UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

INGENIERIA AMBIENTAL
GUIA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

RECOMENDACIONES PARA EL TRABAJO DE LABORATORIO

Antes de la prctica de laboratorio es obligatorio leer la gua y realizar el flujograma del
procedimiento a realizar. Al iniciar la prctica se realizar un quiz sobre el laboratorio a
desarrollar. Durante la prctica se deben registrar las observaciones y datos obtenidos en
la prctica.
MATERIAL DE LABORATORIO
Cada grupo debe llevar al laboratorio: jabn para lavar el material, papel absorbente. La
falta de los implementos anteriormente mencionados afectar la nota del informe de
laboratorio.
Cada equipo de trabajo es responsable del material que se le asigne, a dems del equipo
especial (por ejemplo centrifugas, balanzas, muflas, estufas, espectrofotmetros, etc.) en
caso de prdida o dao, deber responder de ello, y rellenar la correspondiente ficha.
Antes de empezar con el procedimiento experimental o utilizar algn aparato revisar todo
el material, y su manual de funcionamiento en su caso.
El material al igual que el lugar de trabajo debe quedar limpio, si esto no se cumple se
penalizara con la nota del informe.
NORMAS DE SEGURIDAD
El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar donde no se deben permitir
descuidos o bromas. Para ello se tendrn siempre presente los posibles peligros
asociados al trabajo con materiales peligrosos. Nunca hay excusa para los accidentes en
un laboratorio bien equipado en el cual trabaja personal bien informado. A continuacin se
exponen una serie de normas que deben conocerse y seguirse en el laboratorio:
-

Durante la estancia en el laboratorio el alumno debe ir provisto de bata con

mangas largas, gafas de seguridad y guantes de ltex. La bata deber emplearse
durante toda la estancia en el laboratorio.
Las gafas de seguridad siempre que se manejen productos peligrosos y durante la
calefaccin de disoluciones. Los guantes deben utilizarse obligatoriamente en la
manipulacin de productos txicos o casticos.
Retrese todos los accesorios personales que puedan comprender riesgos de
accidentes mecnicos, qumicos o por fuego, como son anillos, pulseras, collares y

sombreros. La responsabilidad por las consecuencias de no cumplir esta norma

dentro del laboratorio es enteramente del estudiante.
Nunca deben llevarse lentes de contacto sin gafas protectoras, pues estos
retienen las sustancias corrosivas en el ojo impidiendo su lavado y extendiendo el
dao.
Est prohibido fumar, beber o comer en el laboratorio.
El pelo largo se llevara siempre recogido.
Debe conocerse la toxicidad y riesgos de todos los compuestos con los que se
trabaje.
Los frascos de los reactivos deben cerrarse inmediatamente despues de su uso,
durante su utilizacin los tapones deben depositarse siempre boca arriba sobre la
mesa.
No se debe pipetear ninguna sustancia con la boca.
Mantenga solo el material requerido para la sesin, sobre la mesa de trabajo. Los
frascos de reactivos deben permanecer en las baldas. Los dems objetos
personales o innecesarios deben guardarse o colocarse lejos del rea de trabajo.
Las vitrinas para gases tienen que utilizarse en todo trabajo con compuestos
qumicos que pueden producir gases peligrosos o dar lugar a salpicaduras.
No deben manipularse jams productos o disolventes inflamables en las
proximidades de llamas.
Si algn reactivo se derrama, debe retirarse inmediatamente dejando el lugar
perfectamente limpio.
Las salpicaduras de sustancias bsicas deben neutralizarse con un cido dbil
(por ej. Acido ctrico) y las de sustancias acidas con una base dbil (bicarbonato
sdico).
No deben verterse residuos slidos en los fregaderos, deben emplearse los
recipientes para residuos que se encuentran en el laboratorio.
Los cidos y bases concentrados se encuentran en la vitrina del laboratorio. En
ningn caso deben sacarse de la vitrina, cuando se requiera un volumen de estos
reactivos se llevara el recipiente adecuado a la vitrina para tomar all mismo la
cantidad necesaria.
Cuando se tengan dudas sobre las precauciones de manipulacin de algn
producto debe consultarse al profesor antes de proceder a su uso.
Los recipientes utilizados para almacenar disoluciones deben limpiarse
previamente, eliminando cualquier etiqueta anterior y rotulando de nuevo
inmediatamente.
No calentar nunca enrgicamente una disolucin. La ebullicin debe ser siempre
suave.
El mechero debe cerrarse, una vez utilizado, tanto de la llave del propio mechero
como la toma del gas de la mesa.
Las disoluciones y recipientes calientes deben manipularse con cuidado.
Las heridas y quemaduras deben ser tratadas inmediatamente.
En el caso de salpicaduras de cidos sobre la piel lavar inmediatamente con agua
abundante, teniendo en cuenta que en el caso de cidos concentrados la reaccin

con el agua puede producir calor. Es conveniente retirar la ropa para evitar que el
corrosivo quede atrapado entre la ropa y la piel.
Debe conocerse la ubicacin de los elementos de seguridad (lavaojos, ducha,
extintor, salidas de emergencia) en el laboratorio, as como todas las indicaciones
sobre seguridad expuestas en el laboratorio.
No debe llevarse a la boca ningn material de laboratorio; si algn reactivo es
accidentalmente ingerido, avise de inmediato al profesor o al tcnico del
Laboratorio.

