua alimentada
- Continua (RCTA)
Transcurre en estado no estacionario

Transcurre en estado estacionario
El biorreactor tubular de flujo en pistn

Se suele operar de forma continua (RCFP)
10
Biocatalizadores en biorreactores
Biorreactor enzimtico
Enzimas
Biorreactor celular
Clulas
Calor
Sustratos
E
Productos
Sustratos
Productos
Reaccin autocataltica
Enzimas
Pm: 12.000 106
Tamao
< 10 nm
Bacterias
Alcohol
deshidrogenasa
Hongos
Levaduras
Tamao > 2 m
11
Diseo de biorreactores
El diseo de biorreactores parte de un anlisis de mercado para un
producto determinado que marca un objetivo de produccin (Ton/ao)
El biorreactor ideal presenta:

Bajos costes de materias primas
= conversiones altas
Bajas inversiones en Equipo
= altas velocidades de produccin
Bajos costes energticos
= agitaciones y aireaciones lentas
Bajos costes de purificacin
= concentracin de producto alta
... y
no contaminaciones, mutaciones, etc.
Podemos conseguir todo esto?
Materias primas
Equipo
Conversin
Velocidad de
produccin
Energa
Purificacin
Concentracin
Producto
12
Diseo de un biorreactor
El diseo de un biorreactor supone el proceso de toma de
decisiones que conducen a especificar:
el tipo: Qu configuracin y geometra usar? Debera agitar
el reactor por medios mecnicos o por aire?
el modo de operacin: Debera operar en discontinuo?
Debe operarse un reactor solo o en serie con otros?
el tamao: Qu tamao de reactor se necesita para alcanzar
la velocidad de produccin deseada?
las condiciones de operacin ptimas:
temperatura, oxgeno disuelto debe mantenerse?
Qu
pH,
13
Quien disea biorreactores?
?
Seleccin y caracterizacin del Condiciones de operacin
Modelacin y escalado
biocatalizador/es
del biorreactor
Ingeniero
Bilogo
- Qumico
- Agrnomo
- Industrial
Qumico
Biorreactores ideales: Modelos de flujo ideal

Los biorreactores ideales son recipientes cuyo flujo en su
interior se corresponde con uno de los dos modelos de flujo
ideal: el flujo de mezcla completa y flujo tipo pistn.
La definicin de flujos ideales tiene varias ventajas:
- El flujo ideal supone un lmite extremo de funcionamiento
para los biorreactores reales y sirve como criterio de
comparacin de las conversiones que se obtendra con cada
uno de ellos.
- Las hiptesis simplificadoras que contienen en su definicin
permiten facilitar mucho los clculos.
14
15
Modelos de flujo ideal

Flujo de mezcla completa
Es el tipo de flujo predominante
en los biorreactores tipo tanque.
Todos los elementos del fluido
estn perfectamente mezclados
entre s y por tanto las variables
de operacin (concentraciones y
temperatura) son independientes
de la posicin en l.
Flujo tipo pistn

Es el modelo de flujo predominante
en los biorreactores tubulares. Todos
los elementos del fluido viajan con la
misma velocidad no existiendo
ningn tipo de mezcla entre ellos en
la direccin axial.
Como consecuencia, las variables de
operacin
(concentraciones
y
temperatura) si dependen de la
posicin en el biorreactor.
Flujo tipo pistn

Mezcla completa
16
Balances de materia en biorreactores ideales (1)

Hagamos un balance de materia para el componente j de una mezcla
que est reaccionando en un reactor. De acuerdo con el Principio de
Conservacin de la Materia, el balance es:
Acumulacin Entrada Salida Generacin
=

+
de j, mol/s de j, mol/s de j, mol/s de j, mol/s

Q (m3/s)
Cje (mol/m3)
Entrada
dV (m3)
Nj
(mol)
Cj
(mol/m3)
Q (m3/s)
Cjs (mol/m3)
Salida
rj (mol/m3s)

Con el fin de obtener una expresin general supongamos que la
reaccin tiene lugar en un elemento diferencial de volumen dV
Entrada (mol/s):
Cantidad de moles por unidad de tiempo del componente j que entra
al elemento diferencial de volumen.
Q Cje
Salida (mol/s):
Cantidad de moles por unidad de tiempo del componente j que sale
del elemento diferencial de volumen
Q ( Cje - dCj)
17

Generacin (mol/s):
Cantidad de moles por unidad de tiempo del componente j que
aparecen o desaparecen en el elemento diferencial de volumen como
consecuencia de la reaccin qumica.
rj dV
Acumulacin (mol/s):
El trmino de acumulacin indica como vara con el tiempo de la
cantidad de moles del componente j dentro del elemento dV.
d Cj V
dt
Puede ser acumulacin positiva si aumenta la cantidad del
componente j con el tiempo o negativa si disminuye
18

Si combinamos todas las expresiones anteriores se obtiene:
d(Cj V)
dt
= Q Cje Q (Cje dCj ) + rj dV
operando adecuadamente:
d(Cj V)
dt
= Q dCj + rjdV
que es la ecuacin diferencial del balance de materia para un

componente j en un elemento diferencial de volumen dV cualquiera y
un instante de tiempo dt.
19
20

A partir del balance de materia global aplicando las hiptesis de
idealidad de cada biorreactor se tiene:
Operacin
discontinua
Q =0
d(CjV)
dt
d(CjV)
dt
= Q dCj + rj dV
Mezcla
Completa
rj f(V)
Mezcla
Completa
rj f(V)
= Q dCj + rj dV
dCj
dt
dCj
dt
Operacin
continua
Q 0
d(CjV)
dt
RDTA
Q
(Cje Cj ) + rj
V
RCTA
= Q dCj + rj dV
Flujo
Pistn
rj = f(V)
= rj
d(CjV)
dt
= Q dCj + rj dV
RFP
Balances de materia en biorreactores ideales

Biorreactores con enzimas
1. Biorreactor enzimtico discontinuo de tanque agitado (RDTA)
2. Biorreactor enzimtico continuo de tanque agitado (RCTA)
3. Biorreactor enzimtico de flujo pistn (RFP)
Biorreactores con microorganismos

