Bioqumica EQ

3 Lista de Exerccios
a

1) Qual a condio para que a velocidade de uma reao enzimtica seja considerada
mxima?
2) Por que preferimos determinar a constante de Michaelis pelo mtodo de Lineweaver-Burk?
Qual a principal limitao deste mtodo?
3) Considerando uma reao enzimtica envolvendo um nico substrato, faa esboos de
grficos que representem resultados experimentais simulados, que seriam obtidos nos
ensaios necessrios para o estudo desta enzima hipottica.
No se esquea de especificar os parmetros dos eixos.
a- Curva de progresso de reao , indicando a fase de velocidade inicial para [E] fixa.
b- Curva mostrando a dependncia da velocidade em relao concentrao de
substrato em duas concentaes de enzima.(indicar qual a maior concentro de E)
c- Plot de Lineweaver-Burk eom duas concentraes de enzima. (indicar qual a maior
concentrao de E)
d- Curva 1/v vs 1/[S] na presena de duas concentraes de um inibidor competitivo,
indicando a maior concentrao de I. No esquecer o controle sem inibidor.
4) Um extrato bruto livre de clulas contm 20mg de protena/ml. 10ml deste extrato, num
volume total padro de reao de 0,5ml, catalisaram a formao de 30 nmoles de produto em
um minuto, sob condies timas de ensaio (pH, T, m, etc)
a) Expresse a velocidade em nmoles/ml.min
b) Qual seria o valor da velocidade se os mesmos 10ml fossem ensaiados num volume
total de 1ml?
c) Qual a concentrao de enzima na mistura de reao e no extrato, em termos de
unidades/ml?
d) Qual a atividade especfica da preparao?
5) O stio ativo de uma enzima contm um nico grupo ionizvel que deve estar na forma
negativa para que o substrato possa ligar-se e a catlise possa ocorrer. O pK deste grupo
5,0. O substrato um composto carregado positivamente e fica ionizado em toda a faixa de
pH estudada.
a- Escreva as reaes mostrando o efeito do pH na distribuio das espcies
enzimticas.
b- Deduza uma equao de velocidade para este sistema.
c- Qual seria o aspecto do grfico velocidade vs pH?
6) Que fenmenos esto envolvidos quando se estuda a ao da temperatura sobre uma
reao enzimtica?

7) verdade que em temperaturas mais baixas que a T tima no existe desnaturao?

Justifique.
8) Por que a equao de Michaelis-Menten s tem validade quando se usa valores de
velocidade inicial? O que voc entende por velocidade inicial?
9) Na tabela abaixo esto resumidos os resultados obtidas na purificao de uma enzima de
Saccharomyces cerevisiae. Complete os dados que faltam na tabela. Se, aps a
cromatografia em peneira molecular, fosse detectada uma atividade total de 8000 unidades,
como voc explicaria este fato?
Etapa de
purificao
Extrato Bruto
ppt c/ (NH4)2SO4
Cromatografia
em sephadex
Cromatografia
em DEAE celulose
Cromatografia de
afinidade

volume Protena Atividade Atividade Atividad

(ml) (mg/ml)
enz.
especfica e total
(U / ml)
( )
( )
650
42
8


200
62
19,6


743
0,77
2,49

Rendiment
o
%

Fator de
purifica-
o

76

0,35

13,7

1,2

5,7

337

10) O grfico abaixo mostra o plot de Lineweaver-Burk para a determinao da velocidade de

uma reao enzimtica em funo da concentrao do substrato, na ausncia e na presena
de 1 mM de um inibidor. Determine o tipo de inibio. Justifique a sua resposta.
1/V

2,40
2,00
1,60
1,20
0,80
0,40
0,00

-0,2

-0,1

-0,40 0,0
-0,80

0,1

0,2

0,3

0,4

1/[S]

11) A influncia da concentrao de substrato sobre a velocidade inicial de uma reao

enzimtica forneceu, pelo mtodo de Lineweaver-Burk, a equao y=3x+2. Na presena de
um inibidor I obteve-se, pelo mesmo mtodo, a equao y=5x+2, para [I] = 10mM.
(a) A partir destes dados diga, justificando sua resposta, que tipo de inibidor reversvel a
substncia I.
(b) Calcule K i para o complexo EI.
(c) Determine a equao que ser obtida se I for usado na concentrao 30mM.