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Versin Final Comit - Diciembre 2006

NORMA CHILENA

NCh3044/1-2006
ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004

Leche y productos lcteos - Determinacin del contenido


de nitritos y nitratos - Parte 1: Mtodo usando reduccin
por cadmio y espectrometra

Prembulo
El Instituto Nacional de Normalizacin, INN, es el organismo que tiene a su cargo el
estudio y preparacin de las normas tcnicas a nivel nacional. Es miembro de la
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION
PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos
organismos.
Esta norma se estudi a travs del Comit Tcnico Ensayos en leche, para especificar
un mtodo de ensayo para la determinacin del contenido de nitritos y nitratos en leche
y productos lcteos, mediante reduccin por cadmio y espectrometra.
Esta norma es idntica a la versin en ingls de la Norma Internacional
ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004 (E) Milk and milk products - Determination of
nitrate and nitrite contens - Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry.
La Nota Explicativa incluida en un recuadro en clusula 2 Referencias normativas y Anexo
Bibliografa, es un cambio editorial que se incluye con el propsito de informar la
correspondencia con norma chilena de las normas internacionales citadas en esta norma.
La norma NCh3044/1 ha sido preparada por la Divisin de Normas del Instituto Nacional
de Normalizacin, y en su estudio el Comit estuvo constituido por las organizaciones y
personas naturales siguientes:
Instituto Nacional de Normalizacin, INN
Nestl Chile S.A.

Jos Manuel Romn M.


Manuel Gonzlez G.

NCh3044/1
En forma adicional a las organizaciones que participaron en Comit, el Instituto recibi
respuesta durante el perodo de consulta pblica de esta norma, de las entidades
siguientes:
Universidad de Santiago de Chile
Vialat S.A.
El Anexo A no forma parte de la norma, se inserta slo a ttulo informativo.

II

NCh3044/1

Contenido
Pgina
Prembulo

Alcance

Referencias normativas

Trminos y definiciones

Principio

Reactivos

Aparatos

Muestreo

Preparacin de la muestra de ensayo

8.1

Leche deshidratada y suero deshidratado

8.2

Casena y caseinatos

8.3

Queso

8.4

Queso de suero

Procedimiento

9.1

Preparacin de la columna de cadmio cuprizado

9.2

Comprobacin de la capacidad de reduccin de la columna

9.3

Regeneracin de la columna

10

9.4

Preparacin de la porcin de ensayo

10

III

NCh3044/1

Contenido
Pgina
9.5

Extraccin y desproteinizacin

11

9.6

Reduccin de nitrato a nitrito

12

9.7

Ensayo en blanco

12

9.8

Determinacin

12

9.9

Preparacin del grfico de calibracin

13

10

Clculo y expresin de resultados

13

10.1

Contenido de nitrito

13

10.2

Contenido de nitrato

14

11

Precisin

15

11.1

General

15

11.2

Repetibilidad

15

12

Informe de ensayo

17

Anexo A (informativo) Bibliografa

19

Anexos

Figuras
Figura 1 Columna de reduccin

IV

18

Versin Final Comit - Diciembre 2006

NORMA CHILENA

NCh3044/1-2006
ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004

Leche y productos lcteos - Determinacin del contenido


de nitritos y nitratos - Parte 1: Mtodo usando reduccin
por cadmio y espectrometra

Advertencia: El uso de esta norma puede implicar materiales, operaciones y equipos


peligrosos. No es propsito de esta norma acercarse a todos los problemas de seguridad
asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario de esta norma establecer prcticas
de seguridad y salud, y previo al uso, determinar la aplicabilidad de las limitaciones
reglamentarias.

1 Alcance
Esta parte de la norma especifica un mtodo de ensayo para la determinacin del
contenido de nitratos y nitritos en leche y productos lcteos, mediante reduccin por
cadmio y espectrometra.
El mtodo es aplicable a:
-

leche deshidratada entera, semi descremada y descremada;

quesos duros, semi duros y blandos;

queso procesado;

queso de suero, casenas y caseinatos y queso de suero deshidratado.

El mtodo se puede realizar utilizando equipo automtico, en particular mediante anlisis de


flujo segmentado (SFA) o anlisis de inyeccin de flujo (FIA), ambos reduciendo as la
contaminacin por cadmio en los lugares de trabajo del laboratorio y en las aguas de desecho.
NOTA - Estos mtodos se describen en ISO 14673-2/IDF 189-2 e ISO 14673-3/IDF 189-3, respectivamente.

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2 Referencias normativas
Los siguientes documentos referenciales son indispensables para la aplicacin de este
documento. Para referencias fechadas, se aplica slo la edicin citada. Para referencias
no fechadas se aplica la ltima edicin del citado documento, (incluidas las enmiendas).
ISO 565
ISO 648
ISO 835-1
ISO 1042

Test sieves - Metal wire cloth, perforated metal plate and electroformed
sheet - Nominal sizes of openings.
Laboratory glassware - One-mark pipettes.
Laboratory glassware - Graduated pipettes - Part 1: General requirements.
Laboratory glassware - One-mark volumetric flasks.