NORMAS DE TRABAJO
-

Las disoluciones de reactivos, que no sean patrones ni muestras, se almacenan

en botellas de vidrio o plstico que deben limpiarse y rotularse perfectamente.
Las balanzas deben dejarse a cero y perfectamente limpias despus de finalizar la
pesada.
Cerca de las balanzas solo deben permanecer los estudiantes que se encuentren
pesando (uno por balanza).
Las sustancias patrn tipo primario anhidras se encuentran en el desecador y solo
deben extraerse el tiempo necesario para su pesada. El desecador debe
permanecer siempre cerrado.
El material asignado a cada practica debe permanecer en el lugar asignado a
dicha prctica.
No se debe utilizar material destinado a prcticas distintas a la que se est
realizando.
Bajo ningn concepto se sacaran reactivos o material de prcticas fuera del
laboratorio.

CALENTAR
-

Para recoger recipientes calientes como capsulas, crisoles, vasos, etc., utilizar las
correspondientes pinzas.
Tambin nos podremos ayudar de un pao del laboratorio.
Cuando se calienten lquidos, evitar que la posible proyeccin pueda alcanzar a
cualquier persona o reactivo incompatible. Al calentar una solucin en un tubo de
ensayo, debe hacerse bajo el nivel del lquido y constantemente agitando. No debe
apuntarse con el tubo al compaero o a s mismo, pues puede proyectarse.
Al calentar vidrio, dejar enfriar antes de cogerlo. Colocarlo sobre un material
trmicamente aislante, el vidrio caliente tiene el mismo aspecto que el vidrio fro.
No manipular productos inflamables (benceno, tolueno, ter, etc.) en presencia de
mecheros encendidos. No destilar ter con llama o en presencia de mecheros
encendidos.
Procure mantener la llama del mechero de color azul, ya que la llama amarilla
produce tizne.

PUESTO DE TRABAJO
-

Conservar siempre limpios los aparatos y el puesto de trabajo. Evitar derrames de

sustancias, pero si cayera alguna, recogerla inmediatamente.
Todas las practicas deberan realizarse con limpieza y, al terminar, toda el area de
trabajo deber quedar ordenada y limpia.

MANEJO DE SUSTANCIAS
- No tocar los productos qumicos con las manos. Usar papel, esptulas, etc. Usar
guantes para el manejo de reactivos corrosivos y/o altamente txicos. Una vez
finalizada la prctica de laboratorio lavarse las manos.
- Al usar cualquier tipo de reactivos, asegrese que es el deseado y lea su etiqueta.
Si es transferido de recipiente etiqutelo de nuevo.
- Todos los reactivos debern manejarse con el equipo perfectamente limpio. Al
pipetear lquidos transfiralos a otro recipiente para su uso. Los reactivos no
usados no se devuelven a los frascos.
- Nunca pipetee directamente del frasco.
- No manejar reactivos sin haber ledo sus frases R y S, registrando sus
propiedades su preinforme.
- Dilucin de cidos: aadir lentamente el acido al agua contenida en un vaso,
agitando constantemente y enfriando el vaso receptor. Nunca aadir agua al
cido.
- Al agitar moderadamente un tubo de ensayo golpee con la punta del dedo la base
del tubo. Cuando requiera una agitacin vigorosa por inversin del recipiente,
tpelo con un tapn de vidrio esmerilado o papel Parafil. Nunca lo haga con la
mano.
RESIDUOS
-

En el laboratorio se encuentran disponibles contenedores para la disposicin de

residuos lquidos (acuosos, orgnicos, con metales, etc.) no se debe arrojar nada
por la caera ni al piso del laboratorio. Si ocurre algn accidente avise
inmediatamente para aplicar el procedimiento adecuado.
Todos los desperdicios slidos y papeles debern colocarse en los bidones de
basura, el material de vidrio roto deber descartarse en el recipiente especial para
ese efecto.

LECTURA DE VOLUMEN
-

En aquellos recipientes de cuello estrecho (pipeta, bureta, matraz aforado) se

forma un menisco que es la superficie cncava o convexa que separa a la fase
liquida de la fase gas.

Las fuerzas de adsorcin entre la superficie del vidrio y el lquido provocan la

curvatura del menisco. La lectura del volumen ha de de realizarse de tal modo que
los ojos estn en un plano tangente al menisco. Ver Figura 1.

