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Estequiometría del crecimiento y formación de producto

Para un balance de materia con reacción, se debe conocer la estequiometría de la
reacción. Cuando existe crecimiento celular, las células son el producto de reacción
y deben, por tanto, estar representadas en la ecuación de reacción. Ahora se
mostrará cómo se formulan las ecuaciones de la reacción de crecimiento y de
síntesis del producto. La estequiometría metabólica posee muchas aplicaciones en
bioprocesos: al igual que en los balances de materia y energía, puede utilizarse para
comparar rendimientos de producto teóricos y experimentales, comprobar la
consistencia de los datos de fermentación experimentales y formular medios de
nutrición.
Estequiometría del crecimiento y balances elementales
A pesar de su complejidad y de que existen miles de reacciones intracelulares, el
crecimiento de las células obedece a la ley de conservación de la materia. Todos los
átomos de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y otros elementos consumidos
durante el crecimiento se incorporan a las nuevas células o se expulsan como
productos. Centrando nuestra atención en aquellos compuestos consumidos o
producidos en cantidades significativas, si los únicos productos extracelulares
formados son CO2 y H20, el crecimiento aerobio de las células puede describirse
mediante la siguiente ecuación:

(1)
En la ecuación (1),
es la fórmula química que representa el
sustrato (por ejemplo, para la glucosa, w = 6, x = 12, y = 6 y z = 0).
es la fórmula química de la fuente de nitrógeno y CH
O
N es
la «fórmula» química de la biomasa seca, a, b, c, d y e son los coeficientes
estequiométricos. La ecuación (1) se escribe tomando como referencia un mol de
sustrato, de manera que se consumen a moles de O2 y se forman dmoles de CO2
por cada mol de sustrato consumido, etc. Como se muestra en la Figura 1, la
ecuación representa un punto de vista macroscópico del metabolismo ya que ignora
la estructura detallada del sistema y considera únicamente aquellos componentes
que presentan un intercambio neto con el ambiente que les rodea. A pesar de su
simplicidad, la aproximación macroscópica
resulta
ser
una
herramienta muy útil
en
el
análisis termodinámico. La ecuación
(1) no incluye gran cantidad de compuestos

Podrían también incluirse compuestos tales como las vitaminas y minerales tomados durante el metabolismo.como el ATP y el ADNH que integran el metabolismo y que sufren cambios cíclicos en las células. Sin embargo.2. aunque existe normalmente un 510% de ceniza residual que no se incluye en la fórmula. cuando no se dispone de la composición puede utilizarse como fórmula general CH1. tienen como base de referencia un átomo de C. pero que no sufren cambios netos con el ambiente. CwHxOyNz + a02 + bHg OhNi cCH O N + dCO2 + eH2O (1) .5N0. oxígeno y nitrógeno para el crecimiento celular.. El «peso molecular» medio de la biomasa basado en los contenidos de C. aunque estos factores de crecimiento se consumen generalmente en tan pequeñas cantidades que su contribución a la estequiometría y a la energía de la reacción es despreciable. H. Las fórmulas de biomasa seca. la cantidad total de biomasa formada durante el crecimiento puede calcularse mediante el coeficiente estequiométrico c de la ecuación (1). la composición celular depende también de las condiciones de cultivo y del sustrato utilizado: de ahí que se encuentran diferentes fórmulas para un mismo organismo. Figura 1: Conversión del sustrato. Ecuaciones de balance. En la ecuación (1). La fórmula muestra simplemente la composición de la biomasa.8O0.0%). Para determinadas especies. la biomasa se representa por la fórmula CH O N .6. Las bacterias tienden a tener contenidos de nitrógeno ligeramente mayores (11-14%) que los hongos (6. Por ello. O y N. O y N es por lo tanto 24. H. Los microorganismos como la Escherichia coli contienen una gran variedad de elementos aunque el 90-95% de la biomasa está constituida por cuatro elementos mayoritarios: C. aunque ésta no se aplique normalmente en biología.3-9. No existe objeción alguna a que exista una fórmula molecular para describir las células. cabe destacar que los resultados son muy similares para células y condiciones muy diferentes.