NOTA EXPLICATIVA NACIONAL


La equivalencia de las normas internacionales sealadas anteriormente con norma chilena, y su grado
de correspondencia es el siguiente:
Norma internacional

Norma nacional

Grado de correspondencia

ISO 565

No hay

ISO 648

No hay

ISO 835-1

No hay

ISO 1042

No hay

3 Trminos y definiciones
Para los propsitos de este documento se aplican los trminos y definiciones siguientes:
3.1 contenido de nitrato: fraccin de masa de nitrato, determinada por el procedimiento
especificado en esta norma
NOTA - El contenido de nitrato se expresa como masa en miligramos de iones nitrato (NO3) por kilogramo
de producto.

3.2 contenido de nitrito: fraccin de masa de nitrito determinada por el procedimiento


especificado en esta norma
NOTA - El contenido de nitrito se expresa como masa en miligramos de iones nitrito (NO2) por kilogramo de
producto.

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4 Principio
Una porcin de ensayo es dispersada en agua caliente, con precipitacin de grasas y
protenas, y luego filtrada. Los iones nitrato son reducidos a iones nitritos en una
porcin del filtrado, por medio de cadmio cuprizado.
Por la adicin de sulfanilamida y N-1- naftil etilendiamina dihidrocloruro, se desarrolla un
color rojo, tanto del filtrado no reducido, como de la solucin reducida. Las mediciones
espectromtricas se realizan a una longitud de onda de 538 nm.
El contenido de nitrito de la muestra y el contenido total de nitrito despus de la
reduccin de los iones nitratos, se calcula por comparacin de las absorbancias
medidas, con aquellas de un set de soluciones de calibracin de nitrito de sodio. El
contenido de nitrato se calcula a partir de la diferencia entre estos dos contenidos.

5 Reactivos
Usar solamente reactivos de reconocido grado analtico, salvo especificaciones en otro
sentido.
5.1 Agua, destilada o desionizada, o agua de pureza equivalente, libre de iones nitrato y
nitrito.
Para evitar la posible inclusin de pequeas burbujas de gas en la columna de cadmio
cuprizado (ver 9.1.6) hervir suavemente el agua destilada o desionizada y enfriarla a
temperatura ambiente. Usar el agua as preparada para la preparacin de la columna
(ver 9.1), para comprobar la capacidad de reduccin de la columna (ver 9.2) y para
regenerar la columna (ver 9.3).
5.2 Grnulos de cadmio, de 0,3 mm a 0,8 mm de dimetro.
Preparar los grnulos de cadmio, si no estn disponibles comercialmente, como sigue:
Colocar una cantidad apropiada de varillas de zinc en un vaso de precipitado. Cubrir las
varillas con una solucin de sulfato de cadmio (ver 5.3). Raspar la capa de cadmio de
las varillas, ocacionalmente, por un perodo de 24 h. Retirar las varillas de zinc y dejar
decantar el residuo de cadmio formado. Dejar agua suficiente para cubrir la capa de
cadmio. Lavar dos o tres veces el residuo de cadmio con agua. Transferir la capa de
cadmio a un mezclador de laboratorio, junto con 400 ml de solucin de trabajo de cido
clorhdrico (ver 5.7) y mezclar durante unos pocos segundos para obtener grnulos del
tamao requerido. Devolver el contenido del mezclador al vaso de precipitado y dejarlo
en reposo por varias horas, revolviendo ocasionalmente para eliminar burbujas. Retirar la
mayora del lquido e inmediatamente, cuprizar los grnulos, como se describe en 9.1.
PRECAUCION - A causa de su toxicidad, el cadmio utilizado debiera ser enviado como
desecho qumico a las autoridades pertinentes.

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5.3 Solucin de sulfato de cadmio, c (CdSO4 x 8H2O) = 40g/L.
Disolver 40 g de solucin de sulfato de cadmio en agua, en un matraz volumtrico
de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.4 Solucin de sulfato de cobre (II), c (CuSO4 x 5H2O) = 20g/L.
Disolver 20 g de sulfato de cobre (II) en agua, en un matraz volumtrico de 1 000 ml
(ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.5 Acido clorhdrico, (HCl), (20=1,19 g/ml)
5.6 Acido clorhdrico diluido, c (HCl) 2 mol/L
Agregar cuidadosamente 160 ml de cido clorhdrico (ver 5.5) a aproximadamente
700 ml de agua, en un matraz volumtrico de 1 000 ml (ver 6.4) agitando regularmente
el contenido. Enfriar el contenido a temperatura ambiente. Diluir con agua hasta el aforo
y mezclar cuidadosamente.
5.7 Solucin de trabajo de cido clorhdrico, c (HCl) 0,1 mol/L.
Agregar 50 ml de cido clorhdrico diluido (ver 5.6) a un matraz volumtrico de
1 000 ml. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.8 Solucin de sulfato de zinc, c (ZnS04 x 7H2O) = 535 g/L.
Disolver 53,5 g de sulfato de zinc en agua, en un matraz volumtrico de 100 ml
(ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.9 Solucin de potasio hexacianoferrato (II), c (K4[Fe (Cn)6] x 3H2O) = 172 g/L.
Disolver 17,2 g de hexacianoferrato de potasio trihidratado (II), en agua, en un matraz
volumtrico de 100 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.10
Solucin
de
disodio
(Na2C10H14N2O8 x 2H2O)

