Professional Documents
Culture Documents
LABORATORIO DE CALIDAD
Mtodo de ensayo Determinacin de azcares Reductores Directos y Totales
Mtodo de volumtrico de Lane-Eynon
Fecha de emisin:
2013-05-28
1.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
OBJETIVO
ALCANCE
Este mtodo aplica en la determinacin de azcares reductores directos y azcares reductores totales
en las materias primas azucaradas, tales como agave crudo y cocido, materiales en proceso de
produccin tales como jugos de agave, mostos, jarabes, azcares , en la bebida alcohlica mezcal en
todos sus tipos y categoras, as como en vinazas del mismo, realizado por el laboratorio de calidad del
COMERCAM, de acuerdo norma NMX-V-006-NORMEX-2013 Bebidas Alcohlicas-Determinacin de
Azcares Reductores Directos y Totales.
3.
TERMINOS Y DEFINICIONES
Azcares reductores: monosacridos que contienen en su molcula un grupo aldehdo, los cuales
pueden ser detectados o estimados cuantitativamente por su oxidacin con CU2+, Ag+ o ferrocianuro,
en un medio alcalino y que pueden ser:
Azcares reductores directos (ARD): son los azcares reductores cuantificables directamente en la
muestra.
Azcares reductores totales (ART): son monosacridos que poseen grupos carbonilos libres, que se
obtienen de la hidrlisis cida y trmica de los polisacridos.
Azcar invertido: Es una mezcla equimolar de glucosa (dextrosa) y fructosa (levulosa) obtenida por la
hidrlisis de la sacarosa.
Factor de Fehling: Es la cantidad en gramos de azcar invertido utilizada para reducir 10 mL de la
mezcla de la solucin de Fehling.
Solucin de Fehling: Mezcla de partes iguales de la solucin A (Sulfato de Cobre) y solucin B
(solucin alcalina de tartrato) preparada para el momento de hacer la determinacin.
Muestra: Consiste de una o ms unidades de producto tomadas de un lote o partida. Estas deben
tomarse estrictamente al azar, sin considerar su calidad. El nmero de unidades de producto en la
muestra corresponde al tamao de la misma.
Muestra representativa: Siempre que sea posible, el nmero de unidades en la muestra se debe
seleccionar en proporcin al tamao de los sublotes o subpartidas o partes que componen el lote o
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
GENERALIDADES
CONTROL DE CALIDAD
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
EQUIPOS E INSTRUMENTOS
6.1 EQUIPO CALIBRADO
Registrar el uso del equipo en la bitcora BIT-LAB-16-02 Control de balanza analtica y en la BIT-LAB16-10 Control de termmetro.
Registrar la verificacin de la calibracin de los equipos en el formato RC-LAB-16-06 Verificacin de la
calibracin de los equipos.
6.2 EQUIPO VARIOS
7.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
7.1 REACTIVOS
7.1.1 MATERIAL DE REFERENCIA
NOTA:
La solucin de Fehling A y solucin de Fehling B pueden ser preparados a partir de sulfato de cobre
pentahidratado (CuSO4.5H2O) y tartrato de sodio y potasio tetrahidratado (KNaC 4O6.4H2O), como se
indica en el punto 9.1 de este procedimiento.
7.2 MATERIALES
8.
Capsula, crisol de porcelana o cualquier otro material para desecar el material de referencia.
Matraces Erlenmeyer de 250 mL
Parrilla elctrica de calentamiento con agitacin magntica
Perlas de vidrio
Goteros color mbar
Cronmetro
Material comn de laboratorio, soporte universal, pinzas, malla de asbesto, vaso de precipitado,
entre otros.
PRECAUCIONES
8.1 MUESTRAS
9.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
Pesar 0,2 g 1,0 g de azul de metileno, transferir y disolver en un matraz volumtrico de 100 mL y
llevar a volumen con agua grado II. Transferir la solucin a un frasco gotero color mbar o utilice la
solucin acuosa de azul de metileno al % adquirida.
9.1.2.
Pesar 1,0 g de fenolftalena y transferir a un matraz volumtrico de 100 mL, agregar 50 mL de alcohol
etlico, una vez disuelto, adicionar agua grado II y homogeneizar. Transferir la solucin a un frasco
gotero color mbar o utilice la solucin de fenolftalena al 1% adquirida.