PRCTICA DE LABORATORIO: PH Y SOLUCIONES BUFFERS

Objetivos
1. Identificar el pH de soluciones de inters.
2. Observar el efecto amortiguador de las soluciones buffer.
Materiales
2 vasos de precipitado de 50 mL
1 probeta de 50 mL
2 Pipetas aforadas de 1 mL
Papel indicador
Papel tornasol
pH-metro
Reactivos
Solucion Buffer*
Acido clorhidrico 0.1M
NaOH 0.1M
* Buffer: Mezclar 250mL acido acetico 0.1M y 250 mL de acetato de sodio 0.1M (recien
preparado).
Cada grupo debe llevar al laboratorio leche de magnesio, vinagre, gaseosa
Procedimiento
Experimento I
1. Envasar aproximadamente 10 mL de leche de magnesio en un vaso de precipitado
correctamente lavado.
2. Medir el pH con el papel tornasol y papel indicador universal.
Repita el procedimiento con vinagre, gaseosa y agua.
Experimento II
1. Medir el pH de la solucin Buffer.
2. Colocar en la probeta 20 mL del buffer y completar hasta 50 mL con agua destilada.
Pasar al vaso de precipitado y medir el pH.
3. Colocar en la probeta 25 mL de la solucin preparada en el numeral 2 y agregar con la
pipeta graduada 1.0 mL de HCl 0.1M. Pasar al vaso de precipitado y medir el pH.
4. Colocar en la probeta 25 mL de agua destilada y agregar con la pipeta graduada 1.0
mL de HCl 0.1M. Pasar al vaso de precipitado y medir el pH.
5. Colocar en la probeta 25 mL de la solucin preparada en el numeral 2 y agregar con la
pipeta graduada 1.0 mL de NaOH 0.1M. Pasar al vaso de precipitado y medir el pH.
6. Colocar en la probeta 25 mL de agua destilada y agregar con la pipeta graduada 1.0
mL de NaOH 0.1M. Pasar al vaso de precipitado y medir el pH.
Registre sus observaciones

Experimento I: Construir una tabla donde se muestren los valores de referencia de pH

para estas muestras y los valores experimentales. Analizar
Experimento II: Determinar el pH terico de cada una de las soluciones preparadas y
compararlas con los resultados experimentales. Calcular el error.

PRACTICA DE LABORATORIO: PRUEBAS DE IDENTIFICACION DE

CARBOHIDRATOS
Objetivo
1. Identificar una muestra problema a partir de reacciones qumicas.
2. Identificar los diferentes tipos de carbohidratos
Fundamento
Los carbohidratos son polihidroxialdehidos o polihidroxicetonas, conocidos como aldosas
y cetosas respectivamente, estos grupos funcionales le confieren la base para la mayora
de las reacciones usadas para su identificacin y cuantificacin. Asimismo los
carbohidratos se pueden clasificar por el nmero de carbonos que posee la estructura.
Cuando un carbohidrato es formado por una molcula se conoce como monosacridos;
por dos, disacrido y por ms de dos, polisacrido. Los disacridos son dos
monosacridos unidos gracias a un enlace glucosdico.
Si este enlace se efecta entre dos carbonos anomricos, el disacrido no tendr el
potencial aldehdo o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que
involucren la participacin de estos grupos, recibiendo el nombre de azcar no reductor.
Materiales
6 tubos de ensayo
Pinzas para tubo de ensayo
1 Gradilla
1 Mechero
1 Tripode
1 Malla de asbesto
1 Pipeta de 5 mL
1 Pipeta de 1 mL
1 Vaso de precipitado de 250 mL
Reactivos
Muestra problema
Blancos: agua, glucosa, fructosa, ribosa, sacarosa*
Acido sulfrico concentrado
Acido clorhdrico concentrado
Solucion de NaOH
Reactivo de Molish
Reactivo de Barfoed
Reactivo de Bial
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Benedict
* Debido a la sensibilidad de las pruebas, la concentracin de las muestras de
carbohidratos debe oscilar entre 1 - 10 g/L.

