Programa: Microbiologa General e Industrial.

Virologa
Introduccin
1- Generalidades y Desarollo Histrico de la Microbiologa
Mtodos de observacin y estructura de los microorganismos
2- Observacin de los microorganismos: el microscopio, preparacin y examen de
muestras.
3- La clula Procaritica; Estructura y Funcin .
4- La clula Eucaritica; Estructura y Funcin .
Crecimiento y control de los microorganismos
5- Nutricin microbiana.
6- Cultivo de los microrganismos: medios de cultivo.
7- Crecimiento microbiano.
8- Control de las Poblaciones Microbianas : Esterilizacin y Desinfeccin.
Metabolismo y Fisiologa Microbiana
9- Metabolismo Microbiano.
10- Microorganismos Heterotrofos.
11- Microorganismos Autotrofos.
12- Biosntesis.
Gentica Microbiana
13- Estructura y Replicacin de los Acidos Nucleicos.
14- Variacin bacteriana. Mutacin y dinmica de poblaciones.
15- Virus bacterianos (bacterifagos).
16- Recombinacin Gentica en Bacterias: Transformacin, Transduccin y
Conjugacin.
Patogenicidad Microbiana
17- Relacin husped- parsito. Factores de patogenicidad microbiana.
18- Defensas especficas e inespecficas frente a la infeccin.
19- Tipos y patrones de enfermedad infecciosa.
20- Agentes Antimicrobianos y Microorganismos.
21- Inmunidad Artificial.
Estudio sistemtico de microorganismos
22.- Clasificacin de microorganismos. Principales atributos utilizados en la
clasificacin e identificacin de microorganismos.
23- Espiroquetas y Campylobacter.

24- Pseudomonas, Neisseria, Legionella y otros bacilos y cocos aerobios gramnegativos. Bacteroides y Fusobacterium. Veillonella.
25-Vibrios, Pasteurellas y Enterobacterias.
26- Rickettsias y Clamidias. Mollicutes y Formas L.
27- Cocos gram- positivos. Estafilococos y Estreptococos.
28- Bacilos gram - positivos esporulados y no esporulados. Bacillus y Clostridium.
Lactobacilos y Listerias.
29- Corinebacterias, Micobacterias y Nocardias.
30- Hongos filamentosos y levaduras.
Ecologa Microbiana
31- Ecologa Microbiana. Microbiologa del Suelo: Los Microorganismos y los Ciclos
Biogeoqumicos.
32- Microbiologa del Agua y Microbiologa del Aire.
33- Microbiologa de los Alimentos.
Microbiologa Industrial
34- Introduccin. Areas de aplicacin
35- Biologa de los microorganismos industriales. Aislamiento y Conservacin
36- Produccin de metabolitos primarios y secundarios. Sistemas de regulacin y su
modificacin
Virologa
37- Caractersticas generales de los Virus (I). Estructura y Clasificacin.
38- Caractersticas generales de los Virus (II). Ciclos de Multiplicacin Viral.
39- Estudio de los Virus ADN.
40- Estudio de los Virus ARN.
41- Agentes infecciosos no convencionales. Viroides y Priones.
42- Virus Oncognicos: Mecanismos moleculares de oncogenesis viral.
Programa de Clases Prcticas
1. Tcnica asptica. Tcnicas de siembra y aislamiento de
microorganismos.

2. Tincin simple. Tinciones diferenciales. Visualizacin microscpica de

3.
4.
5.
6.

microorganismos.
Crecimiento y recuento de microorganismos. Medios de cultivo.
Tcnicas de esterilizacin.
Pruebas de identificacin de microorganismos.
Antibiograma y Evaluacin de antibiticos.
Prcticas de identificacin de microorganismos por simulacin en
ordenador.

TEMA 1. GENERALIDADES Y DESARROLLO

HISTORICO DE LA MICROBIOLOGIA
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca
I.- GENERALIDADES
II.- DESARROLLO HISTORICO DE LA MICROBIOLOGIA
Primeras observaciones de los microorganismos
Origen de los microorganismos
La fermentacin como proceso biolgico
Descubrimiento de la funcin de los microorganismos como causantes de
enfermedades
Desarrollo en la prevencin de enfermedades
Antisepsia
Inmunizacin
Quimioterapia
Microbiologa y gentica
I.- GENERALIDADES

Microbiologa, el estudio de los organismos microscpicos, deriva de 3 palabras

griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente significan el
estudio de la vida microscpica.
Para mucha gente la palabra microorganismo le trae a la mente un grupo de pequeas
criaturas que no se encuadran en ninguna de las categoras de la pregunta clsica: es
animal, vegetal o mineral ? Los microorganismos son diminutos seres vivos que
individualmente son demasiado pequeos como para verlos a simple vista. En este
grupo se incluyen las bacterias, hongos (levaduras y hongos filamentosos), virus,
protozoos y algas microscpicas.
Normalmente tendemos a asociar estos pequeos organismos con infecciones,
enfermedades como el SIDA, o deterioro de alimentos. Sin embargo, la mayora de los
microorganismos contribuyen de una forma crucial en el bienestar de la Tierra ayudando
a mantener el equilibrio de los organismos vivos y productos qumicos en nuestro
medio ambiente: Los microorganismos de agua dulce y salada son la base de la cadena
alimentaria en ocanos, lagos y ros; los microorganismos del suelo destruyen los
productos de desecho e incorporan el gas nitrgeno del aire en compuestos orgnicos,
as como reciclan los productos qumicos en el suelo, agua y aire; ciertas bacterias y
algas juegan un papel importante en la fotosntesis, que es unproceso que genera
nutrientes y oxgeno a partir de luz solar y CO2 siendo un proceso crtico para el
mantenimiento de la vida sobre la Tierra; los hombres y algunos animales dependen de
las bacterias que habitan en sus intestinos para realizar la digestin y sntesis de algunas
vitaminas como son la K y algunas del complejo B. Los microorganismos tambin
tienen aplicaciones industriales ya que se utilizan en la sntesis de productos qumicos
como son acetona, cidos orgnicos, enzimas, alcohol y muchos medicamentos. El

proceso de produccin de acetona y butanol por bacterias fue descubierto en 1914 por
Chaim Weizmann, un polaco que trabajaba en Inglaterra para Winston Churchill.
Cuando estall la primera guerra mundial en agosto de ese ao, la produccin de
acetona era esencial en el proceso de fabricacin de las municiones, por lo que el
descubrimiento de Weizmann jug un papel determinante en el desarrollo de la guerra.
Despus de la guerra, rehus todos los honores que le propuso el gobierno britnico. Sin
embargo, utiliz su influencia para que el gobierno britnico ayudara a establecer el
estado judo en Palestina. En 1949, Weizmann fue elegido el primer presidente de Israel.
La industria alimentaria tambin usa microorganismos en la produccin de vinagre,
bebidas alcohlicas, aceitunas, mantequilla, queso, yogurt y pan. Adems, las bacterias
y otros microorganismos ahora pueden ser manipulados para producir sustancias que
ellos normalmente no sintetizan. A travs de esta tcnica, llamada ingeniera gentica,
las bacterias pueden producir importantes sustancias teraputicas como insulina,
hormona de crecimiento humana e interfern.
Actualmente sabemos que los microorganismos se encuentran en todas partes; pero hace
poco, antes de la invencin del microscopio, los microorganismos eran desconocidos
para los cientficos. Miles de personas moran en las epidemias cuyas causas no se
conocan. El deterioro de los alimentos no se poda controlar siempre y muchas familias
enteras moran debido a que no existan vacunas y antibiticos disponibles para
combatir las infecciones. Nosotros podemos hacernos una idea de como se han
desarrollado nuestros actuales conceptos de microbiologa repasando los
acontecimientos histricos que han cambiado nuestras vidas.
II.- DESARROLLO HISTORICO DE LA MICROBIOLOGIA

Aunque los microorganismos se originaron hace aproximadamente 4.000 millones de

aos, la microbiologa es relativamente una ciencia joven. Los primeros
microorganismos se observaron hace 300 aos y sin embargo pasaron unos 200 aos
hasta que se reconoci su importancia.
Primeras observaciones de los microorganismos (Leeuwenhoek y sus microscopios)
La existencia de los microorganismos no se conoci hasta la invencin del microscopio.
La primera persona en describir los microorganismos en detalle fue el holands Antony
van Leeuwenhoek en 1684, a los cuales denomin animculos. Leeuwenhoek examin
el agua de lluvia, de mar, de ro, saliva y otras materias. Sin embargo, estas
observaciones no condujeron a ninguna investigacin acerca de las posibles actividades
de los microorganismos, ni como agentes de fermentaciones ni de enfermedades
infecciosas ya que el desarrollo de la qumica y de la medicina era demasiado primitivo.
Origen de los microorganismos (Teora de la generacin espontnea)
Una vez descubiertos los microorganismos por Leeuwenhoek se empez a especular
sobre el origen de estos animculos. Se formaron dos escuelas. Una de ellas admita la
existencia de estas estructuras pero apoyaban la teora que provenan de la
descomposicin de los tejidos de las plantas o animales (eran el resultados de la
descomposicin y no la causa). Los que apoyaban esta teora crean que la vida se
generaba a partir de matera no viva, proceso que se denomin abiognesis.
Bsicamente era el concepto de la generacin espontnea. Del otro lado estaba la teora

de la biognesis. Los animculos se originaban, como ocurre en formas de vida

superiores, a partir de animculos padres. Hasta que se rechaz la idea de la generacin
espontnea se tuvieron que realizar muchos experimentos que parecen simples hoy en
da, pero que en aquellos momentos llev ms de 100 aos resolver dicha controversia.
La idea de la generacin espontnea se remonta a la cultura griega, los cuales crean que
las ranas y gusanos crecan espontneamente a partir del lodo. Incluso existan recetas:
llenando una tinaja con trapos y colocndola en un sitio apartado durante semanas al
final crecan ratones a partir de los trapos. En el siglo XVII el italiano Francesco Redi
demostr en 1668 que los gusanos encontrados en la carne podrida eran las larvas que
provenan de los huevos que previamente haban depositado en la carne las moscas y no
el producto de la generacin espontnea. Sin embargo una cosa eran los huevos de
moscas y otra los microorganismos que slo se podan ver con la ayuda del
microscopio.
En 1745 John Needham hirvi trozos de carne para destruir los organismos
preexistentes y los coloc en un recipiente abierto. Al cabo de un tiempo observ
colonias de microorganismos sobre la superficie y concluy que se generaban
espontneamente a partir de la carne. En 1769, Lazzaro Spallanzani repiti el
experimento pero tapando los recipientes, no apareciendo las colonias, lo que
contradeca la teora de la generacin espontnea. Pero Needham argument que el aire
era esencial para la vida includa la generacin espontnea de microorganismos y este
aire haba sido excluido en los experimentos de Spallanzani.
Unos 100 aos despus, en 1836 Franz Schulze pas el aire a travs de unas soluciones
cidas fuertes hacia el interior de un recipiente con carne hervida. Al ao siguiente
Theodor Schwann pas el aire a travs de tubos calientes. Los microorganismos no
aparecan en ningn caso ya que los microorganismos presentes en el aire haban sido
aniquilados. Sin embargo, los que apoyaban la generacin espontnea comentaban que
el cido y el calor alteraban el aire de tal manera que impeda la generacin espontnea
de los microorganismos. Sin embargo fue Louis Pasteur el que zanj definitivamente la
controversia en 1864 al utilizar matraces con un tubo largo y curvado llamados "cuello
de cisne". El aire pasaba libremente a travs del cuello, pero los microorganismos no
aparecan en la solucin ya que las partculas de polvo y microorganismos sedimentaban
en el recodo del cuello. Estos experimentos de Pasteur promovieron el reconocimiento
de la biognesis. Posteriormente Pasteur empez a estudiar el papel de los
microorganismos en la produccin de vino y como causa de enfermedades.
La fermentacin como proceso biolgico (Pasteur y el vino francs)
Sin duda desde la Prehistoria los hombres utilizan con provecho las fermentaciones. El
pan fermentado se conoce desde hace varios miles de aos. Los jeroglficos egipcios, as
como representaciones grficas en todo el Prximo Oriente atestiguan que el hombre
recurra a la fermentacin para fabricar bebidas alcohlicas ya varios milenios antes de
Jesucristo. Al preparar el pan, vino, cerveza o sake, los egipcios, sumerios y todas las
personas hasta mediados del Siglo XIX, empleaban sin saberlo, y de una manera
emprica, una familia de agentes biolgicos muy originales: las levaduras. Son ellas las
que realizan la fermentacin alcohlica.
El papel de las levaduras como agentes fermentadores no fue reconocido hasta 1856 por

Luis Pasteur. Las teoras cientficas de esa poca reconocan la presencia de levaduras
en la fermentacin alcohlica, pero estas levaduras eran consideradas como compuestos
qumicos complejos, sin vida. Esta era la teora mecanstica liderada por los qumicos
alemanes von Liebig y Whler. Luis Pasteur, qumico francs, propuso la teora
vitalstica y demostr que las clulas viables de levaduras causan fermentacin en
condiciones anaerbicas; durante dicha fermentacin el azcar presente en el mosto es
convertido principalmente en etanol y CO2. Sus ilustraciones claramente muestran
autnticas levaduras vnicas y en sus escritos l las diferenciaba claramente de otros
componentes.
En el verano de 1856 M. Bigo, un fabricante de alcohol en la ciudad de Lille, en el norte
de Francia, sufra repetidos fracasos en las fermentaciones de sus productos. En este
proceso intervena la fermentacin de la caa de azcar para producir alcohol etlico,
pero una y otra vez el contenido de las tinajas se agriaba y al final en lugar de alcohol,
se obtena una sustancia que despeda un olor parecido a la leche agria. Sucedi que el
hijo de M. Bigo estudiaba en la Facultad de Ciencias cuyo decano era Pasteur. M. Bigo,
a travs de su hijo, pregunt a Pasteur si estara dispuesto a investigar los fracasos que
estaban ocurriendo con sus fermentaciones, a lo que Pasteur accedi iniciando el estudio
en los laboratorios de la Facultad. En primer lugar someti a anlisis qumico el
contenido estropeado de las tinas llegando a la conclusin de que contenan una
considerable cantidad de cido lctico en lugar de etanol. El siguiente paso fue el
examen de los sedimentos de las tinas en las que la fermentacin haba sido satisfactoria
y el de aquellas que haban fallado. La comparacin de los dos sedimentos revel una
clara diferencia: en los sedimentos procedentes de las tinas que haban producido
alcohol haba levaduras; en los procedentes de las tinas productoras de cido lctico se
vean "glbulos mucho ms pequeos que los de la levadura" con lo que ya dispona de
pruebas de que los productos de estas dos fermentaciones estaban especficamente
asociados con el crecimiento de dos microorganismos morfolgicamente distinguibles.
Tom muestras de los sedimentos de los dos tipos de fermentaciones y los inocul en
tubos que contenan azcar como fuente de carbono; en el caso de los "glbulos mucho
ms pequeos que los de la levadura" pudo reproducir la fermentacin lctica y
observar los diminutos glbulos en el sedimento que apareca en los tubos. La adicin
del sedimento de las tinas en las que se haba producido alcohol, di una tpica
fermentacin alcohlica apareciendo en el fondo de los tubos glbulos de levaduras.
En 1866, Pasteur public la obra titulada "Estudios sobre el vino, sus enfermedades,
causas que las provocan. Nuevos procedimientos para la conservacin y
envejecimiento". Entre las mejoras aconsejadas haba un mtodo para aumentar la
calidad de la conservacin de los vinos consistente en calentarlos a una temperatura de
68 C durante 10 minutos y despus enfriarlos rpidamente. Esta tcnica ha venido a ser
conocida como pasteurizacin y es ahora ampliamente utilizada en el tratamiento de la
leche.
Descubrimiento de la funcin de los microorganismos como causantes de
enfermedades (Koch y la bacteria del carbunco)
Ya en 1546 Girolano Fracastoro haba sugerido que las enfermedades podan deberse a
organismos tan pequeos que no podan verse y que eran transmitidos de una persona a
otra. Sin embargo, el descubrimiento de que las bacterias pueden actuar como agentes
especficos de las enfermedades infecciosas en los animales fue realizado a travs del

estudio del carbunco, infeccin grave de los animales domsticos que es transmisible al
hombre. La demostracin concluyente de la causa bacteriana o etiologa del carbunco la
proporcion en 1876 Robert Koch, un mdico rural alemn. Kosch empez a estudiar el
mundo microbiano despus de que su mujer le regalara por su 28 cumpleaos un
microscopio. Seis aos despus Koch anunci al mundo que haba encontrado la
bacteria del carbunco (Bacillus anthracis). Posteriormente l y sus colaboradores
descubrieron las bacterias que causan la tuberculosis y el clera.
Esta serie de experimentos se ajustaban a los criterios necesarios para poder establecer
la relacin causal entre un organismo especfico y una enfermedad especfica. Estos
criterios se conocen como los postulados de Koch:
1.- El microorganismo debe estar presente en todos los casos de la
enfermedad.
2.- El microorganismo debe ser aislado del hospedador enfermo y obtenerse
en cultivo puro en el laboratorio.
3.- La enfermedad especfica debe reproducirse cuando un cultivo puro del
microorganismo se inocula a un hospedador susceptible sano.
4.- El microorganismo debe ser recuperable de nuevo a partir del
hospedador inyectado experimentalmente.

El descubrimiento posterior de los virus (Dimitri Ivanovski en 1892; el virus del

mosaico del tabaco pasaba los filtros que retenan a las bacterias), agentes que no
crecen en medios artificiales en el laboratorio como lo hacen las bacterias, han
permitido realizar algunas modificaciones en los postulados de Koch.
Este trabajo sobre el carbunco condujo rpidamente a la edad de oro de la
bacteriologa. En 25 aos la mayora de los agentes bacterianos de las principales
enfermedades humanas haban sido descubiertos y descritos.
Desarrollo en la prevencin de enfermedades (Lister y el fenol; Pasteur y las
gallinas; Fleming y el hongo contaminante)
Actualmente es difcil comprender la magnitud de la miseria y devastacin causada
por los microorganismos antes de 1950. En Europa, durante el perodo de 13471350 ocurri una epidemia de peste bubnica, conocida como la "muerte negra" y
causada por una bacteria (Yersinia pestis). A causa de esta enfermedad en Francia
murieron de un tercio a la mitad de la poblacin y se estim que en toda Europa
murieron 25 millones de personas. Con el conocimiento de que los microorganismos
causaban enfermedades, los cientficos se dedicaron a investigar la prevencin y el
tratamiento. Los hospitales adoptaron la antisepsia, la cual previene la diseminacin
de las enfermedades infecciosas mediante la inhibicin o destruccin de los agentes
causantes. Tambin se descubri la inmunizacin, un proceso que estimula las
defensas del cuerpo frente a la infeccin. Se empez a aplicar la quimioterapia,
tratamiento de las enfermedades con una sustancia qumica, a medida que los
investigadores encontrabanmedicamentos ms efectivos. Tambin influy la sanidad
pblica, sobre todo la higiene relacionada con los alimentos y aguas.
Antisepsia: Hacia 1860 un cirujano ingls llamado Joseph Lister investigaba la
forma de eliminar los microorganismos de las incisiones realizadas en las

operaciones quirrgicas. Por esa poca, las muertes por infeccin despus de una
operacin quirrgica eran muy frecuentes. El propio Lister tena anotado en su
cuaderno de notas que el 45% de sus pacientes moran a causa de las infecciones
quirrgicas. Para evitarlo utiliz una solucin diluda de fenol (que ya se saba que
mataba a las bacterias) para lavar las ropas de los cirujanos y todo el marterial
quirrgico, as como en spray en el quirfano durante la operacin. Estos
experimentos fueron el origen de la tcnica asptica.
Inmunizacin: En 1880 Pasteur utiliz las tcnicas de Koch para aislar y cultivar la
bacteria que causa el clera en gallinas. Para probar su descubrimiento convoc una
demostracin pblica del experimento que haba sido un xito repetidas veces en el
laboratorio. Inyect un cultivo puro de la bacteria del clera en gallinas sanas y
esper a que desarrollaran los sntomas y murieran. Per para su desgracia, las
gallinas siguieron vivas. Revisando el experimento fallido descubri que haba
utilizado cultivos viejos en lugar de cultivos frescos preparados especialmente para
la demostracin. Algunas semanas ms tarde repiti el experimento usando dos
grupos de gallinas: uno con gallinas inoculadas en el experimento anterior con el
cultivo viejo y otro con gallinas nunca inoculadas. Ahora inyect en ambos grupos
cultivos frescos. En este experimento las gallinas del segundo grupo murieron, pero
las del primero permanecan vivas. Estos resultados intrigantes pronto encontraron
una explicacin para Pasteur. El haba descubierto que la bacteria, si se dejaba
crecer durante largo tiempo, poda volverse avirulenta. Pero esta bacteria avirulenta
estimulaba algo en el hospedador, en este caso las gallinas, que resistan
infecciones posteriores hacindoles inmunes a esa enfermedad. Pasteur aplic este
principio de inmunizacin en la prevencin del carbunco en animales y funcion. A
estos cultivos avirulentos los llam vacunas (del latn vacca). Usando este trmino
Pasteur reconoci el trabajo de Edward Jenner que en 1798 vacun con xito a un
nio (James Phipps) de viruela, vacuna que obtuvo de las pstulas de una vaca con
viruela.
El reconocimiento internacional de Pasteur le supuso un nuevo reto ya que le
encargaron que encontrara una vacuna contra la rabia. En aquel momento no se
conoca el agente causante de la rabia pero Pasteur crea que era un
microorganismo. Hoy sabemos que es un virus. Finalmente obtuvo una vacuna
frente a la rabia que funcionaba en perros, lo cual es diferente a humanos. En Julio
de 1885, un nio llamado Joseph Meister fu mordido por un lobo rabioso, la familia
del nio persuadi a Pasteur para que utilizara la vacuna en el nio (la enfermedad
era mortal) que result un xito. Posteriormente esta vacuna salv a un grupo de
campesinos rusos que haban sido mordidos por otro lobo rabioso. Como
agradecimiento, el zar de Rusia envi a Pasteur 100.000 francos que utiliz para
construir el Instituto Pasteur de Pars.
Quimioterapia: El tratamiento de las enfermedades mediante compuestos
qumicos no es nuevo. En 1495 ya se utilizaban sales de mercurio para tratar la
sfilis, aunque este tratamiento hizo bueno el axioma: Graviora quaedum sunt
remedia periculus, es decir "Es peor el remedio que la enfermedad" ya que
determinados tratamientos, como es el caso del mercurio, son txicos para las
clulas animales y humanas. Para que un agente quimioterpico sea efectivo en el
tratamiento de una enfermedad infecciosa no slo debe de matar o inhibir al
microorganismo causante de la infeccin sino que adems debe ser relativamente
inocuo para las clulas humanas al exhibir toxicidad selectiva. El primer gran
descubrimiento en este sentido fue hecho por Paul Ehrlich a principios del siglo XX.
Este mdico alemn crea que era posible obtener un compuesto qumico que
pudiera curar especficamente la sfilis sin daar al paciente. El conoca que el
arsnico inhiba al microorganismo causante de la sfilis (Treponema pallidum) pero
que tambin era txico para las clulas humanas. Ehrlich trabaj en la idea de que
el arsnico poda incorporarse dentro de compuestos orgnicos de tal manera que

perdiera su toxicidad para las clulas humanas manteniendo sus propiedades

antimicrobianas. Despus de ensayar 605 sustancias con estas caractersticas
encontr un compuesto, el 606, que cumpla estos requisitos. A esta sustancia la
llam Salvarsan y fue el primer compuesto qumico sintetizado en laboratorio que
poda curar una enfermedad sin ser txico para el paciente. Gracias a este
descubrimiento le concedieron el premio Nobel en 1908. Hoy en da ya no se utiliza
salvarsan para tratar la sfilis ya que ha sido reemplazado por un producto mucho
ms efectivo, el antibitico penicilina.
Hasta 1935 no se realiz ningn nuevo avance en quimioterapia. En ese ao
Gerhard Domagk trabajando en la Bayer realiz un descubrimiento importante.
Despus de llevar a cabo experimentos con ms de 1000 colorantes sintticos para
comprobar si alguno de ellos poda curar las infecciones causadas por estreptococos
en ratones sin daar a los animales, descubri que un colorante rojo llamado
Prontosil era efectivo. Este descubrimiento le vali el premio Nobel en 1939.
Curiosamente, este colorante no era capaz de inhibir el crecimiento de las bacterias
crecidas en laboratorio; slamente era efectivo cuando las bacterias crecan dentro
del cuerpo del animal. Esta aparente contradiccin fue resuelta en el mismo ao por
un qumico francs Jacques Trfoul al observar que el prontosil era transformado
en el cuerpo en un compuesto incoloro diferente que s tena actividad especfica
frente a bacterias. Esta nueva sustancia era la sulfonamida. En un corto perodo de
tiempo se determin su estructura siendo posible sintetizarla en gran escala y
desarrollar nuevos compuestos que se denominaron sulfamidas que an hoy en da
se siguen utilizando.
El salvarsan y las sulfamidas son ejemplos de agentes quimioteraputicos sintticos
obtenidos mediante sntesis qumica en un laboratorio. Sin embargo, existe una
segunda categora: agentes quimioteraputicos naturales, llamados antibiticos. Un
antibitico es una sustancia producida por un microorganismo que es inhibitoria
para otros microorganismos en muy pequea cantidad.
En 1928 el microbilogo ingls Alexander Fleming observ que en una placa de
agar inoculada con Staphylococcus aureus que estaba contaminada con el hongo
Penicillium notatum, las colonias de Staphylococcus eran destrudas por alguna
actividad de las colonias del hongo. A partir de este hongo realiz la extraccin de
un compuesto que era el responsable del efecto inhibitorio al que llam Penicilina.
Si bien Fleming reconoci el enorme potencial teraputico de la penicilina, encontr
serios problemas para aislarla y purificarla. El primer ensayo clnico con una
preparacin cruda de penicilina se llev a cabo el 12 de Febrero de 1941. El
paciente era un polica de Oxford que se estaba muriendo por una infeccin con
Staphylococcus (septicemia). Al administrarle penicilina se observ un
mejoramiento espectacular, pero 5 das despus, cuando se les acab la penicilina,
la infeccin volvi a emerger y el paciente muri. Este ensayo clnico fall debido a
que no se poda obtener una produccin a gran escala de penicilina. En este punto
(1940-1941) los britnicos estaban inmersos en la II guerra mundial. Los
americanos se interesaron por la penicilina y la fundacin Rockefeller invit al ingls
Florey para que investigara la produccin a gran escala de la penicilina junto con
universidades e industrias farmacuticas americanas. Esta cooperacin hizo posible
que un ao despus estuvieran disponibles grandes cantidades de penicilina. Muy
pocos descubrimientos cientficos han tenido tanto efecto en el campo de la
medicina como el descubrimiento de los antibiticos.
Microbiologa y gentica (Neumococos, doble hlice e ingeniera gentica)
Antes de 1940 el conocimiento del fenmeno gentico provena de las
investigaciones sobre plantas y animales, pero no se saba si estos resultados se
podan aplicar a los microorganismos. En 1944 Oswald Avery, Colin MacLeod y

MacLyn McCarty descubrieron el papel del DNA en la gentica bacteriana.