9.1.3.
Pesar 240 g de NaOH (teniendo cuidado, ya que es una reaccin exotrmica), adicionar 200 mL de
agua grado II y transferir a un matraz volumtrico de 1000 mL, llevar a 293 K (20 C) y aforar con agua
grado II a la misma temperatura.
9.1.4.
Adicionar de 250 a 300 mL de agua grado II en un matraz volumtrico de 1000 mL, agregar con
cuidado, lentamente y resbalando por las paredes del matraz 500 mL del cido clorhdrico
concentrado, mezclar con movimientos rotatorios y dejar que tome la temperatura ambiente, aforar con
agua grado II.
NOTA: Medir la concentracin de la solucin resultante con brixmetro a 24,85 Brix o con densmetro
a 293 K (20 C) a 1,029 g/mL, ajustar si es necesario.
9.1.5.
Pesar 34,639 g de Sulfato de Cobre pentahidratado (CuSO 4.5H2O), disolver en 100 mL de agua grado
II y transferir a un matraz volumtrico de 500 mL y aforar con la misma agua.
9.1.6.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
Pesar 173 g de tartrato de sodio y potasio tetra hidratado (KNaC 4O6.4H2O), disolver en 100 mL de
agua grado II, pesar 50 g de hidrxido de sodio (NaOH) y disolver con agua grado II, transferir estas
soluciones en un matraz volumtrico de 500 mL y aforar con agua grado II. Dejar reposar la solucin
durante 2 das y volver a aforar con la misma agua.
9.1.7.
Pesar 9, 5 g de sacarosa (en caso necesario hacer ajuste por pureza) desecada previamente a 60 C
durante 2 horas, disolver en aproximadamente 100 mL de agua grado II, adicionar 2 mL de HCl con
una concentracin de 36,5 a 38% 5 mL al 50% v/v para realizar la hidrlisis y obtener los
monosacridos, mediante la siguiente ecuacin:
C12H22O11 + H2O
HCl ENZIMAS
Sacarosa
PM=342,3
C6H12O6 + C6H12O6
Glucosa + Fructosa
PM=180,16 PM=180,16
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
9.2.2. Adicionar al matraz que contenga la mezcla de solucin Fehling 20 mL de agua grado II y
aadir algunas perlas de ebullicin para mantener la ebullicin uniforme.
9.2.3. El matraz Erlenmeyer con la mezcla de la solucin de Fehling se coloca sobre la parrilla de
calentamiento y calentar la mezcla hasta ebullicin.
9.2.4. Enjuagar la bureta con la solucin de azcar invertido y llenarla con la misma solucin.
9.2.5. Adicionar 24 mL de la solucin estndar de azcar invertido al 0,2% (m/v) al matraz Erlenmeyer
y mantener la ebullicin moderada por 2 minutos, tener la precaucin de que el cuerpo de la
bureta no est en contacto directo con los vapores de la muestra.
9.2.6. Sin quitar de la fuente de calentamiento, adicionar 1 mL de solucin de azul de metileno al 0, 2
% m/v de 3 a 4 gotas de solucin al 1 % m/v; completar la titulacin dentro de un tiempo total
de ebullicin de 3 minutos con adiciones pequeas (de 2 a 3 gotas) de la solucin de azcar
hasta decolorar el indicador (mantener la salida del vapor continuamente lo cual previene la
reoxidacin del cobre o el indicador).
9.2.7. Luego de completar la reduccin del cobre, el azul de metileno es reducido a un compuesto
incoloro y la solucin toma el color rojo ladrillo de CU 2O que tena antes de la adicin del
indicador.
9.2.8. El tiempo total para hacer la titulacin no debe exceder de 3 minutos, de los cuales 2 minutos
para agregar casi la totalidad de la solucin de azcar invertido y 1 minuto ms para agregar el
indicador y concluir dicha titulacin.
9.2.9. Hacer dos determinaciones y los volmenes de solucin de azcar invertido gastado no debe
diferir en ms de 0,1 mL.