Preparacin de reactivos
Reactivo de Molisch: a-naftol al 10% en etanol.
Reactivo de Barfoed: disolver 13.3 g de acetato de cobre en aproximadamente 200 mL de
agua destilada y agregar 1.8 mL de acido actico glacial.
Reactivo de Bial: Anadir 300 ml de HCl concentrado en 250 ml de H2O destilada, aadir
1,5 g de orcinol y 8 gotas de cloruro ferrico al 1%.
Reactivo de Seliwanoff: tomar 3 mL de resorcinol al 0.5 % en agua, aadir 12 mL HCl
concentrado, aadir agua c.s.p. 35mL.
Reactivo de Benedict: disolver 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio en
800 mL de agua caliente, filtrar a travs de papel de filtro en una probeta de 1000 mL,
completar hasta 850 mL.
Mientras tanto, disolver 17.3 g de sulfato de cobre en 100 mL de agua, completar hasta
150 mL.
Verter la primera solucin en un vaso de precipitado de 2L y aadir lentamente la solucin
de sulfato de cobre agitando continuamente.
Prueba de Molisch
Anadir 1 mL de la solucin de carbohidrato a un tubo de ensayo rotulado, posteriormente
agregar 2 gotas del reactivo de Molisch, mezclar. Cuidadosamente agregar
aproximadamente 0.5 mL de H2SO4 concentrado por las paredes del tubo, de tal forma
que se formen dos capas. Un color rojo violeta en la interfase entre el cido y la solucin
acuosa indica una prueba positiva para carbohidratos.
Prueba de Barfoed
A 1 mL de reactivo de Barfoed agregar 0.5 mL de solucin de carbohidrato en un tubo de
ensayo debidamente rotulado y mezclar. Poner el tubo en bao de agua hirviendo. La
aparicin de un precipitado rojo antes de los 6 min indica la presencia de un
monosacridos. La aparicin de un escaso precipitado rojo despus de 9 min indica la
presencia de disacrido o polisacrido.
Prueba de Bial
En un tubo de ensayo agregar 2.5 mL de reactivo de Bial y luego agregar
aproximadamente 1 mL de la muestra. Llevar a bao de mara hirviente durante 3 min. La
aparicin de un color verde botella, brillante y totalmente transparente, indica la presencia
de una pentosa. Algunos azucares dan con el Bial una coloracin verde, pero esta es
opaca.
Prueba de Seliwanoff
Anadir 1 mL del reactivo de Seliwanoff a 0.5 mL de la solucin de carbohidrato en un tubo
de ensayo debidamente rotulado. Mezclar y colocar el tubo en un bao de agua hirviendo
por 4 minutos. Un color rojo intenso es prueba positiva para cetohexosas. El color es ms

fuerte si se contina calentando, pero en este caso las aldohexosas tambin darn color
rojo.
Prueba de Benedict
A 2 mL del reactivo de Benedict aadir 8 gotas de la solucin de la muestra de
carbohidrato en un tubo de ensayo debidamente rotulado. Mezclar y calentar la solucion
en un bano de agua hirviente durante 5 minutos. Un precipitado verde; amarillo o rojo,
indica resultado positivo para azucares reductores. Los diferentes colores que pueden
aparecer se deben al tamao de las partculas formadas: Las partculas grandes forman
precipitados rojo y las partculas pequeas un precipitado verde. Examinar el color y la
cantidad de precipitado obtenido. Una pequea cantidad de precipitado no es prueba
positiva.
Prueba de Sacarosa
A 5 mL de la muestra de carbohidrato agregar 5 gotas de HCl concentrado, calentar
durante 5 minutos en un bao de agua hirviendo, enfriar y agregar NaOH hasta que la
solucin sea neutra o dbilmente alcalina. Con la solucin hidrolizada realizar la prueba
de Seliwanoff.
Observaciones
No olvide plantear el diagrama de flujo para cada prueba.

PRACTICA DE LABORATORIO: PRUEBAS DE IDENTIFICACION LIPIDOS

Objetivo
Reconocer algunas propiedades fsico-qumicas representativas de los lpidos.
Fundamento
Los lpidos son aquellos compuestos que son solubles en compuestos orgnicos e
insolubles en agua.
Saponificacin
Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose
en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. Estos se combinan con
los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las
sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrolisis de los
triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar
a la formacin de cidos grasos y glicerina.
Lieberman-Buchard
El anhdrido actico reacciona con el colesterol en solucin clorofrmica para producir un
color caracterstico azul-verdoso. La naturaleza exacta del cromoforo es desconocida pero
la reaccin probablemente incluye la esterificacin del grupo hidroxilo en la posicin 3
junto con otros arreglos en la molcula.
Materiales
Tubos de ensayo
Gradilla
Varillas de vidrio
Mechero
Vaso de precipitado
Pipetas
Papel de filtro
Reactivos
ter etlico
Cloroformo
Alcohol etlico
Solucin de NaOH al 20%
Cloroformo
Anhdrido actico
H2SO4 concentrado
Acido graso (cido oleico)
Colesterol
Cada grupo debe llevar al laboratorio aceite de oliva y mantequilla.

PROCEDIMIENTO
Experimento I. Solubilidad
Etiquetar cinco tubos de ensayo con el nombre del disolvente: agua, ter, cloroformo,
alcohol frio y alcohol caliente. Colocar un pedazo de grasa en cada tubo. Verter 1 mL del
solvente en el tubo correspondiente (el alcohol se calienta previamente en el bao Mara,
tenga en cuenta el punto de ebullicin del mismo). Mezclar bien y observar si hay algn
grado de dilucin. Colocar en un papel de filtro una gota del lquido contenido en cada
tubo. Esperar a que se seque. Anotar los resultados (clasificar como insoluble, poco
soluble, medianamente y muy soluble).
Repetir el experimento reemplazando la grasa por 1 mL de aceite.
Experimento II. Saponificacin
Tomar do tubos de ensayo limpios, en el primero colocar 2 mL de cido oleico; en el
segundo colocar una muestra de grasa hasta una altura de 0.5 cm aproximadamente.
Agregar 2 mL de NaOH al 20%. Agitar enrgicamente y colocar los tubos al bao Mara
durante 30 minutos. Despus de dejar en reposo, se pueden observar 3 fases: una inferior
clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra
intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipidia de aceite/grasa
inalterado.
Experimento III. Reaccin de Lieberman-Buchard
Agregar 1.5 mL de disolucin de colesterol en cloroformo un tubo de ensayo, luego
agregar 5 gotas de anhdrido actico y dos gotas de H2SO4 concentrado (este ltimo por
las paredes del tubo), mezclar suavemente. Observar y anotar los cambios de coloracin
que se producen.