Encontraron que el material de DNA de un tipo de neumococos puede transferir una
caracterstica hereditaria a otro tipo de neumococos. Posteriormente, en 1953
Watson, Crick y Wilkins descubrieron la estructura molecular del DNA. Estos
descubrimientos, junto con otros, establecieron que la informacin gentica de
todos los organismos est codificada en el DNA. Esto hizo de los microorganismos
un modelo muy atractivo para la investigacin gentica. Actualmente y utilizando la
tecnologa del DNA recombinante o ingeniera gentica se pueden transferir
fragmentos de DNA de un organismo a otro.

TEMA 2. OBSERVACION DE LOS

MICROORGANISMOS: EL MICROSCOPIO,
PREPARACION Y EXAMEN DE MUESTRAS
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- EL MICROSCOPIO
II.- MICROSCOPIO OPTICO
III.- MICROSCOPIO ELECTRONICO
IV.- MICROSCOPIA OPTICA
Microscopio de campo claro
Microscopio de campo oscuro
Microscopio de fluorescencia
Microscopio de contraste de fases
V.- OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS
Preparacin en fresco
Tcnicas de tincin
I.- EL MICROSCOPIO

El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto pequeo.

Es el instrumento que ms se usa en los laboratorios que estudian los microorganismos.
Mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminacin se puede hacer visible un objeto
microscpico. Los microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el
tamao original.
Actualmente existen dos tipos de microscopios: el ptico y el electrnico. En el
microscopio ptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que
manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio
electrnico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo magntico.

II.- MICROSCOPIO OPTICO

Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el

tamao original. El lmite lo tienen en unas 2000 veces.
Las lentes de un microscopio ptico son el condensador, el objetivo y el ocular. La luz
que entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparacin y para esto se utiliza el
condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de
luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada
cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la
lente objetivo y la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final.
Los microscopios que se usan normalmente en microbiologa estn equipados con tres
objetivos: bajo poder, alto poder y objetivo de inmersin. Estos objetivos estn
montados sobre una pieza que se llama revolver que puede rotarse para alinear el
objetivo deseado con el condensador.
La imagen formada por el objetivo es finalmente aumentada por el ocular. El aumento
total de un microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de su
ocular. El microscopio compuesto es capaz de conseguir aumentos considerablemente
mayores que el microscopio construido con una sola lente. Este ltimo, llamado
microscopio simple, se usa principalmente como lupas y cristales de aumento.
Adems del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su poder
resolutivo; esto es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy
cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser la definicin de un objeto.
Los microscopios de gran poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeas
estructuras. El poder resolutivo de un microscopio compuesto depende de la longitud de
onda utilizada y de una propiedad ptica de la lente conocida como apertura numrica.
Como los microscopios pticos utilizan luz visible, la longitud de onda est fijada y es
por lo que la resolucin de un objeto es funcin de la apertura numrica; cuanto mayor
sea la apertura, el objeto resuelto ser ms pequeo.
0.5 l
d = ----------N sen a
d: poder resolutivo; l: longitud de onda; a: mitad del ngulo de la lente objetivo;
N: ndice de refraccin del medio; N sen a: apertura numrica.
Un factor que afecta a la apertura numrica, adems de la construccin de la lente,
es el medio a travs del cual pasa la luz. Mientras que el objetivo est separado del
objeto por el aire, su apertura numrica nunca ser mayor de 1,0; para conseguir
aperturas numricas mayores que sta, el objetivo debe estar inmerso en un lquido
de mayor ndice de refraccin que el aire. A estos lquidos se les denomina aceites
de inmersin que se utilizan con los objetivos de inmersin obteniendo una
apertura numrica entre 1,2 y 1,4. An as, al utilizarse la luz visible (longitud de
onda) estos microscopios llegan a tener un poder de resolucin de
aproximadamente 0,25 m, lo que significa que las partculas con un tamao ms
pequeo de 0,25 m no pueden distinguirse unas de otras.

III.- MICROSCOPIO ELECTRONICO

Los microscopios electrnicos utilizan rayos de electrones en lugar de la luz, lo que les
permite tener un poder de resolucin muy elevado. La longitud de onda de los rayos de
electrones es de 0,005 - 0,0003 nm, muy corta comparada con la de la luz visible (426 750 nm; violeta - rojo). Es posible con el microscopio electrnico resolver objetos
separados por una distancia de 0,003 m, comparado con los 0,25 m de uno ptico.
Los aumentos pueden llegar a ser de un milln de veces.
A causa de la naturaleza de este instrumento slo pueden examinarse objetos muy
delgados; incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada
directamente. Por lo que, para preparar muestras para el microscopio electrnico se
necesitan tcnicas especiales de cortes ultrafinos. Para seccionar las clulas primero
deben ser fijadas y deshidratadas (etanol o acetona). Despus de la deshidratacin, la
muestra se incluye en una resina y es aqu donde se realizan cortes finos con un
ultramicrotomo, por lo general equipado con una cuchilla de diamante. Una sola clula
bacteriana puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas. Si slo tiene que
observarse el contorno de un organismo, no son necesarias secciones finas por lo que se
montan clulas enteras que se recubren de una capa fina de un metal pesado (oro). El
rayo de electrones es dirigido sobre la preparacin y los electrones dispersados por el
metal pesado activan una pantalla de observacin produciendo una imagen. A la primera
tcnica se la denomina Microscopa Electrnica de Transmisin (MET) y a la segunda
Microscopa Electrnica de Barrido (MEB).

IV.- MICROSCOPIA OPTICA

Adems del microscopio de campo claro existen otros microscopios pticos como son el
de campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases.
Microscopio de campo claro: usa como fuente de luz directa bien una bombilla bien la
luz solar. Ya que los microorganismos son transparentes es difcil distinguirlos con este
tipo de microscopa y es por lo que se suelen teir.
Microscopio de campo oscuro: usa un microscopio ptico equipado con un
condensador y objetivo especial que iluminan los microorganismos en la muestra frente
a un fondo oscuro. Este mtodo se utiliza para visualizar microorganismos vivos sin
teir.
Microscopio de fluorescencia: la muestra se tie con una sustancia fluorescente que
absorbe la energa de las ondas cortas de la luz (azul) y emite la luz de longitudes de
ondas ms largas (verde). Se utiliza en inmunofluorescencia, tcnica en la cual una
sustancia fluorescente se une a un anticuerpo especfico de ciertos microorganismos. Si
el anticuerpo fluorescente se une al microorganismo, este microorganismo emite
fluorescencia y se puede identificar. Esta tcnica se usa en clnica.
Microscopio de contraste de fases: es un microscopio ptico modificado que permite
contrastar sustancias de diferente grosor o densidad. Mediante un condensador y un
objetivo especial se controla la iluminacin de tal manera que vaya en diferentes rutas a
travs de las distintas partes de una clula. El resultado es una imagen con diferentes

grados de brillo y oscuridad. Con este mtodo, el material denso aparece brillante,
mientras que las partes de la clula que tienen una densidad cercana al H2O
(citoplasma) aparecen oscuras. Se utiliza para visualizar estructuras celulares sin
necesidad de usar colorantes o matar microorganismos.

V.- OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS

Todos los microorganismos, excepto los virus, pueden ser observados mediante
microscopios pticos, por lo que nos vamos a limitar a describir las tcnicas ms
comunmente usadas para realizar preparaciones para microscopios pticos.
Preparacin en fresco: para poder observar la movilidad de un microorganismo es
preciso que no est fijado. Consiste en suspender una gota, tomada directamente de la
muestra, sobre un portaobjetos y cubrindola, sin formar burbujas de aire, con un
portaobjetos se observa al microscopio de contraste de fases.
Tcnicas de tincin:
En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas:
extensin, fijacin, tratamiento con colorantes y observacin.
1.- Extensin: se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio. Si la
muestra es lquida se hace directamente y, si es slida, hay que resuspenderla
previamente en una gota de H2O.
2.- Fijacin: tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las
protenas para facilitar la accin del colorante. Normalmente se realiza con calor,
pasando la muestra repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.
3.- Tincin: se realiza aadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a
los procesos anteriores. Puede ser de varios tipos:
Negativa: Los colorantes no tien el microorganismo, sino el entorno, aumentando de
este modo su contraste. La muestra se extiende sobre una gota del colorante (nigrosina).
Simple: Se utiliza un solo colorante que puede ser de cualquier tipo. Al igual que la
tincin negativa, slo nos permite observar la forma, el tamao y el tipo de agrupacin
de las clulas.
Diferencial: Intervienen dos o ms colorantes y cada uno diferencia una estructura. El
colorante que se usa en segundo lugar es de color diferente al del primero,
denominndose colorante de contraste.
Tincin de Gram
Es la tcnica de tincin diferencial ms importante que se utiliza en bacterias. El
primero en describirla fue el dans Christian Gram. Consiste bsicamente en aadir lo
siguiente:
Cristal violeta (colorante azul)
Lugol (mordiente, sustancia no colorante que refuerza la accin de un colorante)
Etanol 96 (decolorante que remueve el colorante de ciertas bacterias)
Safranina (colorante de contraste, rojo)

Esta tincin distingue entre dos amplios grupos de bacterias segn la composicin de la
pared celular; las Gram (-) que no retienen el complejo cristal violeta-lugol despus de
la decoloracin con alcohol y aparecen teidas de rojo, y las Gram (+) que s lo retienen
y aparecen teidas de azul oscuro.

TEMA 3. LA CELULA PROCARIOTICA:

ESTRUCTURA Y FUNCION
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS

A.- Tamao
B.- Forma
C.- Disposicin
II.- ULTRAESTRUCTURAS BACTERIANAS
1.- GLICOCALIX
2.- PARED CELULAR
3.- MEMBRANA CITOPLASMATICA
4.- AREA CITOPLASMICA
Ribosomas
Inclusiones
5.- AREA NUCLEAR
6.- FLAGELOS
7.- FIMBRIAS O PILI
III.- ENDOESPORAS BACTERIANAS

Observando los microorganismos a travs de un microscopio podemos apreciar su

morfologa (tamao, forma y disposicin). Si observamos con mayor nmero de
aumentos podemos apreciar, tanto en la superficie como dentro de la clula, un mayor
nmero de estructuras. La ausencia o presencia de ciertas estructuras nos van a servir
para clasificar a los microorganismos.
I.- MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS
A.- Tamao: Invisibles al ojo humano, las bacterias se miden en m que equivale a 103 mm. El tamao de las bacterias vara dependiendo de las especies entre menos de 1
m y 250 m; siendo lo ms habitual entre 1 y 10 m. Una caracterstica de las clulas
bacterianas es la alta proporcin que existe entre el rea de la superficie y el volumen de

la clula. Esto significa que poseen una gran superficie a travs de la cual pueden entrar
nutrientes para alimentar a un pequeo volumen; con lo cual pueden realizar muchas
reacciones metablicas y crecer rpidamente. As, por ejemplo Escherichia coli tarda 20
minutos en dividirse mientras que una clula de mamfero en laboratorio tarda de 13 a
24 horas.
B.- Forma: La forma de una bacteria viene determinada por la rigidez de su pared
celular. Las bacterias poseen una de las tres formas fundamentales: esfrica, cilndrica o
espiral. Las clulas esfricas se denominan cocos y suelen ser redondeadas aunque
pueden ser ovoides o elpticas. A las de forma cilndrica se las denomina bacilos. Los
extremos de estas clulas suelen ser redondeados, rectos, en forma de huso o cuerno. A
las de forma espiral o helicoidal se las denomina espirilos y se caracterizan por su forma
de sacacorchos. Existen modificaciones a estas tres formas fundamentales y aunque la
mayor parte de las bacterias mantienen constante su forma, algunas especies pueden
variar la forma por lo que se les llama pleomrficas. Arthrobacter es un ejemplo de
pleomorfismo debido a que su forma cambia en funcin de la edad del cultivo. Tambin
exhiben pleomorfismo aquellas bacterias que no poseen pared celular como es el caso
de los micoplasmas. Otro ejemplo son las formas L que son bacterias que carecen de
pared celular debido a una situacin de estrs (choque trmico u osmtico, antibiticos,
etc.), pero cuando cesa el estrs sintetizan de nuevo la pared celular. Debido a que la
forma es un carcter taxonmico, el pleomorfismo puede inducirnos a confusin ya que
podemos pensar que un cultivo est contaminado con otro tipo de bacterias. Sin
embargo, el pleomorfismo no suele ser lo ms frecuente.
C.- Disposicin: Muchas veces al mirar al microscopio se observan las clulas unidas
unas a otras. Mientras que las bacterias de forma espiral (espirilos) suelen ser clulas
separadas, otras especies suelen crecer en una disposicin caracterstica, disposicin que
va a depender del plano en el que se realice la divisin celular y si la clula hija
permanece junto a la clula madre una vez realizada la divisin celular. Cada una de
estas disposiciones es tpica de una especie particular y puede usarse en identificacin.
Hay que tener en cuenta que raramente todas las clulas de una especie se disponen
exactamente de la misma manera; por lo que hay que tener en cuenta la disposicin
predominante cuando se estudian las bacterias.
Cuando un coco se divide en un plano forma un diplococo o dos clulas juntas
(Neisseria). Cuando un coco se divide en un plano y permanece unido despus de varias
divisiones formando una cadena se denomina estreptococo (Streptococcus). Si las
clulas se dividen en ms de un plano o dimensin la disposicin es ms complicada.
Cuando un coco se divide en ngulo recto al primer plano de divisin forma ttradas o
tetracocos (Pediococcus). Una posterior divisin en el tercer plano puede resultar en un
paquete cbico de ocho clulas conocido como sarcinas (Sarcina). Si la divisin en los
tres planos es de forma irregular se forman racimos de uva (Staphylococcus).
Los bacilos generalmente no se agrupan en disposiciones caractersticas, aunque hay
excepciones. Por ejemplo, el bacilo de la difteria tiende a agruparse en empalizada. Las
clulas del gnero Caulobacter (bacilo acutico) crece en roseta sobre rocas y
superficies similares. Dentro del gnero Bacillus algunas especies forman cadenas y se
llaman estreptobacilos.

Tambin existen bacterias ramificadas como son los actinomicetos y ya hemos descrito
las formas pleomrficas.

II.- ULTRAESTRUCTURAS BACTERIANAS

Las tcnicas de microscopa revelan que una clula bacteriana est formada por diversas
estructuras que funcionan conjuntamente. Algunas de estas estructuras se encuentran
unidas a la superficie de la pared celular, mientras que otras se encuentran dentro de la
clula. Algunas son comunes a todas las clulas com son el citoplasma y la membrana
citoplasmtica; mientras que otras estructuras estn presentes slo en ciertas especies o
aparecen en determinadas condiciones ambientales.
Una tpica clula bacteriana contiene las siguientes estructuras:
1.- Glicocalix: est compuesta de polmeros
2.- Pared celular: separa a la bacteria del medio que la rodea. Suele ser rgida y es de
naturaleza glcido-lpido-proteica.
3.- Periplasma: espacio entre la pared celular y membrana citoplasmtica.
4.- Membrana citoplasmtica: separa el citoplasma de la pared celular. Est compuesta
de protenas y lpidos.
5.- Citoplasma: es una solucin coloidal que contiene elementos nucleares, inclusiones
citoplasmticas (vacuolas, vesculas, etc.) y ribosomas.
6.- Flagelos: nacen en el citoplasma y son estructuras de locomocin. Estn compuestos
de protena (flagelina).
7.- Fimbrias o pili: formaciones piliformes que nacen en el citoplasma. Estn
compuestos de protena (pilina).

GLICOCALIX
Algunas clulas bacterianas estn rodeadas por una capa de material viscoso llamada
glicocalix. Este glicocalix est compuesto por polmeros de azcares (polisacridos). Si
el glicocalix est organizado en una estructura definida y est unido firmemente a la
pared celular se denomina cpsula. Si por el contrario est desorganizado, sin una forma
definida y no est firmemente unido a la pared celular se denomina capa mucilaginosa.
Composicin: polisacridos y en menor proporcin polipptidos.
Funcin: Existen diferentes funciones dependiendo de la especie bacteriana:
Adherencia: es la principal. Streptococcus mutans se adhiere a travs de la cpsula a la
superficie de los dientes originando caries. Sin la cpsula el microorganismo se elimina
fcilmente con la saliva.
Resistencia a la desecacin: las cpsulas poseen muchos grupos polares que al retener
molculas de H2O protegen a la clula frente a la desecacin.

Material de reserva.
Patogenicidad y virulencia: los neumococos sin cpsula son avirulentos.

PARED CELULAR
La pared celular de los organismos procariotas es una estructura rgida que mantiene la
forma caracterstica de cada clula bacteriana. Dependiendo de las especies y de las
condiciones de cultivo, la pared celular puede suponer desde el 10% al 40% del peso
seco de la clula.
Composicin qumica y propiedades de la pared celular bacteriana: las paredes
celulares no son estructuras homogneas sino que poseen distintas capas que varan
segn el tipo de bacteria, existiendo diferencias tanto en su grosor como composicin.
Estas diferencias se utilizan para identificar y clasificar las bacterias, as como
diferenciarlas mediante la tincin de Gram.
La pared celular de las bacterias Gram (-) es ms delgada (10 - 15 nm) que la de las
Gram (+) (20 - 25 nm). Tanto las bacterias Gram (+) como las Gram (-) poseen un
heteropolmero conocido como peptidoglucano o murena, responsable de la rigidez y
fuerza mecnica de la pared celular, de la forma bacteriana y de la resistencia a la lisis
osmtica. Es una red bidimensional que rodea a la clula a modo de saco. Existe
prcticamente en todas las bacterias y es exclusivo de procariotas. Si bien existen ms
de 100 peptidoglucanos distintos, su estructura bsica est compuesta por tres
componentes:
1.- N-acetilglucosamina (NAG)
2.- Acido N-acetilmurmico (NAM)
3.- Pptido de 4 aminocidos o tetrapptido, algunos de los cuales son D-aminocidos.
Para formar una estructura rgida alrededor de la clula, el tetrapptido de una cadena se
une al de otra a travs de un enlace peptdico entre la D-alanina y el cido mesodiaminopimlico. Algunas zonas del peptidoglucano son abiertas por enzimas
bacterianos llamados autolisinas para que as se puedan aadir ms polmeros y la clula
pueda crecer y dividirse.
A parte de dar forma a la clula bacteriana, la pared celular sirve como barrera para
algunas sustancias impidiendo que penetren dentro de la clula y permitiendo el paso a
otras. La importancia de la pared celular se comprende en parte gracias a experimentos
usando enzimas que la degradan. La pared celular de una bacteria Gram (+) se destruye
completamente con el uso de estos enzimas obtenindose unas clulas esfricas
llamadas protoplastos. La pared celular de las Gram (-) es ms resistente a este
tratamiento, manteniendo restos de su pared celular originando esferoplastos. Tanto los
protoplastos como los esferoplastos se lisan si los colocamos en un medio hipotnico.
Pared celular de las bacterias Gram (+): Contiene una sola capa compuesta de
peptidoglucano y cidos teicoicos que son polmeros de glicerol o ribitol fosfatos que se
unen al peptidoglucano o a la membrana citoplasmtica. Al estar cargados (-) pueden

ayudar en el transporte de iones (+).

Pared celular de las bacterias Gram (-): Contiene dos capas, una membrana externa y
una capa de peptidoglucano. El espacio que existe entre la membrana citoplasmtica y
la membrana externa se denomina espacio periplsmico. La capa caracterstica de las
Gram (-) es la membrana externa que acta como barrera selectiva al paso de algunas
sustancias. Su estructura bsica es una bicapa lipdica que contiene fosfolpidos (capa
interna), lipopolisacridos y protenas (capa externa). Esta bicapa est unida al
peptidoglucano a travs de lipoprotenas. De todos estos componentes, los
lipopolisacridos (LPS) son caractersticos de las bacterias Gram (-) y slo se
encuentran en la membrana externa. Los LPS estn compuestos de tres partes unidas
covalentemente:
1.- Lpido A, localizado en la parte interna; compuesto por un disacrido de
glucosamina fosforilado con cidos grasos de cadena larga.
2.- Ncleo polisacardico, localizado en la superficie de la membrana; compuesto por
azcares y KDO (ketodeoxioctnico).
3.- Antgeno O, localizado fuera de la membrana; compuesto por polisacridos que
contienen azcares comunes como galactosa y otros exclusivos de bacterias como la
abecuosa.

MEMBRANA CITOPLASMATICA
Aproximadamente de 7,5 nm, est compuesta fundamentalmente de fosfolpidos (20% 30%) y protenas (50% - 70%). Los fosfolpidos forman una bicapa donde se intercalan
las protenas. En la bicapa lipdica, la parte polar soluble en H2O est alineada hacia
afuera de la bicapa y la parte no polar hacia adentro. Estos fosfolpidos de la membrana
la hacen fluda, permitiendo que las protenas se muevan alrededor. La mayor parte de
las membranas citoplasmticas de procariotas no contienen como ocurre en los
eucariotas esteroles tales como el colesterol por lo que son menos rgidas que las de los
eucariotas.
Funcin de la membrana citoplasmtica:
- Acta como barrera para la mayor parte de las molculas solubles en H2O, siendo
mucho ms selectiva que la pared celular.
- Contiene enzimas biosintticos que actan en la produccin de energa y sntesis de la
pared celular.
- Las clulas bacterianas no contienen orgnulos como las mitocondrias y cloroplastos
de las clulas eucariotas; sin embargo, la membrana citoplasmtica de muchas bacterias
se extiende dentro del citoplasma formando unos tbulos que se llaman mesosomas.
Estos mesosomas pueden localizarse cerca de la membrana citoplasmtica o ms
adentro en el citoplasma. A estos ltimos, los mesosomas centrales, se une el material
nuclear de la clula y se piensa que intervienen en la replicacin del DNA y divisin
celular. Los mesosomas perifricos parecen estar implicados en la secrecin de ciertos
enzimas como son las penicilinasas que destruyen la penicilina. Tambin actan como
centros con actividad respiratoria o fotosinttica ya que este sistema de membranas
aumenta la superficie disponible para estas actividades.

AREA CITOPLASMICA
El citoplasma es un fluido que contiene sustancias disueltas y partculas en suspensin
como los ribosomas. El 80% del citoplasma corresponde a H2O y el resto lo componen
cidos nucleicos, protenas, carbohidratos, lpidos, iones orgnicos, compuestos de bajo
peso molecular y partculas. En este fluido espeso ocurren muchas reacciones qumicas
tales como la sntesis del material celular a partir de los nutrientes (anabolismo).
Ribosomas: son unas partculas donde tiene lugar la sntesis de protenas. Se encuentran
tanto en procariotas como eucariotas. Sin embargo en las clulas bacterianas al no
existir sistemas internos de membranas, los ribosomas se encuentran libres en el
citoplasma o bien asociados a la parte interna de la membrana citoplasmtica. Los
ribosomas estn compuestos de un 60% de RNA y un 40% de protenas. Los ribosomas
bacterianos estn formados por dos subunidades de diferente tamao: 50 S y 30 S que
conjuntamente forman el ribosoma bacteriano 70 S (S = Svedberg units, unidades de
sedimentacin donde influyen el tamao y la forma):
- 50 S: RNA 23 S + RNA 5 S + 35 protenas
- 30 S: RNA 16 S + 21 protenas
Inclusiones: diferentes tipos de sustancias qumicas pueden acumularse y formar
depsitos insolubles en el citoplasma:
Glbulos de sulfuro que sirven de reserva de energa para bacterias que oxidan el H2S.
Grnulos de volutina o grnulos metacromticos que son de polifosfato. Acumulan
fosfato cuando la sntesis de cidos nucleicos est impedida. Se tien de color prpura
con azul de metileno y se usan para identificar ciertas bacterias.
Poly--hidroxibutirato (PHB) es un material lipdico que acta como reserva de fuente
de carbono y energa. Con sudam III se tien de negro.
Glucgeno es un polmero de glucosa que se tie rojo con lugol.

AREA NUCLEAR
Al contrario que los eucariotas, los procariotas no poseen una membrana que englobe al
ncleo. El material nuclear en una bacteria ocupa la zona central de la clula y parece
estar unido a los mesosomas. Este material nuclear llamado nucleoide est formado por
un nico cromosoma circular. Tambin pueden existir plsmidos que son elementos
extracromosmicos compuestos de DNA.