9.2.10. El volumen gastado en la estandarizacin debe ser de 25.6 mL, obtenido por duplicado, de ser
menor adicionar sulfato de cobre a la solucin de Fehling A y valorar nuevamente hasta obtener
un gasto de 25.6 mL. Si gasta ms 25.6 mL, debe diluirse la solucin de Fehling A con agua e
iniciar el proceso de estandarizacin de nuevo.
9.2.11. Con la solucin estandarizada de la forma anteriormente descrita, se puede utilizar las
siguientes tablas:
9.2.12. Usar la tabla No. 2 para conocer la concentracin de los diferentes tipos de azcares en mg de
azcar / 100 mL cuando se utilizan 10 mL de la mezcla de la solucin de Fehling.
NOTAS:
a) Si no se desea estandarizar la mezcla de solucin de Fehling con la solucin de azcar
invertido se debe calcular el factor de Fehling para cada tipo de azcar a cuantificar.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
b) Se debe confirmar la estandarizacin de la mezcla de Fehling para asegurar que el valor sea
correcto.
9.3.
PREPARACIN DE MUESTRAS
BAGAZO DE AGAVE
JUGO DE AGAVE
Determinar los grados Brix y medir la cantidad de muestra recomendada en la tabla No. 1 y transferirla
a un matraz Erlenmeyer o bien a un matraz volumtrico de la capacidad adecuada.
9.3.2.2.
MOSTO FERMENTADO
Determinar los grados Brix y medir la cantidad de muestra recomendada en la tabla No. 1 y transferirla
a un matraz Erlenmeyer o bien a un matraz volumtrico de la capacidad adecuada.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
9.4.1. Para la determinacin de ART, adicionar 5 mL de cido Clorhdrico al 50% v/v, al matraz que
contiene la muestra.
9.4.2. Colocar el matraz en el bao Mara a temperatura controlada de 341 a 343 K (68-70 C)
introduciendo un termmetro al matraz y esperar a que la muestra llegue a esta temperatura y
mantenindolo as por 5 15 minutos dependiendo del tipo de muestra (consultar la tabla No.
1).
9.4.3. Enfriar a temperatura ambiente la solucin con la muestra ya invertida.
9.4.4. Pasar cuantitativamente la solucin invertida a un matraz volumtrico de la capacidad como se
menciona en la tabla No. 1, agregar 2 3 gotas del indicador de fenolftalena y neutralizar al
vire de color (pH 8,2) con Hidrxido de Sodio 1N, y llevar a la marca de aforo con agua grado
II.
9.4.5. Realizar la titulacin preliminar de aproximacin y posteriormente la titulacin definitiva por
duplicado y registrar el volumen consumido, de acuerdo al punto 9.6 y 9.7. Utilizar el volumen
consumido para los clculos del contenido de ART como en el punto 10.
9.5.
9.5.1. Para la determinacin de ARD de debe omitir la hidrlisis de la muestra, (adicin de cido
clorhdrico y tratamiento trmico en bao Mara). Realizar la titulacin preliminar de
aproximacin y posteriormente la titulacin definitiva por duplicado y registrar el volumen
consumido, de acuerdo al punto 9.6 y 9.7. Utilizar el volumen consumido para los clculos del
contenido de ARD como en el punto 10.
9.6.
NOTA:
Es necesaria esta determinacin para comprobar que la solucin que se prepar con la muestra
problema, nos d un gasto que estar comprendido entre 15 y 50 mL; si la dilucin no gasta esta
cantidad, es necesario preparar otra dilucin de la muestra; adems esta titulacin es para determinar
aproximadamente el gasto para tenerlo en cuenta en la siguiente titulacin definitiva.
9.6.1. Medir volumtricamente 5 mL de solucin de Fehling A (de Sulfato de Cobre) y transferirlos en
un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Hacer lo mismo con la solucin Fehling B (de tartrato de
sodio y potasio) colocndola en el mismo matraz formando as 10 mL de la mezcla de solucin
Fehling.
9.6.2. Adicionar al matraz que contenga la mezcla de solucin Fehling 20 mL de agua grado II y
aadir algunas perlas de ebullicin para mantener la ebullicin uniforme.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
TITULACIN DEFINITIVA
CALCULOS Y RESULTADOS
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
10.1.