PRACTICA DE LABORATORIO: PROPIEDADES FSICO QUMICAS DE LOS

AMINOCIDOS

Objetivo
Reconocer la presencia de aminocidos identificando sus caractersticas qumicas.
Fundamento Terico
Los aminocidos son compuestos qumicos que cumplen varias funciones dentro de la
clula, entre ellas:
1. Constituyen las unidades monomricas de las protenas.
2. Representan la nica fuente de nitrgeno metablicamente utilizable.
3. Aportan entre un 10% y un 20% de la energa que utiliza diariamente la clula.

Desde el punto de vista qumico pueden definirse como molculas orgnicas que poseen
al menos un grupo amino y uno carboxilo. Los aminocidos protenicos dictados por el
cdigo gentico son veinte y se caracterizan por tener enlazados sus grupos amino y
carboxilo a un mismo tomo de carbono (alfa).
Este grupo de molculas cuenta con una parte constante representada por el carbono alfa
(C), el grupo carboxilo (COOH) y el grupo amino (NH2), por consiguiente todos los
aminocidos tienen algunas propiedades fsico-qumicas comunes, aunque debido a que
cada uno posee una cadena lateral o grupo R diferente, los 20 aminocidos muestran
caractersticas especiales y nicas que permiten su clasificacin.
Reacciones qumicas de los aminocidos
- Reaccin de la Ninhidrina: Esta prueba tiene como finalidad detectar grupos amino
libres. Los aminocidos reaccionan con la ninhidrina en un pH entre 4 y 8, cuando son
expuestos a un exceso de la misma y sometidos a calentamiento (100C); si stos tienen
un grupo amino libre, reaccionan y forman dixido de carbono, amonaco y un aldehdo
con un tomo de carbono menos que el aminocido precursor. La ninhidrina reacciona
con el amoniaco liberado, formando un complejo azul o prpura (llamado prpura de
Ruhemann).
La prueba de ninhidrina en la prolina, genera coloracin amarilla debido a que este
aminocido presenta un grupo imino en vez de un amino. Los polipptidos, las protenas
y otros compuestos aminados pueden tambin reaccionar con la Ninhidrina dando
coloracin azul pero sin liberar CO2.
- Reaccin de Admakiewic: Esta prueba es especfica para grupos indol, los cuales
tienen la caracterstica de reaccionar con aldehdos mediante condensacin en presencia

de un agente deshidratante como el cido sulfrico. La reaccin genera molculas con

coloracin violeta que se aprecian en la interfase del cido sulfrico y la solucin.
Las protenas y pptidos que contengan aminocidos que contengan este grupo, tambin
darn resultado positivo a la reaccin de Adamkiewicz.
-Reaccin Xantoproteica: Esta reaccin reconoce el grupo fenil presente en una
molcula, con el cual el cido ntrico forma compuestos amarillos, debido a la nitracin del
grupo fenilo que posea una molcula orientadora para posiciones orto del anillo.
Si en este punto se modifica el pH de la solucin adicionando un hidrxido de alguno de
los metales alcalinos, se obtiene la sal correspondiente que toma coloracin anaranjada.
Los polipptidos, las protenas y otros compuestos que posean grupo fenilo, tambin
darn resultado positivo en esta reaccin.
- Reaccin de los tiogrupos: Este ensayo detecta la presencia de grupos sulfhidrilo o tiol
(-SH), presente en algunos aminocidos, y por consiguiente, en algunos pptidos y
protenas.

La reaccin ocurre en presencia de acetato de plomo en medio alcalino, donde debido a

la presencia del tiol, se da la formacin de sulfuro de plomo que se observa en la solucin
mediante un precipitado oscuro.
Materiales
Reactivos
Agua destilada
Acetato de plomo 10%
cido ntrico concentrado
cido sulfrico concentrado
Albmina 1%
Cistena 0.01M
Fenilalanina 0.01M
Fenol 0.1%
Formaldehdo
Hidrxido de potasio 40%
Hidrxido de sodio 20%
Metionina 0.01M
Ninhidrina 0.1%
Sacarosa 0.01%
Solucin de aminocidos
Solucin desconocida
Triptfano 0.01M

General
Gradillas para tubos de ensayo
Pinza para tubo de ensayo
Pipetas de 1mL
Pipetas de 2mL
Pipetas de 5mL
Tubos de ensayo
Vaso de precipitado para bao de agua
Mecheros
Pipeteadores

