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Pathromtin* SL

Intended Use

Monitoring of Unfractionated Heparin Therapy with APTT


When using the APTT for this purpose, the factors influencing the test should be kept in
mind. General considerations are listed below.

Summary and Explanation

A)

Time of collection is important since the in-vivo half-life of unfractionated heparin is


approximately 1.5 hours4. When it is administered, it has an immediate anticoagulant
effect but the degree of this effect decreases rapidly with time. This is especially
apparent with intermittent single intravenous injections.

B)

The anticoagulant used for sample collection can alter test results.

Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citrated
human plasma.
Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation
system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In conjunction with deficient plasmas it enables the individual factors of the intrinsic system to be
quantified and permits diagnosis of hemophilia. In addition it can be used for monitoring
therapy with unfractionated heparin1.
The use of the APTT as a screening test for coagulation disorders is indicated particularly
prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and
given special therapeutic protection.
The presence of non-specific inhibitors such as the lupus-like anticoagulant may prolong
the APTT, but this effect is variable and generally recognized as being related more to the
nature of the APTT reagent employed2.

Principle of the Method

Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads
to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers
the coagulation process; the time to formation of a fibrin clot is measured.

Reagents

Note
Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens
Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay
specific handling and performance information which may differ from that provided in these
Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides
(Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. Please also
consult the instruction manual of the instrument manufacturer!
Materials provided
10 x 5 mL, [REF] OQGS 29
20 x 5 mL, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composition
Pathromtin* SL Reagent: Silicon dioxide particles (1.2 g/L), plant phospholipids (0.25 g/L),
sodium chloride, HEPES, pH 7.6
Preservative: Sodium azide (< 1 g/L).
Warnings and Precautions
1. For in-vitro-diagnostic use.
2. Contains sodium azide (< 1 g/L) as a preservative. Sodium azide can react with copper
or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local regulations.
Preparation of the Reagents
Pathromtin* SL Reagent must be gently inverted (5 to 8 times) to mix before first use and
must be used at room temperature (+15 to +25 C). Every 24 hours of use, the reagent must
be inverted to resuspend any sediment.
Calcium Chloride Solution 0.025 mol/L: warm to +37 C.
Storage and Stability
Stored unopened at +2 to +8 C Pathromtin* SL Reagent may be used by the expiry date
given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks
(store at +2 to +25 C).
Information regarding on-board stability is specified in the Reference Guides (Application
Sheets) for the different coagulation analyzers.
Materials required but not provided
- Calcium Chloride (CaCl2) Solution 0.025 mol/L
- Control Plasma N, or Dade Ci-Trol Level 1 as control for the normal range
- Control Plasma P, or Dade Ci-Trol Level 2, or Dade Ci-Trol Level 3 as control for the
pathological/therapeutic range
- Pipettes for precise measurement of 0.1 mL
- Plastic test tubes
- Coagulation analyzer

Specimen Collection and Preparation

To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts
venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for no less than
15minutes at 1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 C until
use in the test (max. 4 hours). In the US please refer to the CLSI Document H21-A5, entitled
Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and
Performance of Coagulation Assays3.

Procedure

Manual Testing:
Pipette into a test tube pre-warmed to +37 C:
Citrated plasma

100 L

Pathromtin* SL Reagent

100 L

Incubate for 2 minutes at +37 C


Calcium Chloride Solution (+37 C!)

100 L

On adding the Calcium Chloride Solution start the stopwatch or timer on the coagulation
analyzer and measure the coagulation time.

OQGSG29E0503 (209) SD

C) Platelet factor 4, a heparin neutralizing factor in platelet alpha-granules, can be released


by platelet aggregation or damage. To prevent this occurrence in-vitro, the specimen
should be collected with a minimum of trauma. Cold temperatures are known to induce
platelet aggregation and release platelet factor 4; therefore, centrifugation at room
temperature is recommended for heparin testing.
D) Using APTT to monitor unfractionated heparin therapy is time-dependent. Delay in
testing samples will result in prolonged APTT determinations. Therefore, it is
imperative that the testing on all samples be performed as soon as possible.
E)

Increased contact activation times may result in prolonged APTT in plasma containing heparin. It is imperative that the optimal heating-activation time of the Pathromtin* SL-plasma mixture be rigidly standardized5.

F)

Different test systems (i.e. manual, photo-optical, etc.) will exhibit variable heparin
sensitivity. Interchanging of test systems should be avoided.

G) Baseline data on the APTT of each patient before the start of therapy should be
established where feasible to determine the respective patient APTT as it relates to
the reference range established for the test in that laboratory.
H) Studies have shown variability in original estimates of the quality of unfractionated
heparin from different sources and different manufacturers. In-vivo reactivity varies
with the type of heparin administered, the metabolism of the individual and other coadministrated medications4,6.
I)

Because the APTT can vary with technique, method, equipment, reagent lot and heparin used, each laboratory must establish its own therapeutic ranges, or verify them
whenever one or more of the aforementioned variables is changed. This can be done
by simultaneously determining the APTT and the heparin concentration for samples
from patients receiving heparin therapy. A dose response curve can be calculated
from the data using regression analysis, and the APTT range corresponding to
a heparin concentration of 0.3 - 0.7 U/mL (by a factor Xa inhibition assay) can
be derived 4,6,7.

Internal Quality Control


Normal range:
Control Plasma N, or Dade Ci-Trol Level 1
Pathological range: Control Plasma P, or Dade Ci-Trol Level 2, or Dade Ci-Trol Level 3
Two controls (one in the normal range and one in the pathological/therapeutic range) must
be measured at the start of the test run, after each change of reagent vial, and at least
once during an 8-hour shift. The control material should be prepared and processed in the
same manner as the patient samples. Each laboratory should establish its own confidence
intervals for the controls. This interval is generally 2 to 2.5 standard deviations from the
mean control value. If the control values are outside of the confidence interval, the controls,
reagents and instrument must be checked. Before reporting the patient values, it is recommended that all steps should be documented that were taken to identify and rectify the
problem. New control ranges should be defined for each new lot of reagents or controls.
Results
The result is given in seconds.

Limitations of the Procedure

Interferences of APTT are described in bibliography references8-10. Therapeutic doses of


hirudin or other direct thrombin inhibitors may prolong clotting times11. The choice of anticoagulant (i.e. oxalate instead of citrate) and the condition of the specimen (e.g. hemolyzed,
lipemic, parenteral feeding, etc.) may affect results. The latter is particularly true of optical
instrumentation measurements of the APTT. Preactivation of the sample due to poor phlebotomy technique can lead to false results. Referencing the Sample Handling and Collection section of CLSI Document H21-A5 it is recommended that test tubes with non-wetable
surfaces (e.g., plastic) be used rather than glass test tubes.
Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product
performance and meet product specifications. User defined modifications are not supported
by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to validate modifications to these instructions or use of the reagents
on analyzers other than those included in Siemens Application Sheets or these instructions
for use.
Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patients medical
history, clinical presentation and other findings.

Expected Values

Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population served
and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory
must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the
aforementioned variables are changed.
In a study of ostensibly healthy individuals using a specific lot of Pathromtin* SL Reagent,
the following values were obtained:
Median

90 % Reference Interval
5th Percentile

95th Percentile

100 individuals Sysmex CA-1500

30.9 sec.

26.4 sec.

37.5 sec.

111 individuals BCS System

30.2 sec.

25.9 sec.

36.6 sec.

Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also be established
where warranted.

Specific Performance Characteristics

Precision
Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per
day (n = 8 replicates per day), to total n = 40 for normal and pathological control plasmas
as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was calculated from the individual
n = 4 precision values for the daily runs over the 5 days. Intra-assay precision ranged from
0.6 - 2.0 % CV, while the inter-assay precision ranged from 0.3 - 2.8 % CV.
Method Comparison
Results of a comparison of APTT determinations using Pathromtin* SL Reagent and another commercially available APTT reagent gave a correlation coefficient of 0.96 and a
y-intercept of 2.1 sec., and a slope of 0.99.

