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FARMACIA Y BIQUIMICA

CURSO

: MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS

DOCENTE

: DRA. TERESA GALLARDO

TEMA

:
NUMERACIÓN DE MARCADORES DE INOCUIDAD
MICROBIOLOGICA BACTERIAS COLIFORMES
TOTALES Y COLIFORMES TERMOTOLERANTES
POR EL MÉTODO DEL NMP

ALUMNA

:

CICLO

TURNO

: VIII

: NOCHE

2011

Dil. 10 –1.PRÁCTICA Nº 5 NUMERACIÓN DE MARCADORES DE INOCUIDAD MICROBIOLOGICA BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES TERMOTOLERANTES POR EL MÉTODO DEL NMP  PREPARACIÓN DE LA MUESTRA MUESTRA: Queso MÉTODO: Número más probable (NMP) DILUYENTE: Agua peptonada al 0. 10-3 FACTOR DE DILUCIÓN CON POSIBLE PRESENCIA DE COLIFORMES: - 10-1 - 10-2 (2 tubos) (1 tubo) .1% NUMERACIÓN DE COLIFORMES TOTALES.48 horas DILUCIONES REALIZADAS: Dil. MÉTODO I : (AMERICANO)  DETERMINACIÓN DE LA POSIBLE PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES MÉTODO: Número más probable (NMP) MEDIO DE CULTIVO: Caldo LST TEMPERATURA Y TIEMPO INCUBACIÓN: 35 – 37ºC durante 24 . 10-2. Dil.

DILUCIONES REALIZADAS: Dil. 10 –1. MÉTODO II:(EUROPEO)  DETERMINACIÓN DE LA POSIBLE PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES MÉTODO: Número más probable (NMP) MEDIO DE CULTIVO: Caldo Brila TEMPERATURA Y TIEMPO DE INCUBACIÓN: 35 – 37ºC durante 24 . 10-3 FACTOR DE DILUCIÓN CON POSIBLE PRESENCIA DE COLIFORMES: .48 hora.48 horas NUMERACIÓN DE COLIFORMES TOTALES. Coli TEMPERATURA Y TIEMPO INCUBACIÓN: 44. 10-2.48 horas  COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) MEDIO DE CULTIVO: Caldo E. Dil. Dil. PRUEBA CONFIRMATORIA DE PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES MEDIO DE CULTIVO: Caldo brila y agar EMB TEMPERATURA Y TIEMPO INCUBACIÓN: 35 – 37ºC durante 24 .5ºC durante 24 .

10-1 (2 tubos)  PRUEBA CONFIRMATORIA DE PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES MEDIO DE CULTIVO: agar ENDO TEMPERATURA Y TIEMPO INCUBACIÓN: 35 – 37ºC durante 24 .5ºC durante 24 .48 horas  COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) MEDIO DE CULTIVO: Caldo Brila y caldo triptonado.48 horas . TEMPERATURA Y TIEMPO INCUBACIÓN: 44.

RESULTADOS:  NUMERACIÓN DE COLIFORMES TOTALES. 10-3: No hubo formación de gas. MÉTODO I LECTURAS EN CALDO LST Dil 10 –1: Hubo formación de gas (1 tubo) Dil. 10-2: Hubo formación de gas (2 tubos) Dil. .

Se obtuvo 11 números más probables por gramo de la muestra. .

 PRUEBA CONFIRMATORIA DE PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES En agar EMB: Hubo presencia de colonias típicas de color rosadas con brillo metálico. En caldo E. Coli: Hubo formación de gas. confirma la presencia de coliformes termotolerantes.5 o .  Al fermentar la lactosa a una temperatura de 44. .

Caldo Brila: Hubo producción de gas Caldo Triptonado: Con el reactivo de Kovacs se observo la presencia de un anillo rojo por producción de indol en la parte superior del tubo. NUMERACIÓN DE COLIFORMES TOTALES.  PRUEBA CONFIRMATORIA DE PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES En agar ENDO: Se observo colonias rojas con brillo metálico. Dil. 10-3: No Hubo formación de gas en ningún tubo de la siembra por triplicado. Se confirma la presencia de coliformes termotolerantes . MÉTODO II LECTURAS EN CALDO BRILA Dil 10 –1: triplicado. Hubo formación de gas en 2 tubos de la siembra por Dil 10 –2: No Hubo formación de gas en ningún tubo de la siembra por triplicado.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS E.Coli: INDO RM RM CITRAT Medio: TSA  INDOL: se le agrega Gtas de Kovacs se observa Anillo rojo (Positivo)  RM VP: Se le agrega Gtas de Rvo Rojo de Metilo: Se observa coloración roja .

CUESTIONARIO .  CITRATO: Se observó coloración verde. RM VP: Se le agrega Gtas de Rvo Alfa Naftol + Gtas KOH: Se observó color amarillo anaranjado.

Por la fermentación de la lactosa. minerales y aminoácidos.1. E. mientras que las sales biliares inhiben el crecimiento de gran parte de la flora acompañante. éste último se evidencia al utilizar las campanas Durham. vitaminas. Agar .B. favorece el crecimiento de bacterias lactosa positivas. Este caldo es recomendado por el Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (1975). Agar Fundamento El contenido de lactosa en este medio.Describa los métodos de los medios de cultivo empleados en la práctica.M. C. E. se produce ácido y gas. ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompañante. las sales de fosfato proveen un sistema buffer. la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. aún de los fermentadores lentos. y por Hajna y Perry (1943).. Fundamento de los medios de cultivo Caldo Lauril Sulfato triptosa Fundamento Medio rico en nutrientes. La triptosa es la fuente de nitrógeno. que permite un rápido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico Es un medio selectivo. para el recuento de coliformes en alimentos.

En este medio se obtiene además. está dada por los indicadores eosina y azul de metileno. Este medio permite el crecimiento de Cándida spp. la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. Es una propiedad del grupo coliforme.Fundamento Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. Y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0. éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. . y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. albicans. Crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes. la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes. Presentan un característico brillo metálico. Enterococcus spp. Como colonias rosadas y puntiformes. mientras que Acinetobacter spp. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa. Verde Brillante Bilis 2% Caldo Fundamento En el medio de cultivo. mientras que las que no lo hacen son incoloras. y aquellos que son incapaces de hacerlo. la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada.

2. que en combinación con la fucsina y el sulfito presentes en el medio le confieren a la colonia un brillo metálico. .Sistema ColiTrak da un resultado presuntivo de cuentas de coliformes. Fundamento En el medio de cultivo. 3. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Los equipos son expandibles con 32. Es un medio selectivo debido al lauril sulfato de sodio y al desoxicolato de sodio que inhiben el desarrollo de la flora acompañante. Las bacterias fermentadoras de lactosa producen durante la fermentación aldehídos. y es diferencial debido a la fermentación de la lactosa.Agar Endo.El sistema PASCO es semejante al sistema Vitek. la pluripeptona junto con la peptona. El fosfato dipotásico y el fosfato monopotásico otorgan la capacidad buffer... 120. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable. aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.. 2.Describa los métodos modernos para el recuento de coliformes totales y termotolerantes Sistemas de Identificación Microbiana Existen muchos métodos. algunos de ellos son: 1.Sistema Vitek automático que iidentifica en 2 a 24 h y realiza también confirmación de Patógenos.. la tripteína y el extracto de levadura. 240 ó 480 exámenes y además realiza el antibiograma y CMI. mientras que las colonias de las no fermentadoras son rosadas. reemplazando al NMP y especialmente aplicado a ensayos de aguas. 60.