etilendiamina

tetraacetato

dihidratado

(EDTA),

Disolver 33,5 g de EDTA en aproximadamente 900 ml de agua, en un matraz


volumtrico de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.

5.11 Solucin I
Cuidadosamente agregar 450 ml de cido clorhdrico (ver 5.5) en un matraz volumtrico
de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.

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5.12 Solucin II
Disolver por calentamiento en un bao de agua (ver 6.15), 0,5 g de sulfanilamida
(NH2C6H4SO2NH2) en una mezcla de 75 ml de agua y 5 ml de cido clorhdrico (ver 5.5)
en un matraz volumtrico de 100 ml (ver 6.4). Enfriar a temperatura ambiente. Diluir
con agua hasta el aforo y mezclar. Filtrar la solucin obtenida, si es necesario.

5.13 Solucin III


Disolver en agua 0,1 g de N-1-naftiletilendiamina dihidroclrica (C10H7NHCH2CH2NH2 x 2HCl),
en un matraz volumtrico de 100 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar. Filtrar
la solucin obtenida, si es necesario.
La solucin se puede almacenar en un refrigerador por ms de una semana en una
botella caf bien tapada.

5.14 Solucin stock de nitrito de sodio, (NaNO2)


Secar unos pocos gramos de nitrito de sodio en un horno (ver 6.16) entre 110C y
120C hasta masa constante (es decir, hasta que la diferencia entre dos pesadas
sucesivas no exceda de 1 mg). Disolver 0,150 g de nitrito de sodio en agua, en un
matraz volumtrico de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.

5.15 Solucin de trabajo de nitrito de sodio


Preparar la solucin de trabajo de nitrito de sodio en el da de uso. Transferir con una
pipeta (ver 6.5), 10 ml de la solucin stock (ver 5.14) y 20 ml de la solucin tampn
(ver 5.19) a un matraz volumtrico de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo
y mezclar. El contenido de nitrito en la solucin de trabajo de nitrito de sodio es 1 g/ml.

5.16 Solucin stock de nitrato de potasio, (KNO3)


Secar unos pocos gramos de nitrato de potasio en un horno (ver 6.16) entre 110C y
120C, hasta masa constante (es decir, hasta que la diferencia entre dos pesadas
sucesivas no exceda de 1 mg). Disolver 1,468 g de nitrato de potasio en agua en un
matraz volumtrico de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.

5.17 Solucin de trabajo de nitrato de potasio


Preparar la solucin de trabajo de nitrato de potasio en el da de uso. Transferir con una
pipeta (ver 6.5), 5 ml de la solucin stock de nitrato de potasio (ver 5.16) y 20 ml de la
solucin tampn (ver 5.19) a un matraz volumtrico (ver 6.4) de 1 000 ml. Diluir con
agua hasta el aforo y mezclar El contenido de nitrato en la solucin de trabajo de nitrato
de potasio es 4,50 g/ml.

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5.18 Solucin de amonaco, (NH3), (20 = 0,91 g/ml)
Si no se dispone de una solucin de amonaco de la concentracin antes mencionada,
en 5.19 se puede utilizar una cantidad equivalente de una solucin de amonaco ms
concentrada [por ejemplo, 103 ml de una solucin de amonaco de 35% (fraccin de
masa), (20 =1,19 g/ml)].

5.19 Solucin tampn, pH 9,6 a 9,7


Diluir 50 ml de cido clorhdrico (ver 5.5) con 600 ml de agua en un matraz cnico (ver 6.3)
y mezclar. Agregar 135 ml de solucin de amonaco (ver 5.18) y diluir a 1 000 ml con
215 ml de agua y mezclar. Ajustar el pH, si fuere necesario, entre 9,6 y 9,7.