Bibliography

1. Wagner C, Dati F. Activated partial thromboplastin time (APTT) test. In: Thomas L, ed.
Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: 602-4.
2. Brandt JT, Triplett DA, Rock WA, et al. Effect of lupus anticoagulants on the activated
partial thromboplastin time. Arch Pathol Lab Med 1991; 115: 109-14.
3. CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based
Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline Fifth Edition.
CLSI document H21-A5 (ISBN 1-56238-657-3). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400,
Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2008.
4. Hirsh J, Raschke R. Heparin and low-molecular-weight heparin. The seventh ACCP
Conference on Antithrombotic and Thrombolytic Therapy. Chest 2004; 126: 188S-203S.
5. Hattersley PG, Hayse D. The effect of increased contact activation time on the activated
partial thromboplastin time. Am J Clin Pathol 1976; 66: 479-82.
6. Olson JD, Arkin CF, Brandt JT, et al. College of American Pathologists Conference
XXXI on laboratory monitoring of anticoagulant therapy: laboratory monitoring of
unfractionated heparin therapy. Arch Pathol Lab Med. 1998; 122: 782-98.
7. Bates SM, Johnston M, Hirsh J, Ginsberg JS. Use of a fixed activated partial thromboplastin time ratio to establish a therapeutic range for unfractionated heparin. Arch Intern
Med 2001; 161: 385-91.
8. Poller L, Thomson JM. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In: Jespersen
J, Bertina RR, Haverkate F, eds. A Manual of Laboratory Techniques. Kluwer Academic
Publishers, Hingham, MA, 1992: 35-40.
9. Brack MJ, More RS, Hubner PJ, Gershlick AH. The effect of low dose nitroglycerin
on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood
Coagul Fibrinolysis 1993; 4: 183-6.
10. Harder S, Graff J, Klinkhardt U, et al. Transition from argatroban to oral anticoagulation
with phenprocoumon or acenocoumarol: effects on prothrombin time, activated partial
thromboplastin time, and Ecarin Clotting Time. Thromb Haemost 2004; 91: 1137-45.
11. Boogen C, Niederau C, Reinauer H. Assessment of the influence of r-hirudin on
coagulometric factor assays. Ann Hematol 1999; 78 (Suppl): 73 (Abstract).
BCS, Ci-Trol and Dade are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics.
* Pathromtin is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.

Zusammensetzung
Pathromtin* SL Reagenz: Siliciumdioxid-Partikel (1,2 g/l), pflanzliche Phospholipide (0,25 g/l),
Natriumchlorid, HEPES, pH 7,6
Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l)
Warnungen und Vorsichtsmanahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Enthlt Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupferoder bleihaltigen Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte
ordnungsgem entsprechend den rtlichen Richtlinien.
Vorbereitung der Reagenzien
Pathromtin* SL muss vor erstmaligem Gebrauch durch 5- bis 8-maliges berkopfddrehen resuspendiert werden und wird bei Raumtemperatur (+15 bis +25 C) eingesetzt. Das
Resuspendieren muss alle 24 Stunden wiederholt werden, um Sedimentationseffekte zu
vermeiden!
Calciumchlorid-Lsung 0,025 mol/l auf +37 C erwrmen.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Pathromtin* SL Reagenz ist, ungeffnet bei +2 bis +8 C gelagert, bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar.
Nach dem erstmaligen ffnen ist Pathromtin* SL Reagenz 2 Wochen bei +2 bis +25 C
stabil.
Die Angaben zur Stabilitt auf dem Gert sind in den Referenzhandbchern (Applikationsvorschriften) fr die einzelnen Gerinnungsmessgerte aufgefhrt.
Zustzlich bentigte Materialien
- Calciumchlorid (CaCl2)-Lsung 0,025 mol/l
- Kontroll-Plasma N oder Dade Ci-Trol Level 1 als Kontrolle fr den Normalbereich
- Kontroll-Plasma P oder Dade Ci-Trol Level 2 oder Dade Ci-Trol Level 3 als Kontrolle
fr den pathologischen/therapeutischen Bereich
- Pipetten fr das genaue Abmessen von 0,1 ml
- Testrhrchen aus Plastik
- Gerinnungsmessgert

Probenabnahme und -vorbereitung

Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lsung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorgfltig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 15 Minuten bei
1500 x g zentrifugieren, berstehendes Plasma abhebern und bis zum Test bei +15 bis
+25 C aufbewahren (max. 4 Stunden). In den USA bitte auf das CLSI Dokument H21-A5
mit dem Titel Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation
Testing and Performance of Coagulation Assays beziehen3.

Testdurchfhrung
Manuelle Durchfhrung:
In ein auf +37 C vorgewrmtes Testrhrchen pipettieren:
Citratplasma

100 l

Pathromtin* SL Reagenz

100 l

2 Minuten bei +37 C inkubieren


Calciumchlorid-Lsung (+37 C!)
100 l
Mit Zugabe von Calciumchlorid-Lsung Stoppuhr bzw. Messstelle am Gerinnungsmessgert starten und die Gerinnungszeit messen.
Edition June 2010

Pathromtin* SL
Anwendungsbereich

berwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin mittels APTT


Bei der berwachung der Heparintherapie mittels APTT-Bestimmung sind die Faktoren
zu bercksichtigen, die Einfluss auf das Testergebnis haben knnen. Im Folgenden sind
einige allgemeine Hinweise zusammengefasst:
A)

Da die Halbwertszeit von unfraktioniertem Heparin in vivo ca. 1,5 Stunden betrgt,
ist der Zeitpunkt der Blutentnahme von entscheidender Bedeutung4. Verabreichtes
Heparin besitzt eine sofort einsetzende gerinnungshemmende Wirkung, die rasch
wieder abnimmt. Dieser Effekt ist besonders deutlich bei intermittierend verabreichten
Einzelinjektionen i. v. zu beobachten.

B)

Das zur Blutabnahme verwendete Antikoagulans kann die Testergebnisse beeinflussen.

C)

Durch Aggregation bzw. Beschdigung der Plttchen kann der Heparin-neutralisierende


Plttchenfaktor 4 aus den Alpha-Granula der Plttchen freigesetzt werden. Um derartige
Prozesse in vitro zu vermeiden, sollten die Proben mglichst vorsichtig abgenommen
werden. Da niedrige Temperatur bekanntlich die Plttchenaggregation und damit die
Freisetzung von Plttchenfaktor 4 auslst, sollten Proben fr Heparintests bei Raumtemperatur zentrifugiert werden.

D)

Die berwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin mittels APTT-Bestimmung


ist zeitabhngig. Verzgerungen bei der Probenbearbeitung knnen eine Verlngerung
der APTT bewirken. Die Proben mssen daher so bald wie mglich untersucht werden.

E)

Eine verlngerte Kontaktaktivierung kann bei heparinhaltigem Plasma zur Verlngerung der APTT fhren. Die optimale Inkubationszeit des CephaloplastinPlasma-Gemischs ist daher einzuhalten5.

F)

Da verschiedene Testmethoden (z. B. manuell, photo-optisch) eine unterschiedliche


Heparin-Empfindlichkeit besitzen, sollte ein Wechsel der angewendeten Methode
vermieden werden.

G)

Zur Ermittlung der patientenspezifischen APTT sollte der APTT-Basiswert des


Patienten mglichst vor Therapiebeginn bestimmt und mit dem laboreigenen
Referenzbereich verglichen werden.

H)

Untersuchungen ergaben, dass die Eigenschaften von unfraktionierten Heparinen


verschiedener Hersteller bzw. aus unterschiedlichem Ausgangsmaterial von den
ursprnglich angenommenen Spezifikationen abwichen. In vivo hngt die Reaktivitt
vom Typ des verabreichten Heparins vom Stoffwechsel des Patienten und von anderen,
gleichzeitig angewendeten Arzneimitteln ab4,6.

I)

Da die APTT in Abhngigkeit von den Arbeitstechniken, Methoden, Gerten,


Reagenzchargen und dem eingesetzten Heparin variieren kann, muss jedes
Labor seine eigenen therapeutischen Bereiche ermitteln bzw. nach dem Wechsel
von einem oder mehreren der aufgefhrten Parameter verifizieren. Dies kann durch
die gleichzeitige Bestimmung der APTT und der Heparinkonzentration in Proben
von Patienten unter Heparintherapie erfolgen. Durch Regressionsanalyse der Daten
kann eine Dosis-Wirkungs-Beziehung aufgestellt und der APTT-Bereich festgelegt
werden, der einer Heparinkonzentration von 0,3 - 0,7 U/ml (durch Faktor Xa-Hemmung
bestimmt) entspricht4,6,7.

Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in menschlichem Citratplasma.

Diagnostische Bedeutung

Die Bestimmung der APTT mit Pathromtin* SL Reagenz ist ein schneller Suchtest auf Gerinnungsstrungen des endogenen Systems und erfasst empfindlich die Faktoren VIII und
IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist Pathromtin* SL Reagenz
geeignet fr die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen Systems und zur Diagnose
einer Hmophilie. Auerdem kann es zur berwachung der Therapie mit unfraktioniertem
Heparin benutzt werden1.
Die Messung der APTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstrungen insbesondere vor
chirurgischen Eingriffen, um potenzielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz
stellen zu knnen.
Die Anwesenheit von unspezifischen Inhibitoren, wie der des Lupus-hnlichen Antikoagulans, knnen die APTT verlngern. Dieser Effekt ist jedoch variabel und ist generell als ein
natrlicher Effekt des verwendeten APTT-Reagenz bekannt2.

Prinzip der Methode

Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem Oberflchenaktivator fhrt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen Gerinnungssystems.
Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelst; gemessen wird
die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels.

