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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y RECURSOS


NATURALES
CULTIVO MICROBIOLGICO

Alumna: Auqui Jurado Vanessa


Cdigo: 1129510114
Curso: laboratorio de microbiologa general
Grupo horario: 92g
Profesora: Ms.C. BLG Suyo Loayza, Beatriz

Callao, Per
2014

CULTIVO MICROBIOLGICO
1. INTRODUCCIN
Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En
general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas
del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.
2. OBJETIVOS
Comparar los principales mtodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos
de microorganismos.
Conocer los principales mtodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.
3. MARCO TEORICO
Diferentes mtodos de siembra

- Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriolgico en el medio de cultivo para


promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicacin.
El resultado de una siembra se llama: Cultivo
Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria
Mtodos Generales:
1) Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada
con el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensin
Diluciones sucesivas
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en
un medio de cultivo, generen colonias aisladas.
2) Siembra por estras en superficie: Se siembra el material en la superficie del agar
inclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asa
bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo
estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms
profunda de la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la
boca del tubo.
Medio de cultivo: agar base inclinado
Instrumento: asa o aguja bacteriolgica
3) Siembra por estra por agotamiento: Con ste procedimiento se puede conseguir
una buena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio

de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente


esterilizada se toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie
del medio formando estras. Esto puede realizarse de varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se contina con las estras. Cuando se quiere
obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual
se repite la operacin sin tomar con el asa nuevo material.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el
material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estra
luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el
ltimo cuadrante aparecern las colonias aisladas
c- El inculo se extiende sobre una pequea zona de la placa, prxima al borde, se
esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as sucesivamente.
Medio de cultivo: solido en placa de Petri
Instrumento. Asa
Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o puncin: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semislido. Introducir la aguja hasta el fondo,
formando un canal de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este mtodo se
utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semislido
Instrumento: aguja bacteriolgica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias
5) Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron)
es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el
rojo fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estras en superficie, como ya conocemos,
para estudiar los cambios que ocurrirn en superficie y profundidad. A lo largo del canal
se desarrollan los microorganismos, y segn lo hagan en la parte superior o inferior del
tubo, estarn indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo
siguiente:

Crecimiento microbiano en medio lquido


Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los casos las clulas que se
producen en cada divisin continan su vida independientemente formndose una
suspensin de clulas libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio lquido, se pueden diferenciar cuatro
fases en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano:
1.- Fase lag o de adaptacin durante que los microorganismos adaptan su metabolismo a
las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo)
para iniciar la fase de crecimiento exponencial.
2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima y
el tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen a
velocidad mxima los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas durante
esta fase se explica con los modelos matemticos que describiremos a continuacin.

3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la masa u


otros parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan un
metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una
acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener importancia
industrial.
Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algn nutriente
esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase
exponencial hacen que el medio sea inhspito para el crecimiento microbiano.
La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente con
mayor fidelidad el estado metablico real de los microorganismos en los ambientes
naturales.
4.- Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de bacterias viables del
cultivo.
Crecimiento microbiano en medio slido
Las fases, parmetros y cintica de crecimiento discutidas para el caso de los cultivos
lquidos se presentan tambin en cultivos slidos. La cintica de crecimiento, en este
caso, se puede estudiar siguiendo la evolucin del nmero de clulas viables por unidad
de superficie o por unidad de masa.
Cuando una clula aislada e inmvil comienza a crecer sobre un substrato slido, el
resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se
denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una clula bacteriana viva y aislada que

si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la


produccin de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el nmero inicial de bacterias
por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que se
llama un csped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio.
En el caso de microorganismos mviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos
que tienen un crecimiento trfico no se producen colonias aisladas sino formaciones
ms difusas o miceliares.
4.

MATERIALES
medio de cultivo ya preparado
asa de siembra
mechero
tubo de ensayo 1ml de agua destilada y 9ml de chica de jora 1/10