4. Biorreactor microbiano discontinuo de tanque agitado (RDTA)
5. Biorreactor microbiano continuo de tanque agitado (RCTA)
6. Biorreactor microbiano continuo de tanque agitado (RCTA) en
serie
21
22
1. Biorreactores enzimticos discontinuos de tanque agitado

Concentracin
Salida
de agua
Tanque
Agitador
S
Tiempo
Deflectores
Camisa
termosttica
Entrada
de agua
Fcil control del pH
Volumen
Tiempo de reaccin
Grado de conversin
Balance de materia
Acumulacin = Generacin
dS = - r
s
dt
Se aplica la ecuacin de velocidad (r) de la enzima
23
Resolucin ecuacin balance de materia RDTA

dS = - r
s
dt
Se aplica la ecuacin de velocidad (r) de la enzima
Si la enzima sigue una cintica tipo Michaelis-Menten:

V S
dS
=- m
dt
Km + S
Km + S
dS +
S0
S0
dS
dS = Vm dt
Km
S
dS
t0
Vmax t = S 0 S + K m ln
Vm dt
S0
Km
S
dS = Vm dt
24

Ejemplo: Reactor discontinuo tanque agitado para la hidrlisis de la
lactosa de la leche
Conversin (%)
Reaccin:
Lactosa + H2O -D-galactosa + glucosa
Enzima: -galactosidasa (Aspergillus oryzae)
Sustrato: Lactosa
pH 6.5
T 10 C
Leche: 137 mM lactosa
Cintica Michaelis-Menten: Km = 50mM 0.2 U/ml = 0.2 mM/min
100
0.2 U/ml
1 U/ml
80
60
40
kcat [E] t = So S + KM ln (So/S)
20
0
10
20
30
40
Tiempo (horas)
Qu tiempo es necesario para alcanzar una conversin del 95%?
X = (S0 S) / S0 ;
0,95 = (137 S) / 137 ; S = 137 137 * 0,95 = 6,85
t = (S0 S + Km ln (S0/S)) / Vm = (137 6,85 + 50 ln (137/6,85)) / 0,2 = 1399,7 min

t = 1399,7 / 60 = 23,3 h
25
2. Biorreactores enzimticos continuos de tanque agitado (RCTA)

Enzima soluble retenida
por membranas
Balance de materia
Acumulacin = Entrada Salida - Generacin
dS = D (S - S) - r
e
s
dt
D=
Q
=
V
1
(tiempo de residencia )
En estado estacionario
Volumen
Tiempo de residencia
Grado de conversin
D=
rs
Se - S
26
Resolucin ecuacin balance de materia RCTA en e.e.

rs
D=
Se - S
D=
X=
Si la enzima sigue una cintica tipo Michaelis-Menten:
Vm S
(K m + [S]) (S e - S)
Se S
Se
Vm
= (K m + S) (S e - S) / S
D
X Se = Se S
S = S e (1 - X)
K mX Se
Vm (K m + S) X S e K m X S e + S X S e K m X S e
=
=
=
+ X Se =
+ X Se
D
S
S
S
S e (1 - X)
vm
= Se X + K m
D
1 - X
27

Ejemplo: RCTA para la hidrlisis de la lactosa de la leche
Conversin (%)
Reaccin:
Lactosa + H2O -D-galactosa + glucosa
Enzima: -galactosidasa (Aspergillus oryzae)
Sustrato: Lactosa
pH 6.5
T 10 C
Leche: 137 mM lactosa
Cintica Michaelis-Menten: Km = 50 mM 0,2 U/ml = 0,2 mM/min
100
1 U/ml
80
0.2 U/ml
60
40
X
v max
= Se X + K M
D
1 - X
20
0
0
10
20
30
Tiempo de residencia (horas)
40
Qu tiempo de residencia es necesario para alcanzar una conversin del 95%?

= (X Se + X Km / (1-X)) / vm = (0,95 137 + 0,95 50 / (1-0,95)) / 0,2
Si X = 95% , = 5400 min = 90 horas
28
Ecuaciones de RCTA en estado estacionario

Tipo de
inhibicin
Ecuacin RCTA
Ninguna
v max = S X + K X
e
M
D
1 - X
Sustrato
Producto
2
v max = S X + K X + S e (X - X 2 )
e
M
D
1 - X KIS
v max = S X
e
D
+ KM
1 - X
KM Se X2
KIP (1 - X)
29
3. Biorreactores enzimticos continuos de flujo pistn (RFP)

Corriente de
producto
concentracin
S
longitud
Partculas
de enzima
inmovilizada
Si en el reactor hay un soporte que

ocupa un volumen (Vl), se define la
ocupacin de la columna () como:
= Vl / Vtot ,
por lo que el valor de D ser:
Corriente
de sustrato
Bolitas de 1-3 mm
D=
Q
Vtot
30
Resolucin ecuacin balance de materia RFP en e.e.

d(S V)
= Q dS + v dV
dt
S = f(z)
v = f(z)
Q dS + v A dz = 0
dz = -
Q S dS
L = dz = -
o
A Se v
si v =
L
=
Q dS
A v
Q
dS + v dz = 0
A
S (z)
S (z+dz)
vmax S
Km + S
K S dS 1 S
A
S K +S
dS = - M S
= -S M
Se dS
e
e
Q
vmax S
vmax
S vmax
K
1 V
S S -S
=
= M Ln e + e
D Q vmax
S
vmax
X=
Se S
Se
vmax
S
= KM Ln e + Se - S
D
S
X Se = Se S
S = S e (1 - X)
vmax
= Se X - KM Ln (1 - X)
D
31
Ejemplo: RFP para la hidrlisis de la lactosa de la leche