es el cociente de respiración (RQ). Cuando la ecuación (1) está completa. Esto significa que se necesita alguna información adicional pararesolver el sistema. un balance de electrones. c. Rendimiento de biomasa Generalmente.La ecuación (1) no es completa a menos que se conozcan los coeficientes estequiométricos a. Generalmente esta información se obtiene experimentalmente. b. mediante balances elementales y resolución simultánea de ecuaciones. es decir. c. sin embargo. muy sensibles a pequeños errores en el valor de RQ. Una vez obtenida la fórmula de la biomasa. Balance de C:w = c + d(2) Balance de H:x + bg = c + Balance de O:y+ 2a + bh = c Balance de N:z + bi = c (5) 2e(3) +2d+e(4) Obsérvese que existen cinco coeficientes desconocidos (a. y el valor medido de RQ. (6) Cuando se dispone de un valor experimental de RQ.Sin embargo. necesitándose . medible de forma experimental. b. estos coeficientes pueden calcularse mediante los procedimientos normales de las ecuaciones de balances. d y e) pero sólo cuatro ecuaciones de balances. nitrógeno y oxígeno necesarias para la producción de biomasa pueden determinarse directamente. Un parámetro muy útil. dos balances elementales y una cantidad medida son todavía una información inadecuada para resol ver cinco coeficientes desconocidos. ecuaciones (2) y (5). el cual debe medirse con gran exactitud. las ecuaciones (2) a (6) pueden ya resolverse y así determinar los coeficientes estequiométricos. para calcular los coeficientes estequiométricos se utiliza la ecuación (7) junto con los balances de carbono y nitrógeno. d y e. Los resultados son. las cantidades de sustrato.

Conforme las células crecen existe.todavía otra cantidad experimental para ello. Estas funciones metabólicas requieren sustrato pero no producen necesariamente biomasa celular. la elección del aceptor de electrones. debe estarse seguro de que el sistema de cultivo experimental está correctamente representado por la ecuación estequiométrica. La ecuación (8) expresada en términos de la estequiometría de la ecuación (1) es: (9) donde MW es el peso molecular y «MW células» significa el peso-fórmula de la biomasa más cualquier ceniza residual. YXS: (8) El rendimiento de biomasa se ve afectado por gran cantidad de factores como la composición del medio. El rendimiento de biomasa es mayor en cultivos aerobios que en los anaerobios. la recuperación de componentes celulares y la movilidad celular. antes de aplicar los valores medidos de Yxs y la ecuación (9) para calculare. CO2 y H2O. Por ejemplo. nitrato o sulfato. el pH y la temperatura. la naturaleza de las fuentes de carbono y nitrógeno. debemos estar seguros de que el sustrato no se utiliza para sintetizar otros productos extracelulares que no sean CO 2 y H2O. puede tener también un efecto significativo. Sin embargo. O 2. Cuando YXSes constante durante el crecimiento. En el Capítulo 11 se discuten con más detalle las necesidades de mantenimiento y la diferencia entre rendimientos observados y reales. Es importante tener en cuenta este mantenimiento. Por el momento se considerará que los . es decir. como regla general. su valor determinado experimentalmente puede utilizarse para calcular el coeficiente estequiométrico c en la ecuación (1). Esta relación se expresa cuantitativamente utilizando elrendimiento de biomasa. tal como se describe en la ecuación (1). Una complicación de los cultivos reales es que alguna fracción de sustrato se consume para actividades de mantenimiento tales como el mantenimiento del potencial de la membrana y del pH interno. cuando se utiliza información experimental para completar las ecuaciones estequiométricas. una relación lineal entre la cantidad de biomasa producida y la cantidad de sustrato consumido.