PROCEDIMIENTO

1. Reaccin de la Ninhidrina: Etiquetar cinco tubos de ensayo con el nombre de la

solucin: Albmina, metionina, solucin de aminocidos, sacarosa y solucin
desconocida, adicionar 1,5 mL de cada una de las anteriores soluciones en el
respectivo tubo, finalmente en cada uno de los tubos agregar 0,5 mL de reactivo
Ninhidrina, agitar todos los tubos de ensayo y mantenerlos en bao de agua en
ebullicin durante 5 min. Observar los resultados obtenidos en cada uno de los
tubos, especificando si el resultado es positivo o no.
2. Reaccin de Adamkiewicz: Etiquetar 3 tubos de ensayo con el nombre de la
solucin: Albmina, triptfano y solucin desconocida, adicionar 0,5 mL de cada
una de las anteriores soluciones en el respectivo tubo, adicionar en cada uno de
los tubos 3 gotas de formaldehido, agitar los tubos y adicionar cuidadosamente
1mL de cido sulfrico, de forma lenta por la paredes del tubo sostenido en una
gradilla. Es una reaccin altamente exotrmica y si no se realiza
cuidadosamente pueden producirse salpicaduras y quemaduras. Una vez
termine la reaccin no se deben agitar los tubos. Observar los resultados
obtenidos en cada uno de los tubos, especificando si el resultado es positivo o no.
3. Reaccin Xantoproteca: Etiquetar 5 tubos de ensayo con el nombre de la
solucin: albmina, triptfano, fenol, fenilalanina y solucin desconocida, adicionar
2 mL de cada una de las anteriores soluciones en el respectivo tubo y finalmente
adicionar en cada uno de los tubos 1 mL de cido ntrico (adicionar
cuidadosamente el cido), mantener los tubos en bao de agua en ebullicin
durante 30 segundos. Posteriormente enfriar los tubos y adicionar en cada uno de
los tubos 5 mL de la solucin de hidrxido de sodio al 20%. Observar los
resultados obtenidos en cada uno de los tubos, especificando si el resultado es
positivo o no.
4. Reaccin de los Tiogrupos: Etiquetar 4 tubos de ensayo con el nombre de la
solucin: albmina, cistena, metionina, solucin desconocida, adicionar 1 mL de
cada una de las anteriores soluciones en el respectivo tubo, adicionar a cada uno
de los tubos 1 mL de hidrxido de potasio y 3 gotas de acetato de plomo. Posterior
mantener los tubos de ensayo en agua en ebullicin durante 10 minutos. Observar
los resultados obtenidos en cada uno de los tubos, especificando si el resultado es
positivo o no.
Al final de la prctica cada grupo debe entregar una hoja con los respectivos
resultados.

PRACTICA DE LABORATORIO: CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA DE

AMINOACIDOS

Objetivos:
- Aplicar la cromatografa en la deteccin de aminocidos.
- Realizar los clculos del Factor de Retencin (FR).
Fundamento:
La cromatografa es una tcnica de separacin que presenta distintas variantes. En toda
separacin cromatogrfica hay dos fases (slida, lquida o gas) una mvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto a la otra manteniendo un contacto ntimo.
La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen
entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un
tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separacin.
Los mtodos cromatogrficos pueden aplicarse a la separacin, identificacin y anlisis
cuantitativo de aminocidos, pptidos, protenas, nucletidos, cidos nucleicos, lpidos e
hidratos de carbono.
En esta prctica, vamos a utilizar la cromatografa ascendente sobre papel. La fase
estacionaria es la celulosa del papel y la mvil una mezcla de disolventes orgnicos y
agua. La celulosa retiene cierta cantidad de agua entrelazada entre sus fibras y da lugar a
un mecanismo de reparto de los componentes de una muestra que es aplicada sobre ella
y posteriormente se hace fluir un disolvente de polaridad distinta de la del agua. Segn la
solubilidad que tengan los componentes de la muestra respecto a las dos fases as ser
su movilidad.
Materiales
General

Reactivos

- 4 Tubos de ensayo
- Pinza para tubo de
ensayo
- 1 Gradilla
- 1 Pipeta 1 mL
- 1 Pipeta 5 mL
- 1 Vaso de precipitado
de 250
- 1 Probeta 100 mL
- 1 vidrio de reloj grande
Estufa
de
calentamiento a 100C

- Mezcla de solventes para la

cromatografa:
n-butanol:cido
actico glacial: agua (12:3:5) (aprox
5 mL de la mezcla de solventes para
cada grupo) Preparar el mismo da
de la prctica.
- Solucin de ninhidrina al 0,5% en
acetona
- Solucin 1. lisina, prolina y
fenialanina al 1%. (1mL por cada
grupo)
- Solucin 2. cido glutmico, valina
y leucina

A cargo de cada
grupo
- 3 Capilares
- Papel aluminio
- Regla graduada
- Atomizador pequeo
Lpiz
Guantes de ltex o
nitrilo.
Toallas absorbentes.