Se utiliza lactasa para la hidrlisis de la lactosa obtenida de los desechos de una
quesera y as producir glucosa y galactosa. La enzima est inmovilizada sobre
partculas de resina y empaquetadas en una columna de 0,5 m3. La KM para la enzima
inmovilizada es 1,32 kg/m3, la vmax es 45 kg/m3/h. La concentracin de lactosa en la
corriente de alimentacin es 9,5 kg/m3 y se necesita alcanzar una conversin de
sustrato del 98%. La columna opera en flujo pistn durante 310 das al ao.
a) A que caudal debe operar el reactor?
vmax
= Se X KM ln (1 - X)
D
45 kg/m3/h
= 9,5 kg/m3 0,98 1,32 kg/m3 ln (1 - 0,98)
D
45
= 9,31+ 5,16 = 14,47 D = 3,1 h-1
D
Q = D V = 1,55 m3 /h
b) Cuntas toneladas de glucosa se producen cada ao?
Lactosa = Q(Se S) = 1,55 (9,5 0,19) = 14,5 kg/h

Relacin molar entre lactosa hidrolizada y glucosa producida
Glucosa = 14,5 (kg/h) 24 (h/d) 310 (d/ao) 1/342 (kmol/kg) 180 (kg/kmol)
Glucosa = 56779 kg = 56,7 T/ao
32
Ecuaciones de RFP en estado estacionario

Tipo de
inhibicin
Ninguna
Sustrato
Producto
Ecuacin RFP
vmax = S X K ln (1 - X)
M
e
D
2
vmax = S X - K ln (1- X) - Se (2X - X 2 )
M
e
D
2 KIS
vmax = S X
e
D
KM
- K ln (1KIP M
X)
1 +
Se
KIP
33
Eleccin del biorreactor atendiendo a la cintica de la enzima

Reactor continuo
Cintica de
reaccin
Reactor
discontinuo
RCTA
RFP
Orden cero
Adecuado
Adecuado
Adecuado
Primer orden
Adecuado
Adecuado a baja
conversin
Adecuado
Michaelis-Menten
Adecuado
Adecuado a baja
conversin
Adecuado
Inhibicin sustrato
Adecuado a baja
concentracin
Adecuado
Adecuado a baja
concentracin
Inhibicin por
producto
Adecuado
Adecuado a baja
conversin
Adecuado
34
Biorreactores ideales con microorganismos
X
So
So
P
P
P
P
P
Concentracin
P
P
Tiempo
35

Balance de materia
Acumulacin = Generacin
Biomasa
d
(V X) = V rX
dt
dX
= ( k d ) X
dt
Concentracin
X
P
Sustrato
d
(V S) = V rS
dt
d
(V P) = V rP
Producto
dt
rX
rP
dS
=
+
+ mS X
dt
YXS YXP
dP
= rX + X
dt
S
Tiempo
Asumimos: rx= X (kd=0, Ks << S); rs= - X/YXS (ms=0) ; rP =YPX X (=0)
36
Problema biorreactor microbiano discontinuo (RDTA):

Una cepa de E. coli se utiliza para la produccin de una protena. Se comienza el funcionamiento de un
biorreactor discontinuo inoculando 12 g de clulas en un fermentador aireado de 100 l que contiene 10 g/l
de glucosa. La velocidad especfica mxima de crecimiento del microorganismo es 0,9 h-1, y el rendimiento de
biomasa a partir de glucosa es 0,575 g/g.
a. Calcular el tiempo necesario para alcanzar la fase estacionaria, en la que se ha consumido todo el sustrato.
b. Cul ser la concentracin final de clulas si la fermentacin se para cuando se ha consumido nicamente
el 70% del sustrato?.
Datos: Xo = 12 g / 100 l = 0,12 g/l;
So = 10 g/l
; m = 0,9 h-1 ; YXS = 0,575 g/g
a) t fase estacionaria? La concentracin final de sustrato es cero. S = 0
rx = dX = m X
dt
m X
rs = dS
=
YXS
dt
t
dX
X
ln(
) = m t
=
dt
m
t0
Xo
X
Y
dS = m Xo e m t
XS S dS = t m e m t dt
to
YXS
dt
Xo So
dX = dt
m
X
X
X0
X = Xo e
m t
Concentracin
X
P
Y
Y
Y
1
xs (So - S))
xs
xs (So - S) = e m t - 1
t
=
ln(1
+
(So - S)) = m t
ln(1 +
m
X
X
X
o
o
o
Si S = O t = 1/(0,9) Ln (1 + 0,575 /0,12 (10 - 0)) = 1,11 ln(48,92) = 4,32 h
b) concentracin de biomasa si se consume solo el 70% de sustrato ( = 0,7)?
= (So S) / So; 0,7 = (10 S)/10; 7 = 10 S; S = 3 g/l
t = 1/(0,9) Ln (1 + 0,575 /0,12 (10 - 3)) = 1,11 ln(34,54) = 3,93 h
X = Xo exp(m t) = 0,12 exp(0,9 3,93) = 4 g/l
S
Tiempo
37

Se
S0
D = 0,1 h-1
(D = 0,1 h-1)
Quimiostato
D = 0,3 h-1
(D = 0,3 h-1)
Se
D = 0,8
S baja
Dptimo
h-1
(D = 0,8 h-1)
Se
S = Se
Dmax= 1 h-1
Dmax = 1 h-1
Lavado celular!
Dmax= 1 h-1
38

Balance de materia
Acumulacin = Entrada Salida + Generacin
dX
= D (X e - X) + rX
dt
rx = ( k d ) X
Sustrato
dS
= D (S e - S) + rS
dt
rX
r
rS =
+ P + mS
YXS YPS
Producto
dP
= D (Pe - P) + rP
dt
rP = rX + X
Biomasa
39
Resolucin ecuacin balance de materia RCTA en e.e.