6 Aparatos
Limpiar cuidadosamente todo el material de vidrio y enjuagar con agua destilada para
asegurarse que est libre de iones nitritos y nitratos.
Equipamiento usual de laboratorio y en particular el siguiente:
6.1 Balanza analtica, capaz de pesar con una exactitud de 1 mg, con lectura de 0,1 mg.
6.2 Contenedor de muestra, provisto de tapa hermtica.
6.3 Matraces cnicos, de 250 ml, 500 ml y 1 000 ml de capacidad.
6.4 Matraces volumtricos, de 100 ml, 500 ml, y 1 000 ml de capacidad nominal, que
cumplan con los requisitos de ISO 1042, clase B.
6.5 Pipetas, capaces de entregar 2 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 8 ml,10 ml, 12 ml, 20 ml y
25 ml, que cumplan con los requisitos de ISO 648 clase A, o ISO 835-1. Cuando sea
apropiado, se puede utilizar buretas en lugar de pipetas.
6.6 Cilindros de medicin, de 5 ml, 10 ml, 25 ml, 100 ml, 250 ml, 500 ml y 1 000 ml
de capacidad.
6.7 Embudos de vidrio, de 7 cm de dimetro, con vstago corto.
6.8 Papel filtro, grado medio, de dimetro aproximado de 15 cm, libre de iones nitrato y
nitrito.
6.9 Columna de reduccin, hecha de vidrio, un ejemplo de la cual se muestra en Figura 1.
6.10 Espectrmetro, adecuado para medir absorbancia en una longitud de onda de
538 nm, con celdas de trayectoria ptica de 1 cm a 2 cm de longitud.

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6.11 Dispositivo de molienda, adecuado para moler la muestra de ensayo, si es
necesario. Para evitar prdidas de humedad, el dispositivo no debe producir calor
indebido. No se debe usar molino de martillo.
6.12 Mezclador de laboratorio u homogeneizador, con contenedores de vidrio de 250 ml
o 400 ml de capacidad, apropiados para poner en suspensin porciones de ensayo de
queso o queso de suero.
6.13 Tamiz de ensayo, de tejido de malla metlica de 200 mm de dimetro, aberturas de
tamao nominal de 500 m y un recipiente que cumpla con los requisitos de ISO 565.
6.14 Agitador magntico.
6.15 Bao de agua, capaz de hervir agua.
6.16 Horno, capaz de mantener la temperatura entre 110C y 120C.

7 Muestreo
El muestreo no es parte del mtodo especificado en esta norma. Un mtodo de
muestreo recomendado se indica en ISO 707.
Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea realmente representativa y
que no haya sido daada o cambiada durante el transporte o almacenamiento.
Almacenar la muestra de ensayo de tal modo que se prevenga deterioro o cambios en la
composicin.

8 Preparacin de la muestra de ensayo


8.1 Leche deshidratada y suero deshidratado
Transferir la muestra de ensayo a un contenedor de muestra (ver 6.2) con capacidad
aproximada de dos veces el volumen de la muestra de ensayo. Cerrar el contenedor
inmediatamente. Mezclar completamente la muestra de ensayo mediante agitacin e
inversin reiterada del contenedor, hasta que se obtenga una muestra homognea.

8.2 Casena y caseinatos


8.2.1 Si es necesario, despus de transferir toda la muestra a un contenedor (ver 6.2)
de capacidad adecuada, mezclar sta cuidadosamente, mediante agitacin e inversin
reiterada del contenedor.
8.2.2 Transferir 50 g de la muestra de ensayo al tamiz de ensayo (ver 6.13). Si la
porcin de 50 g pasa directamente a travs del tamiz, o casi completamente, pasar la
totalidad de la muestra de ensayo mezclada (ver 8.2.1) a travs del tamiz.

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8.2.3 Si la muestra de ensayo no pasa completamente a travs del tamiz, usar el
dispositivo de molienda (ver 6.11) para conseguir tal condicin. Inmediatamente
transferir el total de la muestra de ensayo tamizada al contenedor de muestra (ver 6.2) y
mezclar cuidadosamente en el contenedor cerrado. Durante esas operaciones, tomar
precauciones para evitar cualquier cambio en el contenido de agua del producto.
8.2.4 Despus que la muestra de ensayo haya sido preparada, proceder con la
preparacin de la porcin de ensayo (ver 9.4) tan pronto como sea posible.

8.3 Queso
8.3.1 Antes de los anlisis, remover la corteza o capa superficial mohosa de la muestra
de ensayo, de modo de proporcionar una muestra de ensayo representativa del queso
como es generalmente consumido.
8.3.2 Moler la muestra de ensayo mediante un dispositivo apropiado (ver 6.11). Mezclar
la masa molida rpidamente y si es posible, moler una segunda vez y nuevamente
mezclar cuidadosamente. Limpiar el dispositivo despus de la molienda de cada muestra.
Si la muestra de ensayo no puede ser molida, mezclarla cuidadosamente revolviendo y
amasando intensamente.
8.3.3 Tan pronto como sea posible despus de la molienda, transferir la muestra de
ensayo a un contenedor de muestra (ver 6.2) hermtico para esperar la determinacin,
la cual preferentemente se debiera hacer inmediatamente. Si es inevitable una demora,
tomar todas las precauciones para asegurar adecuada conservacin de la muestra de
ensayo y para prevenir la acumulacin de humedad en la superficie interior del
contenedor.
8.3.4 No examinar queso molido que muestre crecimiento no deseado de mohos o que
se empiece a deteriorar.