PRACTICA DE LABORATORIO: DESNATURALIZACION Y CUANTIFICACION DE

PROTEINAS
Objetivos
1. Comprobar la desnaturalizacion de proteinas por diferentes efectos.
2. Cuantificar una muestra problema en solucion.
Fundamento
Desnaturalizacin
La estructura covalente de las protenas posee un carcter informacional secuencial, que
determina la estructura tridimensional biolgicamente activa, terciaria o cuaternaria segn
la protena. La funcin se ejerce mediante el reconocimiento molecular, el cual se
establece en virtud de la disposicin espacial de las cadenas laterales de determinados
residuos de aminocidos; por tanto, el nivel estructural terciario o cuaternario posee un
carcter informacional-conformacional, que permite el funcionamiento de la protena. La
presencia de determinados agentes fsicos o qumicos provoca la ruptura de algunas
interacciones no covalentes, y si estn presentes, la de los puentes disulfuros y con ello
se produce, en mayor o menor grado, la perdida de la estructura tridimensional de la
protena y por ende su funcin. Este fenmeno se conoce como desnaturalizacin.
Resulta oportuno precisar que la desnaturalizacin no afecta los enlaces peptdicos, por lo
que se mantiene el nivel primario.
Cuantificacin
En la prueba de Biuret el sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que
contienen dos o ms enlaces peptidicos dando un complejo de coloracin violeta, la
intensidad del color obtenido es una medida del numero de enlaces peptidicos. Las
protenas reaccionan con el reactivo de Folin-Ciocalteau para dar un complejo coloreado,
el color que se forma es debido a la reaccin del cobre alcalino con la protena. La
intensidad del color depende del nmero de aminocidos aromticos presentes y
cambiara segn la clase de protena.
Materiales
6 Tubos de ensayo
Pipeta graduada de 1 mL
Pipeta graduada de 5 mL
Termmetro
Vaso de precipitado de 250 mL
Gradilla
Malla de asbesto
Tripode

 Espectrofotmetro
Reactivos
Protenas* (5g/L albumina, casena, gelatina)
Solucin de clara de huevo**
Patrn de protenas (solucin de albumina5 mg /mL). Preprese fresco.
Patrn de protena (solucin de albumina 0.2 mg/mL). Preprese fresco.
Acido clorhdrico 1 M
Hidrxido de sodio 1 M
Acido ntrico (conc.).
Etanol 96%
Acetona
Reactivo de Biuret. (Disuelva 3 g de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) y 9 g de tartrato
sdico potsico en 500 mL de hidrxido de sodio 0.2 M; aada 5 g de yoduro potsico y
complete hasta 1 L con hidrxido de sodio 0.2 M.)
Solucin alcalina de carbonato de sodio (Na2CO3 20 gl/L en NaOH 0.1 M).
Solucin de sulfato de cobre-tartrato sdico potsico (5 gl/L CuSO4.5H2O en tartrato
sdico potsico 10 g/L). Preprese fresco mezclando las dos soluciones preparadas por
separado.
'Solucion alcalina'. Preparese el mismo dia mezclando 50 mL de (1) y 1 mL de (2).
Reactivo de Folin-Ciocalteau. (Diluya el reactivo comercial con un volumen igual de agua,
el mismo da que se va a utilizar. Esta es una solucin de tungstato de sodio y molibdato
de sodio en acido fosfrico y acido clorhdrico.
*La caseina se disuelve en un poco de NaOH diluido y las otras protenas en solucin
salina.
** diluir 1.0 mL de clara de huevo hasta 25mL con solucin salina
PROCEDIMIENTO
Experimento I. Desnaturalizacin por pH extremo
A 2 mL de la solucin de protena, agregar lentamente por las paredes del tubo 2 mL de
HNO3 concentrado hasta que se formen dos capas; luego mezcle cuidadosamente los
dos lquidos. Anotar sus observaciones.
Realizar las pruebas para todas las protenas.
Experimento II. Desnaturalizacin por calor
En un tubo de ensayo colocar 4 mL de solucin protenica, luego colocar el tubo en un
bao de agua hirviendo durante 10 minutos y enfriar a temperatura ambiente. Anotar sus
observaciones.
Realizar las pruebas para todas las protenas.
Experimento III. Precipitacin por solventes orgnicos
A 2 mL de la solucin de protena, aadir 2 mL de etanol y agitar cuidadosamente. Repetir
el procedimiento pero adicionando 2 mL de acetona en lugar de etanol.

Realizar las pruebas para todas las protenas.