Balance de materia en estado estacionario
Kd=0 ; Xe=0 ; ms=0 ; rs= X/YXS; Pe=0 ; =YPX ; =0
Biomasa
D (X e - X) + X = 0
Sustrato
X
=0
D (S e - S) YXS
Producto
D (Pe - P) + YPX X = 0
D=
S=
D Ks
m D
D Ks
X = YXS (S e S ) = YXS S e
max D
P=
YPX X
D
40
Problema biorreactor microbiano continuo

A partir de cultivos en discontinuo de un microorganismo, se han obtenido los parmetros del modelo de Monod
que describe su crecimiento (m= 0,2 h-1, y Ks = 0,35 g/l). Se desea llevar a cabo el mismo proceso en un
biorreactor en continuo de tanque agitado a escala industrial.
a) Si la alimentacin es estril (no contiene biomasa) cul ser el volumen de fermentador necesario para
tratar un caudal de 500 l/h de una corriente de sustrato de 30 g/l si se desea alcanzar una conversin del 90%?
b) Cul ser la velocidad de dilucin que permite maximizar la productividad celular?.
c) Si se sabe que el rendimiento en biomasa de sustrato es 0,09 g/g cul ser la productividad en biomasa?.
Datos microorganismo:
m = 0,2 h-1 ; ks = 0,35 g/l; Yxs = 0,09 g/g
a) Volumen del tanque? Si Xe=0, Q = 500 l/h; Se = 30 g/l; = 90%
Balance materia de biomasa en estado estacionario:
Q Xe Q X + X V = 0
0QX+XV=0
Q = V
v = Q / (D = )
Como conversin = 90% entonces Conv = (So S) / So ; y = m S / (Ks + S)
0,9 = (30 S) /30; S= 30 30 0,9 = 3 g/l
V= Q (ks + S) / m S = 500 (0,35+3) / 0,2 3 = 2792 l = 2,79 m3
b) Cual seria D para mxima productividad en biomasa?
m S
En estado estacionario: D = y entonces D = Ks + S

D Ks + D S = m S
S (m - D) = D Ks
S = DmKs
-D
41

Balance de materia de sustrato en estado estacionario
Q Se Q S rs V = 0 como rs = - rx / Yxs = - x / Yxs
entonces
Q
Q D Ks
X
D Ks
X
=0
Se -D
Q Se - Q
-D
V=0
V
V m - D
Yxs
m - D
Yxs
Se -
D Ks
X
=0
m - D Yxs
X = Yxs (Se -
D Ks
)
m - D
Qx = D Yxs (Se -
Qx = Productividad biomasa= D X
D Ks
)
( m - D)
La D de mxima Productividad ser:
D 2 Ks
dD Yxs Se - Yxs
( m - D)
d Qx
= O;
=O
dD
dD
Resolviendo:
ks
0,35
= 0,2 1
= 0,178 h-1
Dopt = m 1
ks + Se
0,35 + 30
X = Yxs (Se -
0,178 x 0,35
D Ks
) = 0,09(30 ) = 0,09(30 2,83) = 2,44g/l
0,2 - 0,178
m - D
Productividad biomasa= D X = 0,178 2,44 = 0,435 g/l h
(Dopt =89% max)
42
6. Biorreactor microbiano continuo de tanque agitado (RCTA) en serie

Ecuaciones e.e. primer reactor
S1 =
RCTA en serie
D1 K s
m D1
X1 = YXS1
D K
S e 1 s
m D1
Balance de materia en segundo reactor

Biomasa
dX 2
V2
= Q (X1 - X 2 ) + 2 V2 X 2
dt
dS 2
2
Sustrato V2
= Q (S1 - S 2 ) V2 X 2
dt
YXS2
Ecuaciones e.e. segundo reactor
X2 =
S 2 = S1
D 2 X1
D 2 2
2 X 1
YXS 2 D 2
43

Problema dos biorreactores microbianos discontinuos en serie
Dos fermentadores de tanque agitado se encentran conectados en serie. El primero tiene un volumen
operacional de 100 l y el segundo de 50 l. La alimentacin del primer fermentador es estril y contiene 5 g/l
de sustrato y se alimenta al fermentador con un caudal de 18 l/h. El crecimiento microbiano sigue una
cintica de Monod, siendo los valores de Ks y m 120 mg/l y 0,25 h-1, respectivamente. Calcular la
concentracin de sustrato en el segundo fermentador en condiciones de estado estacionario. Qu sucedera
si el primer reactor se operara con 50 l y el segundo con 100 l?.
Datos: Se = 5 g/l; max = 0,25 h-1; Ks = 0,12 g/l ; Q = 18 l/h ; D1 = Q / V1 = 18 / 100 = 0,18 h-1
a) Concentracin de sustrato em reactor 2?
Balance materia de biomasa en estado estacionario Reactor 1:
Q Xe Q X + X V = 0
0QX+XV=0
Q = V
Como D =
= m S / (Ks + S)
D Ks + D S = m S
S (m - D) = D Ks
S = DmKs
-D
S = 0,18 x 0,12 / (0,25 0,18) = 0,308 g/l

Reactor 2
Se = 0,308 g/l; Q = 18 l/h ; D2 = Q / V2 = 18 / 50 = 0,36 h-1
Condiciones de lavado Se = 0,308 g/l
Reactores en serie
D2 > max
b) Que sucedera si el primer reactor fuera de 100 l y el segundo de 50 l?

Reactor 1: Se = 5 g/l; Q = 18 l/h; D1 = Q/ V1 = 18 / 100 = 0,36 h-1
Condiciones de lavado S = 0 g/l
D1 > max
Biorreactores no ideales
Biorreactores no ideales (reales)

Las desviaciones de los modelos de flujo ideal (mezcla
completa y flujo pistn) en situaciones reales puede llevar a un
error en el escalado.
La descripcin del flujo viene dado por:
a) Distribucin de tiempos de residencia (informacin cualitativa de
canalizaciones, zonas muertas, recirculacin interna ...)
b) Tiempo de mezcla
c) Calidad de la mezcla (microfluidos y macrofluidos)
En reactores biolgicos las velocidades de reaccin son
moderadas o lentas, los aspectos relacionados con el tiempo y la
calidad de la mezcla tienen menos importancia, siendo esencial la
determinacin de la distribucin de tiempos de residencia.
44
Curvas de distribucin de tiempos de residencia

