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REBIOL 2012; 32(2):91-98 (julio-diciembre 2012)

Revista Cientfica de la Facultad de Ciencias Biolgicas


Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per

Efecto repelente del aceite esencial de Eucalyptus


globulus contra la picadura de Lutzomyia
peruensis, bajo condiciones experimentales
Repellent effect of essential oil of Eucalyptus globulus against the bite
of Lutzomyia peruensis under experimental conditions
Judith Roldn Rodrguez, Esperanza Gonzales Pajares y Richar Morales
Rodrguez
Laboratorio de Artropodologa Parasitaria, Departamento de Microbiologa y Parasitologa. Facultad de Ciencias
Biolgicas. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per

RESUMEN
Se determin el efecto repelente de las concentraciones de 5, 15 y 20% v/v del aceite foliar de Eucalyptus
globulus, contra la picadura de Lutzomyia peruensis en condiciones experimentales.Para ello, se utilizaron

especmenes hembras de 5 a 7 das de edad y en estado de inanicin durante tres das; las cuales fueron
expuestas para alimentarse de Mesocriteus auratus a quien se le aplic 0.1mL/60cm2 en el abdomen rasurado de
cada una de las concentraciones 5, 15 y 20% v/v de aceite a ser evaluadas; se emplearon 20 especmenes por
cada concentracin adems del grupo control (diluyente: acetona); el tiempo de exposicin fue durante 5
minutos a intervalos de 30 min hasta que se produzca la primera picadura; el ensayo de realiz por triplicado,
evalundose el tiempo de proteccin y el porcentaje de repelencia. Se obtuvo altos porcentajes de proteccin
(100%) en las concentracin de 15 y 20%, no encontrndose diferencias significativas entre estas
concentraciones (P>0.01) pero si entra la concentraciones 0 y 5% (p<0.05), sin embargo hasta las 180 horas se
observ un 100% de repelencia en las tres concentraciones. Se concluye que las concentraciones de 5, 15 y
20% v/v del aceite foliar de E. globulus presentan actividad repelente contra la picadura de L. peruensis.
Palabras clave: Lutzomyia, Repelente Aceite esencial, Eucalyptus

ABSTRACT
Repellent effect of concentrations of 5, 15 and 20% v/v leaf oil of Eucalyptus globulus against the bite of
Lutzomyia peruensis in experimental conditions was determined. For this, female specimens were used 5 to 7
days of age and state of starvation for three days which were exposed to feed Mesocriteus auratus who

0.1mL/60cm2 was applied on the shaved abdomen of each of the concentrations 5, 15 and 20% v/v of oil to be
evaluated, 20 specimens were used for each concentration also the control group (solvent: acetone), the exposure
time was 5 minutes at 30 min intervals up occurs first sting, the assay performed in triplicate, evaluating the
protection time and the percentage of repellency. We obtained high percentages of protection (100%) in the
concentration of 15 and 20%, with no significant differences between these concentrations (P> 0.01) but enters
the concentrations 0 and 5% (p <0.05), however until 180 hours showed a 100% repellency at all three
concentrations. It is concluded that concentrations of 5, 15 and 20% v/v leaf oil of E. globulus have repellent
activity against the bite of L. peruensis.
Keywords: Lutzomyia, repellent essential oil, Eucalyptus

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INTRODUCCIN
La leishmaniosis es un grupo de enfermedades causadas por protozoarios parsitos del gnero

Leishmania (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), que es transmitida por la picadura de insectos


dpteros hematfagos de la familia Psychodidae de los gneros Lutzomyia y Phlebotomus y que