Reagenzien

Hinweis
Pathromtin* SL kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgerten verwendet
werden. Siemens Healthcare Diagnostics stellt fr verschiedene Gerinnungsmessgerte
Referenzhandbcher (Applikationsvorschriften) zur Verfgung. Diese enthalten gerte-/
testspezifische Informationen zur Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Informationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen knnen. In diesem Fall ersetzen die
Informationen in den Referenzhandbchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in
dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Gerteherstellers
beachten!
Inhalt der Handelspackungen
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200

OQGSG29E0503 (209) SD

Interne Qualittskontrolle
Normalbereich:
Kontroll-Plasma N oder Dade Ci-Trol Level 1
Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P oder Dade Ci-Trol Level 2 oder Dade
Ci-Trol Level 3
Zu Beginn eines Testlaufs, bei jedem Reagenzflaschenwechsel und mindestens einmal
whrend einer 8-Stunden-Schicht mssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine
im pathologischen/therapeutischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte
wie die Patientenplasmen behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrauensbereich fr die Kontrollen ermitteln. Dieser betrgt in der Regel 2 bis 2,5 Standardabweichungen vom mittleren Kontrollwert. Liegen die Kontrollwerte auerhalb des Vertrauensbereichs, sind die Kontrollen, Reagenzien und das Gert zu berprfen. Es wird
empfohlen, vor der Ausgabe von Patientenwerten alle Manahmen zu dokumentieren, die
zur Feststellung und Behebung des Problems ergriffen wurden. Bei jeder neuen Reagenzien- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche definiert werden.

Ergebnisse

Das Messergebnis wird in Sekunden angegeben.

Einschrnkungen der Testdurchfhrung

ber Strungen der APTT wird in der Literatur berichtet8-10. Therapeutische Dosen von Hirudin oder anderen direkten Thrombininhibitoren knnen zu verlngerten Gerinnungszeiten
fhren11. Die Ergebnisse knnen auerdem durch das gewhlte Antikoagulans (z. B. Oxalat
anstelle von Citrat) beeinflusst werden, sowie durch die Beschaffenheit der Probe (z. B. hmolytisch, lipmisch, knstliche Ernhrung, usw.), welche insbesonders bei der optischen
Bestimmung der APTT von Bedeutung ist. Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe
kann zu falschen Ergebnissen fhren. Im Abschnitt ber Probennahme und -handhabung
des CLSI Dokuments H21-A5 wird empfohlen, Testrhrchen mit nicht-benetzbarer Oberflche (z. B. Plastik) anstelle von Glasrhrchen einzusetzen.
Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengerten auf optimale Produktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen berprft. Vom Benutzer
vorgenommene nderungen werden von Siemens nicht untersttzt, da sie die Leistung des
Systems und die Testergebnisse beeinflussen knnen. Es liegt in der Verantwortung des
Benutzers, nderungen an diesen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien
auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanweisungen genannten Analysengerten zu validieren.
Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten,
dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.

Referenzbereiche

Referenzintervalle variieren von Labor zu Labor in Abhngigkeit von der zu untersuchenden


Population und den angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Gerten und Reagenzchargen. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage der jeweils angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Gerte und Reagenzchargen eigene Referenzbereiche ermitteln,
bzw. die Referenzbereiche nach einem Wechsel der aufgefhrten Parameter verifizieren.
In einer Studie an offensichtlich gesunden Probanden wurden mit einer spezifischen Charge Pathromtin* SL Reagenz folgende Werte erhalten:
Median

90 % Referenzintervall
5. Perzentile

95. Perzentile

100 Probanden Sysmex CA-1500

30,9 sec.

26,4 sec.

37,5 sec.

111 Probanden BCS System

30,2 sec.

25,9 sec.

36,6 sec.

Fr andere Kollektive, wie z. B. pdiatrische Patienten, sollten gegebenenfalls eigene Referenzbereiche ermittelt werden.

Przision
Mit einem opto-densitometrischen Messverfahren wurden Przisionsuntersuchungen
an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool, ber
5 Tage, zweimal tglich (n = 8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen
durchgefhrt. Der Variationskoeffizient in der Serie wurde aus den einzelnen 4-fach-Bestimmungen berechnet. Er lag zwischen 0,6 und 2,0 %, whrend der Variationskoeffizient von
Tag zu Tag zwischen 0,3 und 2,8 % lag.
Methodenvergleich
Bei einem Vergleich von APTT-Bestimmungen mit Pathromtin* SL Reagenz und einem
anderen APTT-Reagenz ergab sich ein Korrelationskoeffizient von 0,96 bei einem y-Achsenabschnitt von 2,1 sec. und einer Steigung von 0,99.

Literatur

Siehe englische Gebrauchsanweisung.


* Pathromtin ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex ist eine eingetragene Marke der SYSMEX CORPORATION.

Ausgabe Juni 2010

Pathromtin* SL
Domaine dutilisation

Ractif pour la dtermination du Temps de Cphaline Activ (TCA) dans le plasma citrat
humain.

La dtermination du TCA l'aide de Ractif Pathromtin* SL est un test de dpistage rapide des troubles du systme endogne de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII, IX, et
aux facteurs de la phase contact. Utilis en association avec des plasmas exempts, Ractif
Pathromtin* SL permet le dosage des diffrents facteurs du systme endogne de la coagulation, ainsi que le diagnostic d'hmophilie. Il peut galement tre utilis pour la surveillance
d'un traitement par hparine non fractionne1.
La dtermination du TCA est indique comme test de dpistage des troubles de la coagulation, en particulier avant une intervention chirurgicale, afin de pouvoir prendre les mesures
thrapeutiques appropries chez les patients susceptibles de faire une hmorragie.
La prsence dinhibiteurs non spcifiques, tel lanticoagulant de type lupus, peut allonger le TCA, mme
si cet effet est variable et gnralement considr comme li la nature du ractif TCA utilis2.
3

Ractifs

Remarque
Pathromtin* SL peut tre utilis manuellement ou sur un appareil automatis de coagulation. Siemens Healthcare Diagnostics propose des guides de rfrence (fiches dapplication) pour plusieurs analyseurs de coagulation. Les Guides de rfrence (fiches
dapplication) contiennent des informations sur les performances et lutilisation spcifique
des tests sur les analyseurs, qui peuvent diffrer de celles mentionnes dans la prsente
notice. Le cas chant, les informations contenues dans les Guides de rfrence (fiches
dapplication) annulent et remplacent celles contenues dans la prsente notice. Veuillez galement, consulter le manuel de formation du fabricant de l'analyseur!
Contenu des coffrets
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composition
Ractif Pathromtin* SL : particules de dioxyde de silicium (1,2 g/l), phospholipides vgtaux (0,25 g/l), chlorure de sodium, HEPES, pH 7,6
Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l)
Mises en garde et prcautions demploi
1. Ne doit tre employ que pour un usage in vitro.
2. Contient de lazide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur. L azide de sodium peut
ragir avec les tuyaux dvacuation en cuivre ou en plomb et former des composs
explosifs. Lvacuer conformment aux rglementations locales.
Prparation des ractifs
Avant son premier emploi, remettre le Ractif Pathromtin* SL en suspension en retournant
le flacon 5 8 fois, et lutiliser la temprature ambiante (+15/+25 C). La remise en suspension doit tre rpte toutes les 24 heures pour viter tout effet de sdimentation!
Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l +37 C.
Stabilit et conditions de conservation
Conserv non ouvert +2/+8 C, Ractif Pathromtin* SL peut tre utilis jusqu la date
dexpiration indique sur ltiquette.
Aprs premire ouverture, il reste stable 2 semaines +2/+25 C.
Les donnes de stabilit sur analyseur sont indiques dans les guides de rfrence (fiches
d'application) des diffrents analyseurs de coagulation.
Autres ractifs ncessaires
- Solution de chlorure de calcium (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma de contrle N ou Dade Ci-Trol niveau 1 comme contrle dans le domaine normal
- Plasma de contrle P ou Dade Ci-Trol niveau 2 ou Dade Ci-Trol niveau 3 comme
contrle dans le domaine pathologique/thrapeutique
- Pipettes pour une distribution exacte de 0,1 ml
- Tubes essai en plastique
- Automate de coagulation

Pour obtenir les plasmas, prlever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec
9 volumes de sang veineux, et mlanger avec prcaution en vitant la formation de mousse.
Centrifuger aussitt pendant au moins 15 min au moins 1500 x g, prlever le plasma surnageant, et le conserver +15/+25 C (max. 4 heures) jusquau test. Aux USA, se reporter au
document CLSI H21-A5 intitul Collection, Transport and Processing of Blood Specimens
for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays3.

Ralisation du test
Mthode manuelle :
Distribuer dans un tube essai prchauff +37 C :
Plasma citrat

100 l

Ractif Pathromtin* SL

100 l

Laisser incuber 2 min +37 C

BCS, Ci-Trol und Dade sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.

OQGSG29E0503 (209) SD

L'incubation du plasma avec une quantit optimale de phospholipides et d'un activateur de


surface entrane l'activation des facteurs du systme endogne de la coagulation. L'addition
d'ions calcium dclenche le processus de la coagulation. On mesure alors le temps coul
jusqu' la formation du caillot de fibrine.

Prlvement et prparation des chantillons

Leistungsmerkmale des Tests

Intrt diagnostique

Principe de la mthode

Solution de chlorure de calcium (+37 C !)