Estudio de trazadores
(tcnicas estmulo-respuesta)
Informacin sobre:
- Tiempo medio de residencia
- Volumen til del reactor
El trazador debe ser:
- Miscible con la corriente
- No afectar rs ni reaccionar
- Detectable con precisin
- No presente en la corriente
45
46
Curva C: curva de respuesta

Curva C
Curva de respuesta
A = C(t) dt
0
_
t
Distribucin
de tiempos de
residencia
es el tiempo
de residencia
C(t) dt
0
A
La curva de respuesta C(t) se normaliza:
El tiempo medio de residencia es:

_
El volumen til es:
Vtil = Vreactor
t=
t C(t) dt
C(t) dt
= 0 C d
t C t
=
C t
i
=1
47
Modelos de flujo no ideal de un solo parmetro

Modelo de dispersin
Grado de mezcla. Difusin DA: coef. difus. axial
DA/uL = 1/Pe
u: veloc. fluido
L: long. reactor
Modelo de tanques en serie (N)
N: nmero de tanques
48
La aireacin es importante en los procesos aerobios pues la mxima
concentracin de saturacin del oxgeno en los medios de cultivo es
pequea (9 mg/l; mezcla aire/agua a 20 C), debido a la baja solubilidad
del oxgeno, por lo que debe ser suministrado de forma continua.
La solubilidad del oxgeno en agua a 1 atm est tabulada, pero vara con:
- Temperatura
- Presin parcial de oxgeno en la fase gas
p O2G = PT y O2G = H C *O2L
siendo H la constante de Henry (a 25 C es 24.2)
La fraccin molar de oxgeno en el aire es 0.2099.

si PT = 1 atm pO2G = 0.2099 atm C* (25 C) = 8.67 10-3 kg m-3
- Presencia de material disuelto
49
Dispositivos aireadores
Se distinguen dos tipos bsicos:
Aspersores:
El mtodo ms simple de dispersar un
gas en un lquido es introducir el gas
por una tubera de extremo abierto.
Aspersor
Difusores:
Son tubos o discos porosos que se
obtienen mediante la sinterizacin de
partculas seleccionadas por tamaos,
normalmente de carbn, cermicos,
polimricos o metlicos.
Difusor
50
Aspersores
Entre los aspersores existen variantes en el diseo con orificios
mltiples a lo largo de la tubera en disposicin recta o circular, o
consistir simplemente en un plato perforado.
Por lo comn el tamao de los orificios va de 1/8 a
1/2 de pulgada de dimetro.
La nica consideracin de diseo a tener en
cuenta es que la presin a nivel de la salida del
dispositivo aireador debe ser superior a la carga
hidrosttica del lquido del tanque. La prdida de
presin originada por el dispositivo aireador no
debe de ser muy grande.
Pgas + (P) asp > Phid

Phid = g H
H = altura de lquido en el tanque
51
Corrientes de flujo en biorreactores aireados y agitados
Velocidad de rodete
Caudal de gas
Aireacin en reactores de tanque agitado
Dnde est el aire? Transferencia de oxgeno Tamao de las burbujas
52
53
Punto de redispersin
Si se aumenta progresivamente la entrada de gas a un tanque
provisto con un agitador se alcanza eventualmente un punto en
el que el rodete se inunda, es decir, est rodeado por una
cantidad excesiva de gas y no puede operar eficazmente. Este
punto se conoce como punto de redispersin.
El caudal en el punto de redispersin (Qred) da la mxima
capacidad de tratamiento de gas en el tanque. Se obtiene
mediante:
NA = 0.194 Fr 0.75
Fr =
da N
g
NA =
Q red
N d 3a
NA, nmero de aireacin

El nmero de aeracin nos indica el grado de
dispersin de las burbujas en el difusor.
N es la velocidad de agitacin
da es el dimetro del agitador
54
Velocidad de transferencia de oxgeno (OTR)

La ecuacin del transporte entre fases si se
expresa la velocidad de transferencia de
oxgeno por unidad de volumen del
reactor y se utiliza el coeficiente global KL es:
'
O2
N
C*
CL
Difusin
1 Ley de Fick
O2
2 rea superficial
= K L a (C L C )
kg m-3 s-1
Donde CL es la concentracin de oxgeno en

la fase lquida, C* la concentracin de
saturacin en la fase lquida, y a la relacin
rea interfacial /volumen de reactor
55
Estimacin de la velocidad de transferencia de oxgeno (OTR)

Modelo:
N'O2 = K L a (C L C * )
Coeficiente global de
transferencia
Valores tpicos:
a = 0,25 m3/m3 X Area / vol. esfera
a = 0,25 x 3 / 0,003 = 210
(25%v/v aire burbujas 3 mm radio)
OTR = 4 10-4 250 0.0083 3600
rea
kg m-3 s-1
Fuerza impulsora
Reactor de 200 m3
KL = 3-4 10-4 m s-1

a = 100 - 250 m2 m-3
C* = 0,0083
OTR 3
kg m-3
kg m-3 h-1
OTR < 3
10-25 % v/v
6 mm
1 m3 s-1
Caudales de aire
0,5 1,5 vvm (vol aire vol ferm min)
Q = 200 m3/min (tanque 200 m3)
56
Determinacin experimental de KL a: Mtodo indirecto

Caractersticas:
- Medio sin clulas
- Electrodos con
tiempos de
respuesta pequeos
- Ecuacin:
dCL
= K L a (C L - C * )
dt
- Ecuacin integrada:
C (t)
ln 1 L * = K L a t
C
Mtodo de eliminacin de oxgeno
57
Determinacin experimental de KL a: Mtodo directo

a) Balance de oxgeno con biorreactor en estado estacionario
Se obtiene KL a durante el proceso de fermentacin. Mas fiable.
Para cuantificar el consumo de oxgeno por la biomasa se define
una velocidad especfica de consumo de oxgeno (QO2).
Q e C O2e Q s C O2s V X Q O2 = 0
Si Qe=Qs
KLa =
K L a (C L - C * ) = X Q O2
Q (C O2e C O2s )
V (C L C * )
Para volmenes superiores a 50 litros se debe tomar la media

