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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Laboratorio: 90 G.

Facultad de Ingeniera Ambiental y RRNN

Recuento
en
Placas
Prctica N: 2 y 3
de Aerobios y Mtodo
Simplate

Docente: Blgo. Carlos Tome Ramos.


Tpico: Cultivo de Setas.

Estudiantes: Correa Flores Astrid.


Daz Mendez Gladys Xiomara.

Huayhua Turpo Katherine Liset.


Haro Wang Renata.
Semestre: 2015-B.

PRACTICA N 2 Y 3

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL 90 G

2015B

Prctica de Laboratorio N 2 y 3
Recuento en Placas de Aerobios, Bacterias
Hetertrofas o mesfilas.
I.-Procedimiento Experimental:
1. Esterilizar el ambiente.
2. Traer aproximadamente 100g de la muestra de compost en una
bolsa de primer uso.
3. Pesar en la misma bolsa, 10 g de compost.
4. Agregarlo a un frasco con 90 ml de agua peptonada. Esta sera la
primera dilucin.

5. Poner 1 ml
en dos placas por concentracin.

de cada dilucin

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2015B

Tubos de ensayo con el


contenido
de
las
diluciones 10-5; 10-4; 103; 10-2; en la parte de
atrs frasco de vidrio de
tapa roja con la dilucin
10-1. En la parte frontal
las placas rotuladas con
su respectiva dilucin.

6. Agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo (Plate Count


Agar)

7. Aparte se prepar una placa sobre el ambiente de trabajo.

Prctica de Laboratorio N 3
Mtodo Simplate para Dosis Mltiples de RPH
I.-Procedimiento Experimental:

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PRACTICA N 2 Y 3

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL 90 G

II.-Clculos y Resultados:
Recuento en Placas de Aerobios
Observaciones
rea de trabajo
Optimo, sin crecimiento
de
microorganismos
oportunistas.
Medio de cultivo
Bueno, sin presentar
cambios en el medio

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Para las diluciones en las placas:

Cantidad de
10-1
Diluciones
Numero
de Incontab
microorganismos
le

10-2

10-3

Incontab
le

Incontab
le

10-4

10-5

804
976

760
704

Para hallar la cantidad total de microrganismos se plantea la formula siguiente


que solo se aplica:
Cuando x > 250, y que por cada 100 cm 2 es contable.

d1
d
, 2 > n x d2
c1 , c 2 c 3 , c 4
d 1 = dilucin
d 2 = mxima dilucin
c 1 , c 2, c 3 , c 4, =
microorganismos

nmero

de

Cantidad de
diluciones
Numero de
microorganismos
Por cada 100cm2
es contable

10-4
80
4
18
0

97
6
20
4

10-5
76
0
16
9

70
4
15
0

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n = nmero ms cercano de 250

104
105
,
>704 x 105
804 , 976 760 ,704

UFC/g

Mtodo Simplate para Dosis Mltiples de RPH


Cantidad de
diluciones
Cantidad de
pocillos de
microorganismos
que emiten
fluorescencia

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

420

420

420

420

416

III.-Discusin de Resultados:
-Discutimos nuestros resultados en funcin de un artculo cientfico que
caracteriz microbiolgicamente el proceso de compostaje a partir de residuos
azucareros microbianos:
En nuestros resultados se observa que la cantidad de unidades
formadoras de colonia por gramo de muestra de compost vara entre
7.04x107 hasta 8.04 x107 mientras que en el artculo encontrado se
observa que la poblacin de bacterias hetertrofas aerobias mesfilas a
lo largo del proceso de compostaje disminuy de 1,40x10 6 a 5,30x105
UFC/g compost en la fase termoflica. Luego existe un ligero aumento
a 9,40 x105 UFC/g compost en la fase de estabilizacin (pero nunca se
supera a la poblacin inicial). Durante el compostaje la poblacin de
bacterias hetertrofas aerobias termfilas aument drsticamente de
1,90x105 a 1,20x107 UFC/g compost, se observ una disminucin cercana
a la poblacin inicial cuando el material tiende a la estabilizacin.
Observamos que en cada etapa de compostaje se va menguando la
cantidad de bacterias mesfilas mientras se incrementa la temperatura,
en nuestro caso por estar en la etapa inicial del compostaje se ve un gran
nmero de UFC/g, en comparacin al artculo mencionado es mucho
mayor, debido quizs a las condiciones de ambiente diferente ya que
este estudio se realiz en Venezuela pas que se encuentra en la zona

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intertropical con clima clido mientras que nosotros presentamos


menores temperaturas, o tambin esa diferencia puede deberse a las
condiciones de sanitarias menores en comparacin con el paper
mencionado.
-Por la cantidad de 7.04x10 7 hasta 8.04 x107 UFC/g encontrado en la muestra de
compost podemos deducir que incluso estando en la cuarta y quinta dilucin si
entrara en contacto con una fuente de agua en el supuesto caso por ejemplo de
ser usado como abono en agricultura no sera permisible un efluente mayor a
500 UFC/ ml en nuestro pas, sobrepasando los lmites mximos permisibles ya
establecidos para bacterias mesfilas.

IV.-Conclusin:
Gracias al Mtodo de Recuento de Placas en aerobios se logr estimar la
biota total de microorganismos pero sin especificar el tipo. As mismo
esta determinacin nos refleja la calidad sanitaria del producto analizado
y las condiciones higinicas en las que se encuentra.
El Mtodo Simplate nos permiti de forma ms rpida contabilizar las
colonias bacterianas debido a la fluorescencia de los pocillos en la placa,
ya que el nutriente contena sustrato que al contacto con las enzimas
bacterianas de la solucin se metabolizaban.
Ambos mtodos permiten cuantificar las cantidades de colonias
existentes de bacterias heterotrficas, pero es mucho ms sencillo el
segundo mtodo Simplate. Aunque es preferible seguir empleando el
primer mtodo debido que en el Per la Norma sanitaria que establece
los criterios microbiolgicos de calidad sanitaria e inocuidad para los
alimentos y bebidas de consumo humano estn en funcin del recuento
de mesfilos.
En general se puede observar que el recuento realizado da como
resultado una alta cantidad de unidades formadoras de colonias por cada
gramo de compost que supera algn estudio parecido y los lmites en
efluentes lquidos.

PRACTICA N 2 Y 3

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http://www.sunass.gob.pe/doc/normas%20legales/legisla
%20web(cambio)/normas/calidad%20de%20agua/Oficio%20677.pdf
ESTE ES DEL PAPER:
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0002192X2009000300007&script=sci_arttext