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EQUIPO 1

ES POSIBLE DEMOSTRAR LA ACCIN DE LA LIPASA PANCRETICA EN PRESENCIA DE BILIS?


RESULTADOS
INTRODUCCIN:

OBJETIVO
Demostrar la accin de la lipasa pancretica en presencia y ausencia de la bilis.

B) graficas

MATERIAL

Clasificacin: Existen diversos criterios para clasificar a los lpidos, presentamos la


que se emplea con mayor frecuencia basada en su composicin qumica:
cidos Grasos: se definen como cidos orgnicos que presentan un mnimo de 9
carbonos.

8 Matraces Erlenmeyer de 125 ml

3.5

Pinza para bureta

1 Bureta de 25 ml

1 Pipeta de 10 ml

1 Soporte universal

1 Pipeta de 1 ml

Termmetro y bao mara a 37 C

3.5

REACTIVOS

Triacilglicridos: compuestos de 3 residuos de cidos grasos grasos esterificados al


glicerol .

CON BILIS

SIN BILIS

1 Pipeta de 5 ml

2.5

ml de KOH

ml de KOH

Lpidos: Es un grupo de sustancias heterogneas que slo tienen en comn dos


caractersticas: son insolubles en agua y son solubles en disolventes orgnicos, como
ter, cloroformo, benceno, etc. Sus funciones biolgicas son: fuente de energa,
reserva energtica, estructural, reguladora y transportadora.

A) Datos de la resta de ml:

1.5

La pancreatina es una mezcla de las enzimas digestivas secretadas por el parnquima del pncreas. El pncreas humano es un rgano que
rene funciones secretoras endocrinas y exocrinas. Las secreciones exocrinas del pncreas son importantes en la digestin. El jugo
pancretico consta de un componente acuoso, rico en bicarbonato, que ayuda a neutralizar el contenido duodenal y un componente
enzimtico.
El componente enzimtico contiene enzimas importantes para la digestin de la mayor parte de los alimentos. La ausencia completa de
enzimas pancreticas implica una mala absorcin de lpidos, protenas y carbohidratos. El jugo pancretico contiene -amilasa, tripsina,
quimotripsina y carboxipeptidasa. El jugo pancretico contiene adems diversas enzimas para la digestin de lpidos, llamadas lipasas. Entre
las principales lipasas pancreticas destacan la triaglicerol hidrolasa, el colesterol ster hidrolasa y fosfolipasa A2. La lipasa son enzimas muy
lbiles al calor y el pH cido, y su accin se lleva a cabo por medio de la hidrlisis de los enlaces ster, junto con los cidos grasos. Estas
enzimas actan mejor en pH entre 7 y 9 y temperaturas entre 37o y 39 C y su actividad depende de la absorcin sobre las partculas
micelares.
Sales biliares
Las sales biliares son cidos biliares mezclados con un catin, por lo general sodio, aunque a veces es potasio. Los cidos biliares son cidos
esteroides que se encuentra principalmente en la bilis. En los seres humanos, las sales de cido tauroclico y cido glicoclico (derivados del
cido clico) representan aproximadamente el 80% de todas las sales biliares. Las sales biliares se producen en el hgado por el Citocromo
P450 mediado por la oxidacin del colesterol. Se conjugan con la taurina o el aminocido glicina, o con un sulfato o glucurnido, y luego se
almacenan en la vescula, que concentra las sales biliares mediante la eliminacin de agua. Tras una comida, el contenido de la vescula biliar
se secretan en el intestino, donde las sales biliares sirven para emulsionar las grasas dietticas incrementando la interfase lpido agua. Al
hacerlo, facilitan el contacto entre enzima y sustrato, lo que permite la metabolizacin de los lpidos y su absorcin en la pared intestinal.

1.5
1

Pancreatina al 1% en agua

Etanol al 95%

0.5

0.5

KOH 0.05 N

Fenolftalena

Reacciones de los triglicridos:

Pancreatina:

15

30

45

Tiempo de hidrolisis

La hidrlisis enzimtica de los triglicridos se produce mediante la escisin del enlace ster, y la formacin de cidos grasos y glicerol. Dicha
hidrlisis es llevada a cabo en la interfase lquidoagua debido a que las grasas son no solubles en agua.