FLAGELOS

Son filamentos helicoidales que se extienden desde el citoplasma a travs de la pared

celular. Los flagelos son los responsables de la movilidad de las bacterias en los
lquidos, llegando a velocidades de 100 m / segundo, lo que equivale a 3000 veces la
longitud de su cuerpo por minuto. El guepardo, uno de los animales ms veloces,
alcanza una velocidad mxima de 1500 veces la longitud de su cuerpo por minuto.
Un flagelo consta de tres partes: cuerpo basal, gancho y filamento. El cuerpo basal que
se encuentra dentro de la clula est compuesto por un cilindro central y varios anillos.
Las bacterias Gram (-) tienen 2 pares de anillos, los exteriores unidos a la pared celular
y los interiores a la membrana citoplsmica. En las bacterias Gram (+) slo existe un
par de anillos, uno est en la membrana citoplasmtica y el otro en la pared celular. Los
flagelos funcionan rotando como un sacacorcho lo que permite a la bacteria moverse en
los lquidos. Los anillos del cuerpo basal, a travs de reacciones qumicas que consumen
energa, rotan el flagelo. El filamento est compuesto de molculas de una protena
llamada flagelina.
No todas las bacterias tienen flagelos (son raros en los cocos) pero en aquellas que los
poseen (muchos bacilos y espirilos) se utilizan como criterio de clasificacin la posicin
y el nmero de flagelos:
Flagelos polares: monotricos, anfitricos y lofotricos
Flagelos peritricos
Las bacterias mviles se mueven en una direccin u otra por diferentes razones. Su
movimiento puede ser aleatorio, o bien acercarse o alejarse de algo que hay en su
ambiente como es buscar luz o alejarse del calor. Tambin exhiben quimiotaxis que es
un movimiento en respuesta a productos qumicos del ambiente. Por ejemplo, las
bacterias se acercan hacia niveles altos de atrayentes como son los nutrientes y se alejan
de los niveles altos de sustancias inhibitorias como es el exceso de sales.

FIMBRIAS O PILI
Son formaciones piliformes, no helicoidales, que no tienen nada que ver con el
movimiento. Suelen ser ms cortos, ms delgados y ms numerosos que los flagelos. Si
bien surgen del citoplasma, no se conoce que posean estructuras de anclaje a la clula.
Estn formados por subunidades de una protena llamada pilina.
Diferentes tipos de pili estn asociados a diferentes funciones siendo las ms conocidas
la adherencia a superficies y la reproduccin sexual de bacterias (conjugacin; paso de
plsmidos a travs del pili de una clula a otra).

III.- ENDOESPORAS BACTERIANAS

Algunas especies de bacterias producen formas de resistencia llamadas esporas que
pueden sobrevivir en condiciones desfavorables tales como el calor o la sequa. Estas

formas son metablicamente inactivas, pero bajo condiciones ambientales apropiadas,

pueden germinar (comenzar a crecer) y llegar a ser clulas vegetativas metablicamente
activas las cuales crecen y se multiplican.
Las esporas que se forman dentro de la clula se llaman endoesporas, producindose
una por clula. Existen distintos tipos segn su forma (ovoides, esfricas) y localizacin
dentro de la clula (centrales, subterminales y terminales). Son muy comunes en el
gnero Clostridium y Bacillus. Cuando una endoespora se libera de la clula madre o
esporangio es muy resistente al calor (varias horas hirviendo en el caso de Clostridium
botulinum). Las causas de la resistencia al calor parecen ser debidas a que durante la
esporulacin ocurre un proceso de deshidratacin por el cual se elimina la mayor parte
del H2O de la espora. A parte, todas las esporas contienen grandes cantidades de cido
dipicolnico (DPA) que no se encuentra en las clulas vegetativas. El DPA en forma de
dipicolinato clcico supone el 5 - 10% del peso seco de la endoespora y parece
localizarse en la parte central de la espora.
Las endoesporas bacterianas se usan como proteccin al contrario que las esporas
fngicas que se usan para reproduccin.

TEMA 4. LA CELULA EUCARIOTICA:

ESTRUCTURA Y FUNCION
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca
1.- CILIOS Y FLAGELOS
2.- PARED CELULAR
3.- MEMBRANA CITOPLASMICA
4.- ORGANULOS CELULARES
Ncleo
Retculo endoplsmico
Aparato de Golgi
Mitocondrias
Cloroplastos
Las clulas eucariotas son generalmente mayores y con una estructura ms
compleja que las clulas procariotas. La morfologa de estos organismos puede
incluir apndices, pared celular, membrana y varias estructuras internas.

CILIOS Y FLAGELOS

Al igual que las bacterias, muchas clulas eucariotas poseen estructuras para la
locomocin denominadas cilios y flagelos. Los cilios de los eucariotas son idnticos a
los flagelos de los eucariotas en estructura, aunque son ms cortos y numerosos. Su

estructura es ms compleja que la de los procariotas, estn compuestos por

microtbulos, 9 pares que rodean un par central todo ello rodeado por una membrana. El
flagelo de los eucariotas se mueve como un ltigo al contrario de los procariotas que lo
hacen rotando como un sacacorchos.

PARED CELULAR

Plantas, algas y hongos poseen pared celular mientras que el resto de los eucariotas no
la poseen. La pared celular mantiene la forma celular y previene de la presin osmtica.
La pared celular de las plantas, algas y hongos son distintas y distinta a la de las
bacterias en cuanto a su composicin y estructura fsica. Por ejemplo, la pared celular de
eucariotas no contiene peptidoglucano. En plantas est compuesta de polisacridos
como la celulosa y pectina. La de los hongos filamentosos contiene quitina y celulosa y
en levaduras manano. En las algas existe celulosa, otros polisacridos y carbonato
clcico.

MEMBRANA CITOPLASMICA

Independientemente de que la clula eucariota posea o no pared celular, posee

membrana citoplasmtica que rodea a la parte principal de la clula. La membrana
semipermeable es una bicapa lipdica que posee insertadas protenas. Algunas de estas
protenas atraviesan enteramente la membrana creando poros a travs de los cuales los
nutrientes entran dentro de la clula. A estas protenas se las denomina permeasas.
Las diferencias existentes entre la membrana de eucariotas y procariotas son:
- Los eucariotas contienen esteroles (fundamentalmente colesterol) que le confieren
rigidez a la membrana.
- En aquellos eucariotas que no poseen pared celular, la membrana est reforzada por
microtbulos de las protenas actina y miosina.
- Los eucariotas no localizan los enzimas implicados en la generacin de energa
metablica en su membrana.

ORGANULOS CELULARES

Dentro de la membrana citoplsmica est el protoplasma que se divide en carioplasma y

citoplasma. El carioplasma es el material que hay dentro de la membrana nuclear,
mientras que el citoplasma es el material existente entre la membrana nuclear y la
membrana citoplsmica. En el citoplasma es donde se encuentran los orgnulos
celulares que son estructuras rodeadas de membrana que realizan funciones especiales,
tales como la fotosntesis y respiracin. Al contrario que los procariotas, el citoplasma
de los eucariotas posee una extensa red de microtbulos y estructuras proteicas que
constituyen el citoesqueleto de la clula. Este citoesqueleto genera la forma de la clula
y a travs de l se mueven los orgnulos en el citoplasma.
a.- Ncleo

El ncleo de los eucariotas se caracteriza por su membrana nuclear; es una doble

membrana la cual se asemeja a dos membranas citoplasmticas juntas, que contiene
muchos poros grandes a travs de los cuales pasan sustancias como protenas y RNA.
Normalmente posee forma esfrica u oval. El ncleo contiene la informacin hereditaria
de la clula en la forma de DNA. En el carioplasma que no se est dividiendo el DNA
est combinado con protenas como las histonas, dndole una apariencia fibrilar. Esta
combinacin de DNA y protenas se llama cromatina. Durante la divisin celular la
cromatina se condensa en cromosomas.
Dentro del carioplasma se encuentra el nucleolo, el cual aparece ms oscuro con el
microscopio electrnico. Alrededor del 5 al 10% del nucleolo es RNA, siendo el resto
protena. Esta estructura es el lugar de sntesis del RNA ribosomal y de los componentes
esenciales del ribosoma. Los componentes proteicos de los ribosomas sintetizados en el
citoplasma entran en el ncleo a travs de los poros nucleares para combinarse con el
RNA ribosomal recin sintetizado. Tanto las protenas como el RNA forman las dos
subunidades de los ribosomas que salen del carioplasma a travs de los poros y se
convierten en funcionales en el citoplasma. Los ribosomas de eucariotas son mayores
que los de procariotas (80 S y 70 S respectivamente). Esto es debido a que las
subunidades de eucariotas son 60 S y 40 S (en procariotas son 50 S y 30 S).
b.- Retculo endoplsmico
El retculo endoplsmico es una red membranosa de sacos y tbulos que a menudo estn
conectados a la membrana nuclear y citoplsmica. Existen dos formas de retculo
endoplsmico: el rugoso y el liso. El rugoso posee ribosomas y el liso no. Las protenas
sintetizadas en el rugoso son liberadas en el citoplasma o pasan a travs de su
membrana dentro de los canales por donde son distribuidas a distintas partes de la
clula. El retculo endoplsmico liso est implicado en la sntesis de glucgeno, lpidos
y esteroides. Los canales del retculo endoplsmico liso tambin sirven para la
distribucin de las sustancias sintetizadas en l.
c.- Aparato de Golgi
Est compuesto de sacos membranosos que tienen vesculas esfricas en sus extremos.
Fue descrito por primera vez por Camillo Golgi en 1898. Es el centro de
empaquetamiento de las clulas eucariotas, responsable del transporte seguro de los
compuestos sintetizados al exterior de la clula. El aparato de Golgi est conectado a la
membrana citoplasmtica donde se fusiona y as poder excretar el contenido fuera de la
clula, proceso que se llama exocitosis. Otra funcin es la de empaquetar ciertos
enzimas sintetizados en el retculo endoplsmico rugoso en unos orgnulos llamados
lisosomas. Estos enzimas catalizan reacciones hidrolticas incluyendo proteasas,
nucleasas, glicosidasas, sulfatasas, lipasas y fosfatasas. El contenido de los lisosomas no
se excreta sino que permanece en el citoplasma y participa en la digestin citoplsmica
de los materiales ingeridos o absorbidos por la clula. El que los enzimas hidrolticos
permanezcan dentro del lisosoma protege a la clula de la accin ltica de estos enzimas.
En adiccin, el aparato de Golgi contiene glicosiltransferasas que unen molculas de
carbohidrato a protenas para formar glicoprotenas.
d.- Mitocondrias
Es un orgnulo citoplsmico donde se generan las molculas de ATP durante la
respiracin aerbica. La membrana interna est muy invaginada y es donde tiene lugar
la conversin de energa. Aunque las mitocondrias son orgnulos de clulas eucariotas

se parecen a las clulas procariotas; contienen sus propios ribosomas, que son 70 S, su
propio DNA el cual es una nica molcula circular que contiene la informacin gentica
necesaria para la sntesis de un limitado nmero de protenas cuya sntesis tiene lugar en
los propios ribosomas de las mitocondrias. Finalmente, las mitocondrias se dividen para
formar nuevas mitocondrias de forma parecida a como lo hacen los procariotas e
independientemente del ncleo celular; sin embargo, no se pueden dividir si se sacan del
citoplasma.
e.- Cloroplastos
Es el lugar donde ocurren las reacciones fotosintticas, donde se utiliza la luz como
fuente de energa para convertir el CO2 en azcar y los tomos de O2 del H2O en
molculas de O2 gaseoso. El cloroplasto es una estructura rodeada por una doble
membrana cuyo interior se denomina estroma. La membrana interna se pliega en el
estroma formando sacos en forma de discos llamados tilacoides, los cuales contienen la
clorofila y los carotenos que intervienen en la fotosntesis. Cada conjunto de tilacoides
se llama grano. Algunos tilacoides se unen a otros de otro grano formando una red. Los
cloroplastos poseen las mismas caractersticas que las mitocondrias (ribosomas 70 S,
DNA circular, fisin binaria). La similitud de las mitocondrias y los cloroplastos con los
microorganismos procariotas di base a la teora endosimbitica del origen de estos
orgnulos.

TEMA 5. NUTRICION MICROBIANA

Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- NUTRICION DE LOS MICROORGANISMOS

II.- NUTRIENTES
1.- MACRONUTRIENTES
2.- MICRONUTRIENTES
3.- VITAMINAS Y HORMONAS
4.- ELEMENTOS TRAZA
III.- PERMEABILIDAD Y TRANSPORTE

I.- NUTRICION DE LOS MICROORGANISMOS

La gran meta que tiene un microorganismo es crecer y dividirse; para ello necesita
duplicar el material que posee. Las clulas utilizan elementos qumicos que provienen
del medio ambiente para transformarlos en los constituyentes caractersticos que
componen dicha clula. Estos compuestos qumicos se llaman nutrientes y el proceso
por el cual una clula transforma estos nutrientes en sus componentes celulares se

denomina anabolismo o biosntesis. La biosntesis es un proceso que requiere energa.

Esta energa se obtiene del medio ambiente. Las clulas pueden utilizar tres tipos
distintos de fuentes de energa: luz, compuestos orgnicos o compuestos inorgnicos.
Aunque algunos organismos obtienen su energa de la luz, la mayor parte lo hacen a
travs de compuestos qumicos. Cuando estos compuestos qumicos se rompen
originando compuestos ms simples se libera energa y a este proceso se le denomina
catabolismo. El resultado colectivo de las reacciones anablicas y catablicas es el
metabolismo.
Cuando los microorganismos se separan de su hbitat (donde adquieren los nutrientes) y
se cultivan en laboratorios o industrias se deben usar medios de cultivo que contengan
los elementos qumicos necesarios para su crecimiento.

II.- NUTRIENTES

Los nutrientes que requiere una clula para su crecimiento se pueden clasificar en los
siguientes grupos:
1.- Macronutrientes: carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno.
2.- Micronutrientes: fsforo, potasio, azufre, magnesio.
3.- Vitaminas y hormonas
4.- Elementos traza: zinc, cobre, manganeso, molibdeno, cobalto.

1.- MACRONUTRIENTES

Carbono. Todos los organismos necesitan carbono en alguna de sus formas. El carbono
forma el esqueleto de los tres ms importantes nutrientes (carbohidratos, lpidos y
protenas) que se utilizan para la obtencin de energa as como material celular. Los
microorganismos que utilizan compuestos orgnicos como fuente de carbono se llaman
heterotrofos y aquellos que utilizan el CO2 como fuente de carbono se llaman
autotrofos.
Hidrgeno y Oxgeno. El hidrgeno y oxgeno forman parte de muchos compuestos
orgnicos. Se encuentran en el H2O, como componentes de nutrientes y en la atmsfera.
Adems el O2 se utiliza en la respiracin aerbica como aceptor terminal de electrones.
Nitrgeno. Todos los organismos requieren nitrgeno. El nitrgeno es metabolizado y
entra a formar parte de las protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared celular.
Las fuentes de nitrgeno que pueden ser utilizadas por diferentes organismos incluyen
el N2 atmosfrico en algunos procariotas, otros utilizan compuestos inorgnicos como
nitratos, nitritos o sales de amonio, mientras que otros requieren compuestos
nitrogenados orgnicos como son los aminocidos o pptidos.

2.- MICRONUTRIENTES (c.a. 0,2 g / l)

Fsforo. El fsforo es esencial para la sntesis de cidos nucleicos y ATP; tambin

forma parte de los fosfolpidos y polmeros de la pared celular. El fsforo se suministra
normalmente como fosfato inorgnico; alternativamente se puede utilizar fosfato
orgnico como son los glicerofosfatos y fosfolpidos.
Potasio. El in potasio acta como coenzima y probablemente como catin en la
estructura de RNA y otras estructuras aninicas celulares.
Azufre. El azufre es necesario para la biosntesis de los aminocidos cisteina, cistina y
metionina. Tambin forma parte de coenzimas como biotina, coenzima A y ferredoxina.
El azufre se suministra en forma inorgnica como sulfato u orgnica como cistina,
cisteina y metionina.
Magnesio. Se utiliza como cofactor de reacciones enzimticas donde acta el ATP.

3.- VITAMINAS Y HORMONAS

Las vitaminas se clasifican en dos grupos, hidrosolubles y liposolubles. Dentro de stas

ltimas la vitamina A, D y E no son necesarias para el crecimiento de las bacterias.
Todas las vitaminas hidrosolubles, excepto el cido ascrbico, son necesarias para el
crecimiento de bacterias. La mayor parte de las vitaminas hidrosolubles son
componentes de coenzimas. En los medios indefinidos se utiliza como fuente de
vitaminas el extracto de levaduras.

4.- ELEMENTOS TRAZA (c.a. 25 mg / l)

En general los requerimientos de elementos traza se conocen slo cualitativamente ya

que es difcil demostrar su requerimiento debido a que las cantidades necesarias se
suelen encontrar a menudo como contaminantes en otros constituyentes del medio. Son
necesarios para activar algunos enzimas; por ejemplo, el Mo6+ se necesita en la
nitrogenasa que es el enzima que cataliza la conversin del nitrgeno atmosfrico en
amonaco en la fijacin biolgica de nitrgeno.
III.- PERMEABILIDAD Y TRANSPORTE

La membrana citoplsmica controla el paso de los nutrientes dentro de la clula, as

como hacia fuera de la clula. Existen 4 mecanismos que regulan el transporte de
nutrientes:
1.- DIFUSION PASIVA
Las molculas de H2O y algunos nutrientes liposolubles pasan libremente a travs de la
membrana hasta equilibrar concentraciones. No hay consumo de energa.
2.- DIFUSION FACILITADA
Los nutrientes se unen a una protena transportadora para atravesar la membrana

pasando de mayor a menor concentracin. No hay consumo de energa.

3.- TRANSPORTE ACTIVO
La mayor parte de los nutrientes son transportados mediante este mecanismo. Este
proceso permite concentrar altos niveles de nutrientes necesarios para las actividades
metablicas dentro de la clula. Hay consumo de energa. El ATP distorsiona el sitio de
unin de la protena transportadora dificultando a la molcula salir de la clula.
4.- TRANSPORTE POR TRANSLOCACION DE GRUPO
En este tipo la protena transportadora es un enzima que aade un grupo fosfato del
cido fosfoenolpirvico al nutriente durante el transporte. Este nutriente alterado ya no
es capaz de unirse a la protena transportadora por lo que se acumula dentro de la clula.

TEMA 6. CULTIVO DE LOS

MICROORGANISMOS: MEDIOS DE CULTIVO
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca
I.- DISEO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
1.- Aporte de nutrientes
2.- pH
3.- Necesidades de gases
4.- Suministro de luz
5.- Control de la temperatura
6.- Otros requerimientos
II.- TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
1.- Estado
2.- Composicin
III.- AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVO PURO
1.- Mtodos para aislar cultivos puros
2.- Mantenimiento y preservacin de cultivos puros
3.- Colecciones de cultivos

I.- DISEO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A la hora de disear un medio de cultivo no slo hay que tener en cuenta los nutrientes
sino tambin las condiciones fsicas que permitan el crecimiento de los
microorganismos.
1.- Aporte de nutrientes
La cantidad y naturaleza de los nutrientes en un medio de cultivo viene determinada por
el rendimiento de un producto en especial adems de los requerimientos nutricionales
del microorganismo.

2.- pH
Un microorganismo puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las
sustancias producidas por el propio microorganismo; por ejemplo:
Utilizacin de carbohidratos ----> Produccin de cidos orgnicos ----> Acidificacin
Catabolismo de protenas ----> Produccin de materiales nitrogenados ---->
Alcalinizacin
Estos cambios pueden llegar a ser tan grandes que inhiban el crecimiento del
microorganismo. Estos cambios se pueden prevenir controlando el pH mediante
sistemas tampn. Uno de los ms utilizados en microbiologa es la combinacin de
KH2PO4 y K2HPO4 tamponando el medio a un pH de aproximadamente 6,8.
3.- Necesidades de gases
Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxgeno y el dixido
de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxgeno libre
clasificndose en cuatro grupos:
i.- Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxgeno libre.
ii.- Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxgeno libre.
iii.- Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en
presencia como en ausencia de oxgeno libre.
iv.- Microaerfilas: bacterias que crecen en presencia de pequeas
cantidades de oxgeno libre.
Para desarrollar bacterias aerobias se incuban los medios de cultivo en agitacin
constante o introduciendo aire estril en el medio.
Los anaerobios estrictos son muy sensibles al O2 por lo que se debe evitar la
exposicin de estos microorganismos al O2. Se puede obtener un ambiente de
anaerobiosis por los siguientes mtodos:
A.- Agregando al medio de cultivo un compuesto reductor, como es el tioglicolato
sdico, para disminuir el contenido de O2.
B.- Quitando el O2 por procedimientos mecnicos y reemplazndolo por N2 o CO2.
C.- Mediante reacciones qumicas dentro del recipiente que contiene el medio de
cultivo inoculado para combinar el oxgeno libre con otro compuesto. Por ejemplo:
al encender una vela se transforma el oxgeno en dixido de carbono.
4.- Suministro de luz
Los organismos fotosintticos debern ser expuestos a una fuente de iluminacin ya
que la luz es su fuente de energa. Esta fuente de iluminacin no debe plantear
problemas de variacin de temperatura, por lo que suelen usarse lmparas
fluorescentes con un desprendimiento mnimo de calor.
5.- Control de la temperatura
El desarrollo de las bacterias depende de reacciones qumicas, y la velocidad con
que se efectan estas reacciones est influda por la temperatura, por lo que la

temperatura puede en parte determinar la velocidad de crecimiento de los

microorganismos. Cada especie microbiana posee una temperatura ptima de
crecimiento clasificndose segn esto en los siguientes grupos:
i.- Psicrfilas: capaces de desarrollarse a 0 C o menos. Su temperatura
ptima es alrededor de los 15 C.
ii.- Mesfilas: crecen mejor entre 25 y 40 C.
iii.- Termfilas: crecen mejor entre 45 y 60 C.
6.- Otros requerimientos
Halfilas: bacterias que para su crecimiento requieren altas concentraciones de sal
(10 - 15%). Son aquellas bacterias aisladas del mar y ciertos alimentos.
Otras bacterias, como las aisladas en las fosas marinas, requieren presiones
superiores a las normales.

II.- TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

1.- Estado:
A.- Medios lquidos
B.- Medios slidos: llevan un agente solidificante (Agar) que es un
polisacrido acdico producido por ciertas algas rojas que gelifica por debajo
de 45 C. Se usa a una concentracin del 1,5%.
C.- Medios semislidos: agar a una concentracin del 0,7%.
2.- Composicin:
A.- Medios sintticos o qumicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente
de nitrgeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca...), otros elementos como
son estimuladores del crecimiento (eritritol para Brucella abortus) pero siempre a
concentraciones conocidas.
B.- Medios complejos o de composicin indefinida. Estos medios llevan
ingredientes como extracto de levadura, peptona, infusin de cerebro, extracto de
carne, etc. que contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la
composicin cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes.
C.- Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con
aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos
(particularmente hetertrofos exigentes). Ejemplo: adiccin de sangre, suero o
extractos de tejidos de animales y plantas.
D.- Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseo el crecimiento
especfico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de
gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una poblacin
microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es selectivo para
autotrofos; adiccionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+);
utilizando maltosa como nica fuente de carbono slo crecern los que usen
maltosa.

E.- Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminacin de

microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento
en dichos medios. Ejemplo: Agar sangre diferencia hemolticos de no hemolticos;
McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (-).
F.- Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento ptimo
ya que el crecimiento rpido y prolfico suele ocasionar la muerte rpida de las
clulas. Ejemplo: al aadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen
cidos, acidificndose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los
medios de mantenimiento.

III.- AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVO PURO

Un cultivo puro es aquel formado por clulas provenientes de una sla inicial y por
tanto pertenecientes a la misma especie y cepa. Es una situacin artificial ya que en la
Naturaleza los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas y
heterogneas. Es un artificio obligado para estudiar cada especie y cepa de
microorganismo en particular.
1.- Mtodos para aislar cultivos puros
i.- Tcnica de siembra por estras en placa.
ii.- Tcnica de vertido en placa.
iii.- Tcnica de enriquecimiento del cultivo: consiste en disear condiciones
de cultivo que favorezcan especficamente al microorganismo que queremos
aislar y que se encuentra en pequeas cantidades.
iv.- Tcnica de las diluciones en serie: se utiliza para microorganismos cuya
proporcin es mayoritaria dentro de la poblacin mixta.
v.- Tcnica de aislamiento de una sola clula mediante un micromanipulador.
2.- Mantenimiento y preservacin de cultivos puros
Se utilizan diversos procedimientos de acuerdo con las caractersticas y la tolerancia
del microorganismo en cuestin:
i.- Resiembra peridica en medios frescos.
ii.- Preservacin de cultivos con una capa de aceite mineral.
iii.- Liofilizacin
iv.- Almacenamiento a temperaturas muy bajas en presencia de agentes
estabilizantes como glicerol o dimetilsulfxido. Nitrgeno lquido (- 196 C).
3.- Colecciones de cultivos
La primera coleccin conocida de cultivos tipo fue la de Kral en Praga
(1900).
Estados Unidos (ATCC) est en Rockville (Maryland).
Francia (CIP) est en el Instituto Pasteur (Pars).
Reino Unido (NCYC) est en Norwich.
Espaa (CECT) est en Valencia.
Alemania (DSM) est en Darmstadt.

Holanda (CBS) est en Baarn.

Japn (IFO) est en Osaka.