presenta cada vez mayores casos a nivel mundial debido al incremento en la transmisin peridomstica, producto de la adaptacin de los vectores a estas reas, y promovida a su vez, por la
deforestacin, urbanizacin y cambios climticos en las zonas de transmisin1,2,3.
En la actualidad, no se dispone de un esquema inmunoprofilctico eficaz para prevenir las
infecciones por Leishmania. La quimioterapia con antimoniales pentavalentes, contina siendo, desde
hace ms de 50 aos, la manera convencional ms rpida, prctica y eficaz para el tratamiento de la
leishmaniosis; sin embargo, estas drogas tienen alta toxicidad y costos elevados; adems,
recientemente se han presentado casos de resistencia en algunas especies de Leishmania, por lo que
es necesario desarrollar alternativas de prevencin y control de la leishmaniosis1,4.
El control vectorial mediante el rociamiento de insecticidas de origen qumico, especialmente a
nivel peri domiciliar e intra domiciliar, as como a nivel selvtico y la utilizacin de mosquiteros
impregnados de los mismos, es una de las medidas generalmente implementadas, aunque su xito
depende de la conducta de los vectores4,5,6. A pesar de lo prctica y atractiva que resulta esta medida,
presenta los siguientes inconvenientes que pueden ser limitantes para ser usados en el control:
desconocimiento de la bio-ecologa y los criaderos de los insectos vectores, la aparicin de resistencia,
discontinuidad de los programas anti vectoriales, sus altos costos, que han afectado la salud humana,
animal y la biosfera en general7,8,9,10.
El control de los flebotominos con insecticidas no es tan viable, una manera de solventar dicho
problema, es desarrollar repelentes, como medida alternativa de proteccin contra los vectores5. La
accin de los repelentes mayormente consiste en producir unas desagradables sensaciones en los
terminales sensitivos de los insectos, por ello su efecto repelente es muy marcado cuando el insecto se
posa en alguna superficie tratada, adems interrumpe la produccin de dixido de carbono, evitando
as la picadura11; tambin presenta una elevada volatilidad, por lo que se crea un cierto entorno
repelente en las zonas donde se aplica12. Tal es el caso del DEET (N, N-dietil-3-metilbenzamida),
considerado uno de los repelentes sintticos ms efectivo contra los mosquitos 13 el cual bloquea los
receptores de las sustancias atrayentes suprimiendo el vuelo, por lo tanto, se produce el abandono del
hospedero12; sin embargo, ciertas reacciones txicas han sido reportadas tanto para el humano como
para el medio ambiente as como tambin, el incremento de la resistencia de los mosquitos a este
producto13,14. Es as que se han desarrollado compuestos repelentes naturales derivados de plantas
como un recurso alternativo, los cuales producen un mecanismo de defensa qumica contra los
mosquitos14. Estos productos son menos nocivos para el ambiente y la salud de los humanos 13. Debido
a que las plantas contienen muchos compuestos qumicos, los cuales son importantes en su defensa
contra los insectos, tales como: alcaloides, terpenoides, fenoles, inhibidores de proteinasa y
reguladores del crecimiento se estn empleando para la obtencin de repelentes15.
Se conoce que los extractos de muchas plantas actan como repelentes de insectos 15. Estos
extractos son los aceites esenciales que son las fracciones lquidas voltiles, generalmente destilables
por arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las plantas son
generalmente lquidos a temperatura ambiente aunque algunos solidifican a baja temperatura; la
mayora son prcticamente transparentes, incoloros o ligeramente coloreados (amarillentos) adems
estos son lipfilos y solubles en disolventes orgnicos apolares (hexano, ter etlico, etc.)16.
Los aceites esenciales se encuentran casi exclusivamente en vegetales superiores, concretamente en
ciertas familias de angiospermas, de las cuales cabe destacar: Apiaceas, Lamiaceas, Mirtaceas, etc. Se
les puede encontrar en diferentes partes de la planta: en las hojas (eucalipto, hierbabuena, limoncillo,
etc.), en las races (anglica, asaro, azafrn, etc.), en el pericarpio del fruto (mandarina, etc.), en las
semillas (ans, comino, etc.), en el tallo (canela, etc.), en las flores (rnica, lavanda, rosa, etc.) y en los
frutos (perejil, pimienta, etc.)16.
Una de las plantas mayormente utilizadas es el Eucalyptus, un rbol que pertenece a la familia de
las Myrtaceas, agrupa cerca de 500 especies de rboles, nativos de Australia y se encuentran
distribuidos en todo el mundo17. El Per es uno de los pases con abundantes plantaciones de
Eucalyptus entre ellos encontramos a E. camaldulensis, E. citriodora, E. globulus en los
departamentos de Cusco, Junn, Amazonas, La Libertad18; siendo este ltimo el ms abundante, el cual