5. PROCEDIMIENTO
Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrn.
Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lpiz para
escribir.
Introduzca el asa de alambre de platino o nicrn directamente en la zona de color
azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente,
proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.
Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de
que el asa se enfre.
Con el asa estril y fra tome el volumen o fragmento de la muestra que ser
sembrado y trasldelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.
Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cua en
tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porcin inferior.
Con el dedo meique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapn de
algodn o la tapa de rosca y retngala(no colocar el tapn o la tapa sobre la mesa
de trabajo)
Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasndola una o dos veces por
la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineracin, los
microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte
externa del tubo. Esta accin calrica, provoca adems una conveccin del
movimiento del oxgeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la
desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminacin.
Introduzca el asa con el volumen o fraccin de la muestra en el tubo, hasta el
fondo de la cua. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de

diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que


pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cua,
trazando una lnea longitudinal.
Deslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia arriba,
imprimindole un movimiento de zigzag.
Motiando toda la superficie de la cua con hisopo.
Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente
roturando el medio con el asa, haciendo un pequeo corte longitudinal.
Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo
procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa


de Petri, proceda de la siguiente manera:
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera
que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de


zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la
superficie.
Cierre la placa y grela varios cm, en contra de las manecillas del reloj,
procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.
Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera
que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el
segundo.
Repita esta operacin una o dos veces ms.

Finalmente cierre la placa y colquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.


Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de
dejarla en el puesto de trabajo.
Rotular y guardar para la incubacin

6. CONCLUSIONES
Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y para
ello se necesita:
Medio de cultivo.
Condiciones ptimas de incubacin como temperatura, pH, presin, condiciones
atmosfricas (concentracin de O2).
Estos medios de cultivo son slidos (cultivos en reposo), o lquidos (para cultivos en
agitacin)
Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que tcnica se va
a utilizar, debido a que estas varan respecto a las caractersticas del microorganismo a
tratar. Tambin debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quiere
llegar, pues dependiendo de esto la tcnica de siembra es diferente. Un microorganismo
se puede sembrar en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar .Un
cultivo de bacterias o de hongos es con el fin de aislarlas en el medio para lograr un
mejor estudio de ellos.
7. CUESTIONARIO
1. CUANDO REALIZARIA CULTIVO POR DILUCIONES?
Tcnica de las diluciones en serie:
Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayos
cantidad que cualquiera de los otros microorganismos, es posible obtenerlo en
cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo, del medio de cultivo
apropiado. Cuando la muestra este muy diluida contendr solamente la bacteria
que buscamos. Aunque es recomendable confirmar mediante el procedimiento
de la siembra en placa la pureza del cultivo que se aisl de la manera descrita.
2. QUE OTRAS FORMAS DE SIEMBRA EXISTEN?
Tcnica por agotamiento de asa
Siembra por estras.
Siembra por puncin.
Siembra volumtrica.
Siembra masiva.
8. BIBLIOGRAFIA
http://html.tecnicas-de-cultivo-microbiologia.html
http://www.slideshare.net/aguero-luna/medios-de-cultivos
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf

Medio de
cultivo

Tipo de
medio

Agente
bacteriosttico

Azcar
fermentab
le

Sistema Indicador

ALRF (agar
lactosa rojo
fenol)
Agar Cetrimide

diferencial
(no
selectivo)
selectivo

-----

lactosa

rojo fenol

-------

--------

Agar Mac
Conkey

selectivo y
diferencial

bromuro de
cetiltrimetil
amonio
cristal violeta,
sales biliares

lactosa

rojo neutro

SS agar
(Salmonella
Shigella)
VRBA (violeta
rojo bilis agar)

selectivo y
diferencial

verde brillante,
sales biliares

lactosa

rojo neutro, citrato


frrico

selectivo y
diferencial

cristal violeta,
sales biliares

lactosa

rojo neutro

Manitol Salt
Agar (Chapman)

selectivo y
diferencial

cloruro de
sodio

manitol

rojo fenol

EMB agar (eosin selectivo y


methylen blue)
diferencial

eosina y azul de lactosa


metileno

eosina y azul de
metileno

XLD agar
(xilosa lisina
desoxicolato)

selectivo y
diferencial

desoxicolato de
sodio

lactosa,
xilosa,
sacarosa

rojo fenol, citrato


frrico amnico y
tiosulfato de sodio

BiS agar
(bismuto sulfito)

selectivo y
diferencial

glucosa

Baird Parker
agar

selectivo y
diferencial

indicador de sulfito
de Bi y sulfato
ferroso
yema de huevo,
telurito de potasio

TSB + 10%
NaCl

enriquecimie
nto selectivo

verde brillante,
sulfito de
bismuto
Cloruro de litio
y telurito de
potasio
cloruro de
sodio

------

-------

Caldo
Tetrationato

enriquecimie
nto selectivo

Tetrationato,
sales biliares

------

------

------

CLBVB (caldo
enriquecimie verde brillante, lactosa
produccin de gas
lactosa bilis
nto selectivo sales biliares
verde brillante)
MEDIO DE CULTIVO, TIPO DE MEDIO, AZUCAR FERMENTABLE, SISTEMA
INDICADOR