CRECIMIENTO MICROBIANO
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca
I.- TIEMPO DE GENERACION
II.- CURVA DE CRECIMIENTO
III.- CRECIMIENTO SINCRONICO
IV.- CULTIVO CONTINUO
V.- DETERMINACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
VI.- EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO
Temperatura
pH
Agua
Oxgeno

I.- TIEMPO DE GENERACION

Las principales reacciones de la sntesis celular son reacciones de polimerizacin,

proceso por el cual los polmeros (macromolculas) se sintetizan a partir de monmeros:
sntesis de DNA, RNA y protenas; que una vez sintetizadas se ensamblan formando las
estructuras celulares tales como la envuelta celular, flagelos, ribosomas, cuerpos de
inclusin, etc. En la mayor parte de los microorganismos este crecimiento contina
hasta que las clulas se dividen en dos nuevas clulas. El tiempo que requiere una clula
para completar su ciclo es muy variable y depende de factores nutricionales y genticos.
El intervalo que transcurre en la formacin de dos clulas a partir de una clula se llama
generacin y el tiempo requerido para esto es el tiempo de generacin.
Clculo del tiempo de generacin
Tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido para que una clula se divida o una
poblacin se duplique.
t
G = ----n
Si partimos de una clula al cabo de una generacin habr duplicado su nmero y
as sucesivamente en cada generacin. Como se puede comprobar el crecimiento se
produce en progresin geomtrica:

1 generacin -------------> 2 clulas = 21

2 generaciones -------------> 4 clulas = 22
3 generaciones -------------> 8 clulas = 23
4 generaciones -------------> 16 clulas = 24
5 generaciones -------------> 32 clulas = 25

Si partimos de N clulas (en microbiologa los estudios se realizan con poblaciones), a

un tiempo determinado (Ta) tenemos un nmero de clulas determinadas (Na). En la
primera generacin se duplicar el nmero de clulas (2Na) y as sucesivamente de tal
manera que al cabo de un tiempo determinado Tb el nmero de clulas determinadas
ser Nb (Nb = 2n Na) donde n es el nmero de generaciones transcurridas desde Ta
hasta Tb. En esta frmula (Nb = 2n Na) conocemos todos los parmetros excepto el
nmero n de generaciones transcurridas por lo que aplicando logaritmos ser posible
calcularlo. Una vez obtenido el nmero de generaciones n transcurridas en un tiempo t
podremos calcular el tiempo de generacin G para ese microorganismo.
Ta -------------> Na
1 generacin -------------> 2Na = 21 Na
2 generaciones -------------> 4Na = 22 Na
3 generaciones -------------> 8Na = 23 Na
4 generaciones -------------> 16Na = 24 Na
5 generaciones -------------> 32Na = 25 Na
n generaciones (Tb) -------------> Nb = 2n Na
Nb = 2n Na
lg Nb = n lg 2 + lg Na
lg Nb - lg Na
n = -----------------------lg 2
lg Nb / Na
n = ---------------lg 2
Nb
n = 3,3 lg -------Na
t
G = -------------------3,3 lg Nb / Na
El tiempo de generacin de la levadura Saccharomyces cerevisiae es de 90 minutos
y el de la bacteria Escherichia coli es 20 minutos. Esta bacteria tiene un crecimiento
muy rpido de tal manera que a partir de una sla clula se obtienen al cabo de 8
horas (8 x 60 = 480 minutos; 480 : 20 = 24 generaciones; 224 = 2 x 106 clulas)
2 millones de clulas. Esta misma bacteria al cabo de dos das se habra
multiplicado hasta 2,2 x 1043 clulas. Una bacteria pesa aproximadamente 10-15 10-11 gramos por lo que el peso de todas estas clulas es de aproximadamente 2,2
x 1030 gramos que equivalen a 8 veces el peso de la Tierra.

II.- CURVA DE CRECIMIENTO

Es la representacin grfica del logaritmo del nmero de clulas frente al tiempo. La

curva terica sera una recta pues los microorganismos estaran creciendo
constantemente pero en la prctica la curva presenta distintas fases:

Fase de latencia: perodo de adaptacin de un microorganismo a un nuevo

medio de cultivo.
Fase exponencial o logartmica: aumento regular de la poblacin que se
duplica a intervalos regulares de tiempo (G).
Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por
acumulacin de productos txicos, etc.
Fase de declinacin o muerte: el nmero de clulas que mueren es
mayor que el nmero de clulas que se dividen.

Las propiedades de un microorganismo dependern de la fase de la curva en que se

encuentren (la produccin de antibiticos se lleva a cabo en la fase estacionaria).

III.- CRECIMIENTO SINCRONICO

Hasta ahora se ha descrito el modelo de crecimiento de poblaciones bacterianas. Estos

estudios no permiten concluir nada sobre el tipo de crecimiento de las distintas clulas
ya que en la mayora de los cultivos bacterianos el tamao celular est distribuido al
azar. Para obtener informacin sobre el tipo de crecimiento de las distintas bacterias
debe recurrirse a los cultivos sincrnicos, es decir, cultivos en los que todos los
individuos de una poblacin estn en la misma etapa del ciclo celular. Esto se puede
conseguir por diversas tcnicas:
Induccin: cambios repetitivos de temperatura o suministrando nutrientes.
Seleccin: filtracin o centrifugacin diferencial.
Una curva de crecimiento sincrnico es del siguiente tipo: el nmero de clulas del
cultivo permanece aproximadamente constante durante el tiempo en el que las clulas
recin formadas aumentan de tamao; luego, el nmero de clulas se duplica de manera
brusca.

IV.- CULTIVO CONTINUO

Consiste en mantener la poblacin microbiana en fase exponencial de crecimiento. Se

utiliza en fermentaciones industriales que requieren actividad metablica mxima. Los
sistemas de cultivo contnuo pueden hacerse funcionar como quimiostatos o como
turbidostatos. En un quimiostato la velocidad de flujo de entrada y salida de nutrientes
se mantiene a un valor determinado de tal manera que la velocidad de crecimiento del
cultivo queda ajustada a esa velocidad de flujo. En un turbidostato el sistema incluye un
dispositivo ptico que regula la turbidez controlando la velocidad de flujo.

V.- DETERMINACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo
mediante el recuento celular (microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso
seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular (grado de actividad
bioqumica en relacin al tamao de la poblacin). Todos estos mtodos se clasifican en
dos apartados: mtodos directos y mtodos indirectos.

Mtodos directos:
o Recuento del nmero de clulas en una cmara Thoma
o Peso seco celular
o Determinacin de nitrgeno o de protenas totales
o Determinacin de DNA
Mtodos indirectos:
o Recuento de colonias en placa
o Recuento sobre filtro de membrana
o Consumo de oxgeno
o Liberacin de dixido de carbono
o Concentracin de un enzima constitutivo
o Decoloracin de un colorante
o Incorporacin de precursores radiactivos
o Medida de la turbidez

VI.- EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO

No todos los microorganismos responden de la misma manera a los factores

ambientales, lo que para unos puede ser beneficioso para otros es perjudicial.
Temperatura
Es de los factores ambientales que ms influye en el crecimiento de los
microorganismos. Al aumentar la temperatura aumenta la velocidad de las reacciones
enzimticas hasta una cierta temperatura a la cual las protenas, DNA y otras
macromolculas son sensibles y se desnaturalizan. Cada microorganismo tiene una
temperatura mnima, ptima y mxima de crecimiento. La temperatura ptima siempre
est ms cerca de la temperatura mxima que de la mnima.
Psicrfilos: temperatura ptima baja (Pseudomonas, Flavobacterium,
Alcaligenes)
Mesfilos: temperatura ptima normal (la mayor parte de los organismos)
Termfilos: temperatura ptima alta (microorganismos aislados de reas
volcnicas)
Termfilos extremos: temperatura ptima muy alta (Thermococcus celer
103 C)
pH

Debido a que los microorganismos cambian el pH del medio cuando crecen se debe
aadir un tampn en el medio para mantener el pH constante. Estos tampones
funcionan en un rango de pH por lo que se deben utilizar diferentes tampones
dependiendo del pH que se quiera en el medio. Para pH neutros se utiliza el tampn
fosfato. Los ambientes naturales tienen un rango de pH que oscila entre 5 y 9. Los
microorganismos que crecen a pH inferiores a 5 se denominan acidfilos
(Thiobacillus pH: 0,5). Los microorganismos que crecen a pH superiores a 9 se
denominan alcalinfilos (Bacillus pH: 11).
Agua
Todos los organismos requieren H2O para vivir. Las sustancias absorben en mayor o
menor medida molculas de H2O que no estn disponibles para los organismos.
Esta disponibilidad del H2O es lo que se llama potencial de agua (aw) cuyos
valores van de 0 a 1. El aw del H2O pura es 1; el aw de los frutos secos es 0,7; el
aw de los campos de cultivo se sita entre 0,9 y 1,0.
Halfilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de sales.
Osmfilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de
azcares.
Xerfilos: microorganismos que viven en ambientes secos.
Oxgeno

Aerobios
o
o

Obligados Requieren O2 para crecer (21 %)

Facultativos No requieren pero crecen mejor en presencia de O2

Micraerfilos Requieren pero a niveles ms bajos que los atmosfricos (1 15 %)

Anaerobios
o Aerotolerantes No requieren y crecen peor cuando el O2 est
presente
o Obligados La presencia de O2 es letal

TEMA 8. CONTROL DE LAS POBLACIONES

MICROBIANAS: ESTERILIZACION Y
DESINFECCION
Dr. Pedro F. Mateos

Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de

Salamanca

I.- DEFINICIONES Y CONCEPTOS

II.- MUERTE DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS Y CURVAS DE SUPERVIVENCIA
III.- CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACCION ANTIMICROBIANA

IV.- AGENTES ESTERILIZANTES FISICOS

1.- Altas Temperaturas
A.- Esterilizacin por calor hmedo
Autoclave
Tindalizacin
Pasteurizacin
B.- Esterilizacin por calor seco
Horno Pasteur
Incineracin
2.- Bajas Temperaturas
3.- Radiaciones
A.- Radiaciones ionizantes
B.- Radiaciones no ionizantes
4.- Filtracin
A.- Filtros de membrana
B.- Filtros HEPA
5.- Desecacin
V.- AGENTES ESTERILIZANTES QUIMICOS
1.- Oxido de etileno
2.- Glutaraldehido
VI.- DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS
A.- Inorgnicos
1.- Metales
2.- Acidos y lcalis
3.- Compuestos inorgnicos oxidantes
4.- Halgenos
B.- Orgnicos
1.- Alcoholes
2.- Fenol y compuestos fenlicos
VII.- EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS DESINFECTANTES
Y ANTISEPTICOS
1.- Tcnica de dilucin en tubo
2.- Tcnica de la placa de agar
3.- Tcnica del coeficiente fenlico
I.- DEFINICIONES Y CONCEPTOS

Esterilizacin: eliminacin de toda forma de vida, includas las esporas.

Desinfeccin: proceso de destruir los agentes infecciosos.
Antisepsia: operaciones o tcnicas encaminadas a crear un ambiente que impida el
desarrollo de los microorganismos e incluso pueda matarlos.
Asepsia: tcnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de
trabajo.
Antibiosis: fenmeno biolgico en el que existe una detencin o destruccin del
crecimiento microbiano debido a sustancias producidas por otro ser vivo.

Antimicrobianos: sustancias que matan o inhiben el crecimiento de los

microorganismos (antibacterianos, antifngicos, etc.).
Microbicidas: sustancias que matan las formas vegetativas, pero no necesariamente las
esporas de un microorganismo (bactericida, fungicida, etc.).
Microbiostticos: sustancias que inhiben el crecimiento de microorganismos
(bacteriostticos, fungistticos, etc.).
Antispticos: se refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo.
Desinfectantes: se refiere a sustancias empleadas sobre objetos inanimados.
Agentes teraputicos: antimicrobianos empleados en el tratamiento de infecciones.
Agentes quimioteraputicos: sustancias qumicas empleadas en el tratamiento de
enfermedades infecciosas o enfermedades causadas por la proliferacin de clulas
malignas.
Antibiticos: sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser
vivo.

II.- MUERTE DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS Y CURVAS DE

SUPERVIVENCIA

Criterio de muerte de un microorganismo: prdida irreversible de la capacidad de

reproduccin en un medio adecuado. Para poder determinar la eficacia antimicrobiana
(la muerte de los microorganismos) se utilizan tcnicas que descubran a los
sobrevivientes es decir, a los capaces de reproducirse; ya que los incapaces de
reproducirse estn muertos. Esto se determina generalmente mediante mtodos
cuantitativos de siembra en placa en los que los supervivientes se detectan porque
forman colonias.
Cuando una poblacin microbiana se expone a un agente letal, la cintica de la muerte
es casi siempre exponencial ya que el nmero de supervivientes disminuye de forma
geomtrica con el tiempo. Si representamos grficamente el logaritmo del nmero de
supervivientes frente al tiempo se obtiene una lnea recta cuya pendiente negativa define
la tasa de mortalidad. Esta tasa de mortalidad nos dice slamente que fraccin de la
poblacin inicial sobrevive a un determinado perodo de tratamiento. Para determinar el
nmero real de sobrevivientes es necesario conocer adems el tamao inicial de la
poblacin. De acuerdo con esto, para establecer los procedimientos de esterilizacin hay
que tener en consideracin dos factores: la tasa de mortalidad y el tamao de la
poblacin inicial. En la prctica de la esterilizacin la poblacin microbiana que ha de
ser destruida es mixta. Como los microorganismos difieren ampliamente en su
resistencia a los agentes letales, los factores que se hacen significativos son el tamao
de la poblacin inicial y la tasa de mortalidad de los miembros ms resistentes de la
poblacin mixta. Para asegurar la fiabilidad de los mtodos de esterilizacin se utilizan
suspensiones de esporas de resistencia conocida. Los procedimientos rutinarios de

esterilizacin se disean siempre de forma que proporcionen un amplio margen de

seguridad.

III.- CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACCION ANTIMICROBIANA

Temperatura: a mayor temperatura mayor accin.

Tipo de microorganismo: las clulas vegetativas en desarrollo son mucho ms
susceptibles que las esporas.
Estado fisiolgico de las clulas: las clulas jvenes son ms vulnerables que las
viejas.
Ambiente:

El calor es ms eficaz en un medio cido que en uno alcalino.

La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye marcadamente en la
penetracin del agente.
Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan, por lo general, la
resistencia trmica de los organismos.
La presencia de materia orgnica extraa reduce notablemente la eficacia de
los agentes qumicos antimicrobianos por inactivar stos o proteger al
microorganismo.

IV.- AGENTES ESTERILIZANTES FISICOS

1.- Altas Temperaturas

La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los mtodos
ms efectivos para destruir microorganismos. Hay que distinguir entre calor hmedo y
calor seco. El hmedo mata los microorganismos porque coagula sus protenas siendo
ms rpido y efectivo que el calor seco que los destruye al oxidar sus constituyentes
qumicos. La accin letal del calor es una relacin de temperatura y tiempo afectada por
muchas condiciones. Por ejemplo, las esporas de Clostridium botulinum son destruidas
en 4 a 20 minutos a 120 C en calor hmedo, mientras que se necesitan alrededor de 2
horas de exposicin al calor seco para obtener los mismos resultados.
A.- Esterilizacin por calor hmedo: (se utiliza para soluciones acuosas)
Autoclave: El calor en la forma de vapor a saturacin y a presin es el agente ms
prctico para esterilizar ya que el vapor a presin proporciona temperaturas superiores a
las que se obtienen por ebullicin. El aparato utilizado se llama autoclave (una olla que
regula la presin interna y el tiempo). Los autoclaves de laboratorio se emplean
generalmente a una presin de vapor de una atmsfera por encima de la presin
atmosfrica lo cual corresponde a una temperatura de 120 C. El tiempo de exposicin
depende del volumen del lquido, de tal manera que para volmenes pequeos (hasta
unos 3 litros) se utilizan 20 minutos a 120 C; si los volmenes son mayores debe
alargarse el tiempo de tratamiento. Algunos materiales no se deben esterilizar en el
autoclave. Sustancias que no se mezclan con el agua no pueden ser alcanzadas por el

vapor sobreviviendo los microorganismos que contengan. Otras sustancias se alteran o

son destruidas por tratamientos prolongados de calor emplendose en estos casos otros
mtodos de esterilizacin.
Tindalizacin: Se utiliza cuando las sustancias qumicas no pueden calentarse por
encima de 100 C sin que resulten daadas. Consiste en el calentamiento del material de
80 a 100 C hasta 1 hora durante 3 das con sucesivos perodos de incubacin. Las
esporas resistentes germinarn durante los perodos de incubacin y en la siguiente
exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas.
Pasteurizacin: La leche, nata y ciertas bebidas alcohlicas (cerveza y vino) se
someten a tratamientos de calor controlado que slo matan a ciertos tipos de
microorganismos pero no a todos. La leche pasteurizada no es estril. La temperatura
seleccionada para la pasteurizacin se basa en el tiempo trmico mortal de
microorganismos patgenos (es el tiempo ms corto necesario para matar una
suspensin de bacterias a una temperatura determinada). Mycobacterium tuberculosis es
de los microorganismos patgenos ms resistentes al calor que puede transmitirse por la
leche cruda y se destruye en 15 minutos a 60 C. Posteriormente se descubri que
Coxiella burnetti, agente causal de la fiebre Q, se encuentra a veces en la leche y es ms
resistente al calor que Mycobacterium tuberculosis por lo que la pasteurizacin de la
leche se realiza a 62,8 C durante 30 minutos o a una temperatura ligeramente superior,
71,7 C durante 15 segundos (Flash-Pasteurizacin).
B.- Esterilizacin por calor seco: (se utiliza para materiales slidos estables al calor)
Horno Pasteur: El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de
vidrio y otros materiales slidos estables al calor. El aparato que se emplea es el horno
Pasteur. Para el material de vidrio de laboratorio se consideran suficientes dos horas de
exposicin a 160 C.
Incineracin: La destruccin de los microorganismos por incineracin es una prctica
rutinaria en los laboratorios. Las asas de siembra se calientan a la llama de mecheros
Bunsen. La incineracin tambin se utiliza en la eliminacin de residuos hospitalarios.
2.- Bajas Temperaturas

En general, el metabolismo de las bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de

0 C. Sin embargo estas temperaturas no matan a los microorganismos sino que pueden
conservarlos durante largos perodos de tiempo. Esta circunstancia es aprovechada por
los microbilogos para conservar los microorganismos indefinidamente. Los cultivos de
microorganismos se conservan congelados a -70 C o incluso mejor en tanques de
nitrgeno lquido a -196 C.
3.- Radiaciones

A.- Radiaciones ionizantes

Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos
istopos radiactivos como es el Co60 pero son difciles de controlar ya que este istopo

emite constantemente los rayos gamma en todas direcciones. Estos rayos gamma
pueden penetrar los materiales por lo que un producto se puede empaquetar primero y
despus esterilizar.
Rayos catdicos (Radiacin con haz de electrones): Se usan para esterilizar material
quirrgico, medicamentos y otros materiales. Una ventaja es que el material se puede
esterilizar despus de empacado (ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la
temperatura ambiente.
B.- Radiaciones no ionizantes
Luz ultravioleta: La porcin ultravioleta del espectro incluye todas las radiaciones
desde 15 a 390 nm. Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen
mayor eficacia como bactericidas (200 - 295 nm). Se usan para reducir la poblacin
microbiana en quirfanos, cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica y
para tratar superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. La luz UV
tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que slo los microorganismos que
se encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la accin de
la luz UV son susceptibles de ser destrudos.
4.- Filtracin

Algunos materiales como los lquidos biolgicos (suero de animales, soluciones de

enzimas, algunas vitaminas y antibiticos) son termolbiles. Otros agentes fsicos como
las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprcticos para esterilizarlos,
por lo que se recurre a la filtracin a travs de filtros capaces de retener los
microorganismos. Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeo
tamao de los poros del filtro y en parte por adsorcin a las paredes del poro durante su
paso a travs del filtro debido a la carga elctrica del filtro y de los microorganismos.
Debido al pequeo tamao de los virus, nunca es posible tener certeza de que, por los
mtodos de filtracin que dejan libre de bacterias una solucin, se van a eliminar
tambin los virus.
A.- Filtros de membrana
Los filtros de membranas son discos de steres de celulosa con poros tan pequeos que
previenen el paso de los microorganismos. Existen distintos tipos de filtro dependiendo
del tamao de poro. Estos filtros son desechables. Adems de utilizarse en la
esterilizacin de lquidos se usan en el anlisis microbiolgico de aguas ya que
concentran los microorganismos existentes en grandes volmenes de agua.
B.- Filtros HEPA
Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) est compuesto por pliegues de acetato
de celulosa que retienen las partculas (includos los microorganismos) del aire que sale
de una campana de flujo laminar.
5.- Desecacin

La desecacin de las clulas vegetativas microbianas paraliza su actividad metablica.

Este proceso fsico se utilizaba ampliamente antes del desarrollo de la refrigeracin. El
tiempo de supervivencia de los microorganismos despus de desecados depende de
muchos factores, entre ellos la especie microbiana. En general, los cocos Gram (-) son
ms susceptibles a la desecacin que los cocos Gram (+). Las endoesporas bacterianas
son muy resistentes a la desecacin pudiendo permanecer viables indefinidamente.
V.- AGENTES ESTERILIZANTES QUIMICOS

1.- Oxido de etileno: El requerimiento esencial para un agente qumico esterilizante es

que sea voltil as como txico para los microorganismos, de manera que pueda ser
fcilmente eliminado del objeto esterilizado despus del tratamiento. Normalmente se
utiliza el xido de etileno, un lquido que hierve a 10,7 C. Se usa en la industria para la
esterilizacin de placas Petri, jeringas y otros objetos de plstico que se funden a
temperaturas superiores a los 100 C. Debido a su alto poder de penetracin estos
objetos se empaquetan primero y despus se esterilizan. El xido de etileno acta
inactivando enzimas y otras protenas que contienen grupos sulfidrilos (R-SH) mediante
una reaccin llamada alquilacin (R-S-CH2CH2O-H).
2.- Glutaraldehido: Una solucin acuosa al 2% presenta una amplia actividad
antimicrobiana. Es efectivo frente a virus, clulas vegetativas y esporas de bacterias y
hongos. Se usa en medicina para esterilizar instrumentos urolgicos y pticos.
VI.- DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

Esterilizacin: es el proceso de destruccin de todas las formas de vida microbiana.

Desinfeccin: es el proceso de destruccin de los agentes infecciosos.
Desinfectantes: son aquellas sustancias qumicas que matan las formas vegetativas y no
necesariamente las formas de resistencia de los microorganismos patgenos. Se refiere a
sustancias empleadas sobre objetos inanimados.
Antispticos: son aquellas sustancias qumicas que previenen el crecimiento o accin
de los microorganismos ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad.
Se refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo.
A.- INORGANICOS

1.- Metales: Los ms efectivos son el mercurio, plata ,cobre y zinc. Actan inactivando
las protenas celulares al combinarse con ellas. Entre los compuestos de mercurio que
se emplean como antispticos en heridas superficiales de la piel y mucosas estn el
mercurocromo (mercromina) y el mertiolato. Entre los compuestos de plata utilizados
como antispticos est el nitrato de plata (AgNO3) que en solucin al 1% se ha utilizado
para prevenir infecciones gonoccicas en los ojos de los recin nacidos aunque
actualmente se est reemplazando por antibiticos como la penicilina. Entre los
compuestos de cobre se encuentra el sulfato de cobre (CuSO4) que se utiliza como
algicida en los recipientes abiertos que contienen agua. Tambin es fungicida por lo que

se utiliza para controlar las infecciones fngicas de plantas (Mezcla Bordolesa). Los
compuestos de zinc tambin son fungicidas por lo que se utilizan para tratar el pi de
atleta.
2.- Acidos y lcalis: Actan alterando la permeabilidad y coagulando las protenas. En
general los cidos son ms eficaces que los lcalis. Dentro de estos compuestos se
encuentran el sulfrico (H2SO4), ntrico (HNO3), hidrxido sdico (NaOH) e
hidrxido potsico (KOH). Tienen aplicacin limitada debido a su naturaleza custica
y corrosiva. An as el NaOH se utiliza en la industria del vino para limpiar las cubas de
madera.
3.- Compuestos inorgnicos oxidantes: actan oxidando los componentes de la
membrana y enzimas. El agua oxigenada (H2O2) al 6% (20 volmenes) se utiliza como
antisptico en pequeas heridas de la piel.
4.- Halgenos: Los halgenos especialmente el cloro y el iodo son componentes de
muchos antimicrobianos. Los halgenos son agentes fuertemente oxidantes por lo que
son altamente reactivos y destructivos para los componentes vitales de las clulas
microbianas.
Cloro: La muerte de los microorganismos por accin del cloro se debe en parte a la
combinacin directa del cloro con las protenas de las membranas celulares y los
enzimas. As mismo en presencia de agua desprende oxgeno naciente (O) que oxida la
materia orgnica:
Cl2 + H2O ----------------> HCl + HClO (cido hipocloroso)
HClO ----------------> HCl + O (oxgeno naciente)

El gas cloro licuificado se utiliza en la desinfeccin del agua de bebida y piscinas. El

hipoclorito sdico (leja) al 1% se puede utilizar como desinfectante domstico.
Iodo: El mecanismo mediante el cual el iodo ejerce su accin antimicrobiana es debido
a su accin oxidante. Adems la habilidad que tiene el iodo para combinarse con el
aminocido tirosina resulta en la inactivacin de enzimas y otras protenas. El iodo se
puede utilizar como antisptico bajo dos formas: i) tintura de iodo, es una solucin
alcohlica (tintura) de iodo (I2) ms ioduro potsico (KI) o ioduro sdico (NaI). ii)
iodforos, son mezclas de iodo (I2) con compuestos que actan como agentes
transportadores y solubilizadores del iodo. Por ejemplo, la povidona iodada (Betadine)
es un complejo de iodo y polivinil pirrolidona (PVP). Los iodforos tienen la ventaja de
que no tien la piel. Las preparaciones de iodo se utilizan principalmente para
desinfectar la piel as como en la desinfeccin de pequeas cantidades de agua. Los
vapores de iodo se utilizan a veces para desinfectar el aire.
B.- ORGANICOS

1.- Alcoholes: El alcohol metlico (1C) es menos bactericida que el etlico (2C) y
adems es altamente txico. Hay un aumento en el poder bactericida a medida que
aumenta la longitud de la cadena carbonada; pero como los alcoholes con peso
molecular superior al del proplico (3C) no se mezclan en todas las proporciones con el

agua, no se suelen utilizar como desinfectantes. Los alcoholes actan desnaturalizando

las protenas, disolviendo las capas lipdicas y como agentes deshidratantes. El etanol al
96% se usa como antisptico de la piel y como desinfectante en los termmetros
clnicos orales y algunos instrumentos quirrgicos.
2.- Fenol y compuestos fenlicos: Una solucin acuosa al 5% de fenol mata
rpidamente a las clulas vegetativas de los microorganismos. Sin embargo, las esporas
son mucho ms resistentes al fenol. Debido a que el fenol es txico y tiene un olor
desagradable ya casi no se usa como desinfectante o antisptico, siendo reemplazado
por compuestos fenlicos que son sustancias derivadas del fenol menos txicas y ms
activas frente a los microorganismos. Lysol es una mezcla de compuestos fenlicos que
se utiliza para desinfectar objetos inanimados como los suelos, paredes y superficies. El
fenol y compuestos fenlicos actan alterando la permeabilidad de la membrana
citoplsmica as como desnaturalizando protenas.
VII.- EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS
DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

1.- Tcnica de dilucin en tubo: Primero se realizan diferentes diluciones del agente
qumico. El mismo volumen de cada dilucin se dispensa en tubos estriles. A cada tubo
se le aade la misma cantidad de una suspensin del microorganismo utilizado como
prueba. A determinados intervalos de tiempo se transfiere una alcuota de cada tubo a
otro tubo que contenga medio de cultivo. Estos tubos inoculados se incuban a la
temperatura ptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante
24 a 48 horas. Al cabo de este tiempo se examina el crecimiento del microorganismo
mediante la aparicin de turbidez en el tubo (crecimiento +) o ausencia de turbidez
(crecimiento -). Aquellos tubos que presenten crecimiento negativo indican la dilucin a
la cual ese agente qumico mata al microorganismo utilizado como prueba cuando este
microorganismo es expuesto al agente qumico durante ese perodo de tiempo.
2.- Tcnica de la placa de agar: Se inocula una placa que contenga medio de cultivo
slido con el microorganismo utilizado como prueba. El agente qumico se coloca en el
centro de la placa, bien dentro de un cilindro o impregnado en un disco de papel. Al
cabo de 24 a 48 horas se observan zonas de inhibicin (crecimiento -) alrededor del
agente qumico. Una modificacin de esta tcnica es la incorporacin del agente
qumico en el medio de cultivo antes de verterlo sobre la placa. Una vez solidificado se
inocula con el microorganismo utilizado como prueba, se incuba y se examina el
crecimiento microbiano.
3.- Tcnica del coeficiente fenlico: Es una tcnica estandarizada que se utiliza para
comparar el poder desinfectante de un agente qumico frente al del fenol. Es una
modificacin de la tcnica de dilucin en tubo tal como se describe a continuacin: (i)
Se prepara una serie de tubos conteniendo cada uno 5 ml de diferentes diluciones del
desinfectante. (ii) A la vez se prepara una segunda serie de tubos que contengan
diferentes diluciones de fenol. (iii) Cada tubo de las dos series se inocula con 0,5 ml de
un cultivo de 24 horas del microorganismo utilizado como prueba (cepas especficas de
Salmonella typhi o Staphylococcus aureus). (iv) A los 5, 10 y 15 minutos se recoge una
alcuota de cada tubo que se inocula en otro tubo que contenga medio de cultivo estril.
(v) Estos tubos inoculados se incuban durante 24 a 48 horas y se observa el crecimiento
del microorganismo (aparicin de turbidez). (vi) La mayor dilucin del desinfectante

que mate a los microorganismos en 10 minutos pero no los mate en 5 minutos se divide
por la dilucin mayor de fenol que d los mismos resultados. El nmero obtenido es el
coeficiente fenlico de ese desinfectante.