8.4 Queso de suero


Preparar la muestra de ensayo como se especifica en 8.3.2.

9 Procedimiento
9.1 Preparacin de la columna de cadmio cuprizado
9.1.1 Transferir una cantidad de grnulos de cadmio (ver 5.2) de 40 g a 60 g por cada
columna a un matraz cnico de 250 ml (ver 6.3). Agregar suficiente solucin de trabajo
de cido clorhdrico (ver 5.7) para cubrir el cadmio. Agitar por algunos minutos.
9.1.2 Decantar la solucin (ver 9.1.1). Lavar el cadmio en el matraz cnico con agua
hasta que est libre de iones cloruro (es decir, hasta que la reaccin con nitrato de plata
sea negativa).

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9.1.3 Cuprizar los grnulos de cadmio agregando la solucin de sulfato de cobre (II)
(ver 5.4), de la cual se requiere aproximadamente 2,5 ml de solucin cprica por gramo
de cadmio. Agitar durante 1 min.
9.1.4 Decantar la solucin (ver 9.1.3) y lavar el cadmio cuprizado inmediatamente con
agua, teniendo cuidado que el cadmio est continuamente cubierto con agua. Terminar
el lavado cuando el agua de lavado est libre de cobre precipitado.
9.1.5 Ajustar un tapn de lana de vidrio al fondo de la columna de vidrio (ver 6.9)
destinado a contener el cadmio cuprizado (ver Figura 1). Llenar la columna de vidrio con
agua.
9.1.6 Transferir el cadmio cuprizado a la columna de vidrio con una mnima exposicin
al aire. La altura del cadmio cuprizado debe ser de 15 cm a 20 cm. Evitar burbujas de
aire atrapadas entre los grnulos de cadmio cuprizado. El nivel del lquido no debe
descender por debajo de la parte superior del cadmio cuprizado.
9.1.7 Acondicionar la columna recin preparada haciendo correr a travs de ella, una
mezcla de 750 ml de agua, 225 ml de solucin de trabajo de nitrato de potasio
(ver 5.17), 20 ml de solucin tampn (ver 5.19) y 20 ml de solucin EDTA (ver 5.10), a
una velocidad que no exceda 6 ml/min. Lavar la columna con 50 ml de agua.

9.2 Comprobacin de la capacidad de reduccin de la columna


9.2.1 Comprobar la capacidad de reduccin de la columna al menos dos veces al da,
como tambin al inicio y al trmino de una serie de determinaciones.
9.2.2 Colocar 20 ml de solucin de trabajo de nitrato de potasio (ver 5.17) dentro del
depsito en la parte superior de la columna. Inmediatamente agregar 5 ml de solucin
tampn (ver 5.19) al contenido del depsito. Eluir el contenido del depsito a travs de
la columna a un flujo que no exceda de 6 ml/min. Recoger el eluyente en un matraz
volumtrico de 100 ml (ver 6.4).
9.2.3 Cuando el depsito de la columna de reduccin est cercano a quedar vaco, lavar
las paredes del depsito con aproximadamente 15 ml de agua. Despus que el agua
haya salido, repetir el lavado con otros 15 ml de agua. Cuando el segundo lavado haya
corrido dentro de la columna, llenar completamente el depsito con agua. Correr el
contenido completo del depsito a travs de la columna a la mxima velocidad de flujo.
Recoger aproximadamente 100 ml de eluyente.
9.2.4 Remover el matraz volumtrico de 100 ml (ver 9.2.3). Diluir su contenido con
agua hasta el aforo y mezclar bien.
9.2.5 Colocar 10 ml de eluyente (ver 9.2.4) dentro de otro matraz volumtrico (ver 6.4).
Diluir el eluyente con agua hasta, aproximadamente, 60 ml y mezclar. Proceder como se
especifica en 9.7 a 9.9.

NCh3044/1
9.2.6 Calcular el porcentaje de capacidad de reduccin de la columna (0,067 g de NO2
por mililitro corresponde a 100% de capacidad reductora) a partir del contenido de nitrito
obtenido en 10.1 del eluyente diluido (ver 9.2.5) y determinado del grfico de calibracin
(ver 9.9.4). Si la capacidad de reduccin es menor de 95%, regenerar la columna como se
especifica en 9.3.

9.3 Regeneracin de la columna


9.3.1 Regenerar la columna al final de cada da de uso, o ms frecuentemente, si la
comprobacin (ver 9.2) indica prdida de eficiencia.
9.3.2 Agregar aproximadamente 5 ml de solucin EDTA (ver 5.10) y 2 ml de solucin
de trabajo de cido clorhdrico (ver 5.7) a 100 ml de agua y mezclar. Correr esta
solucin as obtenida a travs de la columna a una velocidad de flujo aproximada
de 10 ml/min.
9.3.3 Cuando el depsito est vaco, lavar la columna sucesivamente con agua, con
solucin de trabajo de cido clorhdrico (ver 5.7) y otra vez, con agua.
9.3.4 Si la eficiencia de la columna an no es satisfactoria, repetir el procedimiento
especificado en 9.1.7.