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en su composicin presenta tanino, cidos: glico y elgico, principios amargos, resinas, ceras,
sustancia bacteriosttica y aceite esencial eucaliptol (cineol) como componente activo; el cineol es un
aceite voltil, destilado a partir de sus hojas frescas, lquido incoloro o ligeramente amarillento que
tiene propiedades aromticas caractersticas12.
Los repelentes, si bien no matan al insecto, son una buena alternativa preventiva para evitar la
picadura de los vectores. Entre los ingredientes activos de los repelentes contra la picadura de los
insectos, se incluye el DEET (N-N-dietil- 3-metilbenzamida), el cual contina siendo el lder del
mercado desde hace 50 aos. A pesar de que el DEET ha superado muchas pruebas de toxicidad,
presenta un alto grado de absorcin cutnea y hay pruebas que muestran su efecto txico desde leves a
severos niveles9,19,20. Por lo anterior, es que se ha tratado de sustituir por repelentes sintticos como el
IR3535, SS220, Picaridin y MGK-326 en diferentes formulaciones y concentraciones, con actividad
por ms de 6h7,21,22. Estas sustancias fueron probadas contra Phlebotomus mascitii Grassi, P. dubosqui
Neveu-Lemaire y Lutzomyia longipalpis Luzt & Neiva, con resultados satisfactorios6,22.
Sin embargo, es necesario implementar alternativas de control contra las picaduras de los
flebotominos que sean menos riesgosas y contaminantes. Las plantas medicinales y en particular sus
metabolitos secundarios, son una buena opcin efectiva como repelente contra los insectos 4,23. Se ha
probado una variedad de plantas como repelentes naturales contra mosquitos, de las cuales existen
reportes para Melissa officinalis citronela, Cedrus cedro, Eucaliptus eucalipto, Pimenta
pimienta, Citrus limn, Geranium geranio, Carapa andiroba, Melissa melisa y semillas de
Glycine soya; el tiempo de proteccin de estas especies puede variar de 2 a 30 min. de proteccin
total y cerca de 90 min. para el aceite de semillas de soya4,9,20.
Debido a la presencia de Lutzomyia peruensis en reas endmicas de leishmaniosis de la sierra
peruana y estar involucrada en la transmisin del agente etiolgico de esta parasitosis24, adems de
existir pocos estudios de repelentes botnicos contra los vectores de Leishmania en comparacin con
los realizados con mosquitos25,26, es que se plante el presente trabajo que tuvo como finalidad
evaluar el efecto repelente de las concentraciones de 5, 15 y 20% v/v del aceite foliar de Eucalyptus
globulus contra la picadura de Lu. peruensis, en condiciones experimentales.
MATERIAL Y MTODOS
Material biolgico
En el estudio se utilizaron adultos de Lu. peruensis de la generacin F1 obtenidos en el laboratorio
de Artropodologa Parasitaria a partir de la colecta de adultos del Casero de Pagash, distrito de
Samne, provincia de Otuzco.
Obtencin de adultos de Lu. peruensis
La captura se realiz en trampa Shannon la que fue colocada a 30cm del piso, en el peridomilicio
entre las 18 - 23 horas en el Casero de Pagash, distrito de Samne, provincia de Otuzco y con la
ayuda de tubo aspirador se capturarn los especmenes vivos, los cuales fueron colocados en envases
de plstico conteniendo una base de yeso de Paris humedecido para mantener la humedad alta y
constante, condicin favorable para la supervivencia de los flebotominos. Los especmenes colectados
fueron trasladados al insectario del laboratorio de Artropodologa Parasitaria de la Facultad de
Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de Trujillo; a partir del cual se obtendr una colonia
a ser utilizada en el ensayo. Las colonias se mantienen utilizando la tcnica descrita previamente27 en
incubadora a 20C2 y a 80%10 de humedad relativa.
Se utilizarn 450 Lu. peruensis que fueron criadas en jaulas de 30x30x30 cm. Los adultos fueron
alimentados con una dieta a base de solucin azucarada al 20%, las hembras adems se le alimento
con sangre de Mesocricetus auratus hmster; dentro de la jaula se coloc un recipiente de 15
x10x10 cm conteniendo una base con yeso de pars sobre el cual las hembras realizaron la postura de
huevos, las larvas fueron alimentadas con un producto balanceado elaborado en base a extracto de
hgado de pollo27. Las hembras emergidas fueron utilizadas para la prueba de repelencia, para ello se
consider que deberan tener de 5 a 7 das de edad y en inanicin de 3 das.
Obtencin del aceite esencial
Las hojas de E. globulus fueron recolectadas en las zonas de cultivo de la ciudad de Otuzco
departamento de la Libertad .Se colectaron hojas y flores con la finalidad de realizar la clasificacin
taxonmica correspondiente y fueron separadas manualmente eligiendo siempre las ms suculentas y