TEMA 9. METABOLISMO MICROBIANO

Dr. Pedro F. Mateos

Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de

Salamanca
I.- CONCEPTO DE METABOLISMO
II.- CLASIFICACION DE LOS ORGANISMOS SEGUN SU FUENTE DE CARBONO Y
ENERGIA
III.- LA ENERGIA Y EL PODER REDUCTOR EN EL METABOLISMO MICROBIANO:
PAPEL DEL ATP Y DE LOS PIRIDIN NUCLEOTIDOS
IV.- MECANISMOS DE OBTENCION DE ATP
1.- Fosforilacin a nivel de sustrato
2.- Fosforilacin oxidativa (Transporte de electrones)
I.- CONCEPTO DE METABOLISMO

El trmino metabolismo se utiliza cuando nos referimos a todos los procesos qumicos
que tienen lugar dentro de una clula. Los elementos qumicos bsicos que utiliza una
clula provienen del medio ambiente y estos elementos qumicos son transformados por
la clula en los constituyentes caractersticos que componen dicha clula. Estos
compuestos qumicos se llaman nutrientes y el proceso por el cual una clula transforma
estos nutrientes en sus componentes celulares se denomina anabolismo o biosntesis. La
biosntesis es un proceso que requiere energa. Esta energa se obtiene del medio
ambiente. Las clulas pueden utilizar 3 tipos distintos de fuente de energa: luz,
compuestos orgnicos y compuestos inorgnicos. Aunque algunos organismos obtienen
su energa de la luz, la mayor parte lo hacen a travs de compuestos qumicos. Cuando
estos compuestos qumicos se rompen originando compuestos ms simples se libera
energa. Este proceso se denomina catabolismo. Las clulas tambin necesitan energa
para otras funciones celulares como es la motilidad (movimiento celular) y transporte de
nutrientes. Como hemos visto existen dos procesos bsicos de transformaciones
qumicas en las clulas: anabolismo y catabolismo. El resultado colectivo de las
reacciones anablicas y catablicas es el metabolismo.

II.- CLASIFICACION DE LOS ORGANISMOS SEGUN SU FUENTE DE CARBONO

Y ENERGIA
FUENTE DE ENERGIA
FUENTE DE CARBONO
FOTOTROFOS
QUIMIOTROFOS
AUTOTROFOS

LUZ
QUIMICA

CO2

HETEROTROFOS

COMPUESTOS ORGANICOS
FUENTE DE ENERGIA

FUENTE DE CARBONO

LUZ
LUZ
QUIMICA
QUIMICA

CO2
COMPUESTOS ORGANICOS
CO2
COMPUESTOS ORGANICOS

FOTOAUTOTROFOS
FOTOHETEROTROFOS
QUIMIOAUTOTROFOS
QUIMIOHETEROTROFOS

Fotoautotrofos:Vegetales, algas, bacterias fotosintticas.

Fotoheterotrofos: Bacterias
Quimioautotrofos: Bacterias.
Quimioheterotrofos: Animales, Protozoos, bacterias.

III.- LA ENERGIA Y EL PODER REDUCTOR EN EL METABOLISMO

MICROBIANO: PAPEL DEL ATP Y DE LOS PIRIDIN NUCLEOTIDOS

La energa qumica es la energa liberada cuando un compuesto orgnico o inorgnico

es oxidado. En biologa las unidades de energa ms usadas son la kilocalora (Kcal) y el
kilojulio (KJ). 1 Kcal = 4.184 KJ. La utilizacin de energa qumica en los organismos
vivos est implicada con las reacciones de oxidacin-reduccin, llamadas REDOX ya
que por cada oxidacin que ocurre tiene que haber una reduccin. Una oxidacin se
define como la eliminacin de electrones de una sustancia y una reduccin se define
como la adicin de electrones a una sustancia. En bioqumica, las oxidaciones y
reducciones frecuentemente conllevan no slo la transferencia de electrones, sino de
tomos enteros de hidrgeno.
La energa liberada como resultado de las reacciones redox debe de conservarse para ser
utilizada por la clula. En los organismos vivos, la energa qumica liberada en las
reacciones redox se transfiere normalmente a una variedad de compuestos fosfato en la
forma de enlaces fosfato de alta energa. El compuesto ms importante en los
organismos vivos que contiene enlaces fosfato de alta energa es el adenosn trifosfato
(ATP). El ATP contiene 2 enlaces fosfato de alta energa. Se puede considerar que el
ATP tiene por objeto "atrapar" una parte de la energa libre que queda disponible en las
reacciones catablicas e impulsar reacciones biosintticas al activar ciertos metabolitos
intermediarios de la biosntesis.
Adems del ATP, existen otros compuestos de alta energa que activan intermediarios
metablicos y as impulsan ciertas reacciones de biosntesis:
Compuestos de alta energa
Guanina, Uridina
Citidina
Desoxitimidina
Acetil coenzima A

Causa activacin en la biosntesis de:

Protenas, Peptidoglicano, Glucgeno
Fosfolpidos
Lipopolisacridos
Acidos grasos

Ya hemos dicho que cuando ocurre una oxidacin tiene que haber una reduccin, es
decir una sustancia que acepte los electrones eliminados. En la mayor parte de los
casos, cada etapa de oxidacin de un metabolito implica la eliminacin de dos
electrones y, por ello, la prdida simultnea de dos protones; esto equivale a la
eliminacin de dos tomos de hidrgeno y se denomina deshidrogenacin.
Inversamente, la reduccin de un metabolito implica la adiccin de dos electrones y

de dos protones y se considera una hidrogenacin. Los compuestos que con ms

frecuencia llevan a cabo oxidaciones y reducciones biolgicas (es decir, que sirven
como aceptores de tomos de hidrgeno liberados en las reacciones de
deshidrogenacin y como donadores de tomos de hidrgeno requeridos para las
reacciones de hidrogenacin) son dos piridn nucletidos: nicotinamida adenn
dinucletido (NAD) y nicotinamida adenn dinucletido fosfato (NADP). Estos dos
piridn nucletidos pueden fcilmente sufrir oxidaciones y reducciones reversibles
en el grupo nicotinamida. La oxidacin-reduccin reversible del NAD y del NADP
puede simbolizarse as:
NAD+ + 2H -----> NADH + H+
oxidado
reducido
NADP+ + 2H -----> NADPH + H+
IV.- MECANISMOS DE OBTENCION DE ATP

En el metabolismo, el ATP se genera por dos mecanismos bioqumicos

fundamentalmente diferentes: Fosforilacin a nivel de sustrato y fosforilacin oxidativa.
1.- Fosforilacin a nivel de sustrato: Mediante la fosforilacin a nivel de sustrato, el
ATP se forma a partir de ADP por transferencia de un grupo fosfato de alta energa de
un intermediario de una ruta catablica. La siguiente reaccin sirve de ejemplo:
Acido 2 fosfoglicrico -----> Acido fosfoenolpirvico + ADP -----> Acido pirvico +
ATP
Como consecuencia de la prdida de una molcula de H2O, el enlace ster de baja
energa del fosfato del cido 2-fosfoglicrico se convierte en un enlace enlico de alta
energa en el cido fosfoenolpirvico. Este fosfato de alta energa puede luego ser
transferido al ADP con lo que se produce una molcula de ATP.
2.- Fosforilacin oxidativa (Transporte de electrones): En los diferentes modos de
metabolismo microbiano, incluyendo la respiracin y la fotosntesis, el ATP se genera
por transporte de electrones a travs de una cadena de molculas transportadoras que
tienen una orientacin fijada en la membrana celular. Los componentes de la cadena son
molculas transportadoras capaces de sufrir oxidaciones y reducciones de modo
reversible de tal manera que cada miembro de la cadena es capaz de ser reducido por la
molcula transportadora que le precede y oxidado por la que le sigue.
En la cadena de transporte de electrones algunos miembros transportan tomos de
hidrgeno (un electrn ms un protn), mientras que otros transportan slamente un
electrn. La orientacin de los transportadores en la membrana celular es tal que los
transportadores de tomos de hidrgeno realizan el transporte hacia fuera de la clula y
los transportadores de electrones lo realizan hacia el interior con lo que en cada
confluencia se transporta fuera de la clula un protn. La membrana celular es
impermeable a los protones; como resultado, el transporte de electrones retiene una
porcin de energa qumica liberada por la reaccin global de la cadena (oxidacin del
donador primario de electrones por el aceptor terminal de electrones). Esta energa se
utiliza en los sistemas de permeasas, movilidad celular por flagelos y en la sntesis de
ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico. Esta sntesis de ATP est catalizada por un
enzima complejo unido a la membrana la ATP fosfohidrolasa (ATPasa). La fosforilacin
oxidativa se puede explicar aplicando el smil de la generacin de energa elctrica a

travs de agua embalsada. La membrana acta como una presa que retiene el agua (en
este caso los protones que se transportan fuera de la clula a travs de la cadena
transportadora de electrones); en el momento que se abren las compuertas (ATPasa) este
agua liberada (protones) mueve la turbina (ATPasa) que genera energa elctrica
(sntesis de ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico).

TEMA 10. MICROORGANISMOS

HETEROTROFOS
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I- MECANISMOS DE OBTENCION DE ENERGIA POR MICROORGANISMOS

QUIMIOHETEROTROFOS
1.- Fermentacin
Resultados de la fermentacin de la glucosa
El efecto Pasteur
2.- Respiracin aerbica
Reacciones anaplerticas
Ciclo del glioxilato
Balance energtico de la respiracin aerbica

I.- MECANISMOS DE OBTENCION DE ENERGIA POR MICROORGANISMOS

QUIMIOHETEROTROFOS

Como ya hemos dicho, los organismos quimioheterotrofos son aquellos que utilizan
compuestos orgnicos como fuente de carbono y energa. Estos organismos son los
animales, protozoos, hongos y casi todas las bacterias. Las vas utilizadas por los
quimioheterotrofos para la oxidacin de compuestos orgnicos y la conservacin de la
energa en ATP se pueden dividir en dos grupos:
1.- Fermentacin: cuando las reacciones redox ocurren en ausencia de cualquier
aceptor terminal de electrones.
2.- Respiracin: cuando se utiliza el oxgeno molecular o algn otro agente oxidante
como aceptor terminal de electrones. Aerbica: oxgeno; Anaerbica: Nitrato, Sulfato,
Fumarato, Oxido de Trimetilamina.

1.- FERMENTACION

Existen muchos tipos de fermentaciones pero en todas ellas slo ocurre una oxidacin
parcial de los tomos de carbono del compuesto orgnico y por lo tanto slo se produce

una pequea parte de la energa disponible.

La oxidacin en una fermentacin est acoplada a la reduccin de un compuesto
orgnico generado a partir del catabolismo del sustrato inicial, por lo que no son
necesarios aceptores externos de electrones. El ATP en la fermentacin se produce a
partir de la fosforilacin a nivel de sustrato. Como consecuencia de la no participacin
de un aceptor externo de electrones, el sustrato orgnico experimenta una serie de
reacciones oxidativas y reductoras equilibradas; los piridn nucletidos reducidos en un
paso del proceso son oxidados en otro. Este principio general se ilustra en dos
fermentaciones: la fermentacin alcohlica (tpica del metabolismo anaerbico de la
glucosa por levaduras) y la fermentacin homolctica (tpica del metabolismo de
algunas bacterias lcticas). Ambos procesos fermentativos utilizan la ruta EmbdenMeyerhof: las dos molculas de NAD reducidas por esta ruta se reoxidan en reacciones
que implican un ulterior metabolismo del piruvato. En el caso de la fermentacin
homolctica, esta oxidacin ocurre como consecuencia directa de la reduccin del cido
pirvico a cido lctico. En el caso de la fermentacin alcohlica, el cido pirvico se
descarboxila primero para formar acetaldehdo y la reoxidacin del NADH ocurre en
paralelo con la reduccin del acetaldehdo para formar etanol.
Las bacterias pueden producir productos fermentativos finales distintos al cido lctico
y al etanol debido a las diferencias en el metabolismo del cido pirvico. Estos
productos finales pueden ser cido frmico, 2,3 butanodiol, isopropanol, cido butrico,
butanol. La mayor parte de las fermentaciones bacterianas pueden originar varios
productos finales, pero ninguna fermentacin da lugar a todos los productos finales.
Resultados de la fermentacin de la glucosa. El resultado final de la glicolisis es el
consumo de glucosa, la sntesis de 2 ATP y la produccin de productos de fermentacin.
Para el organismo el producto ms importante es el ATP y los productos de la
fermentacin son productos de desecho. Sin embargo, estos productos son muy
importantes para el cervecero, panadero, quesero. La fermentacin anaerbica de
glucosa por levaduras produce etanol que es el producto principal de las bebidas
alcohlicas, y la produccin de cido lctico es el paso inicial en la produccin de
productos lcteos fermentados incluyendo el queso. Para los panaderos, la produccin
de CO2 por la fermentacin de levaduras es el paso esencial en el esponjamiento del
pan.
El efecto Pasteur se produce en microorganismos capaces de realizar metabolismo
fermentador y respiracin aerobia (anaerobios facultativos). En presencia de O2 utilizan
la respiracin aerbica, pero pueden emplear la fermentacin si no hay O2 libre en su
medio ambiente. Pasteur fu el primero en observar que el azcar es convertido en
alcohol y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que en presencia de aire se forma
muy poco o nada de alcohol, siendo el CO2 el principal producto final de esta reaccin
aerbica. Este efecto indica el mayor rendimiento energtico de la respiracin sobre la
fermentacin.

2.- RESPIRACION AEROBICA (Rutas de utilizacin del piruvato por aerobios)

La glucosa, tanto en el metabolismo respiratorio como en el fermentativo, se transforma

en cido pirvico por una de las siguientes rutas:

a) Embden-Meyerhof (eucariotas y procariotas)

b) Pentosa fosfato (eucariotas y procariotas)
c) Entner Doudoroff (slo en ciertos procariotas como alternativa a la ruta EmbdenMeyerhof)
En la mayor parte de los aerobios, el piruvato sufre una descarboxilacin oxidativa
catalizada por un sistema enzimtico llamado complejo piruvato deshidrogenasa que
produce acetil-coenzima A (acetil-CoA). El acetil-CoA es un metabolito precursor que
puede entrar en rutas biosintticas; alternativamente, puede ser oxidado completamente
a CO2 a travs de una ruta conocida como ciclo de Krebs o ciclo de los cidos
tricarboxlicos (TCA). Este ciclo es la principal va de generacin de ATP en los
heterotrofos aerbicos (por paso de electrones a travs de una cadena transportadora de
electrones desde los piridn nucletidos reducidos). El ciclo TCA genera adems tres
metabolitos precursores, a-cetoglutarato, succinil-CoA y oxalacetato. El ciclo TCA
efecta la oxidacin completa de una molcula de cido actico a CO2, produce tres
molculas de piridn nucletidos reducidos, una molcula de ATP y una molcula de
FAD reducido (flavoprotena que cede electrones a una cadena de transporte
independiente de piridn nucletidos).
Reacciones anaplerticas. El ciclo TCA, adems de oxidar el acetil CoA (dentro del
ciclo) genera metabolitos precursores que son utilizados en la biosntesis (fuera del
ciclo), por lo que requiere un aporte de cido oxalactico que reponga el utilizado en la
sntesis de los metabolitos precursores. Estas reacciones de sntesis de oxalactico se
denominan anaplerticas y fundamentalmente consisten en reacciones que carboxilan el
piruvato o el fosfoenolpiruvato para obtener oxalacetato. Como resultado, el carbono
procedente del piruvato entra en el ciclo por dos rutas: va acetil-CoA y va piruvato o
fosfoenolpiruvato.
Ciclo del glioxilato. Durante la oxidacin de cido actico o cidos grasos que se
convierten en acetil-CoA sin la formacin intermedia de piruvato, ocurre una
modificacin especial del ciclo TCA conocida como ciclo del glioxilato. Bajo estas
circunstancias no puede generarse oxalacetato a partir de piruvato o fosfoenolpiruvato
(anaplerticas) ya que en los microorganismos aerbicos no existe un mecanismo que
sintetice piruvato a partir de acetato. El oxalacetato requerido para la oxidacin del
acetato se repone mediante la oxidacin de succinato y malato, que se produce por una
secuencia de dos reacciones. En la primera reaccin el isocitrato, que es un
intermediario normal del ciclo TCA, se rompe para dar succinato y glioxilato. En la
segunda reaccin el acetil-CoA se condensa con el glioxilato para formar malato, el
precursor inmediato del oxalacetato. As, el ciclo del glioxilato acta como una
secuencia anaplertica que permite el funcionamiento normal del ciclo TCA.
Balance energtico de la respiracin aerbica. El TCA produce la completa oxidacin
del cido pirvico en 3 molculas de CO2 con la produccin de 4 molculas de NADH
y una molcula de FADH. El NADH y FADH pueden ser reoxidados a travs del
sistema de transporte de electrones originando 3 molculas de ATP por NADH y 2
molculas de ATP por FADH. Tambin se produce una molcula de ATP por
fosforilacin a nivel de sustrato en la oxidacin de a-cetoglutarato a succinato. En total
suman 15 molculas de ATP por ciclo. Como por cada molcula de glucosa se originan
2 molculas de cido pirvico, en total seran 30 molculas de ATP. A estos hay que
aadir las 2 molculas de ATP formadas en la glicolisis y los 2 NADH que en presencia

de O2 pueden ser reoxidados en el transporte de electrones originando 6 molculas de

ATP. En total son 38 ATP por cada molcula de glucosa que contrastan con los 2 ATP
producidos en la fermentacin.

TEMA 11. MICROORGANISMOS AUTOTROFOS

Dr. Pedro F. Mateos

Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de

Salamanca

I.- MECANISMOS DE OBTENCION DE ENERGIA POR MICROORGANISMOS

AUTOTROFOS
1.- Sntesis de metabolitos precursores: Ciclo de Calvin-Benson
2.- Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos
A.- Quimioautotrofos
B.- Fotoautotrofos

Fotosntesis oxignica
Fotosntesis anoxignica

I.- MECANISMOS DE OBTENCION DE ENERGIA POR MICROORGANISMOS

AUTOTROFOS

A diferencia de lo que ocurre en los heterotrofos las reacciones de mantenimiento de los

autotrofos, que obtienen su carbono celular del CO2, tienen lugar en dos fases
bioqumicas distintas:
1.- Sntesis de metabolitos precursores
2.- Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos

1.- Sntesis de metabolitos precursores: Ciclo de Calvin-Benson

Este ciclo es compartido por la mayora de los fotoautotrofos y los quimioautotrofos. La

mayor parte de los autotrofos (aunque hay excepciones) fijan el CO2 mediante una
reaccin catalizada por el enzima ribulosa difosfato carboxilasa que convierte la
ribulosa 1,5-difosfato en cido 3-fosfoglicrico, a partir del cual se sintetizan todos los
metabolitos precursores. Sin embargo, la fijacin de CO2 depende de la disponibilidad
de ribulosa difosfato. Por consiguiente, parte del cido fosfoglicrico debe de utilizarse
para regenerar este aceptor de CO2 (Ribulosa difosfato). El ciclo de Calvin-Benson
puede dividirse en 3 fases:
1.- Fijacin de CO2
2.- Reduccin del CO2 fijado

3.- Regeneracin del aceptor de CO2

El ciclo de Calvin-Benson, en lugar de producir ATP y reducir piridn nucletidos, los
consume. En los autotrofos tales compuestos se sintetizan por otros mecanismos.

2.- Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos

A.- Quimioautotrofos

Los quimioautotrofos obtienen ATP y poder reductor mediante la oxidacin de

compuestos inorgnicos. Los substratos que pueden servir como fuente de energa son
H2, CO, H3N, NO2-, Fe2+ y compuestos reducidos de azufre (H2S, S, S2O3-). En este
tipo de metabolismo respiratorio, los electrones de estos compuestos pasan a travs de
una cadena de transporte de electrones que genera ATP por el modo que opera en los
heterotrofos (fosforilacin oxidativa). El aceptor terminal de electrones de la cadena de
los quimioautotrofos es normalmente el O2. Algunos de estos substratos inorgnicos
(H2 y CO) son agentes reductores suficientemente potentes como para reducir
directamente a los piridn nucletidos, pero otros no lo son. Estos agentes reductores
dbiles (NO2- y Fe2+) reducen los piridn nucletidos por un proceso llamado
transporte inverso de electrones; en el cual parte de la fuerza motora de protones
generada en el funcionamiento de la cadena normal de transporte de electrones se utiliza
para impulsar electrones en una direccin inversa, que de otro modo sera
termodinmicamente desfavorable, a travs de otra cadena que une el sustrato
inorgnico con los piridn nucletidos oxidados que resultan por ello reducidos.
B.- Fotoautotrofos

Los fotoautotrofos obtienen ATP y poder reductor mediante la fotofosforilacin, proceso

por el que los organismos fototrofos convierten la energa radiante de la luz en energa
metablica y poder reductor. Existen dos tipos de fotosntesis, la oxignica y la
anoxignica.
Fotosntesis oxignica: La generacin de ATP y poder reductor se lleva a cabo en dos
centros de reaccin fotoqumica diferentes llamados fotosistema I (PSI) y fotosistema II
(PSII), los cuales contienen clorofila y se localizan en las membranas de los tilacoides.
Estos dos fotosistemas actan de una manera conjunta en cianobacterias, algas y
plantas. i) Cuando la luz es absorbida por las molculas de clorofila existentes en el PSI,
stas molculas de clorofila se fotoactivan lo que les permite oxidarse. Los electrones
eliminados de las molculas de clorofila del PSI son aceptados por el NADP
reducindose a NADPH2. Todo esto deja a las molculas de clorofila del PSI
temporalmente deficientes en electrones lo que les confiere una carga positiva. ii) De la
misma manera, la luz absorbida por las molculas de clorofila existentes en el PSII
provoca que un electrn sea eliminado de cada molcula. Estos electrones pasan a travs
de un sistema transportador de electrones hasta que llegan al PSI donde son aceptados
por las molculas de clorofila deficientes en electrones que se reducen. Este sistema
transportador de electrones es parecido al descrito en la fosforilacin oxidativa,
utilizndose la energa liberada para la sntesis de ATP. La diferencia radica en que el
donador primario de electrones es la clorofila del PSII y el aceptor terminal de

electrones es la clorofila del PSI (NADH2 y O2 respectivamente en la fosforilacin

oxidativa). iii) En este punto la clorofila del PSII es deficiente en electrones. Sin
embargo, esta clorofila es un fuerte agente oxidante que obtiene los electrones
necesarios para reducirse de las molculas de H2O. Esta oxidacin del H2O genera
oxgeno gaseoso. Las cianobacterias, algas y plantas son organismos que generan
oxgeno mediante la fotosntesis oxignica, siendo los responsables de la produccin
mayoritaria del oxgeno que existe en la atmsfera terrestre. La atmsfera de la
primitiva Tierra no contena oxgeno hasta que se desarrollaron las cianobacterias hace
entre 1000 y 3000 millones de aos. El desarrollo de los organismos aerobios slo fu
posible despus de que se acumularan en la atmsfera apreciables cantidades de O2
(generado mediante la fotosntesis oxignica de las cianobacterias).
Fotosntesis anoxignica: Los fototrofos anoxignicos convierten la energa de la luz
en energa qumica necesaria para el crecimiento; sin embargo, y al contrario que las
plantas, algas y cianobacterias en este proceso de transformacin de la energa no se
produce oxgeno y por ello se le llama fotosntesis anoxignica. Otra diferencia es que
los fototrofos anoxignicos contienen un tipo de clrofila, bacterioclorofila, diferente a la
clorofila de las plantas. Estas bacterias contienen adems carotenoides, pigmentos
encargados de la absorcin de la energa de la luz y posterior transmisin a la
bacterioclorofila. El color de estos pigmentos son los que le dan el nombre a estas
bacterias: bacterias rojas y bacterias verdes. En las cianobacterias estos pigmentos
captadores de luz son las ficobilinas, de ah su nombre: bacterias azules
(cianobacterias). En las bacterias rojas y bacterias verdes slo existe un fotosistema, de
tal manera que la energa absorbida de la luz se utiliza para transportar un electrn
desde la clorofila a la cadena de transporte de electrones que finalmente cede el electrn
a la misma clorofila. En esta cadena de transporte de electrones se genera la energa
necesaria para sintetizar ATP. Sin embargo, el transporte de electrones es cclico (el
donador primario de electrones y el aceptor terminal de electrones es la misma clorofila)
no existiendo por lo tanto reduccin de NADP a NADPH. Esta reduccin se lleva a
cabo mediante transporte inverso de electrones gracias a los electrones donados por el
hidrgeno gaseoso (H2) o el sulfuro de hidrgeno (H2S). En cualquier caso nunca se
produce O2.