logartmica para el gradiente de concentraciones (CL-C*)
58
Determinacin experimental de KL a: Mtodo directo

b) Tcnica dinmica
Se obtiene KL a durante el proceso de fermentacin y consiste en introducir
una perturbacin al sistema en estado estacionario
Tramo BC
Sin oxgeno
X QO2
Tramo BC
dCL
= K L a (C * - CL ) - X QO2
dt Transferencia - consumo
CL =
1 dCL
+ X Q O2 ) + C *
(
K L a dt
59
Estimacin de KL a
Vlida para:
- Biorreactor de tanque agitado y (Pg/V) entre 500 y 10000 W/m3
- Medios de baja viscosidad
m
Pg n
K L a = b u
V
Donde,
Disoluciones acuosas: b = 0.026; Disoluciones de electrolitos: b = 0.002
Dispersiones claras: m = 0.4; Medios turbios: m = 0.7
Dispersiones claras: n = 0.5; Medios turbios; n = 0.2
Pg = potencia del agitador en sistema aireado (W)
V = volumen de lquido del tanque (m3)
u = velocidad superficial del gas (m/s)
Kl a en s-1
60
Estimacin de KL a
Vlida para:
- Biorreactor de tanque agitado
- Sistemas viscosos
- El clculo se hace a partir de mdulos adimensionales
0.06D A
KLa =
d2a
D A
0.5
e u

0.6
1.5
d N
e
2
a
da = dimetro del agitador (m)

N = revoluciones del agitador (s-1)
u = velocidad superficial del lquido (m/s)
g = aceleracin de la gravedad (m/s2)
e = viscosidad efectiva (kg/ms)
= tensin superficial (N/m)
= densidad (kg/m3)
DA = difusividad del componente A (m2/s)
daN
0.19
daN
0.32
61
Estimacin de la Velocidad de consumo de oxgeno (OUR)

Modelo:
OUR = N'O2 = Q O2 X = YOX X
kg m-3 s-1
biomasa.
rendimiento
velocidad especfica de crecimiento
Valores tpicos:
- Rendimiento oxgeno/biomasa
3 CH2O + 0,5 O2 2 CH2O0.5 + CO2 + H2O
0,5 32
= 0,32 kg kg-1
2 25
- Valores tpicos:
= 0,5 h-1
YOX =
X = 50 kg m-3
OUR = YOX X
OUR = 8
kg m-3 h-1
Formacin de espumas
Un alto grado de aeracin y agitacin conduce normalmente a la
formacin de espumas debido a la existencia de molculas con
propiedades tensioactivas.
La formacin de espumas debe evitarse pues causa otros problemas de
operacin:
- Disminuyen la transferencia de oxgeno al quedar las burbujas
atrapadas en el equipo y estar siendo recirculadas continuamente
disminuyendo su contenido en oxgeno.
- Causan problemas operativos al salir por los conductos de aire y toma
de muestras
- Son fuente de contaminacin
- Suponen una barrera fsica a la eliminacin de CO2
Se usan antiespumantes (ej. dodecil sulfato sdico) que mejoran a (la
relacin rea interfacial /volumen de reactor) pero disminuyen KL.
62
63
Dispositivos de mezcla en biorreactores de tanque agitado

Podemos distinguir dos grandes tipos de agitadores segn el ngulo que
forman las aspas con el plano de rotacin: hlices y turbinas.
Hlices: Son aquellos impulsores
que forman un ngulo menor de
90 con el plano de rotacin
dando un flujo de tipo axial.
hlice
Turbinas: Son aquellos impulsores

cuyas aspas son paralelas al eje
del agitador dando al fluido un flujo
de tipo radial.
turbina
Montaje de hlices y turbinas

Hlices
El montaje es lateral Fluidos de baja viscosidad o fluidos con
slidos suspendidos de velocidad de sedimentacin lenta.
El montaje es axial excntrico (15 de la lnea central) y se usan
hlices de aspas inclinadas Fluidos viscosos que requieren mas
energa de agitacin.
Las hlices se fabrican en dos gamas de velocidades:
Baja (350 - 420 rpm), o Alta (1150 - 1750 rpm)
Turbinas
Las turbinas son mas adecuadas para operaciones a gran escala y
para lquidos con slidos en suspensin.
En turbinas el montaje siempre es axial, y estn en el rango bajo de
velocidad entre 20 y 150 rpm.
64
65
Tipos de rodetes para turbinas

Las turbinas se clasifican a su vez segn el rodete sea de palas, de
disco o tipo ancla.
Palas planas
Palas curvas
Disco
Ancla
Las turbinas de palas se usan para velocidades bajas y disponen de

2 o 4 palas, pudiendo ser planas o curvas. Las palas curvas son
mejores para fluidos con slidos en suspensin.
Las de disco se usan para velocidades mas altas y pueden tener 6
palas o ms.
Para fluidos muy viscosos es mejor usar el tipo ancla que pasan muy
cerca de la superficie y evitan la deposicin de slidos y zonas
estancadas cerca de la pared
Intervalos de viscosidad para diferentes rodetes
66
Uso de deflectores en tanques agitados

Los
deflectores
(baffles
o
desviadores) son bandas planas
verticales colocadas radialmente a
los largo de la pared del tanque que
rompen el flujo en remolino y da
como resultado una gran circulacin
de la parte superior al fondo.
Sin deflectores se produce un
vrtice debido a la fuerza centrfuga
que limita la velocidad de rotacin ya
que cuando el vrtice llega a la hlice
se produce un arrastre importante del
aire situado sobre l. El remolino
genera fuerzas oscilantes que
pueden daar el tanque.
67
Dimensionado de tanques agitados

Las proporciones estndar comnmente aceptadas son:
68
69
Tanques agitados por varios rodetes

Para mejorar la mezcla en sistemas aireados
pueden colocarse varios rodetes.
La distancia entre rodetes debe ser de 1 a 1,5
veces el dimetro del rodete.
En el caso de sistemas sin aireacin la potencia
consumida ser:
(P)n = n (P)i
Stirred tank
cooling
coils
stirrer
70
Tiempo de mezcla en tanques agitados