2.5

Leche homogeneizada

60

15

30

45

60

Tiempo de hidrolisis

Bilis

DISCUSIN
Etanol (95%)

Hidrxido de Potasio (0.05 N)

Frmula: C2H6O
Peso molecular: 46.07 g/mol
Apariencia y olor: Lquido transparente e incoloro,
olor caracterstico.
Punto de fusin:-114.1C
Punto de ebullicin: 78.5C
Densidad: 0.789 g/cm3
Grado Alcoholimtrico: 95 G.L. Mnimo
Solubilidad: Miscible con agua

Frmula: KOH
Peso molecular:56.1056 g/mol
Apariencia y olor: Slido blanco, delicuescente,
inodoro.
Punto de fusin: 380C
Punto de ebullicin: 1324C
Densidad: 2,04 g/cm3
Solubilidad en agua, g/100 ml a 25C: 110

Fenolftalena

Frmula: C20H14O4
Peso molecular: 318,33 g/mol
Apariencia y olor: Slido, cristales blancos o
blancos amarillentos, sin olor.
Punto de fusin: 258-262C (se descompone
completamente)
Densidad a 20C: 1,29 g/cm3
Solubilidad en agua: Muy soluble en Acetona Soluble en Tolueno - Moderadamente soluble en
Alcohol Etlico y Dietil ter - Insoluble en Benceno y
ter de Petrleo.

Primero realizamos la resta de los ml usados de KOH del testigo 1 a los matraces 1,2,3 y del testigo 2 a los matraces 4,5,6, esto fue ya que a los
matraces que sirvieron como testigos se les agrego la pancreatina con un proceso trmico, como no va a presentar accin en la reaccin nos
permitir saber si la leche tenia algunos cidos grasos ya liberados y as no sean tomados en cuenta mas adelante. Despus se construyeron las
graficas y pudimos observar claramente la funcin que tienen las sales biliares en la reaccin, pues hubo un aumento en el volumen de KOH en la
grafica 2, lo que significa que hubo un mayor numero de cidos grasos liberados, pues la lipasa tuvo una mayor actividad enzimtica en presencia
de la bilis.

CONCLUSIN
La hidrlisis de los triglicridos se lleva a cabo por medio de enzimas lipolticas elaboradas en el pncreas. Estas reacciones se aceleran con las
sales biliares como taurocolato o glicocolato de sodio, que emulsifican y solubilizan a los lpidos. Las sales biliares vienen en la bilis. Los substratos
de la lipasa son los triglicridos de cadena larga a los cuales hidroliza; rompen la unin Ester en la posicin alfa y por lo tanto hay ms triglicridos
despus del rompimiento, para lo cual se necesita ms ml de KOH, que es proporcional a los cidos liberados. Por lo que concluimos que la lipasa
Cataliza la hidrlisis de los cidos grasos, rompiendo su larga cadena y se observ la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulacin de
los cidos grasos liberados.

CUESTIONARIO
1.- Cul es la interpretacin de las grficas obtenidas?
En la grafica 1 se puede observar que la titulacin se realizo de forma correcta, ya que la recta de ml usados en la titulacin, fue ascendiendo
conforme el tiempo de incubacin aumentaba, por lo que la presencia de cidos grasos fue normal.
En la grafica 2 se puede observar un aumento en el volumen de titulante conforme aumentaba el tiempo de incubacin, pero se puede notar que
los volmenes fueron mayores a los volmenes de la grafica 1, por lo que podemos decir que la liberacin de cidos grasos en la leche fue mayor
ante la presencia de bilis.
2.- Cul es el objeto de agregar bilis en el experimento?
Es necesario el empleo de agentes emulsificantes como lo son las sales biliares (que producen una estimulacin de la hidrlisis enzimtica de los
lpidos) las cuales son uno de los principales componentes de la bilis.

PROCEDIMIENTO

3.- Cmo se clasifican los lpidos?

4.- Cules son los cidos grasos ms importantes de la grasa humana?