TEMA 12. BIOSINTESIS

Dr. Pedro F. Mateos

Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de

Salamanca

I.- BIOSINTESIS
1.- Sustancias nitrogenadas
A.- Protenas
B.- Acidos nucleicos
2.- Carbohidratos
3.- Lpidos

I.- BIOSINTESIS

La clula es una excelente "industria qumica" encargada de ensamblar las intrincadas

molculas de la vida. Muchas de estas sustancias qumicas "fabricadas" por las clulas
son tan complejas que todava no han podido ser sintetizadas artificialmente por los
qumicos en el laboratorio. Sin embargo, las bacterias pueden sintetizarlas a partir de los
nutrientes y a temperatura ambiente. Estas sustancias son:
1.- Sustancias nitrogenadas, incluyendo protenas (como son los
enzimas) y cidos nucleicos (DNA y RNA).
2.- Carbohidratos, donde se incluyen polisacridos complejos como es la
parte correspondiente del peptidoglucano de la pared celular.
3.- Fosfolpidos, los cuales son componentes importantes de la membrana
citoplsmica.
1.- SUSTANCIAS NITROGENADAS

A.- Protenas
El cido glutmico es el aminocido ms importante a partir del cual las bacterias
sintetizan otros aminocidos. En Escherichia coli el cido glutmico se obtiene por
reduccin aminada del cido a-cetoglutrico. Este cido glutmico se puede transformar
en otros aminocidos por dos mecanismos:
Transaminacin: el grupo amino del cido glutmico se intercambia por un tomo de
oxgeno de diversos cidos orgnicos convirtindolos en aminocidos. Por ejemplo, la
sntesis de alanina a partir de la transaminacin del cido pirvico:
Acido glutmico (-NH2) + Acido pirvico (=O) --------> Acido a-cetoglutrico (=O) +
Alanina (-NH2)
Alteracin de la estructura molecular: la otra va por la cual el cido glutmico se
utiliza para sintetizar otros aminocidos es alterando su estructura molecular. Estos
cambios estructurales requieren energa en forma de ATP. Un ejemplo es la sntesis de
prolina:
Acido glutmico + ATP + NADH2 --------> Semialdehido del cido glutmico + ADP +
P + NAD --------> H2O + Pirrolina-5-cido carboxlico + NADPH2 --------> Prolina +
NAD
Una vez sintetizados, estos aminocidos deben activarse para as poder ser utilizados en
la sntesis de protenas. Las clulas activan los aminocidos usando la energa del ATP
de la siguiente manera:
Aminocido + ATP --------> Aminocido-AMP + Pirofosfato

La sntesis de protenas se ver en captulos posteriores.

B.- Acidos nucleicos

Los aminocidos son utilizados tambin por las clulas para sintetizar nucletidos
(bloques constituyentes de los cidos nucleicos). Existen dos tipos de nucletidos segn
el azcar que contengan:
Ribonucletidos: ribosa; sntesis de RNA
Deoxiribonucletidos: deoxiribosa; sntesis de DNA
Estos nucletidos tambin se clasifican en dos grupos segn la base nitrogenada
que contengan:
Purinas: adenina o guanina
Pirimidinas: citosina, timina o uracilo
En la biosntesis de las purinas se requieren los aminocidos glicina, asprtico y
glutamina adems de energa en forma de ATP y GTP (guanosina trifosfato). En la
biosntesis de las pirimidinas se requieren los aminocidos glutamina y cido
asprtico as como energa en forma de ATP. En ambos casos la ribosa fosfato se
obtiene a partir de glucosa.
Una vez que se han sintetizado los nucletidos, stos se activan por ATP. En este
proceso el nucletido, que ya contiene un grupo fosfato, adquiere otros dos grupos
fosfato. Por ejemplo, la guanosina monofosfato se activa a guanosina trifosfato:
GMP + 2 ATP --------> GTP + 2 ADP

El ATP, adems de ser una molcula que intercambia energa, es la forma activa de un
nucletido, la adenosina monofosfato (AMP), que se utiliza para sintetizar cidos
nucleicos.
La biosntesis de DNA y RNA a partir de los nucletidos activados la veremos en
captulos posteriores.
2.- CARBOHIDRATOS

Los microorganismos sintetizan carbohidratos mediante diferentes mecanismos segn

sean autotrofos (CO2) o heterotrofos (compuestos orgnicos como la glucosa) a partir
de los cuales obtienen los diferentes monosacridos. Estos monosacridos deben ser
activados para poder ser ensamblados en los polisacridos correspondientes. Por
ejemplo, la forma activada de la glucosa es uridin difosfato glucosa (UDP-Glucosa) y la
fuente de energa usada es ATP y UTP:
Glucosa + ATP + UTP --------> UDP-Glucosa + ADP + Pirofosfato

Biosntesis del peptidoglucano de la pared celular: La sntesis de los polisacridos

bacterianos se puede ilustrar mediante la biosntesis del peptidoglucano. Si bien este
peptidoglucano est localizado en la pared celular, la mayora de la energa utilizada en
este proceso biosinttico se consume dentro de la clula. Los distintos pasos
involucrados en este proceso se sumarizan en:
(i) A partir de glucosa y utilizando ATP y UTP se obtiene N-acetilglucosamina-UDP
(NAG-UDP).
(ii) Algunas de estas molculas de NAG-UDP se utilizan para obtener N-

acetilmurmico-UDP (NAM-UDP). La energa requerida en este paso se obtiene a

partir del fosfoenolpirvico.
(iii) A cada molcula de NAM-UDP se le unen 5 aminocidos para formar una
cadena pentapeptdica. La adicin de cada aminocido requiere energa en forma de
ATP.
(iv) El grupo UDP del NAM-pentapptido-UDP se reemplaza por un lpido llamado
lpido transportador.
(v) A este NAM-pentapptido-lpido transportador se le une una molcula de NAGUDP para formar una unidad completa activada que se insertar en la cadena de
peptidoglucano.
(vi) Esta unidad completa activada se transporta, con la ayuda del lpido
transportador, a travs de la membrana hacia la pared celular.
(vii) Una vez en la pared celular, esta unidad completa activada se une a una
cadena de peptidoglucano alargndose esta cadena en una unidad.
(viii) El ltimo paso es la unin de esta cadena a otras cadenas para formar la
malla del peptidoglucano que constituye la estructura de la pared celular. Esta unin
se inicia con la eliminacin del quinto aminocido de la cadena pentapeptdica,
reaccin catalizada por el enzima transpeptidasa. La rotura de este enlace libera
energa que es utilizada por la transpeptidasa para unir los tetrapptidos de dos
cadenas distintas (el tercer aminocido de una con el cuarto aminocido de otra).
3.- LIPIDOS

Los lpidos ms importantes de las clulas bacterianas son los fosfolpidos que, junto
con las protenas, forman la estructura de la membrana citoplsmica. La va general por
la cual los microorganismos sintetizan fosfolpidos comienza a partir de glucosa (6C)
que a travs de la glucolisis se oxida originando dos molculas de cido pirvico (3C)
que a su vez se descarboxila a acetil-CoA (2C); este acetil-CoA puede carboxilarse para
formar malonil-CoA (3C). Esta ltima reaccin consume energa en forma de ATP:
Acetil-CoA + CO2 + ATP --------> Malonil-CoA + ADP + P

El acetil-CoA y malonil-CoA son las formas activas del cido actico y malnico
respectivamente las cuales se utilizan para sintetizar cidos grasos de cadena larga:
(2C) Acetil-CoA + (3C) Malonil-CoA --------> Acetil-protena + Malonil-protena
--------> (4C) Butiril-protena + CO2 --------> + Malonil-protena --------> (6C)-protena
+ CO2 --------> + Malonil-protena --------> --------> --------> --------> --------> (16C
18C)-protena + CO2
Una vez formados los cidos grasos de cadena larga, stos se utilizan para sintetizar los
fosfolpidos. Para ello se necesita adems glicerol fosfato, compuesto que se obtiene
por reduccin de la dihidroxiacetona fosfato que es un intermediario en la glucolisis. A
cada molcula de glicerol fosfato se le unen dos molculas de cidos grasos de cadena
larga para formar una molcula de cido fosfatdico que es un fosfolpido sencillo a
partir del cual se sintetizan otros fosfolpidos mediante la unin de otros grupos
qumicos al grupo fosfato. Por ejemplo, el aminocido serina se puede adiccionar al

cido fosfatdico para formar fosfatidilserina. La energa que se requiere en esta

reaccin se obtiene a partir de la citidina trifosfato (CTP):
Acido fosfatdico + CTP + Serina --------> Fosfatidilserina + CMP + Pirofosfato

TEMA 17. RELACION HUESPED - PARASITO.

FACTORES DE PATOGENICIDAD
MICROBIANA
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- RELACION HUESPED - PARASITO

II.- MICROBIOTA NORMAL DEL CUERPO HUMANO
1.- Origen de la microbiota
2.- Distribucin de la microbiota normal en el cuerpo humano

Sangre, fluidos corporales y tejidos

Piel
Ojos
Tracto respiratorio
Boca
Tracto gastrointestinal
Tracto genitourinario

3.- Efecto de la microbiota sobre el cuerpo humano

III.- FACTORES DE PATOGENICIDAD MICROBIANA
1.- Puerta de entrada
2.- Tamao del inculo
3.- Mecanismos de invasin y establecimiento del patgeno
Adhesin
Factores de virulencia
Enzimas extracelulares
Toxinas bacterianas
Factores antifagocticos

I.- RELACION HUESPED - PARASITO

La mayor parte de los microorganismos que habitan en el cuerpo humano lo hacen

porque se benefician de los nutrientes y del hbitat protegido que este cuerpo humano
les provee. Pero desde el punto de vista del cuerpo humano esta relacin puede ser
mutualismo, comensalismo o parasitismo, segn sea beneficiosa, neutral o perjudicial,
respectivamente. Independientemente del tipo de relacin, todas comienzan con el
contacto, algunos microorganismos se establecen permanentemente colonizndolo
(microbiota normal), otros desaparecen rpidamente (transeuntes) y otros invaden los
tejidos. Este contacto con los microorganismos conduce a la infeccin, condicin en la
cual el microorganismo patgeno elude las defensas del husped, penetra en los tejidos
y se multiplica. Cuando los efectos acumulativos de la infeccin daan los tejidos se
produce una enfermedad infecciosa. La relacin husped - parsito comienza con el
contacto, progresa a la infeccin y finaliza en enfermedad. Cuando un microorganismo
potencialmente infeccioso est presente en el cuerpo sin invadirlo todava se le
denomina contaminante, por lo que estar contaminado no es lo mismo que estar
infectado ya que no todas las contaminaciones acaban en infeccin y no todas las
infecciones acaban en enfermedad. De hecho, la contaminacin sin infeccin y la
infeccin sin enfermedad es la regla.
1.- Contacto con el microorganismo:
1.1.- Colonizacin (microbiota)
1.2.- Eliminacin por las defensas del husped, lavado o antisepsia (transeunte)
1.3.- Contaminacin
1.3.1.- Infeccin
1.3.1.1.- Destruccin por el sistema inmune
1.3.1.2.- Portadores
1.3.1.3.- Enfermedad
1.3.1.3.1.- Cura por accin del sistema inmune
1.3.1.3.2.- Portador
1.3.1.3.3.- Disfuncin de rganos o tejidos (Morbilidad)
1.3.1.3.4.- Mortalidad

II.- MICROBIOTA NORMAL DEL CUERPO HUMANO

El cuerpo humano debido a que mantiene relativamente estables su pH, temperatura y

un aporte constante de nutrientes, provee un hbitat favorable para una gran cantidad de
microorganismos. De hecho es tan favorable que clula a clula en el cuerpo humano
existen 10 veces ms clulas de microorganismos que humanas. Esta gran mezcla de
microorganismos adaptada al cuerpo humano recibe el nombre de microflora, aunque el
trmino ms preciso es el de microbiota. Esta microbiota incluye bacterias, hongos y
protozoos.

1.- Origen de la microbiota

Antes del nacimiento un feto humano sano est libre de microorganismos. El primer

encuentro del recin nacido con los microorganismos es en el canal del parto y
especialmente en la vagina. El recin nacido adquiere los microorganismos por
contacto superficial, tragando o inhalando. Posteriormente los adquiere a travs de
los objetos y personas que le cuidan (leche artificial: coliformes, lactobacilos,
enterococos; leche materna: Bifidobacterium). Cada parte del cuerpo humano, con
sus condiciones ambientales especiales, tiene su propia mezcla de
microorganismos. Por ejemplo, la cavidad oral adquiere una poblacin natural
diferente a la de los intestinos. En un corto perodo de tiempo (erupcin de los
dientes e introduccin de alimentos slidos) el nio tendr el mismo tipo general de
microbiota que una persona adulta que viva en el mismo ambiente. La naturaleza
de esta microbiota va a depender de factores tales como la frecuencia de lavados,
dieta, prcticas higinicas y condiciones de vida.

2.- Distribucin de la microbiota normal en el cuerpo humano

Sangre, fluidos corporales y tejidos
En individuos sanos la sangre, fluidos corporales y tejidos estn libres de
microorganismos.
Piel
La epidermis junto con la dermis forman una barrera frente a muchos
microorganismos debido a que son impermeables a stos, por lo que a la piel se la
denomina la primera lnea de defensa. La constante exposicin de la piel al medio
ambiente implica que en sta existan muchos microorganismos transeuntes. Sin
embargo la superficie de la piel es hostil a la supervivencia y crecimiento de
muchas bacterias debido a su sequedad, bajo pH (3-5) y sustancias inhibitorias
(lisozima que destruye el peptidoglucano). A pesar de estos factores algunas
bacterias pueden sobrevivir en la piel, crecer y formar la microbiota normal ya que
las glndulas sudorparas y sebceas excretan agua, aminocidos, urea, sales y
cidos grasos que sirven como nutrientes a estos microorganismos. La mayor parte
de estas bacterias son especies de Staphylococcus (S. epidermidis) aunque tambin
existen Micrococcus y Corynebacterium. En la parte ms profunda de las glndulas
sebceas existen bacterias anaerbicas como Propionibacterium acnes que al ser
parte de la microbiota, normalmente no es perjudicial; sin embargo, ha sido
asociado con el acn, una enfermedad de las glndulas sebceas de la piel. Debido
a su localizacin profunda, el nmero de estas propionibacterias se v muy poco
afectado por el lavado o por las soluciones desinfectantes.
Ojos
La conjuntiva es lavada contnuamente por las lgrimas que adems de remover a
los microorganismos contiene lisozima. Consecuentemente, la microbiota de la
conjuntiva es espordica. Los principales microorganismos encontrados son
Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Corynebacterium,
Streptococcus pneumoniae, Neisseria spp.
Tracto respiratorio
El tracto respiratorio es un sitio difcil para la colonizacin de los microorganismos
ya que en el tracto respiratorio alto los microorganismos que estn en el aire
que respiramos pasan a travs de las fosas nasales a la nasofaringe quedando
pegados en el moco el cual contiene lisozima; al pasar este moco a la faringe, las
bacterias atrapadas en el moco pueden ser tragadas y destrudas por el HCl del
estmago. A pesar de sto existen numerosos microorganismos en las fosas
nasales debido a la habilidad de adherirse a las clulas epiteliales de las
membranas mucosas. Las bacterias ms frecuentemente encontradas en las fosas
nasales son Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus; en la nasofaringe

cepas avirulentas de treptococcus pneumoniae. El tracto respiratorio bajo no

posee microbiota debido a que los microorganismos se eliminan mecnicamente por
los cilios de la trquea. Si alguna bacteria pasa a travs de la trquea es fagocitada
por los macrfagos.
Boca
La abundante y constante presencia de alimento disuelto en la boca hacen de ella
un ambiente ideal para el crecimiento bacteriano. Sin embargo, el contnuo flujo de
saliva hace que los microorganismos se tragen y destruyan por el HCl del
estmago. Consecuentemente la mayor parte de los microorganismos que
constituyen la microbiota de la boca resisten estos mecanismos al adherirse
firmemente a las distintas superficies de la cavidad oral. Los dientes son un rea de
esta adherencia bacteriana, de hecho la placa dental es una agregacin de
bacterias y materia orgnica. La caries est iniciada por Streptococcus mutans al
hidrolizar la sacarosa en glucosa y fructosa. La glucosa es polimerizada en glucano
y la fructosa metabolizada a cido lctico. El glucano acta como cemento uniendo
las bacterias a los dientes y el cido lctico acta como abrasivo. Una vez iniciado el
ataque por Streptococcus mutans, otras bacterias como Lactobacillus y Actinomyces
contribuyen como invasores secundarios en el desarrollo de la caries. La microflora
normal de las encas consiste fundamentalmente en bacterias Gram (+) como
Streptococcus sanguis y especies de Actinomyces.
Tracto gastrointestinal
La mayor concentracin de microbiota normal del cuerpo humano se encuentra en
el tracto gastrointestinal.
Estmago: aunque el estmago est recibiendo constantemente bacterias
transeuntes de la cavidad oral, un estmago sano contiene muy pocas bacterias
debido al efecto bactericida del HCl y enzimas digestivos. Los pocos
microorganismos que se encuentran son lactobacilos y levaduras (Candida spp.).
Intestino delgado: en el duodeno sobreviven pocas bacterias debido a la
combinacin del ambiente fuertemente acdico del estmago y la accin inhibitoria
de la bilis. De los microorganismos presentes, la mayora son cocos y bacilos Gram
(+). En el yeyuno se encuentran especies de enterococos, lactobacilos y
corinebacterias. Tambin puede encontrarse la levadura Candida albicans. La ltima
parte del intestino delgado, el leon, posee una microbiota ms abundante y
parecida a la del intestino grueso. En el leon crecen bacterias anaerobias como
Bacteroides y anaerobios facultativos como Escherichia coli.
Intestino grueso: el colon es la parte del cuerpo humano que contiene la mayor
poblacin microbiana. Se calcula que un adulto excreta alrededor de 30 billones de
clulas bacterianas diariamente a travs de la defecacin. Se han aislado alrededor
de 300 especies bacterianas diferentes de las heces humanas. En el intestino
grueso existen 300 veces ms bacterias anaerobias (Bacteroides y Fusobacterium)
que anaerobios facultativos (Escherichia, Proteus, Klebsiella y Enterobacter);
tambin se encuentra la levadura Candida albicans. Una prolongada terapia con
ciertos antibiticos pueden eliminar muchos microorganismos de la microbiota
normal intestinal permitiendo el crecimiento de especies resistentes a los
antibiticos lo que puede causar transtornos gastrointestinales como es la diarrea.
La administracin oral de la bacteria Gram (+) Lactobacillus acidophilus puede
aliviar estos desrdenes intestinales ya que la ingestin de estos microorganismos
reemplaza a los organismos intestinales indeseables. Existen en el mercado muchos
productos comerciales con fines teraputicos que contienen lactobacilos.
Tracto genitourinario
En individuos sanos los riones, urteres y vejiga estn libres de microorganismos
por lo que la orina en la vejiga tambin lo est. Sin embargo existen bacterias en la
parte inferior de la uretra tanto en hombres como mujeres (Staphylococcus
epidermidis, Streptococcus faecalis y corinebacterias) de tal manera que la orina

adquiere estos microorganismos cuando pasa de la vejiga al exterior del cuerpo

humano en la parte inferior de la uretra. El tracto genital femenino tiene una
microbiota compleja. Durante los aos que existe actividad en los ovarios (pubertad
--> menopausia) la microbiota principal de la vagina son lactobacilos cido
tolerantes (bacilos de Doderlein); stos hidrolizan el glucgeno producido por el
epitelio vaginal en estos aos debido a la accin de los estrgenos, formando cido
lctico. Como resultado, el pH de la vagina se mantiene entre 4,4 y 4,6. Los
microorganismos capaces de crecer a este bajo pH son los que se encuentran en la
vagina (enterococos, corinebacterias y Candida albicans). Este glucgeno no est
presente antes de la pubertad ni despus de la menopausia, con lo que las
secreciones vaginales son suavemente alcalinas y contienen microorganismos
normales de la piel y colon.

3.- Efecto de la microbiota sobre el cuerpo humano

Para estudiar el efecto de la microbiota sobre el cuerpo humano se ha recurrido a
experimentos con animales libres de microorganismos o animales axnicos (cesrea
--> incubadores estriles --> alimentos estriles) encontrndose los siguientes
resultados:
1.- Los animales axnicos viven ms tiempo y tienen menos enfermedades que los
controles, siempre y cuando se mantengan en un ambiente estril. Esto significa
que la microbiota no es necesaria para la supervivencia y puede ser incluso la
fuente de agentes infecciosos.
2.- La microbiota contribuye significativamente al desarrollo del sistema inmune.
3.- Los microorganismos son necesarios para el desarrollo normal del intestino.
4.- Los microorganismos son una fuente de vitaminas, especialmente de vitamina K
y vitaminas del complejo B.
5.- La microbiota acta como antagonista frente a patgenos.
III.- FACTORES DE PATOGENICIDAD MICROBIANA

Patogenicidad es un trmino general que se utiliza para describir las infecciones

microbianas. Las propiedades que contribuyen a que un patgeno infecte y dae los
tejidos del husped se llaman factores de virulencia. La virulencia (invasin y toxicidad
microbiana) puede deberse a uno o a mltiples factores. En algunos microorganismos
las causas de la virulencia estn claramente establecidas mientras que en otros no lo
estn tanto. A continuacin vamos a describir los factores de patogenicidad y virulencia.

1.- Puerta de entrada

Al iniciar una infeccin, un microorganismo penetra en los tejidos del cuerpo por
una ruta caracterstica, la puerta de entrada que para la mayor parte de los
microorganismos suelen ser las mismas regiones anatmicas que contienen
microflora normal: piel, tracto alimentario, tracto respiratorio y tracto
genitourinario. La mayor parte de los patgenos se han adaptado a una puerta
especfica de entrada, aquella que le provee de un hbitat adecuado para crecer y

diseminarse. Esta adaptacin puede ser tan restrictiva que si ciertos patgenos
penetran por la puerta "equivocada" no sern infecciosos. Por ejemplo, la
inoculacin de la mucosa nasal con el virus de la gripe invariablemente conlleva a la
gripe, pero si el virus contacta slo con la piel no habr infeccin.

2.- Tamao del inculo

Otro factor crucial para el curso de la infeccin es la cantidad de microorganismos
presentes en el inculo. Para la mayor parte de ellos la infeccin tendr lugar si
existe un nmero mnimo de clulas llamado dosis infecciosa (ID). Este nmero se
ha determinado experimentalmente para muchos microorganismos variando desde
1 clula en la fiebre Q, 10 partculas virales en la rabia, 1000 clulas en la
gonorrea, 10000 clulas en la fiebre tifoidea hasta 109 clulas en el clera. En
general, los microorganismos con ID pequeos tienen mayor virulencia. Si el
tamao del inculo es ms pequeo que el ID, la infeccin generalmente no
progresar. Si el tamao del inculo es mucho mayor que el ID, el comienzo de la
enfermedad puede ser ms rpido.

3.- Mecanismos de invasin y establecimiento del patgeno

Una vez que el patgeno ha contactado con el husped a travs de las vas de
entrada, el siguiente paso en la infeccin requiere que el patgeno (i) se una al
husped; (ii) atraviese el epitelio y (iii) se establezca en los tejidos.
a.- Adhesin
Es el proceso mediante el cual los microorganismos consiguen una posicin ms
estable en el portal de entrada, lo que les permite no ser fcilmente eliminados y
estar listos para invadir los compartimentos estriles del cuerpo. Los mecanismos
que utilizan los patgenos bacterianos en la adhesin incluyen fimbrias o pilis,
flagelos y cpsulas. Los virus se unen a travs de receptores especializados.
b.- Factores de virulencia (penetracin e invasin)
Los factores que contribuyen a la penetracin e invasin de los tejidos se dividen en
exoenzimas, toxinas y factores antifagocticos.
Enzimas extracelulares: muchas bacterias y hongos patgenos secretan
exoenzimas que rompen e inflingen daos en las estructuras epiteliales. Los
siguientes enzimas disuelven las barreras defensivas del husped y promueven la
diseminacin de los microorganismos en tejidos ms profundos:
- Mucinasa: destruye la capa protectora de las membranas mucosas; la produce
Vibrio cholerae.
- Queratinasa: digiere el principal componente de la piel y pelo; la producen los
hongos dermatofitos.
- Colagenasa: digiere la principal fibra del tejido conectivo; la producen especies de
Clostridium.
- Hialuronidasa: digiere la sustancia que acta como cemento de las clulas
animales compactndolas, cido hialurnico. Este enzima es un importante factor
de virulencia en estafilococos, clostridios, estreptococos y neumococos.
- Algunos enzimas reaccionan con los componentes de la sangre como es el caso de
la coagulasa producida por estafilococos patgenos que coagula la sangre. Las
kinasas bacterianas disuelven los cogulos favoreciendo la invasin de los tejidos
daados.