100 l

Dclencher le chronomtre ou la chambre de mesure de l'automate de coagulation au moment


de l'addition de la Solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de coagulation.
Surveillance dun traitement lhparine non fractionne par le TCA
Dans le cadre de la surveillance dun traitement lhparine par le TCA, il faut tenir
compte des facteurs qui peuvent influencer ce test. Quelques remarques gnrales sont
rsumes ci-dessous :
A)

Dans la mesure o le temps de demi-vie de lhparine non fractionne est denv.


1,5 heure in-vivo, du prlvement est l'heure du prlvement est important4. Lors de
son administration, l'hparine a un effet anticoagulant immdiat mais l'amplitude de
cet effet dcrot rapidement dans le temps. Ceci est particulirement visible en cas
dinjections intraveineuses intermittentes.

B)

Lanticoagulant utilis pour le prlvement peut fausser le rsultat du test.

C) Lagrgation ou lendommagement des plaquettes peut librer le facteur 4 plaquettaire 4


des granules alpha des plaquettes, facteur qui neutralise lhparine. Pour viter ce phnomne in-vitro, le prlvement de l'chantillon doit tre fait d'une manire non traumatique.
Dans la mesure o l'on sait quune temprature basse favorise lagrgation des plaquettes et dclenche ainsi la libration du facteur 4 plaquettaire 4, il est recommand
de centrifuger les chantillons devant tre tests pour une surveillance dhparine
la temprature ambiante.
D) La surveillance dun traitement lhparine non fractionne par un TCA est variable
dans le temps. Si un chantillon nest pas test immdiatement, le TCA peut tre
allong. Il est donc recommand de tester les chantillons le plus rapidement
possible aprs leur prlvement.
E)

Une activation de la phase contact plus longue peut entraner un allongement du


TCA pour les plasmas contenant de lhparine. Il est impratif que le temps d'incubation optimal du mlange Pathromtin* SL-plasma soit parfaitement respect5.

F)

Les diffrents systmes de mesure (manuel, photo-optique, etc.) montreront une


sensibilit variable l'hparine. L'change des systmes de mesure doit tre vit.

G) Pour dterminer un TCA spcifique au patient, il est recommand de dterminer une


valeur de base de TCA pour le patient avant le dbut du traitement et de la comparer
au domaine de rfrence dfini par le laboratoire.
H) Des tudes ont montr que les proprits des hparines non fractionnes des diffrents fabricants ou provenant de diffrentes prparations variaient par rapport aux
spcifications initialement indiques. La ractivit in-vivo du type dhparine administre varie en fonction du mtabolisme du patient et des autres mdicaments simultanment administrs4,6.
I)

Le TCA pouvant varier selon les techniques de travail, les mthodes, les analyseurs,
les lots de ractif et lhparine utiliss, chaque laboratoire doit dterminer ses propres domaines thrapeutiques, et les vrifier aprs chaque changement dun ou de
plusieurs de ces paramtres. Pour ce faire, mesurer simultanment un TCA et une
concentration dhparine sur des chantillons de patients sous traitement lhparine. Une analyse de rgression permet de dterminer un rapport dose-effet ainsi
que le domaine de TCA correspondant une concentration dhparine comprise
entre 0,3 et 0,7 U/ml (obtenue par linhibition du facteur Xa) 4,6,7.

Contrle de qualit interne


Domaine normal :
Plasma de contrle N ou Dade Ci-Trol niveau 1
Domaine pathologique : Plasma de contrle P ou Dade Ci-Trol niveau 2 ou Dade CiTrol niveau 3
Au dbut de chaque srie, chaque changement de flacon de ractif, et au moins toutes
les 8 heures de travail, mesurer deux contrles (un dans le domaine normal et un dans
le domaine pathologique/thrapeutique). Traiter les contrles comme des chantillons de
patients. Chaque laboratoire doit dterminer ses propres domaines de confiance pour les
contrles. Ils sont gnralement de 2 2,5 dviation standard (DS) par rapport la valeur
moyenne du contrle. Si les valeurs obtenues pour les contrles sortent de leur domaine de
confiance respectif, procder une vrification des contrles, des ractifs et de lappareil.
Il est recommand de documenter toutes les mesures prises pour identifier et rsoudre le
problme rencontr avant de rendre les rsultats des patients. Etablir de nouveaux domaines de confiance chaque changement de lot de ractif ou de contrle.
Rsultats
Les rsultats sont exprims en secondes.

Limites de ralisation du test

La littrature fait tat de perturbations du TCA8-10. Des doses thrapeutiques dHirudin ou


dautres inhibiteurs directs de la thrombine peuvent entraner un allongement des temps
de coagulation11. Les rsultats peuvent galement tre influencs par lanticoagulant choisi
(par ex. de loxalate au lieu du citrate), ainsi que par ltat de lchantillon (par ex. hmolytique, lipmique, alimentation artificielle, etc.), tout particulirement en cas de dtermination
optique du TCA. Une practivation de lchantillon due la technique de prlvement peut
entraner de faux rsultats. Selon le document CLSI H21-A5 sur le prlvement et le traitement des chantillons, il est recommand dutiliser des tubes essai non mouillables (par
ex. en plastique) au lieu de tubes en verre.
Siemens a valid lutilisation de ces ractifs sur plusieurs analyseurs afin doptimiser les
performances du produit et rpondre ses spcifications. Les modifications apportes par
lutilisateur ne sont pas sous la responsabilit de Siemens dans la mesure o elles peuvent
affecter les performances du systme et les rsultats des dosages. Il est de la responsabilit de lutilisateur de valider toutes modifications apportes ces instructions ou
lutilisation des ractifs sur les analyseurs autres que ceux mentionns dans les protocoles
dapplication Siemens ou dans la prsente notice dutilisation.
Les rsultats de ce test doivent toujours tre interprts en rapport avec les antcdents
mdicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations.

Domaines de rfrence

Les intervalles de rfrence varient dun laboratoire lautre selon les populations tudies,
ainsi que selon les techniques de travail, les mthodes, les appareils et les ractifs utiliss.
Aussi chaque laboratoire doit-il dterminer ses propres domaines de rfrence en fonction
des techniques de travail et des mthodes quil applique, ainsi que des appareils et des
lots de ractifs quil utilise, et vrifier ses domaines de rfrence aprs tout changement
dun des paramtres.
Dans le cadre dune tude effectue sur des sujets apparemment sains, les valeurs suivantes ont t obtenues avec un lot spcifique de Ractif Pathromtin* SL:
mdiane

90 % de lintervalle de rfrence
5me percentile

95me percentile

100 chantillons sur Sysmex CA-1500

30,9 sec

26,4 sec

37,5 sec

111 chantillons sur BCS System

30,2 sec

25,9 sec

36,6 sec

Pour dautres collectifs de patients, par ex. pdiatriques, il peut tre ncessaire de dterminer un domaine de rfrence spcifique.

Caractristiques du test
Prcision
Une tude de prcision a t effectue selon un procd photo-densitomtrique sur des
plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas hparins. Les
chantillons ont t tests sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8 dosages par jour). Un total
de 40 dosages a t effectu. Les coefficients de variation de rptabilit ont t calculs
partir des dosages en quadruple, et trouvs entre 0,6 et 2,0 %. Les coefficients de variation
de reproductibilit ont t trouvs entre 0,3 et 2,8 %

Pathromtin* SL
Uso Previsto

Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato (APTT) nel
plasma citratato umano.

Riassunto e Spiegazione

Il Reagente Pathromtin* SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema
endogeno della coagulazione e rivela con sensibilit deficit dei fattori VIII, IX e dei fattori di
contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Reagente Pathromtin* SL adatto per la determinazione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emofilia. Oltre a ci, pu essere
usato per monitorare la terapia con eparina non frazionata1.
La misura dell'APTT indicata per rilevare potenziali soggetti emofilici, in modo da sottoporli ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico.
La presenza di inibitori non-specifici, come lanticoagulante lupus-like, possono prolungare
lAPTT. Questo effetto, per, variabile e generalmente noto come un effetto collegato alla
natura del reagente APTT utilizzato2.

Principio del Metodo

L'incubazione del plasma con una quantit ottimale di fosfolipidi e di un attivatore di superficie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. Laggiunta
di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene quindi misurato il tempo di formazione del coagulo di fibrina.