9.4 Preparacin de la porcin de ensayo


9.4.1 Leche deshidratada
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.1). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz
cnico de 500 ml (ver 6.3). Agregar progresivamente a la porcin de ensayo, 136 ml de
agua precalentada entre 50C y 55C. Dispersar la porcin de ensayo revolviendo con
una varilla de vidrio o agitando el matraz cnico.
9.4.2 Suero deshidratado
Pesar, con una exactitud de 0,1 mg, aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.1). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz
cnico de 500 ml (ver 6.3). Agregar progresivamente a la porcin de ensayo, 136 ml de
agua precalentada entre 50C y 55C. Dispersar la porcin de ensayo revolviendo con
una varilla de vidrio o agitando el matraz cnico. Cubrir el matraz cnico con una lmina
de aluminio o un vidrio reloj y colocarlo durante 15 min al bao de agua (ver 6.15)
hirviendo. Remover el matraz del bao de agua y esperar que la temperatura haya
descendido entre 50C y 60C.

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NCh3044/1
9.4.3 Casenas
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.2). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz
cnico de 500 ml (ver 6.3). Agregar progresivamente a la porcin de ensayo, 136 ml de
agua precalentada entre 50C y 55C y 10 ml de solucin tampn (ver 5.19). Dispersar
la porcin de ensayo mediante agitacin utilizando el agitador magntico (ver 6.14).
9.4.4 Caseinatos
Pesar, con una exactitud de 0,1 mg, aproximadamente 2 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.2). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz
cnico de 500 ml (ver 6.3). Agregar progresivamente a la porcin de ensayo, 136 ml de
agua precalentada entre 50C y 55C y 10 ml de solucin tampn (ver 5.19). Dispersar
la porcin de ensayo mediante agitacin utilizando el agitador magntico (ver 6.14).
9.4.5 Queso
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.3). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente al contenedor de
vidrio del mezclador u homogeneizador de laboratorio (ver 6.12). Agregar progresivamente a
la porcin de ensayo, 144 ml de agua precalentada entre 50C y 55C. Mezclar en el
mezclador u homogeneizador (ver 6.12) hasta que la porcin de ensayo est bien
suspendida.
9.4.6 Queso de suero
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.4). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente al contenedor de
vidrio del mezclador u homogeneizador de laboratorio (ver 6.12). Agregar
progresivamente a la porcin de ensayo, 134 ml de agua precalentada entre 50C y
55C. Mezclar en el mezclador u homogeneizador (ver 6.12) hasta que la porcin de
ensayo est bien dispersada.

9.5 Extraccin y desproteinizacin


9.5.1 Leche deshidratada, suero deshidratado, caseinas y caseinatos y queso de suero
9.5.1.1 Agregar a la porcin de ensayo (9.4.1, 9.4.2, 9.4.3, 9.4.4 9.4.6,
respectivamente), en el orden siguiente, 12 ml de solucin de sulfato de zinc (ver 5.8),
12 ml de solucin de hexacianoferrato de potasio (II) (ver 5.9) y 40 ml de solucin
tampn (ver 5.19), agitar cuidadosamente despus de cada adicin y mezclar. Para
obtener un filtrado claro dejar la mezcla en el matraz cnico por, al menos 15 min, pero
no por ms de 1 h. Luego pasar a travs de un papel filtro (ver 6.8), recogiendo el
filtrado en un matraz cnico de 250 ml (ver 6.3).

11

NCh3044/1
9.5.1.2 Es esencial obtener un filtrado claro dentro del tiempo especificado. Para este
propsito puede ser necesario utilizar un mayor volumen de cada reactivo de
precipitacin (ver 5.8 y 5.9) (por ejemplo, si es analizado un queso bien maduro).
Reducir el volumen del agua precalentada, ajustndose a la necesidad de mantener el
volumen de filtrado en aproximadamente 200 ml.
NOTA - El volumen total del filtrado debe ser de aproximadamente 200 ml. Este volumen es asumido en los
clculos (ver 10.1 y 10.2).

9.5.2 Queso
Agregar a la porcin de ensayo (ver 9.4.5) en el orden siguiente, 6 ml de solucin de
sulfato de zinc (ver 5.8), 6 ml de solucin de hexacianoferrato de potasio (II) (ver 5.9) y
40 ml de solucin tampn (ver 5.19), agitar cuidadosamente despus de cada adicin y
mezclar. Para obtener un filtrado claro dejar la mezcla en el contenedor de vidrio por al
menos 15 min, pero no por ms de 1 h. Luego pasar a travs de un papel filtro
(ver 6.8), recogiendo el filtrado en un matraz cnico de 250 ml (ver 6.3) (ver 9.5.1.2
y Nota).