Leche homogeneizada
Por definicin la leche de vaca es la secrecin, excluyendo el calostro, que se puede obtener mediante mtodos normales de ordeo de la
glndula mamaria lactante de vacas sanas, alimentadas normalmente. Se puede considerar que contiene tres componentes bsicos: agua,
grasa y slidos no grasos (SNG). La materia orgnica de la porcin no grasa consiste principalmente de las protenas (caseina 80%, albminas
5% y globulinas 12%), lactosa y cidos lctico y ctrico.
La homogenizacin de la leche se obtiene hacindola pasar bajo presin elevada ( 180 200 bares) a travs de orificios o vlvulas muy
estrechas con lo que el tamao de los glbulos grasos se reduce aproximadamente a 1/5 del inicial (unos 5 m). Tambin se destruyen
parcialmente las micelas de casena y los pedazos se adhieren a la superficie de los glbulos grasos. Estos dos fenmenos estabilizan la
emulsin retardando la decantacin y coalescencia. La homogenizacin tambin mejora la consistencia de la leche, aumenta su blancura y
hace los lpidos mas digestibles porque las lipasas digestibles penetran mejor en una emulsin mas fina . Por esta razn , la leche
homogenizada es muy sensible a las lipasas endgenas de la leche.
Las enzimas digestivas de los triacilglicridos son hidrosolubles, su digestin se lleva a cabo en interfases lpido-agua. La velocidad de este
proceso, depende entonces del rea superficial de la interfase, la cual se incrementa por los movimientos peristlticos del intestino
combinados con la emulsificacin de los cidos biliares (detergentes digestivos sintetizados en el hgado y llevadas al intestino delgado en
donde la digestin y absorcin lipdica se lleva a cabo).
Latriacilglicerol lipasa presenta activacin superficial i.e. su actividad se incrementa al entrar en contacto con la interfase lpido-agua, no se
une a la interfase, est en contacto con la colipasa.
Los productos de la digestin de los lpidos, son absorbidos por las clulas de la mucosa intestinal (en el intestino delgado) el proceso es
facilitado por los cidos biliares que ayudan a formar micelas. Los cidos biliares son esenciales para el transporte de los productos de la
digestin de los lpidos, no slo para su degradacin, as mismo son necesarios para el transporte de vitaminas liposolubles (A,D,E y K).
Las lipasas pancreticas existen en dos tipos: las especificas para romper la unin ester en la posicin alfa o alfa prima de los triglicridos, y
las especificas para las uniones beta. La hidrlisis completa de los triglicridos procede entonces por pasos. Primero se hidrolizan

MATRAZ NMERO
REACTIVOS (ml)

T1

T2

Leche homogeneizada

Extracto neutro de
pancreatina al 1%

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

45

15

30

45

15

30

45

45

Extracto de pancreatina
caliente a ebullicin por 3
minutos.
Bilis
Tiempo de incubacin a 37 C

5.- Cul es la importancia clnica de la lipasa en un diagnstico?


La lipasa (LPS) es una enzima pancretica necesaria para la absorcin y digestin de los nutrientes, cataliza la hidrlisis de los esteres de glicerol
de los cidos grasos. La determinacin de la LPS es til para el diagnostico de enfermedades del pncreas como pancreatitis aguda y obstruccin
pancretica. El diagnostico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.
6.- Cul es la composicin y el funcionamiento del tejido adiposo?
Las clulas adiposas, adipocitos o lipocitos son las clulas que forman el tejido adiposo. Existen dos tipos de tejido adiposo, y por tanto dos tipos
de adipocitos diferentes que los forman.

Adipocitos blancos: contienen una gran cantidad de lpidos rodeados por un anillo de citoplasma. El ncleo es plano y se localiza en la
periferia. Contienen grasa en un estado semilquido, y compuesta principalmente por triglicridos y steres de colesterol. Secreta
resistina, adiponectina y leptina.

Adipocitos marrones: tienen una caracterstica forma poligonal, y a diferencia de los adipocitos blancos tienen una gran cantidad de
citoplasma con fracciones dispersas de lpidos. Su ncleo es redondo, y aunque est ligeramente desplazado del centro de la clula no se
encuentra en la periferia. Su color marrn se origina por la gran cantidad de mitocondrias que poseen.
La funcin ms importante del tejido adiposo consiste en proporcionar un lugar donde almacenar energa, para que pueda ser usada por el
organismo cuando la ingesta calrica sea inferior a los requerimientos. Esta energa se almacena fundamentalmente en forma de triglicridos, los
cuales pueden sintetizarse en el propio adipocito, generalmente a partir de la glucosa.
Otra funcin del tejido adiposo es la movilizacin de los triglicridos almacenados, cuya posterior hidrlisis produce cidos grasos libres que
abandonan la clula y son transportados por la sangre unidos a la albmina. La hidrlisis de los triglicridos almacenados est sujeta a un control
hormonal estricto, de modo que la cantidad de cidos grasos liberados en sangre depende de los requerimientos energticos del organismo.