Reagenti

Nota
Pathromtin* SL pu essere utilizzato manualmente o su analizzatori per coagulazione
automatici. Siemens Healthcare Diagnostics fornisce Guide di Riferimento (Protocolli
Applicativi) per diversi analizzatori per coagulazione. Le Guide di riferimento (Protocolli
Applicativi) contengono informazioni sulla manipolazione e sulle prestazioni specifiche per
i diversi analizzatori/test che possono essere diverse da quelle fornite nelle presenti Istruzioni per l'uso. In tal caso, le informazioni contenute nelle Guide di riferimento (Protocolli
Applicativi) sostituiscono le informazioni contenute nelle presenti Istruzioni per luso. Consultare anche il manuale di istruzioni del produttore dello strumento!
Materiali forniti
10 x 5 mL, [REF] OQGS 29
20 x 5 mL, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composizione
Reagente Pathromtin* SL: particelle di biossido di silicio (1,2 g/L), fosfolipidi vegetali
(0,25 g/L), cloruro di sodio, HEPES, pH 7,6
Conservante:
sodio azide (< 1 g/L)
Avvertenze e Precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in-vitro.
2. Contiene sodio azide (< 1 g/L) come conservante. La sodio azide pu reagire con le
tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali.
Preparazione dei Reagenti
Il Reagente Pathromtin* SL deve essere delicatamente capovolto (da 5 a 8 volte) per
miscelarlo prima del primo utilizzo e deve essere utilizzato a temperatura ambiente
(da +15 a +25 C). Ogni 24 ore di utilizzo, il reagente deve essere capovolto per risospendere leventuale sedimento.
Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L a +37 C.
Conservazione e Stabilit
Prima dell'apertura il Reagente Pathromtin* SL pu essere utilizzato fino alla data di
scadenza indicata sulletichetta del flacone se conservato, sigillato, a +2 a +8 C. Dopo
la prima apertura il Reagente Pathromtin* SL stabile per 2 settimane se conservato a
+2 a +25 C.
Le informazioni riguardanti la stabilit on-board sono specificate nelle Reference Guides
(Protocolli Applicativi) per i diversi analizzatori per coagulazione.
Materiale necessario, ma non fornito
- Soluzione di Calcio Cloruro (CaCl2) 0,025 mol/L
- Control Plasma N, oppure Dade Ci-Trol Livello 1 come controllo nellintervallo normale
- Control Plasma P, oppure Dade Ci-Trol Livello 2, oppure Dade Ci-Trol Livello 3
come controllo per lintervallo patologico
- Pipette di precisione da 0,1 mL
- Provette di plastica
- Analizzatore per coagulazione

Raccolta e preparazione dei campioni

Per ottenere il plasma mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato sodico


(0,11mol/L) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare
immediatamente per 15 minuti a 1500 x g, rimuovere il plasma sovranatante e mantenerlo
da +15 a +25 C fino allutilizzo nel test (max. 4 ore). Negli USA fare riferimento al Documento CLSI H21-A5, intitolato "Raccolta, Trasporto e Analisi di Campioni di Sangue per lAnalisi
della Coagulazione e lEsecuzione di Test Coagulativi"3.

Comparaison avec dautres mthodes


La comparaison des dosages de TCA effectus avec Ractif Pathromtin* SL et de ceux
effectus avec un autre ractif TCA a permis dobtenir pour Ractif Pathromtin* SL un
coefficient de corrlation de 0,96, avec une intersection de laxe des y 2,1 sec. et une
pente de 0,99.

Littrature

Voir la notice dutilisation en anglais.


*

Pathromtin est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics.

BCS, Ci-Trol et Dade sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex est une marque dpose de SYSMEX CORPORATION.
OQGSG29E0503 (209)
dition juin 2010
OQGSG29E0503 (209) SD

Procedura

In uno studio su soggetti evidentemente sani utilizzando un lotto specifico di Reagente


Pathromtin* SL, sono stati rilevati i seguenti valori:

Procedura Manuale
Distribuire in una provetta preriscaldata a +37 C:

Mediana

Plasma citratato

100 L

Reagente Pathromtin* SL

100 L

incubare per 2 minuti a +37 C


Soluzione di cloruro di calcio (+37 C!)

100 L

Dopo laggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di misura sull'analizzatore per coagulazione e determinare il tempo di formazione del coagulo.
Monitoraggio della terapia con eparina non frazionata mediante APTT
Quando si utilizza l'APTT per questo scopo, occorre tenere in considerazione i fattori che
influenzano il test. Le considerazioni generali sono elencate qui di seguito.
A)

B)

L'orario del prelievo importante poich l'emivita in-vivo dell'eparina non frazionata
di circa 1,5 ore4. Quando viene somministrata, ha un immediato effetto anticoagulante, ma il grado di tale effetto diminuisce rapidamente nel tempo. Ci particolarmente evidente per singole somministrazioni venose intervallate.
L'anticoagulante utilizzato durante il prelievo del campione pu alterare i risultati
del test.

C) Il fattore piastrinico 4, un fattore di neutralizzazione dell'eparina rilasciato dagli alfa-granuli


piastrinici, viene rilasciato a seguito di aggregazione o danno piastrinico. Per prevenire
tale fenomeno in-vitro, il campione deve essere prelevato riducendo al minimo il trauma. noto che le basse temperature inducono aggregazione piastrinica e rilasciano il
fattore piastrinico 4; pertanto, per i test sull'eparina, si raccomanda di centrifugare il
campione a temperatura ambiente.
D) L'utilizzo dell'APTT per monitorare la terapia con eparina non frazionata dipende dal
tempo. Un ritardo nell'analisi dei campioni produce risultati di APTT prolungati.
Quindi basilare che le analisi su tutti i campioni siano eseguite il pi presto
possibile.
E)

Aumentati tempi di attivazione da contatto possono produrre APTT prolungati nel


plasma contenente eparina. basilare che il tempo di incubazione-attivazione della
miscela di Pathromtin* SL/plasma sia rigidamente standardizzato5.

F)

Sistemi analitici diversi (manuale, foto-ottico, ecc.) mostrano sensibilit variabile


all'eparina. Evitare quindi di scambiare sistemi analitici diversi.

G) Ove possibile, consigliabile determinare il valore basale dell'APTT di ogni paziente


prima di avviare la terapia, al fine di determinare l'APTT di ogni paziente rispetto
all'intervallo di riferimento definito per il test nel laboratorio specifico.
H) Degli studi hanno mostrato una variabilit nelle stime originali circa la qualit dell'eparina non frazionata proveniente da fonti e da produttori diversi. La reattivit in vivo
varia in funzione del tipo di eparina somministrata, del metabolismo del soggetto e
della somministrazione concomitante di farmaci4,6.
I)

Poich il valore di APTT pu variare a seconda della tecnica, del metodo, della
strumentazione, del lotto di reagente e dell'eparina utilizzati, ogni laboratorio deve
stabilire i propri intervalli terapeutici, oppure verificare tali intervalli al variare di una o
pi delle condizioni citate. Ci pu essere ottenuto determinando simultaneamente
l'APTT e la concentrazione di eparina su campioni di pazienti in terapia eparinica.
possibile estrapolare dai dati una curva dose-risposta applicando l'analisi della
regressione e determinare l'intervallo di APTT corrispondente a una concentrazione
di eparina pari a 0,3 - 0,7 U/mL (tramite un test di inibizione del fattore Xa)4,6,7.

Controllo di Qualit Interno


Intervallo normale:
Control Plasma N, oppure Dade Ci-Trol Livello 1
Intervallo patologico: Control Plasma P, oppure Dade Ci-Trol Livello 2, oppure Dade
Ci-Trol Livello 3
Due controlli (uno per lintervallo normale e uno per lintervallo patologico/terapeutico) devono essere misurati allinizio di ogni ciclo analitico, dopo ogni cambio di flacone del reagente,
e almeno una volta ogni 8 ore. Il materiale di controllo deve essere preparato e processato
allo stesso modo dei campioni dei pazienti. Ogni laboratorio dovrebbe definire i propri intervalli di accettabilit per i controlli. Lintervallo generalmente da 2 a 2,5 deviazioni
standard dal valore medio del controllo. Se i valori dei controlli sono al di fuori dellintervallo
di accettabilit, occorre verificare i controlli, i reagenti e lo strumento. Prima di refertare i
valori dei pazienti, si raccomanda di documentare tutte le azioni intraprese per identificare
e correggere il problema. Nuovi intervalli di controllo dovrebbero essere definiti per ogni
nuovo lotto di reagente o di controllo.
Risultati
Il risultato viene dato in secondi.

Limiti della Procedura

Le interferenze per lAPTT sono descritte nei riferimenti bibliografici8-10. Dosi terapeutiche di
irudina o di altri inibitori diretti della trombina possono allungare i tempi di coagulazione11.
La scelta dellanticoagulante (es., ossalato invece di citrato) e la condizione dei campioni
(es. emolizzati, lipemici, nutrizione parenterale, ecc.) possono influenzare i risultati. Lultima
condizione vale in particolare per le misurazioni dellAPTT con strumentazione ottica. La
preattivazione del campione a causa della tecnica di prelievo carente pu portare a falsi
risultati. In riferimento alla sezione Gestione e Raccolta dei Campioni del documento CLSI
H21-A5 si raccomanda di utilizzare provette con parete idrofobica (es. plastica) piuttosto
che provette di vetro.
Siemens ha validato luso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni
e rispettare le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dallutente non sono supportate
da Siemens poich possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test.
Pertanto responsabilit dellutente validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni,
luso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni
duso fornite da Siemens.
I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, del quadro clinico e valutando contestualmente lesito di altri accertamenti.