9.6 Reduccin de nitrato a nitrito


9.6.1 Colocar 20 ml del filtrado (ver 9.5.1 9.5.2) dentro del depsito en la parte
superior de la columna de reduccin (ver 9.1) preparada. Agregar 5 ml de solucin
tampn (ver 5.19) al contenido del depsito. Mezclar revolviendo con una pequea
varilla de vidrio. Pasar el contenido del depsito a travs de la columna a una velocidad
de flujo que no exceda de 6 ml/min. Recoger el eluyente en un matraz volumtrico
de 100 ml (ver 6.4).
9.6.2 Cuando el depsito de la columna de reduccin est cercano a quedar vaco, lavar las
paredes del depsito con aproximadamente 15 ml de agua. Despus que el agua haya
salido, repetir el lavado con otros 15 ml de agua. Cuando el segundo lavado haya corrido
dentro de la columna, llenar completamente el depsito con agua. Eluir el contenido
completo del depsito a travs de la columna a la mxima velocidad de flujo. Recoger
aproximadamente 100 ml de eluyente en un matraz volumtrico de 100 ml (ver 6.4).
9.6.3 Remover el matraz volumtrico de 100 ml. Diluir con agua su contenido hasta el
aforo y mezclar bien.

9.7 Ensayo en blanco


Llevar a cabo un ensayo en blanco en paralelo con la determinacin, pero reemplazando
en 9.8.1 la porcin de ensayo por un volumen igual de agua

9.8 Determinacin
9.8.1 Colocar volmenes iguales (por ejemplo 25 ml) del filtrado obtenido en 9.5.1
9.5.2 y del eluyente (ver 9.6.3) en matraces volumtricos de 100 ml separados
(ver 6.4). Agregar agua a cada uno de los matraces para obtener un volumen de
aproximadamente 60 ml y mezclar.

12

NCh3044/1
9.8.2 Agregar 6 ml de solucin I (ver 5.11) a la solucin del matraz (ver 9.8.1) y
seguidamente, 5 ml de solucin II (ver 5.12). Mezclar las soluciones cuidadosamente y
dejar el matraz durante 5 min a temperatura ambiente y protegido de la luz solar.
9.8.3 Agregar 2 ml de solucin III (ver 5.13) a la solucin del matraz (ver 9.8.2).
Mezclar nuevamente estas soluciones cuidadosamente y dejar el matraz por 5 min a
temperatura ambiente y protegido de la luz solar. Diluir con agua el contenido del matraz
hasta el aforo de 100 ml y mezclar.
9.8.4 Medir la absorbancia de la solucin obtenida en 9.8.3 en contraste con la del test
en blanco (ver 9.5) utilizando el espectrmetro (ver 6.10), a una longitud de onda
de 538 nm, en el plazo de 15 min.

9.9 Preparacin del grfico de calibracin


9.9.1 Colocar 0 ml (blanco), 2 ml, 4 ml, 6 ml, 8 ml, 12 ml y 20 ml de solucin de
trabajo de nitrito de sodio (ver 5.15) en matraces volumtricos separados, de 100 ml.
(ver 6.4). Agregar agua a cada uno de los matraces para obtener volmenes
aproximados de 60 ml.
9.9.2 Proceder como se especific en 9.8.2 y 9.8.3.
9.9.3 Utilizando el espectrmetro (ver 6.10), medir la absorbancia de las soluciones de
trabajo de nitrito de sodio, en contraste con la del blanco, a una longitud de onda
de 538 nm, en el plazo de 15 min.
9.9.4 Registrar las absorbancias obtenidas en 9.9.3, en contraste con las
concentraciones de nitrito, en microgramos por mililitro, calculadas de las cantidades
agregadas de solucin de trabajo de nitrito de sodio (ver 9.9.1).

10 Clculo y expresin de resultados


10.1 Contenido de nitrito
10.1.1 Clculo del contenido de nitrito
Calcular el contenido de nitrito de la muestra, N 1 , utilizando la ecuacin siguiente:

N1 =

20 000 c1
mV

en que:

N 1 =contenido de nitrito de la muestra, en miligramos de iones nitrito por


kilogramo;

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c1

=valor numrico de la concentracin leda desde el grfico de calibracin,


correspondiendo a la absorbancia medida de la solucin de ensayo
(ver 9.8.4), en microgramos de iones nitrito por mililitro;

=masa de la porcin de ensayo (ver 9.4) en gramos;

=volumen de la porcin alcuota tomada del filtrado (ver 9.8.1), en


mililitros.

10.1.2 Expresin de resultados


Expresar los resultados con una cifra decimal

10.2 Contenido de nitrato


10.2.1 Clculo del contenido de nitrato
Calcular el contenido de nitrato de la muestra, N 2 , utilizando la ecuacin siguiente:

100 000 c2

N1

mV

N 2 = 1,35
en que:

N 2 = contenido de nitrato de la muestra, en miligramos de iones nitrato


por kilogramo;

c2

= valor numrico de la concentracin leda desde el grfico de calibracin,


correspondiente a la absorbancia medida de la solucin de ensayo
(ver 9.9.4), en microgramos de iones nitrito por mililitro;

= masa de la porcin de ensayo (ver 9.4) en gramos;

= volumen de la porcin alcuota tomada del eluyente (ver 9.8.1), en


mililitros.