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jvenes, ausentes de manchas; para que finalmente sean transportadas al laboratorio de Artropodologa
donde se realiz el procesamiento y extraccin de sus aceites28
La extraccin del aceite a partir de hojas de E. globulus se realiz mediante el mtodo de
destilacin por arrastre de vapor de agua, se obtuvo 5 mL de aceite de a partir de 900 g de hojas
previamente trituradas, en un baln de 2000 mL previamente cortadas en partes pequeas29,30.
Preparacin de las diferentes concentraciones del extracto
A partir del extracto puro del aceite de Eucalyptus se obtuvieron las concentraciones de 5, 15 y
20% v/v del aceite foliar de Eucalyptus globulus utilizando acetona como diluyente31.
Evaluacin de la capacidad de repelencia (bioensayo)
Determinacin de la avidez
Se determin la avidez de ingesta sangunea colocando diez hembras de Lu. peruensis en estado
de inanicin (3dias) dentro de una de las jaulas de crianza que contena a M. auratus hamster
de aproximadamente 200g de peso al cual se le dej expuesta a la picadura el abdomen
previamente rasurado . Esta actividad se realiz entre las 18 horas hasta las 20 hs.
Bioensayo
Para la evaluacin del efecto repelente contra la picadura de Lu. peruensis se utilizaron 20
mosquitos hembras en estado de inanicin (3 dias) para cada concentracin (5, 15 y 20% v/v de
aceite de E. globulus) y grupo control (diluyente: acetona), los cuales fueron instalados en
jaulas de crianza. Como fuente alimenticia se utiliz a un hamster de quien se le aplic
0.1mL/60cm2 de aceite esencial en el abdomen rasurado, de cada una de las concentraciones a
ser evaluadas. Despus de secar en el aire durante 2 min, se le introdujo en la jaula que
contena a los 20 mosquitos hembra, durante 5 minutos a intervalos de 30 min 32; del mismo
modo se procedi con el control. Cada ensayo se repiti tres veces con mosquitos diferentes.
Determinacin del tiempo de proteccin y el porcentaje de repelencia
El tiempo de proteccin, es el tiempo que trascurre desde la aplicacin del producto hasta que
ocurra la primera picadura33,34. Se estim el tiempo de proteccin del aceite por cada concentracin y
al que present efecto repelente satisfactorio (tiempo de proteccin >180min), se determin el
porcentajes de repelencia35.
Clculo del porcentaje de repelencia (PP)
Se realiz el recuento de mosquitos que son repelidos en cada uno de los ensayos. El porcentaje de
proteccin (repelencia), fu calculada de acuerdo con la frmula36:

Dnde:
Nc=nmero de picaduras en el control en determinado perodo de tiempo
Nt=nmero de picaduras en el tratado en el mismo perodo.

Anlisis de datos
Los resultados obtenidos del efecto de repelencia del aceite de E. globulus en Lu. peruensis fueron
sometidos al anlisis de varianza (ANOVA) y una prueba de comparacin de medias Tukey, a fin de
determinar las diferencias entre las concentraciones y el grupo control mediante el uso de un
programa computarizado STATGRAPHICS Plus versin 5.1 con un grado de significancia de 0.05.
RESULTADOS
Respecto de la variacin del porcentaje de repelencia a la picadura de Lu. peruensis en relacin al
tiempo de proteccin, se encontr los ms altos porcentajes de proteccin en las concentracin de 15
y 20%, no encontrndose diferencias significativas entre estas concentraciones (P>0.01) pero s entre
las concentraciones 0 y 5% (p<0.05), sin embargo hasta las 180 horas se observ un 100% de
repelencia en las tres concentraciones (Figs. 1 y 2) .

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Fig. 1. Porcentaje de repelencia a las diferentes concentraciones (0,5, 15y 20%) del aceite foliar de Eucalyptus
globulus contra la picadura de Lutzomyia peruensis en relacin al tiempo de proteccin (Min).