Valori Attesi

Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la popolazione affluente e secondo la tecnica, il metodo, la strumentazione ed il lotto di reagente utilizzati.
Pertanto, ogni laboratorio deve definire i propri intervalli di riferimento o verificarli qualora
cambi una o pi delle variabili menzionate.

OQGSG29E0503 (209) SD

Intervallo di riferimento al 90%


5 Percentile

95 Percentile

100 soggetti Sysmex CA-1500

30,9 sec.

26,4 sec.

37,5 sec.

111 soggetti Sistema BCS

30,2 sec.

25,9 sec.

36,6 sec.

Anche gli intervalli di riferimento per altre popolazioni quali i gruppi pediatrici devono essere
definiti ove richiesto.

Caratteristiche del test


Precisione
Sono state eseguite delle verifiche di precisione mediante procedimento di misurazione ottico-densitometrico su plasmi normali e patologici, e su un pool di plasmi eparinizzati, per 5 giorni, due volte al giorno (n = 8 determinazioni al giorno), per un totale di
40 determinazioni. La precisione intra-ciclo stata calcolata dai valori di precisione di
n = 4 soggetti su cicli quotidiani per 5 giorni. La precisione intra-ciclo risultata compresa
nellintervallo CV 0,6 - 2,0 %, mentre la precisione inter-ciclo risultata CV 0,3 - 2,8 %.
Confronto tra Metodi
Confrontando i valori di APTT ottenuti con il Reagente Pathromtin* SL e i valori ottenuti
con altri reagenti per APTT stato determinato un coefficiente di correlazione di 0,96 con
intercetta 2,1 sec. e coefficiente angolare di 0,99.

Bibliografia

Vedere le istruzioni per luso in lingua inglese.


*

Pathromtin un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics.

BCS, Ci-Trol e Dade sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics.


Sysmex un marchio registrato di SYSMEX CORPORATION.

Edizione Giugno 2010

Pathromtin* SL
Campos de aplicacin

Reactivo para la determinacin del tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa) en


plasmas humanos citratados.

Significado diagnstico

La determinacin del APTT con Reactivo Pathromtin* SL es un test rpido para la bsqueda
de anomalas del sistema endgeno de la coagulacin, que adems registra con precisin
tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin* SL, en colaboracin con
plasmas deficientes, es apropiado para la determinacin individual de los factores del sistema
endgeno y para el diagnstico de la hemofilia. Adems, tambin puede emplearse para el
control de la terapia con heparina no fraccionada1.
La medida de APTT est indicada como prueba de deteccin de los trastornos de la coagulacin, especialmente antes de intervenciones quirrgicas, con el fin de poder someter a
tratamientos preventivos a posibles hemoflicos.
La presencia de inhibidores no especficos, como los anticuoagulantes similares al lpico, puede prolongar el APTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es generalmente reconocido como un efecto
ms relacionado con la naturaleza del reactivo APTT empleado2.

Principio del mtodo

La incubacin del plasma con cantidades ptimas de fosfolpidos y un activador de superficie conduce a una activacin de los factores del sistema endgeno de la coagulacin.
Mediante la agregacin de iones de calcio se desencadena el proceso de coagulacin; se
mide el tiempo transcurrido hasta la formacin de un cogulo de fibrina.

Reactivos

Nota
Pathromtin* SL puede utilizarse con mtodos manuales o en analizadores de coagulacin
automticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a su disposicin Guas de Referencia (Hojas de Aplicacin) para varios analizadores de coagulacin. Las Guas de
Referencia (Hojas de aplicacin) contienen informacin especfica sobre el manejo y el
procedimiento correspondiente a los analizadores/ensayos que puede diferir de la ofrecida
en estas Instrucciones de utilizacin. En ese caso, la informacin contenida en las Guas
de Referencia (Hojas de Aplicacin) reemplaza la informacin de las presentes Instrucciones de utilizacin. Le recomendamos que consulte tambin el manual de instrucciones del
fabricante.
Contenido de los envases comerciales
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composicin
Reactivo Pathromtin* SL: Partculas de bixido de silicio (1,2 g/l), fosfolpidos vegetales
(0,25 g/l), cloruro de sodio, HEPES, pH 7,6
Medio de conservacin: Azida de sodio (< 1 g/l)
Advertencias y medidas de seguridad
1. Slo para ser utilizado en diagnsticos in vitro.
2. Contiene azida sdica (< 1 g/l) como conservante. La azida sdica puede reaccionar con las
tuberas de cobre y plomo y formar azidas metlicas explosivas. Cuando se eliminen los reactivos, enjuagar con agua abundante para evitar la acumulacin de azidas, si la eliminacin es
a travs de los desages sanitarios de acuerdo con la normativa vigente.
Preparacin de reactivos
El reactivo Pathromtin* SL, antes de usarse por primera vez, debe resuspenderse invertiendo el frasco de 5 a 8 veces y debe ser usado a temperatura ambiente (entre +15 y +25 C).
La resuspensin se debe repetir cada 24 horas, para evitar efectos de sedimentacin.
Calentar la solucin de cloruro de calcio 0,025 mol/l a +37 C.

Estabilidad y almacenaje
El Reactivo Pathromtin* SL, conservado cerrado entre +2 y +8 C, es estable hasta la fecha
de vencimiento dada en la etiqueta.
Una vez abierto Reactivo Pathromtin* SL es estable durante 2 semanas si se mantiene
entre +2 y +25 C.
Los datos de estabilidad estn especificados en el manual de referencia (hojas de aplicacin) para cada uno de los analizadores de coagulacin.
Materiales adicionales necesarios, pero no incluido
- Solucin de cloruro de calcio (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma control N o Dade Ci-Trol nivel 1 como control para el intervalo normal
- Plasma control P o Dade Ci-Trol nivel 2 o Dade Ci-Trol nivel 3 como control para
los intervalo patolgico/teraputico
- Pipetas para la medida exacta de 0,1 ml
- Tubos de ensayo de plstico
- Analizador de coagulacin

Extraccin y preparacin de las muestras

Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solucin de citrato de sodio


(0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando la formacin de espuma. Centrifugar
inmediatamente por lo menos 15 min a un mnimo de 1500 x g, separar el plasma sobrenadante y mantenerlo entre +15 y +25 C hasta la realizacin de la prueba (mx. 4horas).
En EE. UU., por favor, referirse al documento H21-A5 del CLSI (Instituto de Normalizacin
clnica y de laboratorio, del ingls Clinical and Laboratory Standards Institute) con el ttulo
Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for coagulation Testing and
Performance of Coagulation Assays3.

Mtodo
Procedimiento manual:
En un tubo de ensayo precalentado a +37 C, pipetear:
Plasma citratado

100 l

Reactivo Pathromtin* SL

100 l

Resultados
Los resultados de las medidas se deben dar en segundos.

Limitaciones del procedimiento

Sobre alteraciones del APTT se informa en la literatura8-10. Dosis teraputicas de hirudina


o de otros inhibidores directos de la trombina pueden conducir a tiempos prolongados
de coagulacin11. Los resultados pueden tambin ser influenciados por el anticoagulante
escogido (por ej., oxalato en lugar de citrato), as como tambin, por las condiciones de
la muestra (por ej., hemoltica, lipmica, alimentacin parenteral, etc), la cual es de gran
significado en la determinacin ptica del APTT. Una preactivacin dependiente de la toma
de la muestra puede conducir a resultados falsos. En la seccin sobre Toma y manejo de
las muestras del documento H21-A5 del CLSI se recomienda usar tubos de ensayo con una
superficie no mojable (por ej., plstico) en lugar de tubos de vidrio.
Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones
definidas por el usuario no estn garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al
rendimiento del sistema y a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario
validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones o el uso de los reactivos en
analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens o en estas
instrucciones de uso.
Los resultados de esta prueba debern interpretarse siempre de acuerdo con la historia
clnica del paciente, la sintomatologia clnica y otras observaciones.

Rangos de referencia
Intervalos de referencia
El intervalo de referencia vara de laboratotio a laboratorio, dependiendo de la poblacin
investigada y de las tcnicas de trabajo, mtodos, instrumentos y lotes de referencia utilizados. Por esta razn, cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de referencia
basados en las correspondientes tcnicas de trabajo, mtodos, instrumentos y lotes de
referencia utilizados, como tambin el verificar el intervalo de referencia al cambiar alguno
de los parametros arriba mencionados.
En un estudio realizado con individuos presuntamente sanos, para un lote especfico del
reactivo Pathromtin* SL , se obtuvieron los siguientes resultados:
Mediana

Incubar 2 min. a +37 C


Solucin de cloruro de calcio (+37 C!)