Toxinas bacterianas: una toxina es un producto qumico especfico de

microorganismos, plantas y algunos animales que es venenoso para otras formas
de vida. Toxigenicidad es la capacidad de producir toxinas; esta capacidad es una
caracterstica de muchas especies controlada genticamente siendo la responsable
de los efectos adversos de una variedad de enfermedades llamadas toxinosis.
Toxemia es una toxinosis en la cual la toxina se distribuye a travs de la sangre
desde el sitio de infeccin (ttano y difteria). Intoxicacin es una toxinosis causada
por la ingestin de toxinas (botulismo). Las toxinas se denominan de acuerdo a su
sitio especfico de accin en:
Neurotoxinas cuando actan en el sistema nervioso.
Enterotoxinas cuando actan en el intestino.
Hemotoxinas cuando lisan los hemates.
Nefrotoxinas cuando daan los riones.
Las toxinas tambin se pueden clasificar segn su origen en:
Exotoxinas: toxinas secretadas por una clula bacteriana viva en el tejido infectado.
Endotoxinas: toxinas que slamente se liberan despus de que la clula ha sido
daada o lisada. Nunca se secretan. Las diferencias entre exotoxinas y endotoxinas
son:
CARACTERISTICA

EXOTOXINAS

Toxicidad

Fuerte

Efectos sobre el cuerpo

Composicin qumica
Lipopolisacrido
Desnaturalizacin a 60 C
Respuesta inmune
antitoxinas

Dbil

Especfico de un tejido

Generalizado

Polipptidos
Inestable
Estimula antitoxinas

Estimulacin de la fiebre
Fuente tpica

ENDOTOXINAS

Estable
No estimula

NO

Algunas bacterias Gram (+) y Gram (-)

SI
Gram (-)

Factores antifagocticos: Los fagocitos son clulas que bloquean el avance de los
microorganismos en los tejidos. A travs de la fagocitosis los patgenos son
introducidos dentro del fagocito donde son destrudos por potentes enzimas. Para
combatir la fagocitosis muchos microorganismos han adoptado mecanismos que
evitan el proceso fagoctico (factores antifagocticos):
- Matar los fagocitos: especies de Streptococcus y Staphylococcus producen
leukocidinas, sustancias txicas para los glbulos blancos.
- Produccin de una cpsula que dificulta al fagocito la ingestin del
microorganismo. Ejemplos son Streptococcus pneumoniae, Salmonella typhi,
Yersinia pestis y Neisseria meningitidis.
- Supervivencia dentro del fagocito: algunas bacterias se han adaptado a sobrevivir
dentro del fagocito despus de la ingestin. Especies patgenas de Legionella,
Listeria y Mycobacterium son capaces de evitar su destruccin dentro del fagocito.
Esta supervivencia intracelular en los fagocitos tiene especial significancia ya que
provee a los microorganismos de un lugar donde "esconderse", crecer y distribuirse
a travs del cuerpo.

TEMA18.DEFENSAS ESPECIFICAS E
INESPECIFICAS FRENTE A LA INFECCION
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- DEFENSAS INESPECIFICAS

1.- Factores ambientales
Edad
Nutricin
Profesin
2.- Especie, raza e individuo
3.- Mecanismos de defensa externos
Piel y membranas mucosas
Secreciones qumicas
Microbiota
4.- Mecanismos de defensa internos

Inflamacin
Fiebre
Clulas killer naturales
Fagocitos
Mediadores solubles
Complemento
Linfokinas

II.- DEFENSAS ESPECIFICAS

1.- Inmunidad humoral

Inmunoglobulina
Inmunoglobulina
Inmunoglobulina
Inmunoglobulina
Inmunoglobulina

M
G
A
D
E

2.- Inmunidad celular

Existen factores que predisponen a la resistencia a una enfermedad que son

inherentes a cada husped y al ambiente que le rodea. Estos mecanismos de

proteccin no van dirigidos contra un patgeno especfico y por lo tanto son
factores de resistencia inespecficos. Si un husped desarrolla mecanismos de
defensa en respuesta a un patgeno especfico, defensas especficas, ste husped
adquiere inmunidad frente a ese patgeno.
I.- DEFENSAS INESPECIFICAS

1.- Factores ambientales

Condiciones fsicas y emocionales estresantes del husped (falta de sueo, fatiga,
ansiedad y depresin) hacen a una persona ms vulnerable a la enfermedad. En
condiciones de estrs existe un aumento en la produccin de adrenalina acompaado de
la alteracin de los niveles de las hormonas corticoides. Esta alteracin suprime la
funcin de muchos grupos de clulas defensivas.
Edad: los ms jvenes y los ms viejos tienen un mayor riesgo de infeccin ya que en
los nios el sistema inmune est menos desarrollado y en los ancianos ya no es tan
eficiente.
Nutricin: una dieta que contenga las cantidades necesarias de protenas (tejidos sanos
y protenas sricas) y vitaminas (metabolismo eficiente e integridad de la piel) protege
de las enfermedades microbianas.
Profesin: existen profesiones que conllevan un alto riesgo de contraer ciertas
infecciones. Los dentistas tienen un mayor riesgo de ser infectados con el virus de la
hepatitis B que se transmite a travs de los aerosoles de la saliva y sangre de sus
pacientes.

2.- Especie, raza e individuo

Especie: Las caractersticas fisiolgicas y anatmicas de una especie puede
determinar si un microorganismo puede ser patgeno para esa especie. Por
ejemplo, debido a la diferencia en la temperatura corporal muchas enfermedades
de mamferos no afectan a peces o reptiles y viceversa.
Raza: En algunos casos existen factores genticos que hacen a ciertas razas ms
susceptibles (o ms resistentes) que otras razas a infecciones particulares. Los
negros africanos son ms resistentes a la malaria ya que les falta el receptor de las
clulas sanguneas a Plasmodium vivax). Los indios americanos perdieron 2/3 de su
poblacin debido a la viruela y tuberculosis ya que su resistencia a estas
enfermedades era muy baja al no haber estado expuestos previamente.
Individuo: Algunos individuos tienen ms facilidad para tener fiebre o infecciones
menos severas que otros (algunas personas tienen muchos ms catarros durante el
invierno que otras), incluso teniendo aparentemente las mismas condiciones
raciales y oportunidades de exposicin. Esta resistencia individual se debe
probablemente a una combinacin de resistencias especficas e inespecficas
heredadas de sus familiares.

3.- Mecanismos de defensa externos

Estos mecanismos inespecficos son fundamentalmente mecnicos (piel y
membranas mucosas) aunque tambin estn involucradas barreras qumicas
(secreciones qumicas).
Piel y membranas mucosas: como ya hemos visto anteriormente la piel
(sequedad, bajo pH) y membranas mucosas son una buena barrera efectiva frente
a los agentes infecciosos.
Secreciones qumicas: lisozima (lgrima), jugo gstrico, cidez alta de la vagina.
La lactoferrina es una protena que se encuentra en la leche y en la mayora de las
secreciones que baan a las mucosas humanas as como en los fagocitos. En la
sangre se encuentra la transferrina. Estas protenas son agentes quelantes del
hierro disponible en el ambiente limitando por tanto la disponibilidad de este
nutriente para los microorganismos invasores.
Microbiota: la microbiota normal juega un papel importante al competir con los
patgenos intrusos por un nicho ecolgico particular en el cuerpo humano.

4.- Mecanismos de defensa internos

Los componentes de los mecanismos internos de defensa constituyen una enorme
barrera contra la infeccin. Estos mecanismos incluyen mediadores celulares del
sistema inmune (clulas killer y fagocitos), factores solubles y respuestas
fisiolgicas complejas que llevan a la inflamacin y fiebre.
Inflamacin: La respuesta inflamatoria es la reaccin celular y vascular a la
presencia de microorganismos invasores, heridas y objetos irritantes (astillas,
espinas...); siendo uno de los mecanismos de defensa ms efectivos en animales.
Los detalles de la inflamacin se pueden resumir en: (i) movilizacin y atraccin de
componentes inmunes al sitio de la herida; (ii) poner en marcha los mecanismos
para reparar los tejidos daados, localizar y eliminar las sustancias dainas; (iii)
destruir los microorganismos y bloquear futuras invasiones. Primero existe una
vasoconstriccin seguida rpidamente de una vasodilatacin cuyo efecto es el
aumento del flujo sanguneo en el rea afectada, lo cual facilita la llegada de
componentes inmunolgicos. Este aumento del flujo sanguneo tambin causa
enrojecimiento y calentamiento. Como resultado de las sustancias vasoactivas, las
clulas endoteliales que rodean a los capilares se contraen y forman agujeros a
travs de los cuales sale el exudado que se acumula en los tejidos causando
hinchazn local y dureza, reaccin que se denomina edema (si el edema contiene
glbulos blancos se llama purulento). Al cabo de una hora multitud de neutrfilos
responden quimiotcticamente a las molculas seales convergiendo en el sitio de
la herida. En algunos tipos de inflamacin los fagocitos acumulados contribuyen a la
formacin de pus (masa blanquecina compuesta de clulas, restos celulares lquidos
y bacterias). Ciertas bacterias (estreptococos, estafilococos, gonococos y
meningococos) son especialmente poderosos atrayentes de neutrfilos y por lo
tanto se les denomina piognicos. El ltimo paso en la respuesta inflamatoria es
limpiar la zona y curarla. De la limpieza del pus, restos celulares, neutrfilos
muertos y tejido daado se encargan los macrfagos. Al mismo tiempo los linfocitos
B reaccionan con las molculas y clulas extraas produciendo anticuerpos y los
linfocitos T matan directamente a los intrusos. Mientras esto ocurre, el tejido
daado se regenera (si es posible) o es reemplazado por tejido conectivo.

Fiebre: Una de las ms importantes respuestas del cuerpo a la invasin microbiana

es la fiebre, que es una anormal elevacin de la temperatura del cuerpo. En
humanos, la temperatura media diaria es 37 C. Esta temperatura constante est
controlada por el hipotlamo. Durante la infeccin ciertas sustancias afectan al
hipotlamo desregulndolo. Algunas de estas sustancias son las endotoxinas de las
bacterias Gram (-). Por ejemplo, 2 nanogramos por kilogramo de peso corporal de
la endotoxina de Salmonella typhi (que causa la fiebre tifoidea) puede resultar en
una fiebre de 43 C. Otras sustancias que causan fiebre son los pirgenos
endgenos, producidos por los fagocitos y presentes en los exudados inflamatorios
y el plasma durante la enfermedad. La fiebre se mantiene hasta que la endotoxina
o el pirgeno endgeno se eliminan, momento en el cual el hipotlamo vuelve a
regularla a 37 C. La respuesta inmune del cuerpo a una infeccin tambin puede
causar fiebre. Las altas temperaturas alcanzadas durante los procesos febriles se
cree que inhiben o destruyen los microorganismos infecciosos. Sin embargo, slo
los microorganismos patgenos que causan gonorrea y sfilis son destruidos por las
temperaturas febriles. En la mayor parte de los casos clnicos, las altas
temperaturas necesarias para matar a los microorganismos raramente se alcanzan.
Adems, los pacientes empiezan a estar desorientados o irracionales (delirar) a
43,3 C, entrando en coma por encima de esta temperatura. La muerte ocurre si la
temperatura corporal alcanza los 45 C o la temperatura del cerebro llega a 40,5
C. Esto significa que hay pocas evidencias de que la fiebre mate a los
microorganismos.
Clulas killer naturales (clulas NK): Son linfocitos grandes (leucocitos
agranulocitos) que no son fagocitos ni tampoco contienen marcadores superficiales
como otros linfocitos del sistema inmune y cuya funcin es la de matar clulas
indeseables como son las clulas tumorales y aquellas infectadas por virus. Las
clulas NK tienen una actividad no especfica e independiente de cualquier
estimulacin antignica. Las clulas NK actan unindose a la clula diana y
liberando dentro de ella enzimas que destruyen su membrana (proteasas y
fosfolipasas) creando poros en ella. A estos enzimas se les denomina perforinas.
Las clulas NK buscan, reconocen y destruyen las clulas tumorales tan pronto
como aparecen. En este caso las clulas NK actan como la primera lnea de
defensa frente al cncer.
Fagocitos: Existen dos tipos principales de fagocitos, los neutrfilos o leucocitos
polimorfonucleares (PMNs) y los macrfagos. Ambos se originan en la mdula sea
y cuando ocurre una infeccin migran al rea infectada. Una vez que los neutrfilos
desde la sangre penetran en los tejidos realizan su trabajo durante unas pocas
horas y despus mueren, siendo reemplazados por una descarga continua de un
gran nmero de neutrfilos desde la mdula sea a la sangre. A un determinado
tiempo alrededor de la mitad de los neutrfilos estn adheridos a las paredes de los
capilares. Los monocitos que circulan por la sangre se convierten en macrfagos
tan pronto como ellos salen de la sangre en el sitio de la infeccin y penetran en los
tejidos. Esta conversin es estimulada por las linfokinas. Existen dos tipos de
macrfagos:
a.- Macrfagos de tejidos que circulan por la sangre y migran a travs de los tejidos
a las reas infectadas.
b.- Histiocitos cuando penetran en ciertos tejidos y rganos (hgado, pulmones,
sistema nervioso, linftico, bronquios, etc.) y permanecen all de forma contnua.
Mediadores solubles: Adems de los mediadores celulares de las defensas
internas del cuerpo humano (clulas NK y fagocitos) existen unos mediadores
solubles que contribuyen a la resistencia del husped:

a.- Complemento: El suero de los animales superiores contiene un grupo de unas

20 protenas que interaccionan conjuntamente denominndose complemento ya
que su accin complementa la de ciertas reacciones mediadas por anticuerpos. Una
vez activadas por un microorganismo invasor o por la unin de un anticuerpo, los
componentes del sistema complemento reaccionan secuencialmente en forma de
cascada de tal manera que algunas protenas del complemento actan como
proteasas que hidrolizan y activan a la siguiente protena en la secuencia mientras
que otras actan sobre las clulas inflamatorias de alrededor:
---------> C3a ---------> cambios inflamatorios
C3 --------->
---------> C3b ---------> unin a receptores celulares ---------> fijacin del
complemento
---------> complejo ltico ---------> canal en la membrana citoplasmtica de la
clula
---------> lisis celular
b.- Linfokinas: Son protenas solubles producidas y secretadas por los linfocitos T
que tienen una gran variedad de actividades biolgicas como por ejemplo atraer los
macrfagos, activar a los macrfagos, destruir clulas extraas o clulas infectadas
por virus y participar en el proceso inflamatorio. Sirven como seales de
comunicacin intercelular. Existen varios tipos, siendo las principales la
interleuquina 2 (IL-2) producida por las clulas T y que acta como seal entre
leucocitos; la interleuquina 1 (IL-1) producida por macrfagos se conoce como
pirgeno endgeno ya que es la responsable de las alteraciones del centro
hipotalmico que conducen a la fiebre durante la infeccin; el interfern es una
pequea protena producida por clulas eucariotas en respuesta a las infecciones
vricas. El interfern acta activando molculas que bloquean la replicacin del
genoma vrico (activa la ribonucleasa L que degrada el mRNA parando la
transcripcin) y adems incrementa la citotoxicidad de las clulas T.
II.- DEFENSAS ESPECIFICAS

La inmunizacin ocurre cuando un individuo es natural o artificialmente expuesto a un

antgeno, activndose el sistema inmune produciendo inmunidad humoral (anticuerpos)
y celular (linfocitos T). Los anticuerpos son ms efectivos frente a patgenos
encontrados fuera de las clulas y los linfocitos T son ms efectivos frente a patgenos
encontrados dentro de las clulas.

1.- Inmunidad humoral

Durante la respuesta inmune activa (producida por el husped) los macrfagos
inducen a los linfocitos T para producir interleuquinas, las cuales promueven el
crecimiento y diferenciacin de los linfocitos B para que produzcan anticuerpos. Los
tipos de anticuerpos y sus funciones son:
Inmunoglobulina M (Ig M): La primera clase de anticuerpo producido en
respuesta a un antgeno es la Ig M. Es el anticuerpo ms grande, formado por 5
monmeros. La Ig M fija el complemento muy bien y por lo tanto causa la lisis de
bacterias, envueltas vricas y clulas infectadas.

Inmunoglobulina G (Ig G): Es el anticuerpo ms comn, representando el 80%

de las inmunoglobulinas presentes en el suero. Acta neutralizando toxinas y virus
y facilitando la fagocitosis de bacterias y virus. Tambin fija el complemento
causando lisis de bacterias. Las Ig G pueden atravesar la placenta confiriendo
inmunidad pasiva al nio.
Inmunoglobulina A (Ig A): Es la inmunoglobulina que provee inmunidad humoral
en las secreciones de mucosas como lgrima, saliva, moco intestinal y fludo
seminal. En el suero aparece como un monmero pero en las secreciones mucosas
aparece como un dmero siendo este dmero el responsable de la neutralizacin de
toxinas, alergenos, bacterias y virus antes de que penetren en el cuerpo a travs de
las membranas mucosas. La Ig A es el mayor componente proteco de la leche
materna confiriendo inmunidad pasiva frente a los patgenos entricos en el recin
nacido.
Inmunoglobulina D (Ig D): No se conoce bien su funcin.
Inmunoglobulina E (Ig E): Es el anticuerpo de la alergia, responsable de la
hipersensibilidad a muchos antgenos. La funcin de la Ig E no es causar alergias,
sino probablemente sea montar una respuesta segura frente a los parsitos que
entran en el cuerpo ya que la gente que vive en los trpicos, donde son ms
comunes los parsitos, tienen elevado los niveles de Ig E.

2.- Inmunidad celular

En la inmunidad celular estn implicadas las clulas T que son las responsables de
los rechazos en los trasplantes. Si el trasplante es antignicamente distinto, el
rechazo se produce normalmente a los 10 12 das. Los trasplantes que son ms
similares, pero no completamente idnticos, tales como los de familiares, sern
aceptados por largos perodos. Los nicos trasplantes que son aceptados
indefinidamente sin el uso de inmunodepresores son los autotrasplantes e
isotrasplantes (gemelos).
En un individuo con enfermedad vrica los virus estn "escondidos" dentro de las
clulas del husped. Adems, los virus pueden moverse de una clula a otra a
travs de puentes intercelulares, con lo que evitan el contacto con los anticuerpos
presentes en el suero que pueden neutralizarlos. Las clulas citolticas T son
efectivas frente a las clulas infectadas del husped cuando stas expresan
antgenos virales en su superficie.

TEMA 19. TIPOS Y PATRONES DE ENFERMEDAD

INFECCIOSA
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- TIPOS Y PATRONES DE ENFERMEDAD INFECCIOSA

II.- PATRONES DE TRANSMISION EN ENFERMEDADES TRANSMISIBLES
1.- Transmisin por contacto directo
2.- Transmisin por contacto indirecto
Vehculos
Aire
I.- TIPOS Y PATRONES DE ENFERMEDAD INFECCIOSA

Las enfermedades infecciosas se pueden clasificar en base a cmo son adquiridas. Una
enfermedad es transmisible cuando un hospedador infectado puede transmitir el agente
infeccioso a otro hospedador y establecer la infeccin en este hospedador. La
transmisin del agente puede ser directa o indirecta. Directa es cuando existe contacto
con el hospedador infectado. Indirecta cuando el agente infeccioso pasa a travs de un
objeto o sustancia intermedia. Si el agente es altamente transmisible, especialmente a
travs del contacto directo, la enfermedad es contagiosa. Por ejemplo, la gripe y
sarampin son contagiosas, sin embargo la lepra es poco transmisible.
En contraste, en una enfermedad infecciosa no transmisible no existe transmisin del
agente infeccioso desde un hospedador a otro. La infeccin y enfermedad se adquieren a
travs de circunstancias especiales. Las enfermedades infecciosas no transmisibles
ocurren bsicamente cuando una persona comprometida es invadida por su propia
microbiota, como ocurre con ciertas neumonas, o cuando un individuo tiene un
contacto accidental con un parsito facultativo que existe en un reservorio inanimado.
Por ejemplo, las micosis se adquieren a travs de la inhalacin de esporas de hongos que
se encuentran en el polvo; o el ttanos, en la cual las esporas de Clostridium tetani que
se encuentran en un objeto en contacto con el suelo entran a travs de una herida. Las
personas infectadas no transmiten la enfermedad a otras personas.
II.- PATRONES DE TRANSMISION EN ENFERMEDADES TRANSMISIBLES

Las rutas o patrones de las enfermedades transmisibles son muchas y variadas. La

propagacin puede ser por contacto directo o indirecto, a travs de objetos animados o
inanimados, y puede ser horizontal o vertical. Horizontal significa que la enfermedad es
propagada en la poblacin de un individuo infectado a otro. Vertical significa
transmisin de los padres a los descendientes a travs del vulo, esperma, placenta o
leche. Las enfermedades infecciosas transmisibles se pueden dividir en dos grandes
grupos:
1.- Transmisin por contacto directo
2.- Transmisin por contacto indirecto
a.- Vehculos
b.- Aire

1.- Transmisin por contacto directo

Para que un microorganismo pueda ser directamente transferido, tiene que existir
algn tipo de contacto entre la piel o membranas mucosas de la persona infectada
y la de la que va a ser infectada. En estos casos no existe ningn objeto intermedio
entre el portal de entrada y el portal de salida. En esta categora se incluyen las
finas gotas que se rocan cuando uno tose. Tambin se incluyen las enfermedades
de transmisin sexual. Son tambin directas las enfermedades que se transmiten
por besos, placenta o picaduras de vectores biolgicos. Cuando una persona come
carne de un animal infectado (por ejemplo salmonelosis) tambin forma parte de la
comunicacin directa.

2.- Transmisin por contacto indirecto

Para ser considerado indirecto, el agente infeccioso debe pasar de un hospedador
infectado a un objeto o sustancia intermedia y desde stos a otro hospedador. Esta
forma de comunicacin ocurre cuando el individuo infectado contamina objetos
inanimados, alimentos o el aire a travs de sus actividades.
a.- Vehculos: se refiere a cualquier material inanimado comunmente usado por
los humanos que puede transmitir agentes infecciosos. Un vehculo comn es un
nico material que sirve como fuente de infeccin para muchos individuos. Algunos
vehculos especficos son los alimentos, agua, productos biolgicos (sangre, suero,
tejidos) y fmites. Los fmites son objetos inanimados que contienen patgenos
debido a que estn expuestos constantemente a contaminacin. Son fmites los
telfonos, los pomos de las puertas, jugetes de guarderas, billetes, etc. La fuente
de contaminacin de los alimentos puede ser el suelo, el manipulador o un vector
mecnico. En cuanto al agua la va de contaminacin ms frecuente es la oral fecal.
b.- Aire: el aire de los espacios cerrados puede servir como un importante medio
para la suspensin y dispersin de ciertos patgenos respiratorios a travs de gotas
y aerosoles. Las gotas son residuos microscpicos secos creados cuando una
partcula microscpica del mucus o saliva son expulsados de la boca o nariz. Los
aerosoles son suspensiones de polvo fino que estn en el aire.