La experimentacin con trazadores en tanques agitados informa de la desviacin
respecto al modelo de mezcla completa.
El tiempo de mezcla (tm) es el tiempo de homogeneidad (10% error).
El tiempo de circulacin (tc) tiempo medio en que el fluido da una
vuelta al tanque
Curva de respuesta
A escala industrial
(1 100 m3)
tm entre 30 y 120 s
Clculo del tiempo de mezcla en tanques agitados

El tiempo de mezcla de un tanque agitado, tm, se puede calcular:
- Sin atender a la geometra del reactor, como cuatro veces el tiempo
de circulacin.
tm (s) = 4 tc
- Atendiendo a la geometra del reactor segn la expresin:
tm (s) = 0,6 / N (D/Dr)3 (H/D) Np-1/3 (Dr/Hr)2/3
donde,
V = volumen de trabajo (m3)
N = velocidad de rotacin del agitador (s-1)
Dr = dimetro del rodete (m)
Hr = altura del rodete (m)
D = dimetro interno del reactor (m)
H = altura del lquido en el reactor (m)
Np = nmero de potencia (-)
71
72
Potencia de agitacin en tanques agitados

La potencia (P) necesaria para la agitacin se obtiene a partir de la
relacin entre el mdulo de potencia (NP), el mdulo de Reynolds
de rotacin (Re)r y el mdulo de Froude (Fr):
NP =
P
n
m
=
b
(Re)
(Fr)
r
N 3 D5
D2 N
(Re) r =
D N2
Fr =
g
en donde N es la velocidad de agitacin, D el dimetro del rodete,

la densidad, b una constante que depende de la geometra del
tanque, y n y m son constantes que dependen del rgimen de
circulacin y del tipo de impulsor utilizado.
Para tanques con deflectores m = 0, siendo la potencia
independiente del nmero de Froude.
73
Relacin entre el nmero de potencia y el Reynolds de rodete

Para (Re)r < 10 NP= b/(Re)r
Para (Re)r 1010.000 las correlaciones se dan de forma grfica
segn el tipo de agitador:
Turbina
de disco
NP
Turbina
de palas
Hlice
(Re)r
Para (Re)r > 10000 el nmero de potencia es independiente de (Re)r

y la potencia puede calcularse a partir de:
NP = b N3 D5
74
Relacin entre el nmero de potencia y de aeracin

En sistemas aireados se calcula un nmero de potencia modificado:
Pg
NP =
g N3 D5
usando la densidad aparente definida como:
g = (1 G )
G es la fraccin volumtrica de la fase gas retenida en el tanque (hold-up)
Relacin entre Na y Np para turbinas de disco

El nmero de aeracin se
calcula con la ecuacin:
Qg
Na =
N D3
Qg es el caudal de gas (m3/s)
75
Ejemplo: Clculo de las necesidades de potencia en un fermentador
agitado
Se considera un tanque de fermentacin de 1 m de dimetro, equipado con
una turbina de disco. El tanque dispone de pantallas deflectoras y sus
proporciones se pueden considerar estndar. En un proceso concreto se
establece la utilizacin de un medio de cultivo con una densidad de 1100
kg/m3, y una viscosidad de 0,01 kg/m s. Las condiciones de operacin viene
fijadas por un caudal de aireacin de 0,7 vvm (volmenes de aire por
volumen de fermentador por minuto) y una velocidad de agitacin de 250
rpm. Calcular los requerimientos de potencia del sistema sin aireacin, la
potencia para el sistema aireado y la retencin de gas (G).
a) Sin aeracin:
D (rodete) = T/3 = 1/3

2
1 250
1100

D 2 N 3 60
(Re) r =
=
= 1.53 105
0.01
3
Np= 5 (grficamente)
250 1
P = NP N3 D5 = 5 1100
= 1637 W
60
3
76
b) Con aereacin
2
T H = 13 = 0.785 m3
4
4
0.7 0.785
m3gas
1
= 9.16 10 3 m3 /s
V=
Caudal de gas : Q g = 0.7 3
60
m fer min 60 s
Qg
9.16 10 3
=
= 0.0593 Np= 2.2 (grficamente)
Nmero de aeracin : Na =
3
3
ND
250 1

60 3
Volumen fermentador : V =
250 1
Pg = NP N D = 2.2 1100
= 720 W
60
3
c) Retencin de gas
Pg
g
720
=
= (1 G ); 1 G =
= 0.44 G = 0.56
1637
P
77
VIDEO
- La transferencia de oxigeno en un fermentador
- Mtodo dinmico
- Mtodo esttico
- Elementos de un fermentador
- Agitacin
- Medidas de oxgeno
- Condiciones que afectan la transferencia de oxgeno
Dispositivos de transmisin de calor en biorreactores

Encamisado
Serpentn
Intercambiador
externo
78
Seleccin del dispositivo de intercambio de calor
79
80
Balance de energa en un biorreactor

Velocidad de
HPR= OUR 14 106
produccin de calor:
J m-3 s-1
Disipacin:
J m-3 s-1
Entalpa de combustin O2
Ps
Principalmente por agitacin
Velocidad de
enfriamiento:
HTR
= ov Ac T
Coeficiente de transferencia
J m-3 s-1
Gradiente de temperatura
rea especifica de enfriamiento
81
Estimacin del balance de energa en un biorreactor

OUR
= OTR
= 3 / 3600
kg m-3 s-1
HPR= 12 103
J m-3 s-1
adems
Ps = 2 103
J m-3 s-1
Valores tpicos:
ov = 2000
J m-2 K-1
Ac = 1
m2 m-3
T =
10
usando
entonces
Enfriamiento
HTR
= 20 103
J m-3 s-1
82
Biorreactores
Aireacin, agitacin y calor en biorreactor
200
3
m ...
400 kW
2 Hz
1-10 m
10-50 kg m-3
OUR = 8
kg m-3 h-1
10-25 % v/v
6 mm
OTR 3
kg m-3 h-1
1 m3 s-1
Ps = 2 103 W m-3
HTR = 20 x 103
6m
W m-3
7m
1 m2/m3
HPR= 12 103 W m-3
83
84
Equipos a escala laboratorio
BIOSTAT B series (2L, 5L and 10L)
85
Equipos a escala piloto
50 - 200 litros
86
Equipos a escala industrial