100 l

Agregar la solucin de cloruro de calcio y simultneamente accionar el cronmetro o el aparato


de medida de la coagulacin y medir el tiempo de coagulacin.
Monitorizacin de la terapia con heparina no fraccionada mediante la
determinacin del TTPa
Para el control de la terapia con heparina por medio de la determinacin del TTPa se
deben tener en cuenta los factores que pueden influir en el resultado de la prueba. A
continuacin se resumen algunas advertencias generales.
A)

El tiempo de la extraccin es importante, puesto que la semivida in-vivo de la heparina no fraccionada es, aproximadamente, de 1,5 horas4. Tras su administracin,
posee un efecto anticoagulante de accin inmediata que, sin embargo, disminuye
rpidamente con el paso del tiempo. Este efecto se observa claramente cuando se
inyecta por va intravenosa en dosis nica y aislada.

B)

El anticoagulante utilizado para la extraccin de la sangre puede alterar los resultados de la prueba.

C) El calcio plaquetario, contenido en los grnulos de los trombocitos, es un factor neutralizante de la heparina y puede ser liberado por agregacin o alteracin trombocticas.
Para evitar este tipo de procesos in-vitro, las muestras deben ser extradas con sumo
cuidado. Dado que las bajas temperaturas desencadenan la agregacin plaquetaria y
la liberacin del calcio plaquetario, las muestras con heparina deben ser centrifugadas a temperatura ambiente.
D) El control de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinacin del
TTPa depende del tiempo de anlisis. Si se retrasa el anlisis de las muestras,
los resultados de las determinaciones del TTPa se alargarn. Por lo tanto, es
esencial que el anlisis de todas las muestras se realice a la mayor brevedad
posible.
E)

En plasmas que contengan heparina puede producirse una prolongacin del TTPa
debido al aumento del tiempo de la activacin de contacto. Es esencial que se normalice de manera rigurosa el tiempo ptimo de activacin por calor de la mezcla
Pathromtin* SL-plasma5.

F)

Los diferentes mtodos de anlisis (p. ej., manual, luminiscencia, etc.) presentan
diferente sensibilidad a la heparina. Por lo tanto, no deben alternarse.

G) Antes de empezar el tratamiento y en la medida de lo posible, se deben determinar


los valores de referencia del TTPa de cada paciente y compararlos con el intervalo
normal para la prueba del propio laboratorio.
H) Diversos estudios han demostrado que la calidad de la heparina no fraccionada vara
respecto de las estimaciones iniciales en funcin de su origen y el fabricante. La
reactividad in-vivo de la misma vara en funcin de la heparina aplicada, del metabolismo del paciente y de otros medicamentos administrados simultneamente4,6.
I)

Ya que el TTPa puede variar dependiendo de las tcnicas de trabajo, los mtodos,
los instrumentos, el lote del reactivo y de la heparina utilizados, cada laboratorio
debe determinar sus propios intervalos teraputicos o verificarlos cada vez que se
modifique alguno de los parmetros mencionados anteriormente. Esto se puede
llevar a cabo mediante la determinacin simultnea del TTPa y la concentracin
de heparina en muestras de pacientes sometidos a un tratamiento con heparina.
Por medio de un anlisis de regresin de los datos se puede calcular una curva
de dosis-respuesta y extrapolar el intervalo del TTPa correspondiente a una
concentracin de heparina de 0,3 a 0,7 U/ml (determinada por una prueba de
inhibicin del factor Xa) 4,6,7.

Control de calidad interno


Intervalo normal:
Plasma control N o Dade Ci-Trol nivel 1
Intervalo patolgico: Plasma control P o Dade Ci-Trol nivel 2 o Dade Ci-Trol nivel 3
Se deben medir dos niveles de control (uno en el intervalo normal y uno en el intervalo
patolgico/teraputico), al comienzo de cada serie de anlisis, en cada cambio de frasco
del reactivo y por lo menos cada 8 horas en un da de trabajo. El material de control debe
ser tratado como las muestras de pacientes. Cada laboratorio debe determinar sus propios
intervalos de confianza para los controles. Este intervalo, por lo general se encuentra entre
2 a 2,5 desviaciones estndard (s) del valor promedio del control. Si los resultados de
las medidas del control se encuentran fuera del intervalo de confianza, se deben comprobar los controles, los reactivos y los instrumentos. Antes de comunicar los resultados de
los pacientes, se recomienda documentar todas las medidas tomadas para identificar y
eliminar el problema. Para cada nuevo lote de reactivos o de controles se debe definir un
nuevo intervalo de referencia.
OQGSG29E0503 (209) SD

90% Intervalo de referencia


5. percentil

95. percentil

100 Individuos Sysmex CA-1500

30,9 seg.

26,4 seg.

37,5 seg.

111 Indivicuos Sistema BCS

30,2 seg.

25,9 seg.

36,6 seg.

Para otros colectivos, como por ej., pacientes peditricos, se debe determinar, en cada
caso, su propio intervalo de referencia.

Caractersticas de la prueba
Precisin
Con un procedimiento de medicin optodensitomtrico se realizaron medidas de precisin
de plasmas normales, patolgicos y de un pool de plasmas heparnicos durante 5 das,
dos veces al da (n = 8 determinaciones por da), con un total de 40 determinaciones. El
coeficiente de variacin en la serie se obtuvo a partir de los valores de una determinacin
cudruple, dando un resultado entre 0,6 y 2,0 %, mientras el coeficiente de variacin da
a da fue entre 0,3 y 2,8 %.
Comparacin de mtodos
Al comparar una determinacin de APTT con Reactivo Pathromtin* SL y una con otro reactivo para APTT se encontr para Reactivo Pathromtin* SL un coeficiente de correlacin de
0,96 para un corte de eje-y de 2,1 seg. y una pendiente de 0,99.

Bibliografa

Ver instrucciones de utilizacin en ingls.


*

Pathromtin es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics.

BCS, Ci-Trol y Dade son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.


Sysmex es una marca registrada de SYSMEX CORPORATION.

Edicin Junio 2010

Pathromtin* SL
Campo de aplicao

Reagente para determinao do tempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) em plasmas humanos citratados.

Significado diagnstico

A determinao do TTPA com Reagente Pathromtin* SL um teste rpido para deteco de transtornos do sistema intrnseco da coagulao e que detecta de modo sensvel os factores VIII e IX,
assim como os factores de contacto. Usado com plasmas deficitrios, Reagente Pathromtin* SL
um instrumento apropriado para a determinao de factores singulares do sistema intrnseco e o
diagnstico da hemofilia. Alm disso, pode ser utilizado para o controlo da terapia heparnica.
Pode ainda ser usado para monitorizar a terapia com heparina no fraccionada1.
A presena de inibidores no especficos, como os anticoagulantes lpicos, pode prolongar o TTPA,
mas este efeito varivel e geralmente atribuido natureza do reagente de TTPA utilizado2.

Princpio metodolgico

A incubao do plasma com quantidades ptimas de fosfolpidos e um activador de superfcie leva a uma activao dos factores do sistema intrnseco da coagulao. Mediante a
agregao de ies de clcio desencadeado o processo de coagulao. Mede-se o tempo
transcurso at formao de um cogulo de fibrina.

Reagentes

Nota
Pathromtin* SL pode ser utilizado manualmente ou em analisadores de coagulao automatizados. A Siemens Healthcare Diagnostics fornece guias de consulta (folhas de
instrues de aplicao) para vrios analisadores de coagulao. Os guias de consulta
(folhas de instrues de aplicao) contm informaes especficas sobre o manuseamento e desempenho do analisador/teste que podem diferir das fornecidas nestas instrues.
Numa situao destas, as informaes contidas nos guias de consulta (folhas de instrues
de aplicao) substituem as informaes nestas instrues. Consulte ainda o manual de
instrues do fabricante do aparelho!

Contedo da embalagem comercial


10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composio
Reagente Pathromtin* SL: Partculas de dixido de silcio (1,2 g/l), fosfolpidos vegetais
(0,25 g/l), cloreto de sdio, HEPES, pH 7,6
Agente de conservao: azida sdica (< 1 g/l)
Advertncias e medidas de precauo
1. S para uso diagnstico in-vitro.
2. Contm azida de sdio (< 1 g/l) como conservante. A azida de sdio pode reagir com os
tubos de cobre ou de chumbo das canalizaes de esgotos formando compostos explosivos.
Elimine este produto de forma correcta e de acordo com as regulamentaes locais.
Preparao dos reagentes
Antes do primeiro uso, o Pathromtin* SL tem de ser resuspenso invertendo o frasco 5 a
8 vezes e utilizado temperatura ambiente (+15 a +25 C) . A resuspenso tem de ser
repetida a cada 24 horas, para evitar os efeitos da sedimentao!
Aquecer a soluo de cloreto de clcio 0,025 mol/l a +37 C.
Estabilidade e condies de conservao
No aberto, e conservado entre +2 e +8 C, Reagente Pathromtin* SL mantm-se utilizvel at data de validade indicada no rtulo.
Uma vez aberto, mantm-se estvel durante 2 semanas temperatura de +2 a +25 C.
As indicaes sobre a estabilidade no aparelho esto mencionadas nos manuais de
referncia (instrues de aplicao) para os diferentes coagulmetros.
Outros materiais necessrios
- Soluo de cloreto de clcio (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma de controlo N ou Dade Ci-Trol Level 1 como controlo para o intervalo normal
- Plasma de controlo P ou Dade Ci-Trol Level 2 ou Dade Ci-Trol Level 3 como controlo para o intervalo patolgico/teraputico
- Pipetas para a medio exacta de 0,1 ml
- Tubinhos de ensaio em plstico
- Analisador de coagulao

Colheita e preparao de amostras

Para obter o plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de soluo de citrato de sdio


(0,11 mol/l) com 9 partes de sangue venoso, evitando formao de espuma. Centrifugar,
imediatamente, durante 15 min. no mnimo a 1500 x g, recolher o plasma sobrenadante
e conservar at realizao do teste temperatura entre +15 e +25 C (4 horas, no mximo). Nos EUA, por favor consultar o documento CLSI H21-A5 com o ttulo Collection,
Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance
of Coagulation Assays3.