Demanda teórica de oxígeno La demanda de oxígeno es un parámetro importante en el bioprocesado ya que el oxígeno es a menudo el sustrato limitante en las fermentaciones aerobias. La ecuación (1) puede extenderse para incluir la síntesis del producto de la siguiente manera: CwHxOyNz + a02 + bHg OhNi cCH O eH2O +fCjHkOlNm(10) N + dCO2 + Donde f es el coeficiente estequiométrico para el producto. asimismo no puede aplicarse a la producción metabólica secundaria como la fermentación de la penicilina o en biotransformaciones como la hidroxilación de esteroides que involucran sólo un pequeño número de enzimas. por lo que se necesitará conocer otra relación más entre coeficientes. Las necesidades de oxígeno están directamente relacionadas con los electrones disponibles para la transferencia de oxígeno por lo que la demanda de oxígeno puede derivarse a . En estos casos. La demanda de oxígeno está representada por el coeficiente estequiométrico a en las ecuaciones (1) y (10). para describir el crecimiento y síntesis de producto deben utilizarse ecuaciones de reacción independientes. La síntesis del producto introduce otro coeficiente estequiométrico desconocido a la ecuación. Para ello se utiliza generalmente otro coeficiente de rendimiento determinado experimentalmente.valores disponibles de rendimiento de biomasa reflejan sólo el consumo de sustrato para el crecimiento. debe asegurarse de que el sistema experimental utilizado para medir Y ps corresponde a la ecuación (10). La ecuación (10) no es válida si la formación de producto no está directamente relacionada con el crecimiento. Estequiometría del producto Considérese la formación de un producto extracelular C jHkOlNm durante el crecimiento. Yps (11) Como se ha mencionado anteriormente en relación al rendimiento de biomasa. el rendimiento de producto a partir del sustrato.

la demanda de oxígeno puede calcularse rápidamente. como el representado por la ecuación (10). Cuando existe síntesis de producto. el balance de electrones es: (12) donde obtiene: es el grado de reducción del producto. Rendimiento máximo posible De la ecuación (12) se deduce que el reparto de electrones disponibles en el sustrato puede escribirse como: (14) El primer término de la parte derecha de la ecuación (14) es la fracción de electrones disponibles transferidos desde el sustrato al oxígeno. y el rendimiento de biomasa (c) y de producto (f). La ecuación (13) permite una evaluación más rápida y no es necesario conocer las cantidades de NH3 CO2 y H2O involucradas. el sustrato (w y ) y el producto (j y ) involucrados en el cultivo celular. Por supuesto a puede también determinarse resolviendo los coeficientesestequiométricos de la ecuación (10) como se ha descrito. Significa que si se conocen los organismos ( ). Si se define como la fracción de electrones disponibles en el sustrato transferidos a la biomasa: (15) .partir de un balance de electrones apropiado. Esta relación puede utilizarse para obtener los rendimientos de biomasa y producto a partir del sustrato. Reordenando la ecuación se (13) La ecuación (13) es una ecuación muy útil. el segundo término es la fracción de electrones disponibles transferidos a la biomasa y el tercero es la fracción de electrones disponibles transferidos al producto.

el valor máximo del coeficiente estequiométrico c es: (16) cmax puede convertirse a rendimiento de biomasa con unidades de masa mediante la ecuación (9).5N0. indicado por elevados valores de . Cuando se calculan los rendimientos y las demandas de oxígeno para cualquier proceso que incluye crecimiento celular debe utilizarse la ecuación estequiométrica global incluyendo la biomasa. Los sustratos con alto contenido energético. la naturaleza química o el estado de oxidación del sustrato presentan su mayor influencia sobre el rendimiento de producto o a biomasa a través del número de electrones disponibles.En ausencia de formación de producto.2 que es el valor medio de la fórmula de la biomasa CH 1. si todos los electrones disponibles se utilizaran para la síntesis de biomasa sería igual a la unidad. puede tomarse como 4. De esta manera puede determinarse el rendimiento máximo de producto en ausencia de síntesis de biomasa.max) o como número de átomos de C en la biomasa por átomo de C de sustrato consumido (cmax/w). Por otro lado. Los rendimientos máximos de biomasa pueden expresarse en términos de masa (Y xs. En conclusión la ecuación de la reacción química para la conversión del sustrato sin crecimiento es una pobre aproximación de la estequiometría global cuando existe crecimiento celular. Bajo estas condiciones. Si no se conoce la composición de las células.2. el límite superior de rendimiento de biomasa puede calcularse rápidamente a partir de la fórmula molecular del sustrato y del producto. . Estas cantidades se denominan algunas veces como rendimientos termodinámicas máximos de biomasa. Entonces. incluso si no se conoce la estequiometría de crecimiento. producen los mayores máximos de rendimientos de biomasa. a partir de la ecuación (14): (17) La ecuación (17) permite calcular rápidamente el límite superior del rendimiento de producto a partir de la fórmula molecular del sustrato y del producto.8O0.