Experimento IV. Prueba de Biuret
A 3 mL de la solucin de protena (5 mg de albumina/mL), aadir 4.5 mL del reactivo de
Biuret, mezclar y calentar a 37 C durante 10 minutos. Dejar enfriar y leer la absorbancia a
540 nm. Reportar los datos de la absorbancia de acuerdo a las concentraciones descritas
en la Tabla 1. Determinar la concentracin de protenas de una muestra problema
despus de preparar una curva patrn (grafica de concentracin vs absorbancia).
Experimento V. Mtodo de Folin-Lowry para determinacin de protenas
A 1 mL de la muestra (solucin de albumina 0.2 mg/mL) agregar 5 mL de 'solucin
alcalina'. Mezclar vigorosamente y dejar reposar a temperatura ambiente por 10 minutos o
ms. Agregar 0.5 mL de reactivo diluido de Folin-Ciocalteau en forma rpida y mezclando
inmediatamente. Despus de 30 minutos leer la absorbancia contra el blanco apropiado a
750 nm. Reportar los datos de la absorbancia de acuerdo a las concentraciones descritas
en la tabla 2. Determinar la concentracin de protenas de una solucin problema despus
de preparar una curva patrn (grafica de concentracin vs absorbancia).
Observaciones
Tabular sus resultados, realizar las curvas de calibracin y comparar los mtodos de
cuantificacin de Folin y Biuret.

PRACTICA DE LABORATORIO: CINETICA ENZIMATICA

Objetivos
1. Identificar los factores que afectan la actividad enzimtica de la a-amilasa.
2. Determinar la actividad enzimtica de la a-amilasa de acuerdo a las diferentes
propiedades que presentan los reactantes y productos de las reacciones catalizadas.
3. Determinar experimentalmente las condiciones optimas de temperatura, pH y
concentraciones de enzima y sustrato para la a-amilasa.
Fundamento
La cintica enzimtica tiene por objeto el estudio de la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas, as como los factores que en ella influyen y los mecanismos por
los cuales transcurren. La velocidad de las reacciones enzimticas se puede medir por:
- la cantidad de sustrato que desaparece en la unidad de tiempo.
- la cantidad de producto que aparece en la unidad de tiempo.
En esta prctica de laboratorio se comprobara la influencia de la concentracin del
sustrato (S), de la enzima (E), el pH y la temperatura (T) en la cintica de la enzima aamilasa salival en su accin sobre los enlaces a1-4 del almidn. Al reaccionar el almidn
con lugol se produce un color azul, y con base en la desaparicin del almidn en la unidad
de tiempo podemos estudiar el efecto que provocan en la cintica enzimtica la variacin
de los factores que influyen en ella.
Materiales
5 Tubos de ensayo
placa de porcelana con excavaduras
vasos de precipitado
bano de agua termostatado
cronometro
pipeta graduada 1mL
pipeta 10mL
gotero
Reactivos
Solucion de la enzima*
Agua destilada.
Solucion de almidon al 1%.
Cloruro de sodio 1%
Disoluciones tampon de pH 5.0; 6.8 y 8.0.
Reactivo de Lugol diluido (lugol:agua 1:2)
Hielo

*Solucion de la enzima: Se prepara colectando 0.5 mL de saliva (previo enjuague de la

boca con agua
destilada) y diluyendolo hasta 20 mL con agua destilada.
** Lugol: Se prepara disolviendo 1 g de iodo, 2 g de KI en 200 mL de agua destilada.

Observaciones
Registrar los datos obtenidos de los diferentes experimentos y analice.

Recomendaciones a tener en cuenta para la presentacin de Informes

El informe se debe elaborar a mano, hojas tamao carta y paginadas. El informe ser
entregado en la siguiente prctica.
Las tablas y figuras deben colocarse en la misma pgina en que se mencionan o en la
siguiente. Para su numeracion se utilizan numeros arabigos en orden consecutivo y no se
debe emplear la abreviatura No. ni el signo #. El titulo de la tabla o figura se debe
escribir en la parte superior de la misma.
Toda tabla y/o figura se debe relacionar dentro del texto.
El informe debe incluir:
- Ttulo de la prctica: debe ir en letra mayscula.
- Fecha de realizacin de la prctica.
- Nombre de los autores.
- Numero del grupo y subgrupo.
- Resumen: mnimo 5 lneas.
- Palabras clave: se plantean 5 a 8 palabras clave o frases que identifiquen los
principales aspectos del trabajo.
- Introduccin: describir el planteamiento general del tema, dando la informacin
necesaria en forma concisa y precisa haciendo referencia solamente a la
bibliografa directamente relacionada. No se deben incluirrevisiones amplias de
bibliografa (no se aceptan pginas de internet, ni repetir lo que est en la gua).
En este tem se incluyen los objetivos de la prctica dentro del texto.
- Datos y clculos: los datos que se colectan durante la prctica se deben ordenar
en tablas (si es posible), asimismo los clculos se deben presentar en forma
ordenada, si un tipo de clculo se repite, solo se plantea una vez. Siempre que sea
posible calcular el error experimental.
- Anlisis de resultados: deben presentarse de forma precisa incluyendo, si da a
lugar tablas y figuras (las cuales dan origen al anlisis y discusin de los
resultados), la discusin debe estar enfocada a la interpretacin de los datos
experimentales. Cuando sea necesario se deben plantear las reacciones.
- Conclusiones: deben estar respaldadas por los resultados y el anlisis, una
conclusin es clara, corta y concisa.
- Bibliografa: se deben referenciar los autores, titulo, volumen, pas y ano de
publicacin.