DISCUSIN
Las plantas repelentes, son aquellas que tienen la capacidad de repeler insectos, debido a que en su
estructura tienen compuestos que producen mal olor, interfieren en la comunicacin entre insectos o
tienen efectos irritantes para algunas especies. Son productos a base de sustancias producidas por las
plantas, llamados metabolitos primarios o secundarios y su eficacia depende de muchos factores como
las condiciones del proceso de extraccin, la calidad de la planta de la cual se extrae la sustancia, entre
otras.
Las plantas repelentes se pueden utilizar directamente para beneficio de los humanos, es conocido
el uso de plantas como Foniculum vulgare (hinojo), Ruta graveolens (ruda) y Eucaliptus globulus
(eucalipto) entre otras plantas aromticas como el clavo de olor, canela o citronella, para repeler
insectos chupadores como los mosquitos para lo cual se utiliza extractos33. En animales, los extractos
de repelentes son utilizados para alejar insectos que afectan la piel del ganado, como por ejemplo el
gusano barrenador37.
El efecto repelente del aceite de E. globulus (100%) obtenido en el presente trabajo contra las
picaduras de Lu. peruensis mostr el mayor efecto repelente con un tiempo de proteccin hasta 210
minutos aproximadamente en las tres concentraciones (3.5 horas) (Fig. 1) estos resultados son
similares a los obtenidos por Nieves et al33 quienes reportan que al utilizar el aceite esencial Los
aceites de Pseudognaphalium caeruleocanum y Cinnamomun zeylanicum mostraron un 95% de
proteccin de 3h contra las picaduras de L. migonei siendo el aceite de P. caeruleocanum
quien present el mayor tiempo de proteccin, de ms de 4h y de 2h en concentraciones de 50% y
10%, respectivamente, por lo que sugieren que el aceite P. caeruleocanum podra ser un potencial
candidato como repelente natural contra la picadura de dpteros posibles transmisores de Leishmania.
Otros investigadores han reportado las bondades de los repelentes botnicos contra las picaduras de
flebotominos de los aceites esenciales de citronela, linalol y geraniol en velas, encontrndose un 24%,
55% y 79% de proteccin, respectivamente (Muller et al. 2008); sin embargo, el geraniol, usado en
placas evaporadoras, no produce un efecto repelente contra P. papatasi y P. sergenti Parrot6.
Poco se conoce acerca del mecanismo de accin de los repelentes, se cree que interfieren con los
receptores olfatorios de atraccin hacia la fuente de alimento del insecto. Cada sustancia repelente
acta segn su composicin y al mecanismo especie especfico del insecto involucrado en la atraccin
hacia el hospedador. La mayora de los ingredientes activos de los repelentes actan como
neurotoxinas o toxinas respiratorias para los insectos, bloqueando la respuesta electrofisiolgica de las
neuronas sensoriales olfatorias atractivas del olor, e inhibiendo el comportamiento de atraccin hacia

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la fuente de alimento de los receptores de cido lctico y CO2, entre otros38. La actividad repelente de
una planta se debe principalmente a sus componentes, tales como los fenoles, terpenos o alcaloides;
sin embargo, son necesarios futuros estudios para identificar su papel y los diversos mecanismos
fisiolgicos del insecto involucrados en la atraccin hacia el hospedador39.

P> 0.05

Fig. 2. Porcentaje de repelencia a las diferentes concentraciones (0, 5, 15 y 20 %) del aceite foliar de
Eucalyptus globulus contra la picadura de Lutzomyia peruensis hasta los 180 minutos de exposicin.

Con relacin al tiempo de proteccin del aceite de E. globulus, a diferentes concentraciones (Fig.
2), se observ una disminucin del tiempo de proteccin al disminuir las concentraciones de dichos
aceites, semejante a lo que se reporta con diferentes repelentes botnicos contra mosquitos 23,35. Sin
embargo, para poder definir un buen efecto repelente se considera un tiempo superior a 180
minutos por lo que las tres concentraciones ensayadas en el presente trabajo cumplen con esta
propiedad por lo que tambin se puede concluir que el aceite de E. globulus es una buena alternativa
para la prevencin la picadura de mosquitos vectores de Leishmania; teniendo en cuenta que se ha
observado un inters creciente por incrementar las reas dedicadas a plantaciones forestales con fines
de produccin industrial, siendo E. globulus sin lugar a dudas la especie de mayor distribucin se
halla dispersa en toda la sierra ocupando ms del 90 % de la extensin de plantaciones donde adems
estn las reas endmicas de leishmaniosis
En conclusin las plantas repelentes son una buena alternativa para el control de mosquitos, es
econmica y de fcil elaboracin y aplicacin, sin embargo al utilizar estas tcnicas se debe tomar en
cuenta los problemas que pueden traer si no se utilizan de la manera adecuada.
CONCLUSIN
Las concentraciones de 5, 15 y 20% v/v del aceite foliar de Eucalyptus globulus presentan
actividad repelente contra la picadura de Lutzomyia peruensis
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