TEMA 20. AGENTES ANTIMICROBIANOS Y

MICROORGANISMOS
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- HISTORIA
II.- DEFINICION Y CLASIFICACION DE LOS ANTIBIOTICOS

1.- Betalactmicos
2.- Macrlidos
3.- Aminoglicsidos
4.- Tetraciclinas
5.- Polipeptdicos
6.- Polienos
7.- Otros antibiticos
III.- MODO DE ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS
1.- Inhibicin de la sntesis de la pared celular
2.- Alteracin sobre la membrana citoplsmica
3.- Inhibicin de la sntesis proteica
4.- Bloqueo de la sntesis de los cidos nuclicos
IV.- OTROS AGENTES ANTIMICROBIANOS SINTETICOS DE USO CLINICO
Trimetropin
Nitrofuranos
Isoniazida
Quinolonas
V.- BASES PARA LA UTILIZACION CLINICA DE LOS ANTIMICROBIANOS
VI.- METODOS UTILIZADOS PARA LA VALORACION Y SELECCION DE ANTIBIOTICOS
1.- Tcnica de dilucin en tubo
2.- Tcnica de difusin en placa
VII.- CONSIDERACIONES A TENER EN CUENTA AL UTILIZAR ANTIBIOTICOS

I.- HISTORIA

El tratamiento de las enfermedades mediante compuestos qumicos no es nuevo. En

1495 ya se utilizaban sales de mercurio para tratar la sfilis, aunque este tratamiento
hizo bueno el axioma: Graviora quaedum sunt remedia periculus, es decir "Es peor el
remedio que la enfermedad" ya que determinados tratamientos, como es el caso del
mercurio, son txicos para las clulas animales y humanas. Para que un agente
quimioterpico sea efectivo en el tratamiento de una enfermedad infecciosa no slo
debe de matar o inhibir al microorganismo causante de la infeccin sino que adems
debe ser relativamente inocuo para las clulas humanas al exhibir toxicidad selectiva. El
primer gran descubrimiento en este sentido fue hecho por Paul Ehrlich a principios del
siglo XX. Este mdico alemn crea que era posible obtener un compuesto qumico que
pudiera curar especficamente la sfilis sin daar al paciente. El conoca que el arsnico
inhiba al microorganismo causante de la sfilis (Treponema pallidum) pero que tambin
era txico para las clulas humanas. Ehrlich trabaj en la idea de que el arsnico poda
incorporarse dentro de compuestos orgnicos de tal manera que perdiera su toxicidad
para las clulas humanas manteniendo sus propiedades antimicrobianas. Despus de
ensayar 605 sustancias con estas caractersticas encontr un compuesto, el 606, que
cumpla estos requisitos. A esta sustancia la llam Salvarsan y fue el primer compuesto
qumico sintetizado en laboratorio que poda curar una enfermedad sin ser txico para el
paciente. Gracias a este descubrimiento le concedieron el premio Nobel en 1908. Hoy
en da ya no se utiliza salvarsan para tratar la sfilis ya que ha sido reemplazado por un
producto mucho ms efectivo, el antibitico penicilina.
Hasta 1935 no se realiz ningn nuevo avance en quimioterapia. En ese ao Gerhard
Domagk trabajando en la Bayer realiz un descubrimiento importante. Despus de
llevar a cabo experimentos con ms de 1000 colorantes sintticos para comprobar si

alguno de ellos poda curar las infecciones causadas por estreptococos en ratones sin
daar a los animales, descubri que un colorante rojo llamado Prontosil era efectivo.
Este descubrimiento le vali el premio Nobel en 1939. Curiosamente, este colorante no
era capaz de inhibir el crecimiento de las bacterias crecidas en laboratorio; slamente
era efectivo cuando las bacterias crecan dentro del cuerpo del animal. Esta aparente
contradiccin fue resuelta en el mismo ao por un qumico francs Jacques Trfoul al
observar que el prontosil era transformado en el cuerpo en un compuesto incoloro
diferente que s tena actividad especfica frente a bacterias. Esta nueva sustancia era la
sulfonamida. En un corto perodo de tiempo se determin su estructura siendo posible
sintetizarla en gran escala y desarrollar nuevos compuestos que se denominaron
sulfamidas que an hoy en da se siguen utilizando.
El salvarsan y las sulfamidas son ejemplos de agentes quimioteraputicos sintticos
obtenidos mediante sntesis qumica en un laboratorio. Sin embargo, existe una segunda
categora: agentes quimioteraputicos naturales, llamados antibiticos. Un antibitico es
una sustancia producida por un microorganismo que es inhibitoria para otros
microorganismos en muy pequea cantidad.
En 1928 el microbilogo ingls Alexander Fleming observ que en una placa de agar
inoculada con Staphylococcus aureus que estaba contaminada con el hongo Penicillium
notatum, las colonias de Staphylococcus eran destrudas por alguna actividad de las
colonias del hongo. A partir de este hongo realiz la extraccin de un compuesto que era
el responsable del efecto inhibitorio al que llam Penicilina. Si bien Fleming reconoci
el enorme potencial teraputico de la penicilina, encontr serios problemas para aislarla
y purificarla. El primer ensayo clnico con una preparacin cruda de penicilina se llev
a cabo el 12 de Febrero de 1941. El paciente era un polica de Oxford que se estaba
muriendo por una infeccin con Staphylococcus (septicemia). Al administrarle
penicilina se observ un mejoramiento espectacular, pero 5 das despus, cuando se les
acab la penicilina, la infeccin volvi a emerger y el paciente muri. Este ensayo
clnico fall debido a que no se poda obtener una produccin a gran escala de
penicilina. En este punto (1940-1941) los britnicos estaban inmersos en la II guerra
mundial. Los americanos se interesaron por la penicilina y la fundacin Rockefeller
invit al ingls Florey para que investigara la produccin a gran escala de la penicilina
junto con universidades e industrias farmacuticas americanas. Esta cooperacin hizo
posible que un ao despus estuvieran disponibles grandes cantidades de penicilina.
Muy pocos descubrimientos cientficos han tenido tanto efecto en el campo de la
medicina como el descubrimiento de los antibiticos.

II.- DEFINICION Y CLASIFICACION DE LOS ANTIBIOTICOS

Los antibiticos se pueden definir como un producto del metabolismo microbiano que
es capaz de matar o inhibir el crecimiento de otros microorganismos y adems es
efectivo a bajas concentraciones. Actualmente se conocen ms de 5000 antibiticos de
los cuales alrededor del 75% son producidos por el gnero Streptomyces.
Basados en su estructura qumica, los antibiticos se pueden clasificar en los siguientes
grupos:
1.- Betalactmicos. Se caracterizan por poseer en su estructura el anillo betalactmico
que est compuesto por 3 tomos de carbono y 1 tomo de nitrgeno. En esta categora

se incluyen:
PENICILINAS: Bencilpenicilina (Penicillium chrysogenum)
CLAVAMAS: Acido clavulnico (Streptomyces clavuligerus)
CEFALOSPORINAS: 3 generacin Cefotaxima (Acremonium [Cephalosporium])
MONOBACTAMAS: Aztreonam (Chromobacterium violaceum)
CARBAPENEMAS: Imipenem (Streptomyces cattleya)
2.- Macrlidos. A esta categora pertenece la eritromicina que consiste en un anillo
lactnico con azcares aminados. La eritromicina es producida por Streptomyces
erythreus que fue aislado de un suelo de Filipinas.
3.- Aminoglicsidos. El antibitico ms conocido es la estreptomicina. Consisten en
azcares aminados y un anillo llamado aminociclitol. La estreptomicina la produce
Streptomyces griseus. La neomicina tambin pertenece a este grupo y debido a que se
absorbe poco se utiliza oralmente antes de una ciruga intestinal.
4.- Tetraciclinas. Los antibiticos de este grupo (tetraciclina, clortetraciclina,
oxytetraciclina, doxiciclina) tienen en comn en su estructura el anillo naftaleno (4
anillos). Son producidas por el gnero Streptomyces.
5.- Polipeptdicos. A este grupo pertenece la bacitracina que es producida por una cepa
de Bacillus subtilis que fue aislada de una herida infectada de una joven llamada Tracy
(de ah su nombre). Los antibiticos pertenecientes a este grupo se caracterizan por
poseer una cadena de aminocidos algunas veces circular como es el caso de la
polimixina B que es producida por Bacillus polymyxa. Debido a su toxicidad se aplican
de forma tpica.
6.- Polienos. Compuestos que contienen tres o ms dobles enlaces. El grupo incluye los
antibiticos nistatina y anfotericina B. La nistatina (cuyo nombre proviene del estado
donde se descubri, New York STATe) es producida por Streptomyces noursei y fue el
primer antifngico descubierto pero debido a su toxicidad se usa en tratamientos de la
piel e infecciones bucales. La anfotericina B (su nombre proviene de su carcter
anfotrico ya que posee propiedades de cido y base) es producido por Streptomyces
nodosus y tambin es txico (causa daos en el rin) por lo que se administra
monitorizado en el tratamiento de infecciones internas fngicas.
7.- Otros antibiticos. El Cloranfenicol posee una estructura simple (nitrobenceno). Lo
produce Streptomyces venezuelae aunque debido a su simplicidad resulta ms
econmica su sntesis qumica. Causa como efecto secundario anemia aplstica (la
mdula sea deja de producir nuevas clulas sanguneas) por lo que su administracin
est limitada a la fiebre tifoidea, abcesos cerebrales e infecciones oculares. El
cloranfenicol nunca debe administrarse durante largos perodos de tiempo.

III.- MODO DE ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS

En general, los antibiticos deben su toxicidad selectiva a las diferencias entre las
clulas eucariotas y procariotas. Su eficacia txica es la consecuencia de su capacidad
de inhibir una reaccin bioqumica especfica y esencial, bien sea para la clula

eucariota o para la clula procariota. Para que el antibitico ejerza su accin es

necesario que llegue al foco infeccioso, penetre en las bacterias (por difusin o
transporte activo) y alcance intracelularmente la concentracin necesaria. Una vez
dentro de la clula el antibitico puede ser bacteriosttico si inhibe la multiplicacin de
forma reversible, o bactericida si tiene un efecto letal. En general, cada grupo de
antibiticos acta preferentemente de una forma u otra.
Antibiticos bacteriostticos: macrlidos, tetraciclinas, cloranfenicol.
Antibiticos bactericidas: betalactmicos, aminoglicsidos, polipeptdicos, polienos.
Los antibiticos de uso en clnica pueden ejercer su accin en una de las siguientes
estructuras o funciones:
1.- Inhibicin de la sntesis de la pared celular
2.- Alteracin sobre la membrana citoplsmica
3.- Inhibicin de la sntesis proteca
4.- Bloqueo de la sntesis de los cidos nucleicos
1.- Inhibicin de la sntesis de la pared celular. La pared celular de las bacterias est
compuesta por peptidoglicano. Esta estructura, que es ms gruesa en las G+, entre otras
funciones protege a la clula de su destruccin por estallido en un medio normal, no
hiperosmtico puesto que las bacterias tienen una gran presin osmtica interna (G+: 20
atmsferas; G-: 5 atmsferas).
Las clulas, debido a su crecimiento, estn contnuamente sintetizando nuevo
peptidoglicano y transportndolo a su sitio adecuado en la pared celular. Varios
antibiticos reaccionan con uno o varios de los enzimas que se requieren para completar
este proceso originando que la clula desarrolle puntos frgiles en su pared celular
debido a la sntesis de peptidoglicano deficiente, lo que origina que sea osmticamente
frgil. Los antibiticos que producen este efecto se consideran bactericidas ya que la
clula debilitada est sujeta a lisis. La mayor parte de estos antibiticos son activos
frente a clulas en crecimiento ya que las clulas viejas no sintetizan peptidoglicano.
Antibiticos que bloquean la sntesis de la pared celular:
Bacitracina. Bloquea el transporte de las subunidades de peptidoglicano a su posicin
en la pared celular.
Betalactmicos. Inhiben la sntesis de la pared celular en su ltima fase interfiriendo la
transpeptidacin. Son anlogos estructurales de la D-alanil-D-alanina y por ello se
considera que estos frmacos se unen a las transpeptidasas a las que inactivan
irreversiblemente. Algunas penicilinas son menos efectivas frente a bacterias G- debido
a que la membrana externa bloquea su paso al interior, aunque las penicilinas sintticas
y cefalosporinas tienen efecto tambin frente a G-.
2.- Alteracin sobre la membrana citoplsmica. Una clula con la membrana daada
muere invariablemente por insufiencia metablica o lisis incluso cuando no est en
crecimiento debido a que esta estructura es vital para todas las clulas ya que entre sus
propiedades incluye el actuar como barrera de permeabilidad selectiva. Las sustancias
que alteran esta estructura modifican la permeabilidad, permiten la salida de iones K y
macromolculas como los cidos nucleicos y causan un efecto ltico. Desgraciadamente,
debido a la presencia universal de membranas tanto en clulas microbianas como

animales, la mayor parte de estos antibiticos son txicos para los humanos.
Antibiticos que alteran la membrana citoplsmica:
Polimixinas. Interaccionan con los fosfolpidos de las membranas desorganizndolos y
aumentando su permeabilidad originando una prdida de metabolitos esenciales y la
muerte bacteriana como resultado final. Las bacterias ms susceptibles son las que
tienen en su membrana un mayor contenido en fosfolpidos (G-).
Polienos. Los antibiticos polinicos (nistatina, anfotericina B) son activos frente a
hongos ya que forman complejos con los esteroles de las membranas de las clulas
fngicas originando poros hidroflicos, lo que modifica la permeabilidad de la
membrana.
3.- Inhibicin de la sntesis proteica. La mayor parte de los inhibidores de la sntesis
proteica reaccionan con el complejo ribosoma-mRNA. Aunque las clulas humanas
tambin tienen ribosomas, los ribosomas de los eucariotas son diferentes en tamao y
estructura de los ribosomas de los procariotas (80S y 70S) por lo que estos
antimicrobianos tienen una accin selectiva frente a bacterias.
Antibiticos que inhiben la sntesis proteica:
Aminoglicsidos (estreptomicina, gentamicina). Actan unindose especficamente y
de forma irreversible a un receptor proteico de la subunidad 30S de los ribosomas (en el
caso de la estreptomicina, la protena P10). Esta unin causa, por un lado, el bloqueo de
la actividad normal del complejo de iniciacin, con lo que se detiene la sntesis proteica
y, por otro, distorsiona el codon del locus A, provocando la incorporacin de un
aminocido distinto al codificado. De esta manera se forman protenas anmalas.
Tetraciclinas. Se unen a la subunidad 30S de los ribosomas bloqueando la fijacin del
aminoacil-tRNA al locus A parando la sntesis de protenas.
Cloranfenicol. Se une a la subunidad 50S de los ribosomas impidiendo la transferencia
al inhibir la peptidiltransferasa y, por ello, la transpeptidacin.
Macrlidos (eritromicina). Tambin actan sobre la subunidad 50S de los ribosomas,
impidiendo la translocacin, es decir, el paso del peptidil-tRNA del locus A al locus P,
previa liberacin del tRNA.
4.- Bloqueo de la sntesis de los cidos nuclicos. La biosntesis de molculas de RNA
y DNA consiste en una larga serie de reacciones catalizadas por enzimas que al igual
que cualquier otro proceso complejo es susceptible de romperse en diferentes puntos.
Una inhibicin en un punto de la secuencia puede bloquear las reacciones posteriores.
Los antibiticos que interfieren en la sntesis de cidos nuclicos esencialmente actan
bloqueando la sntesis de sus componentes, inhibiendo la replicacin o parando la
transcripcin.
Compuestos que bloquean la sntesis de cidos nuclicos:
Sulfamidas (quimioterpicos sintticos). Se denominan antimetabolitos debido a que
interfieren un proceso metablico esencial en las bacterias. Las sulfamidas son anlogos
estructurales de un compuesto metablico natural, el PABA (cido para-aminobenzoico)
que es necesario para que las bacterias puedan sintetizar cido flico que a su vez es un

componente del coenzima cido tetrahidroflico que a su vez participa en la sntesis de

purinas y ciertos aminocidos. Una molcula de sulfonamida tiene gran afinidad por el
sitio donde se une el PABA al enzima (dihidro-pteroatosintetasa) que sintetiza cido
flico. Si esto ocurre se bloquea la sntesis de cido flico, lo cual provoca que exista
una cantidad insuficiente de cido flico con lo que se bloquea la sntesis de cidos
nuclicos. Aunque los humanos requieren tambin cido flico en la sntesis de cidos
nuclicos, los humanos no pueden sintetizar cido flico; ste es un nutriente esencial
(vitamina) que se obtiene exgenamente a travs de la dieta. Ya que los humanos
carecen de este sistema enzimtico especial para incorporar el PABA al cido flico, su
metabolismo no puede ser inhibido por las sulfamidas.

IV.- OTROS AGENTES ANTIMICROBIANOS SINTETICOS DE USO CLINICO

Trimetropin. Es un agente antibacteriano sinttico (pirimidina sinttica) que no es una

sulfamida pero se usa en combinacin con ellas para tratar infecciones del tracto
urinario, respiratorio y gastrointestinal debido a su accin sinergista al inhibir al enzima
dihidrofolato reductasa de las bacterias ya que el enzima humano tiene diferente
estructura.
Nitrofuranos. Son derivados del furfural al que se le ha aadido un grupo nitro creando
un nitrofurano. Estos compuestos inhiben la sntesis de protenas. La nitrofurantoina se
utiliza en infecciones urinarias ya que se excreta por los riones y se concentra en la
orina.
Isoniazida. Se usa para tratar la tuberculosis ya que es bactericida frente a
Mycobacterium tuberculosis pero slo frente a clulas en crecimiento. Su mecanismo de
accin no se conoce con exactitud aunque es un anlogo estructural de la piridoxina
(vitamina B6) por lo que puede bloquear las reacciones bioqumicas en las que est
involucrada la vitamina B6.
Quinolonas. Son derivados de la quinina. El cido nalidxico es una quinolona que
inhibe la sntesis de DNA en bacterias G- al inhibir la DNA girasa. Se usa contra las
infecciones del tracto urinario.

V.- BASES PARA LA UTILIZACION CLINICA DE LOS ANTIMICROBIANOS

Existen ms de 5000 antibiticos de los cuales slo unos 100 se utilizan en la prctica
clnica. Para que un compuesto qumico sea considerado un agente quimioteraputico
ideal para tratar las infecciones microbianas debe reunir las siguientes cualidades:
1.- Debe ser capaz de destruir o inhibir muchos tipos de microorganismos patgenos.
Ser mejor cuanto mayor sea el nmero de especies microbianas afectadas. Los
antibiticos ms utilizados son los de amplio espectro.
2.- Debe inhibir a los microorganismos de tal manera que se evite el desarrollo de
microorganismos patgenos resistentes al antibitico.

3.- No debe producir efectos secundarios no deseables en el paciente tales como

reacciones alrgicas, dao al sistema nervioso, a los riones o irritaciones del tracto
gastrointestinal.
4.- No debe eliminar la microbiota normal del tracto intestinal o de otras reas del
cuerpo ya que estos microorganismos juegan un papel importante al evitar el
crecimiento de microorganismos patgenos y por lo tanto de infecciones.
5.- Si el agente se administra oralmente, no debe inactivarse por los cidos del estmago
y debe absorberse desde el tracto intestinal al cuerpo. Si la administracin es parenteral,
no debe inactivarse por la unin a protenas de la sangre.
6.- Debe ser altamente soluble en los fluidos corporales ya que debe estar en solucin
para ser activo.
7.- Debe de alcanzar una concentracin lo suficientemente alta en los tejidos o la sangre
del paciente para poder matar o inhibir a los microorganismos causantes de la
enfermedad.
Desgraciadamente no existe ningn antibitico que rena todas estas caractersticas; es
por lo que siempre se deben hacer comparaciones entre los distintos agentes existentes
para seleccionar el mejor en el tratamiento de una infeccin especfica.

VI.- METODOS UTILIZADOS PARA LA VALORACION Y SELECCION DE

ANTIBIOTICOS

Antes de llevar a cabo una terapia antimicrobiana es importante conocer al menos tres
factores:
1.- Naturaleza del microorganismo causante de la infeccin.
2.- Grado de sensibilidad del microorganismo a diferentes antibiticos.
3.- Historial mdico del paciente.
No todos los agentes infecciosos requieren llevar a cabo pruebas de susceptibilidad. En
infecciones causadas por hongos estas pruebas son difciles y a veces innecesarias.
Tambin existen ciertos grupos de bacterias como los estreptococos A y todos los
anaerobios (excepto Bacteroides) que generalmente son sensibles a la penicilina. En
estos casos no son necesarias las pruebas de susceptibilidad salvo que el paciente sea
alrgico a la penicilina.
Las pruebas de susceptibilidad son necesarias en aquellos grupos de bacterias que
comunmente presentan resistencias, fundamentalmente Staphylococcus, Neisseria
gonorrhoeae, ciertos estreptococos (S. pneumoniae y S. faecalis) y los bacilos aerobios
entricos G-.
Mtodos microbiolgicos
1.- Tcnica de dilucin en tubo. En el mtodo de dilucin en tubo se utilizan una serie
de tubos que contienen un medio de cultivo estril y varias concentraciones de cada uno
de los antibiticos que se van a ensayar. Todos los tubos se inoculan con el

microorganismo que va a ser ensayado y se incuban a la temperatura ptima de

crecimiento del microorganismo. Posteriormente se examinan los tubos para determinar
en cules de ellos se ha inhibido el crecimiento del microorganismo. Tambin se calcula
la concentracin mnima inhibitoria (CMI) que es la concentracin ms baja que es
capaz de prevenir el crecimiento del microorganismo. Aquellos antibiticos que tengan
la CMI ms baja debern ser los que tengan la mayor actividad antimicrobiana frente al
patgeno.
2.- Tcnica de difusin en placa. En este mtodo se incuba el microorganismo en una
placa Petri con medio de cultivo solidificado sobre la que se aaden discos de papel
impregnados con una cantidad conocida de antibitico. Despus de la incubacin se
observan en la placa la presencia de zonas claras alrededor de los discos llamadas halos
de inhibicin. La ausencia de un halo significa que el microorganismo es resistente al
antibitico. Por el contrario y por regla general, cuanto mayor es el halo ms efectivo es
el antibitico. Este mtodo se puede utilizar tambin para determinar la CMI al utilizar
discos con distintas concentraciones de un mismo antibitico.

VII.- CONSIDERACIONES A TENER EN CUENTA AL UTILIZAR ANTIBIOTICOS

1.- Aproximadamente se recetan 200 millones de antibiticos al ao en Estados Unidos.

Se estima que la mitad de estas prescripciones son inapropiadas debido a que el origen
de la infeccin es viral.
2.- El abuso de antimicrobianos en los hospitales como medida de profilaxis en las
operaciones quirrgicas est incrementando la resistencia antimicrobiana sin realmente
beneficiar en muchos casos al paciente.
3.- Existe una tendencia a utilizar antibiticos de amplio espectro para combatir
infecciones menos graves lo que puede originar superinfecciones as como reacciones
txicas. Las tetraciclinas y cloranfenicol se siguen recetando rutinariamente para
combatir infecciones que podran ser tratadas ms eficientemente con otros antibiticos
menos txicos y con un espectro ms limitado.
4.- Muchos antibiticos se recetan sin identificar al microorganismo o realizar
antibiogramas, incluso cuando dichos ensayos estn claramente aconsejados.
5.- Normalmente se recetan los antibiticos ms caros cuando otros ms baratos son
igual de efectivos. Dentro de los antibiticos ms caros estn las cefalosporinas y
algunas tetraciclinas, que son los antibiticos ms recetados.
6.- Muchas personas se automedican antibiticos. No es aconsejable dispensar
antibiticos sin receta mdica.

TEMA 21. INMUNIDAD ARTIFICIAL

Dr. Pedro F. Mateos

Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de

Salamanca
I.- TIPOS DE VACUNAS
1.- Vacunas atenuadas
2.- Vacunas inactivadas
3.- Vacunas toxoides
4.- Vacunas de componentes celulares bacterianos
5.- Vacunas de subunidades vricas
6.- Vacunas anti-idiotpicas

Una vacuna es una suspensin de microorganismos (o alguna parte o producto de

ellos) que producir inmunidad al ser inoculada en un husped.
I.- TIPOS DE VACUNAS

1.- Vacunas atenuadas

Son preparaciones de bacterias o virus vivos que estn tan debilitados o alterados que ya
no son virulentos, siendo todava capaces de provocar una respuesta inmune. Las
vacunas de virus vivos atenuados tienden a mimetizar la infeccin verdadera y suelen
producir mejor inmunidad que las de virus inactivados. Algunos ejemplos de vacunas
vivas son la Sabin para la poliomielitis, fiebre amarilla, sarampin, rubeola, parotiditis y
la BCG para la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis). La mayora de las vacunas
de virus atenuados provocan inmunidad para toda la vida sin inmunizaciones de
recuerdo.

2.- Vacunas inactivadas

Son suspensiones de bacterias o virus que han sido matados por la accin de
desinfectantes como son el fenol o formaldehido. En este tipo de vacunas es
necesario dividir la cantidad total que se necesita para inducir la proteccin en
varias dosis con intervalos de das o semanas debido a la alta concentracin de
microorganismos muertos que se deben administrar ya que no se replican como en
el caso de las vacunas atenuadas. Algunos ejemplos de vacunas muertas son la
Salk para la poliomielitis, rabia, gripe y la tosferina (Bordetella pertussis).

3.- Vacunas toxoides

Son preparaciones obtenidas a partir de toxinas bacterianas inactivadas.

Generalmente se utiliza el formol (38% de formaldehido en H2O). Los toxoides son
muy efectivos en la prevencin de la difteria y el ttanos.

4.- Vacunas de componentes celulares bacterianos

Este tipo de vacunas evocan una respuesta inmune ms especfica evitando la
inoculacin de material celular que no contribuye a la respuesta inmune y s en los
efectos secundarios. Se obtienen mediante el fraccionamiento de una vacuna
clsica y posterior recoleccin de aquellas porciones que contienen los antgenos
deseados. Se denominan vacunas subcelulares. De este tipo es una vacuna nueva
contra la tosferina (2 componentes de la toxina y la hemaglutinina).

5.- Vacunas de subunidades vricas

Las vacunas de subunidades utilizan solamente aquellos fragmentos antignicos del
virus ms adecuados para estimular una respuesta inmunitaria potente. Los genes
que codifican para estas subunidades proteicas pueden ser introducidos en el
genoma de una bacteria o levadura mediante las tcnicas de ingeniera gentica. La
bacteria o levadura produce estas subunidades en cantidad que posteriormente son
recolectadas y purificadas para utilizarlas como vacunas. Por ejemplo, la vacuna
actual contra la hepatitis B es una vacuna de subunidades (HBsAg, antgeno de
superficie del HBV) producida en una levadura con lo que se evitan los problemas
asociados con el uso de material derivado de donadores humanos.

6.- Vacunas anti-idiotpicas

La idea bsica de las vacunas anti-idiotpicas es la de utilizar, en lugar de un
antgeno, un anticuerpo que reproduzca la morfologa del antgeno (y que por lo
tanto induzca inmunidad) pero que sea de por s inocuo. Para producir una vacuna
de este tipo el primer paso es obtener un anticuerpo contra el antgeno. Este
anticuerpo, llamado anticuerpo idiotpico (Ac-1), se inyecta en un animal que
responde produciendo anticuerpos contra l (anticuerpos anti-idiotpicos o Ac-2). El
anticuerpo Ac-2 puede actuar como vacuna puesto que contiene un determinante
antignico similar al del antgeno original. Otro animal que reciba la vacuna
conteniendo Ac-2 responder produciendo un tercer tipo de anticuerpos
(anticuerpos anti-anti-idiotpicos o Ac-3). Si el animal inmunizado se enfrenta al
antgeno original, los anticuerpos Ac-3 reaccionarn con ese antgeno inactivndolo
o provocando su destruccin. Este planteamiento se ha propuesto como una forma
de desarrollar una vacuna potencial contra el SIDA pero los intentos no han tenido
xito hasta la fecha.