Procedimento

Plasma citratado

100 l

Reagente Pathromtin* SL

100 l

Deixar incubar 2 min a +37 C


Soluo de cloreto de clcio (+37 C!)
100 l
Simultaneamente com a adio de soluo de cloreto de clcio, pr em marcha o cronmetro ou o aparelho de medio da coagulao e determinar o tempo de coagulao.
Monitorizao da terapia da heparina no fraccionada com APTT
Para a monitorizao da terapia de heparina atravs da determinao de APTT, necessrio tomar em considerao os factores que podem ter influncia no resultado do teste.
Seguidamente, apresenta-se o resumo de algumas indicaes gerais:

B)

Uma vez que o valor de semi-vida da heparina no fraccionada in-vivo de aprox.


1h 30m4, o momento da colheita de sangue tem uma importncia decisiva. A heparina administrada possui um efeito que provoca imediatamente a supresso da
coagulao, efeito esse que diminui outra vez, rapidamente. Este efeito pode ser
observado com especial evidncia nas injeces individuais intravenosas administradas intermitentemente.
O anticoagulante usado para a colheita da amostra pode influenciar os resultados
do teste.

C) Com a agregao ou deteriorao das plaquetas, o factor de plaqueta 4, um factor


neutralizador de heparina, pode ser libertado dos grnulos alfa das plaquetas. Para
evitar estes processos in-vitro, necessrio colher as amostras com o mximo cuidado.
Uma vez que, como sabido, as baixas temperaturas desencadeiam a agregao de
plaquetas e, por conseguinte, a libertao do Factor de plaqueta 4, as amostras para
os testes de heparina devem ser centrifugadas temperatura ambiente.
D) A monitorizao da terapia com heparina no fraccionada atravs da determinao
APTT depende do tempo. Os atrasos no processamento das amostras podem
provocar um prolongamento do APTT. Por conseguinte, as amostras tm de
ser analisadas o mais cedo possvel.
E)

O prolongamento da activao do contacto no plasma que contm heparina pode


provocar o prolongamento do APTT. Por isso, preciso normalizar rigorosamente5 o
tempo de incubao optimizado da mistura de plasma Pathromtin* SL.

F)

Uma vez que os diferentes mtodos de teste (p. ex., manual, foto-ptico) possuem sensibilidades heparina diferentes, dever evitar-se a mudana do mtodo utilizado.

G) Para a determinao do APTT especfico do paciente, o valor bsico APTT do paciente dever ser determinado e comparado com o intervalo de referncia prprio do
laboratrio, de preferncia antes do incio da terapia.
H) Estudos demonstraram que as caractersticas da heparina no fraccionada proveniente de diferentes fabricantes e fontes divergem das especificaes admitidas originalmente. A reactividade in-vivo depende do tipo da heparina administrada, do metabolismo do paciente e dos outros medicamentos utilizados simultaneamente4,6.
I)

Como o APTT pode variar consoante a tcnica, mtodo, equipamento, lote de reagentes e heparina utilizados, cada laboratrio deve estabelecer os seus prprios
intervalos teraputicos ou verific-los sempre que uma ou mais das variveis acima mencionadas for alterada. Isto pode ser feito determinando simultaneamente o
APTT e a concentrao de heparina em amostras de pacientes em tratamento com
heparina. A curva de resposta dose pode ser calculada a partir dos dados que
utilizam a anlise de regresso e o intervalo de APTT correspondente a uma
concentrao de heparina de 0,3 0,7 U/ml (por um teste de inibio do factor Xa)
pode ser calculado 4,6,7.

OQGSG29E0503 (209) SD

Resultados
O resultado da medio expresso em segundos.

Limitaes do procedimento

A literatura faz referncias a perturbaes de APTT8-10. As doses teraputicas de hirudina ou


outros inibidores directos de trombina podem originar tempos de coagulao prolongados11.
Alm disso, os resultados podem ser influenciados pelo anticoagulante escolhido (p. ex.,
oxalato em vez de citrato), e pelas caractersticas da amostra (p. ex., hemoltica, lipmica,
alimentao artificial, etc.), que so importantes, sobretudo, para a determinao ptica do
APTT. A activao prvia da amostra condicionada pela colheita, pode provocar resultados
incorrectos. No captulo sobre a colheita e manipulao de amostras do documento CLSI
H21-A5 recomenda-se que sejam utilizados tubinhos de ensaio com superfcie no humectante (p. ex., plstico), em vez de tubinhos de vidro.
A Siemens validou a utilizao destes reagentes em vrios analisadores, com o intuito de
optimizar o desempenho do produto e satisfazer as especificaes do produto. As modificaes definidas pelo utilizador no so suportadas pela Siemens, na medida em que podem
afectar o desempenho do sistema e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do
utilizador validar as modificaes efectuadas nestas instrues ou em relao ao uso dos
reagentes noutros analisadores que no os includos nas folhas de instrues de aplicao
da Siemens ou nestas instrues de utilizao.
Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histrico
mdico do doente, estado clnico e outros dados de interesse.

Intervalos de referncia

Os intervalos de referncia variam de laboratrio para laboratrio em funo da populao


a analisar, tcnicas de trabalho, mtodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados. Por
isso, cada laboratrio dever determinar intervalos de referncia prprios com base nas
respectivas tcnicas de trabalho, mtodos, aparelhos e lotes de reagentes utilizados, ou
verificar os intervalos de referncia aps mudana dos parmetros acima referidos.
Num estudo efectuado com indivduos examinados aparentemente saudveis, obtiveramse os seguintes valores com um lote especfico do reagente Pathromtin* SL:
Mdia

Execuo manual:
Pipetar para um tubo de ensaio pr-aquecido a +37 C:

A)

Controlo de qualidade interno


Intervalo normal:
Plasma de controlo N ou Dade Ci-Trol Level 1
Intervalo patolgico: Plasma de controlo P ou Dade Ci-Trol Level 2 ou Dade
Ci-Trol Level 3
No incio de uma srie de teste, em cada mudana de reagente e uma vez, no mnimo,
durante um turno de 8 horas, devero ser medidos dois controlos (um no intervalo normal
e um no intervalo patolgico/teraputico). O material de controlo dever ser tratado como
o plasma do paciente. Cada laboratrio dever determinar o seu intervalo de confiana
prprio para os controlos. Normalmente, este apresenta desvios (s) standard de 2 a
2,5 em relao ao valor de controlo mdio. Se os valores de controlo se situarem fora
do intervalo de confiana, necessrio controlar os controlos, os reagentes e o aparelho.
aconselhvel documentar todas as medidas que foram tomadas para a constatao e
eliminao do problema antes da divulgao dos valores do paciente. Para cada lote de
reagente ou controlo novo devero ser definidos intervalos de controlo novos.

Intervalo de referncia 90%


5. Percentil 95. Percentil
100 Indivduos examinados com Sysmex CA-1500 30,9 seg.
26,4 seg.
37,5 seg.
111 Indivduos examinados no sistema BCS
30,2 seg.
25,9 seg.
36,6 seg.
Para os outros colectivos, como p. ex., pacientes peditricos, tambm devero ser determinados intervalos de referncia prprios.

Caractersticas do teste

Preciso
Com um processo de medio optodensitomtrico foram efectuadas medies de preciso
de plasmas normais, patolgicos e de um pool de plasmas heparnicos durante 5 dias, 2 vezes por dia (n = 8 determinaes por dia), com um total de 40 determinaes. Os coeficientes
de variao intra-assay foram calculados a partir de cada uma das determinaes qudruplas
e obtiveram-se resultados compreendidos entre 0,6 e 2,0 %, enquanto que, para os coeficientes de variao inter-assay, foram achados valores situados entre 0,3 e 2,8 %.
Comparao de mtodos
A comparao de uma determinao do TTPA com Reagente Pathromtin* SL com outra efectuada com outro reagente para TTPA revelou para Reagente Pathromtin* SL um coeficiente de correlao de 0,96 com uma interseco do eixo y de 2,1 seg. e um coeficiente angular de 0,99.

Bibliografia

Ver Instrues em ingls.


* Pathromtin uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics.
BCS, Ci-Trol e Dade so marcas comerciais da Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex uma marca registada da SYSMEX CORPORATION.

Edio Junho 2010

2010 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH.


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