CLCULOS PARA ART Y ARD UTILIZANDO LA SOLUCION ESTANDARIZADA Y LA
TABLA No. 2. mg/100mL de azcares reductores para 10 mL de solucin de Fehling
(mtodo volumtrico de Lane Eynon)
Con los mililitros gastados en la titulacin definitiva de las muestras, encontrar el valor de mg/100 mL
en la tabla No.2 (Anexo 3), y sustituir este valor en las siguientes ecuaciones, con el uso de esta tabla
se puede obtener de manera directa, el valor de mg de azcar/100 mL utilizando la columna
correspondiente (azcar invertido, glucosa fructosa) y calcular en contenido de ART/ARD:
ART = mg azcar/100 mL (valor de tabla)x FD
100
ARD = mg azcar/100 mL (valor de tabla)x FD
100
FD = volumen total de la dilucin
volumen o masa de la muestra
En donde:
ART = Azcares reductores totales en la muestra expresados en mg/g mg/mL o bien g/Kg g/L
haciendo el ajuste de unidades correspondientes.
ARD = Azcares reductores directos en la muestra expresados en mg/g mg/mL o bien g/Kg g/L
haciendo el ajuste de unidades correspondientes.
FD = Factor de dilucin
100 = Ajuste de unidades
10.2.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
REGISTROS
11.1. Los resultados obtenidos de esta prueba sern registrados en la bitcora BIT-LAB-15-01 Datos
de anlisis, en el folio que corresponda al elemento ensayado.
11.2.
Para la trazabilidad del resultado obtenido ver RC-LAB-17-02 Carta de Trazabilidad del
equipo/instrumento y el registro RC-LAB-17-01 Carta de trazabilidad del mtodo.
11.3.
12.
REFERENCIAS
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
ANEXOS
BIBILOGRAFIA
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
GRADO I
GRADO II
GRADO III
NO APLICA
NO APLICA
NO APLICA
0,01
0,1
0,5
NO APLICA
0,08
0,4
NO
ESPECIFICADO
NO
ESPECIFICADO
0,001
0,01
NO
ESPECIFICADO
NO
ESPECIFICADO
NO APLICA
0,01
0,02
NO
ESPECIFICADO
Anexo 2.
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
TIEMPO DE
HIDRLISIS
Azcar
2 g/ 1000 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/Kg
Piloncillo
2,5 g/1000 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/Kg
Meladura
15 minutos
Azcar Invertido
g/Kg
15 minutos
Azcar Invertido
g/Kg
Brix 0 a 1,2
100 mL/200 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
Brix 1,2 a 1, 9
50 mL/250 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
25 mL/250 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
50 mL/1000 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
25 mL/1000 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
20 mL/1000 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
10 mL/1000 mL
5 minutos
Fructuosa
g/l
Brix 0 a 1,2
100 mL/200 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
Brix 1,2 a 1, 9
50 mL/250 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
25 mL/250 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
50 mL/1000 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
25 mL/1000 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
20 mL/1000 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
10 mL/1000 mL
100 g/3000 mL
50
mL/200 mL
500 g/4000 mL
100 mL/200 mL
15 minutos
Azcar Invertido
g/l
5 minutos
Fructuosa
5 minutos
Fructuosa
Fructosa Pura
3,0/1000 mL
5 minutos
Fructuosa
g/Kg
3,0/1000 mL
5 minutos
Azcar Invertido
g/Kg
3,0/1000 mL
Dependiendo de la
cantidad de extracto
seco realizar la
dilucin
100mL/200 mL
25 mL/500 mL
25 mL/1000mL
5 minutos
Glucosa
g/Kg
15 minutos
Azcar Invertido
g/Kg
MUESTRA
Melaza
LECTURA DE COLUMNA
DE TABLAS
EXPRESIN DE
RESULTADOS
Jugos de Agave:
Jugos Mixtos:
Agave Crudo
Bagazo de Agave
Dextrosa
Bebidas alcohlicas
g/Kg
g/Kg
Anexo 3
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05
Fecha de revisin:
2013-05-28
Revisin No. 01
Clave: MOE-AR-05