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MATERIAL

:
- Microscopio
- Algodón
- Alcohol
- Aceite de Inmersión
- Vaselina
- Portaobjetos (plano)
- Cubreobjetos
- Vaso de precipitados
- Agitador
- Asa bacteriológica
- Palillo de madera
- Mechero de Bunsen
- Agua destilada
- Glucosa
- Levadura
PROCEDIMIENTO:
“Técnica de la Gota Pendiente”
1. Se prepara la muestra en el vaso de precipitados:
levadura al 5%, e igual manera, la glucosa al 5%, en
donde la levadura inactivada, pasa a ser activada con la
glucosa, y funcionará como nutriente.
Nota: La muestra tiene un color translucido.
2. Aforar a 100 ml. con agua destilada, y se agita.
3. Se colocan unos puntos de vaselina en los bordes del
portaobjetos, en forma de cruz, de derecha a izquierda y
arriba hacia abajo, a un mismo tamaño del cubreobjetos.
4. Se enciende el mechero de Bunsen.
5. Después de terminada la reacción de fermentación, se
toma un asa bacteriológica que previamente debe ser
esterilizada con fuego del mechero, se espera que se
enfríe retirándolo a 1 cm. y posteriormente, se introduce
al fondo de la muestra, hasta que toque la parte líquida.

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6. La gota de muestra se lleva al portaobjetos, y con
cuidado, se centra el cubre objetos por encima, que será
sellado con las los puntos de vaselina ya agregados.
7. Se vuelve a esterilizar el asa bacteriológica.
8. Una vez que haya quedado fijo, se voltea para que la
gota quede pendiente, y listo para usarse se procede a
su observación.
9. Con el objetivo de 10x se alcanza a ver un poco los
pequeños círculos.
10.
Posteriormente, se agrega una gota de aceite de
inmersión, y se cambia a la lente de inmersión.
Nota: Se debe hacer correctamente, para evitar tronar el
cubreobjetos. Si está bien enfocado, no hay necesidad de
utilizar el anillo macrométrico, que se utiliza para
enfocar, solamente el micrométrico, para dar nitidez.
Como la muestra es translucida, se va a batallar un poco,
pero se tiene que centrar y concentrarse muy bien en lo
que se está viendo, y no confundir las levaduras con
burbujas de aire.

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Para ver la estructura interna de las levaduras:
“Preparación de Frotis (fija y teñida)”
1. Se toma un asa bacteriológica y se esteriliza al rojo vivo,
se deja enfriar retirándolo a 1 cm. de la flama y
posteriormente se introduce en la espuma, hasta el
fondo de la muestra en la parte líquida.
2. La gota atrapada se lleva al portaobjetos, se centra y se
extiende con la misma asa bacteriológica.
3. Se vuelve a esterilizar el asa y se pone en su lugar.
4. El portaobjetos se toma de un extremo y se pasa por la
flama del mechero, para que con la acción del calor se
fije al vidrio; se va a secar la parte líquida y se va a
quedar fija.
5. Posteriormente, en las varillas de vidrio que se
encuentran en los vertederos, se coloca el portaobjetos y
se agregan unas gotas de colorante (violeta), solamente
en el lugar donde se vea la muestra.
6. Se deja intacto por 2 minutos aproximadamente.
Nota: Con este tiempo es suficiente para que la anilina
(colorante) atraviese la estructura de las levaduras y
queden teñidas.
7. Una vez que hayan pasado los 2 minutos, se abre la llave
del agua, se toma de un extremo el portaobjetos y se va
a enjuagar, por los dos lados, y entre mayor colorante se
tumbe, será mejor.
8. Se pone a secar a temperatura ambiental, y una vez
seco, se puede proceder a observar en el microscopio, se
enfoca con el objetivo de 10x, después se agrega una
gota de aceite de inmersión, y se pasa al objetivo de
100x.

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Nota: Con la tinción, se logra ver muy a fondo la
estructura interna de las levaduras más claramente, que
están en etapa de reproducción.

RESULTADOS:
Morfología:
Son muy
parecidas
a
bacterias
macroscópicamente pero son más cremosas y los colores que
presentan son blancos, beige o un poco más oscuros. En esta
ocasión presentan una forma esférica y son de color blanco.
Movilidad: Lenta.
Estructura interna:
Pared celular: Las levaduras presentan partes de una célula
completa: pared celular y protoplasma; éste último contienen
la membrana fundamental (plasmalema), el citoplasma y el
núcleo. La pared celular o cápsula en muy delgada o gruesa
segú la edad de la célula y especie de levadura; está formada
principalmente de polisacáridos constituidos por mananas, βglucanas y algo de quitina.
Membrana fundamental: Tiene estructura, constitución y
funciones semejantes a las de otras células y en los
fenómenos de plasmosis se contrae junto con el
citoplasma. Juega un papel importante en la regulación del
flujo de todos los materiales tanto hacia el interior como hacia
el exterior de la célula.
El citoplasma: En él se encuentran diversas estructuras
metaplasmáticas
(mitocondrias,
vacuolas
y
retículo
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endoplasmático), así como granulaciones para plasmáticas
(glucógeno y glóbulos metacromáticos).
El núcleo: Está rodeado por una doble membrana. En su
interior se alberga un área densa, en forma de media luna, a
la que se denomina nucléolo. Los cromosomas no son
distinguibles, pero hay pruebas genéticas que indican la
existencia de al menos 17 pares y varios fragmentos en las
células diploides. El núcleo siempre está muy cercano a la
zona donde está la gema (célula con otra al lado o encima).
La estructura del núcleo de las levaduras puede variar según
el grupo taxonómico al que pertenecen
Reproducción: Gemación.

Proceso asexual, en el cual la célula progenitora reparte sus
constituyentes celulares con una célula hija (sin división del
núcleo); las dos células son iguales en su madurez.

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“Técnica de la Gota Pendiente”
fija y teñida”

“Preparación

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