Tamao de fermentadores de diferentes volmenes
Cilindro de relacin H/D= 2,5
Volumen (m3)
Altura (m)
Dimetro (m)
0,80
10
4,3
1,75
100
9,3
3,70
1000
19,9
8,00
87

20 m3
2 m3
1m
2m
2.5 m
6m
88

250 m3
152
m
5m
Fermentadores usados para la

produccin de cido glutmico y
lisina. Kyowa Hakko Kogyo Co.
Ltd, Hofu, Japan.
Cada fermentador contiene unos
250 m3 y mide ~15 m de alto.
89
Fermentadores usados para

la produccin de enzimas.
Novozymes. Dinamarca.
90
Vino
Cerveza
91
Planta para la produccin bioetanol. Ecocarburantes, Cartagena.

Cada fermentador contiene unos 1500 m3
11 m
92
Sistema de cultivo celular

completamente automatizado
con biorreactor de 900 Litros.
Cultivo de clulas de insecto
para produccin de protenas
teraputicas.
Sistema de limpieza
integrado.

Planta de production de la vacuna para la Hepatitis B
- 300 litros fermentador principal
- 20 litros pre-fermentador
- Secuencias de inoculacin y recoleccin
completamente automatizadas
- Sistema de control automtico conjunto
93
Monitorizacin de biorreactores
Medidas In-situ (in-line)
Sensores Fsicos
Sensores Qumicos
Medidas en lnea (on-line)
Medidas discontinuas (off-line)
94

Sensores Fsicos:
Temperatura (termopares)
Presin (mecnicos tipo Bourdon)
Agitacin (sensores pticos, magnticos, tacmetros)
Propiedades hidrodinmicas
Anemmetros laser doppler
Anemmetros de hilo caliente
Nivel (conductividad)
Caudal gases (rotmetro, medidor msico)
Caudal lquidos (medidores magnticos, por pesada)
95

Sensores Qumicos:
pH metros
pO2 disuelto (polarogrficos)
CO2 disuelto
Potencial redox
O2 gas (analizador paramagntico)
CO2 gas (infrarrojo)
Espectrometra de masas (O2, CO2, gases de salida)
Biomasa (ptico, fluorimetra, capacitancia)
Bioelectrodos
96
97
Medidas en lnea (on-line)

Equipos que consiguen muestra libre de biomasa
Sonda filtrante in-situ
Separacin continua fuera del reactor (filtracin/centrifugacin)
Equipos de anlisis de inyeccin de flujo (FIA)
Detector
Medidas discontinuas (off-line)

Biomasa:
Peso seco
Recuento microscpico en cmara de contaje
Contaje de colonias en placas Petri (cfu/ml)
Densidad ptica
Citometra de flujo
Anlisis fluorimtrico de NADH
Densitometra de resonancia acstica
Sustratos y productos
Mtodos espectrofotomtricos
Mtodos cromatogrficos
HPLC / GC / FPLC
98
Unidad mvil para la limpieza de fermentadores
99
Unidad mvil para la limpieza de fermentadores
100

Tema 7 Biorreactores Enzimas - Microorg 14 - 15

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Tema 7 Biorreactores Enzimas - Microorg 14 - 15

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Unidad didctica 2

REACTORES CON ENZIMAS Y MICROORGANISMOS

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Biorreactores: Definicin y tipos

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Modos de operacin de biorreactores

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Modos de operacin de biorreactores

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Biorreactores discontinuos frente a continuos

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Transcurre en estado no estacionario

El biorreactor tubular de flujo en pistn

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

El biorreactor ideal presenta:

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Biorreactores: definicin, tipos y diseo

Quien disea biorreactores?

Biorreactores ideales: balances de materia

Biorreactores ideales: Modelos de flujo ideal

Biorreactores ideales: balances de materia

Modelos de flujo ideal

Flujo tipo pistn

Flujo tipo pistn

Biorreactores ideales: balances de materia

Balances de materia en biorreactores ideales (1)

Acumulacin Entrada Salida Generacin

de j, mol/s de j, mol/s de j, mol/s de j, mol/s

Biorreactores ideales: balances de materia

Balances de materia en biorreactores ideales (2)

Biorreactores ideales: balances de materia

Balances de materia en biorreactores ideales (3)

Biorreactores ideales: balances de materia

Balances de materia en biorreactores ideales (4)

= Q Cje Q (Cje dCj ) + rj dV

que es la ecuacin diferencial del balance de materia para un

Biorreactores ideales: balances de materia

Balances de materia en biorreactores ideales (5)

Biorreactores ideales con enzimas

Balances de materia en biorreactores ideales

Biorreactores con microorganismos

Biorreactores ideales con enzimas

1. Biorreactores enzimticos discontinuos de tanque agitado

Fcil control del pH

Se aplica la ecuacin de velocidad (r) de la enzima

Biorreactores ideales con enzimas

Resolucin ecuacin balance de materia RDTA

Se aplica la ecuacin de velocidad (r) de la enzima

Si la enzima sigue una cintica tipo Michaelis-Menten:

Biorreactores ideales con enzimas

kcat [E] t = So S + KM ln (So/S)

0,95 = (137 S) / 137 ; S = 137 137 * 0,95 = 6,85

t = (S0 S + Km ln (S0/S)) / Vm = (137 6,85 + 50 ln (137/6,85)) / 0,2 = 1399,7 min

Biorreactores ideales con enzimas

2. Biorreactores enzimticos continuos de tanque agitado (RCTA)

Biorreactores ideales con enzimas

Resolucin ecuacin balance de materia RCTA en e.e.

Si la enzima sigue una cintica tipo Michaelis-Menten:

Biorreactores ideales con enzimas

Qu tiempo de residencia es necesario para alcanzar una conversin del 95%?

Biorreactores ideales con enzimas