10.2.2 Clculo del contenido de nitrato, considerando la capacidad de reduccin de la


columna
Si se toma en cuenta la capacidad de reduccin de la columna, calcular el contenido de
nitrato de la muestra N 2 utilizando la ecuacin siguiente:

100 000 c2

N 2 = 1,35

14

mV

100
N1

NCh3044/1
en que:

= valor numrico de la capacidad de reduccin de la columna, al trmino de


una serie de determinaciones.

10.2.3 Expresin de resultados


Expresar los resultados en nmeros enteros.

11 Precisin
11.1 General
Los valores para los lmites de repetibilidad y reproducibilidad se expresan para un nivel
del 95% de probabilidad y no pueden ser aplicables a rangos de concentracin y matrices
diferentes de aquellas dadas.
NOTA - Los valores para repetibilidad y reproducibilidad han sido adoptados de las antiguas normas
internacionales para la determinacin de contenido de nitrito y nitrato en productos lcteos, ISO 4099,
ISO 6736, ISO 6739, ISO 6740 e ISO 8195. Estas normas internacionales fueron anuladas y reemplazadas
por ISO 14673-1:2001.

11.2 Repetibilidad
11.2.1 Nitritos
La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples independientes, obtenidos
utilizando el mismo mtodo sobre idntico material, en el mismo laboratorio, por el mismo
operador, empleando el mismo equipamiento, dentro de un corto intervalo de tiempo ser,
en no ms del 5% de los casos, mayor que 1 mg/kg de producto.
11.2.2 Nitratos
La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples independientes, obtenidos
utilizando el mismo mtodo sobre idntico material, en el mismo laboratorio, por el mismo
operador, empleando el mismo equipamiento, dentro de un corto intervalo de tiempo ser,
en no ms del 5% de los casos, mayor que:
- para leche deshidratada, suero deshidratado, casenas,
caseinatos y queso con un contenido de nitrato
< 30 mg/kg

3 mg/kg;

- para leche deshidratada, suero deshidratado, casenas,


caseinatos y queso con un contenido de nitrato
30 mg/kg

10% de la media
aritmtica de los
resultados;

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NCh3044/1
- para queso
< 30 mg/kg

de

suero

con

un

contenido

de

nitrato

5 mg/kg;

- para queso
30 mg/kg

de

suero

con

un

contenido

de

nitrato

15% de la media
aritmtica de los
resultados.

11.2.3 Reproducibilidad
La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples, obtenidos utilizando el
mismo mtodo sobre idntico material de ensayo, en diferentes laboratorios, con
diferentes operadores empleando diferente equipamiento ser, en no ms del 5% de los
casos, mayor que:
- para leche deshidratada con un contenido de nitrato
< 30 mg/kg:

8 mg/kg;

- para leche deshidratada con un contenido de nitrato


30 mg/kg:

25% de la media
aritmtica de los
resultados;

- para suero deshidratado con un contenido de nitrato


< 30 mg/kg:

5 mg/kg;

- para suero deshidratado con un contenido de nitrato


30 mg/kg:

15% de la media
aritmtica de los
resultados;

- para casenas y caseinatos:

25% de la media
aritmtica de los
resultados;

- para queso con un contenido de nitrato < 30 mg/kg:

6 mg/kg;

- para queso con un contenido de nitrato 30 mg/kg:

25% de la media
aritmtica de los
resultados;

- para suero de
< 30 mg/kg:

queso

con

un

contenido

de

nitrato

10 mg/kg;

- para suero de
30 mg/kg:

queso

con

un

contenido

de

nitrato

15% de la media
aritmtica de los
resultados.

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NCh3044/1

12 Informe de ensayo
El informe de ensayo debe especificar:

toda informacin necesaria para la completa identificacin de la muestra;

el mtodo de muestreo usado, si es conocido;

el mtodo de ensayo usado, con referencia a esta norma;

todos los detalles operativos no especificados en esta norma, o considerados como


opcionales, junto con detalles de todos los incidentes que puedan haber influenciado
el (los) resultado(s);

el (los) resultado(s) del ensayo obtenido(s), o si se ha comprobado la repetibilidad, los


resultados citados obtenidos.

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Anexo A
(Informativo)

Bibliografa
[1]

ISO 707:1997 Milk and milk products - Guidance on sampling.

NOTA EXPLICATIVA NACIONAL


La equivalencia de la norma internacional sealada anteriormente con norma chilena, y su grado de
correspondencia es el siguiente:
Norma internacional
ISO 707:1997

Norma nacional
NCh1011/2

Grado de correspondencia
Equivalente

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