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TEMA 1.

Anlisis Qumico y
Anlisis Instrumental
Tipos de Anlisis.- Campo de aplicacin.Complementariedad de los anlisis.- Lmites de
deteccin y cuantificacin. Rango dinmico.Interferencias en los anlisis: seal y ruido,
integracin de seales, solapamiento de seales

Hechos, situaciones, necesidades


Anlisis del fsforo

Casos y situaciones

Uso 1: Minerales de fsforo como fertilizantes

Fosforita (Ca3(PO4)2)
Variedad criptocristalina del apatito
Roca sedimentaria
Compuesta fundamentalmente por fosfato
clcico
Especificacin Qumica

P2O5 26,88%
CaO 33,00%
Fe2O3 9,00%
SiO2 3,00%
Al2O3 5,00%
MgO 0,10%

Hechos, situaciones, necesidades

Casos y situaciones

Anlisis del fsforo

Uso 2: El fsforo como elemento esencial

El P es un elemento esencial para la vida

Ligado al Ca

necesario para el desarrollo del esqueleto y los msculos

0,8 al 1,1% del peso total del cuerpo

Las plantas lo necesitan para crecer y desarrollar su


potencial gentico
No es abundante en el suelo

En formas disponibles para la planta

sales orgnicas e inorgnicas

Se absorbe paralelamente al Ca
Llega mejor a nuestro organismo si es en compaa de
la vitamina D
3

Hechos, situaciones, necesidades


Anlisis del fsforo

Casos y situaciones

Uso 2: El fsforo como elemento esencial

El papel que juega el fsforo es muy


importante:

metabolismo de los hidratos de carbono


contraccin de los msculos
absorcin de la glucosa en el intestino, los
riones,
equilibrio cido-base en la sangre
tejido nervioso, etc

Importancia y uso del fsforo

Produccin de ATP

encargado de guardar energa

Nucleoprotenas celulares en conexin con


el ADN
y los fosftidos (ej. Fosfoglicridos)

intervienen en la formacin de numerosas


enzimas que oxidan la glucosa

Importancia y uso del fsforo

Alimentos ricos en P:

Almendras, ajo, avena, maz, lentejas, coles, lechuga, cebolla,


manzana, arroz, apio, patata, puerro, fresa, tomate, pepino,
castaas, setas, alcachofas, avellanas nueces
Carne, pescado y lcteos (P y Ca)

Proporcin necesaria para el ser humano se equilibra con la de


Ca:

Lactantes 200 mg diarios


Adolescentes 900 mg diarios
Adultos y 700 mg
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Importancia y uso del fsforo

Dficit o exceso de P:

debilidad muscular
alteraciones seas
Raquitismo
afecciones intestinales
Hiperparatiroidismo
glomerculonefritis.

Niveles y matrices - Fsforo

Fosforita

Suelos (movilidad- biodisponibilidad)

P2O5 26,88%; CaO 33,00%; Fe2O3 9,00%; SiO2 3,00%; Al2O3 5,00%
MgO 0,10%

100 ppm, total- 10 ppm disponible (citrato)

Alimentos

Naranjas 300 mg/Kg

Mtodos analticos para P segn las matrices

Fosforita: 11,7 % de P

Gravimtrico:

Mg(NH4)PO4.6H2O (forma de precipitacin)


Mg2P2O7
(forma de pesada)
1 g de fosforita genera 0,4201 g de Mg2P2O7
Precisin 0,2%; tiempo de anlisis 5 h

Espectrofotomtrico

Disolucin en H2SO4
Color azul 820 nm con reactivo molbdico

= 5000 l.mol-1.cm-1 (~10 50 ppm)

1 g de fosforita 117000 ppm de P


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Anlisis de fsforo

Suelos (movilidad- biodisponibilidad)

Alimentos

100 ppm, total- 10 ppm disponible (citrato)

Naranjas 300 mg/Kg

Como analizar???
Qu mtodos???

10

Est mi protena fosforilada? Dnde?


Ejemplo

Un pptido de secuencia p-KRPSQRHGSKYamida


Tripsina

rompe las cadenas C-terminales de la arginina (R)


origina dos fragmentos de pptido

Cul est fosforilado?

m/z 591 HGSKY-amida


m/z 852 KRPpSQR

MALDI-MS

m/z 591 se mantiene no contiene el fosfato


no existe m/z 852 sino m/z 772, (852-80 u)
fosforilado

11

Fosfoprotenas

Serina, treonina, tiroxina fosforilacin

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Lmites de deteccin y cuantificacin.


Rango dinmico

Criterios numricos para seleccionar mtodos analticos

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Lmite de deteccin

La concentracin que proporciona una seal


instrumental (y) significativamente diferente del
blanco o seal de fondo

LOD y = yB + 3sB
LOQ y = yB + 10sB

Sensibilidad (y) = a + 3sy/x

14

Lmite de deteccin

Sensibilidad (y) = a + 3sy/x = 1,52 + 3 0,433 = 2,189


y = bx + a x = LOD = (y-a)/b = (2,189-1,52)/1,93 = 0,67 pg
Por tanto, LOD = (3 sy/x)/b y LOQ = (10 sy/x)/b
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Parmetros de calidad analtica a partir de la


curva de calibrado

LOD = lmite de deteccin; LOQ = lmite de cuantificacin


LOL = limite de respuesta lineal o rango lineal.
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Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin

Recta de calibrado: y = bx +a

Lmite de deteccin

LD= SB + 3 s B
LD = a + 3sy/x
CLD = (LD-a)/b

Lmite de cuantificacin

LQ= SB + 10 s B
LQ = a + 10 sy/x
CLQ = (LQ-a)/b
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Exactitud y precisin

IMPRECISO E INEXACTO

PRECISO PERO INEXACTO

PRECISO Y EXACTO

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Exactitud

Se analizan uno o varios materiales estndar


de referencia

Para evitar errores aleatorios y sistemticos:

n = 20 o 30 anlisis repetidos

Exactitud = media valor verdadero

19

Parmetros de calidad para la precisin

20

Caractersticas de los mtodos analticos de uso habitual


Mtodos
Basados en la reaccin

Basados en
radiaciones
Electromagnticas

Absorcin

Emisin

Basados en el
intercambio de
electrones en una
interfase

Basado en la medida
de masas

Seal

Muestra

Rango

Precisin

Tiempo

Gravimetra

Disuelta

1-10-3 M

< 1%

13h

Volumetra

Disuelta

1- 10-3 M

< 1%

15 min

Disuelta

g ml-1
(ppm)

1-5 %

5 min

< 5%

30 min

Espectroscopia
UV-visible
(molecular)

Radiacin
UV-visible

Espectroscopia
Infrarroja
(molecular)

Radiacin IR

Espect. Absorcin
Atmica

Radiacin
UV-visible

Disuelta

g ml-1/ng ml-1
(ppm ppb)

1-5 %

3-5 min

Espectr. Emisin
Atmica

Radiacin
UV-visible

Disuelta
(multielemental)

g ml-1/ng ml-1
(ppm ppb)

1-5 %

3-5 min

Fluorimetra
(emis. molecular)

Radiacin
UV-visible

Disuelta

g ml-1/ng ml-1
(ppm ppb)

1-5 %

10 min

Fluorescencia
rayos X

Rayos X

Slida

g ml-1
(ppm)

1-5 %

15 min

Polarografa

Intensidad de
corriente

Disuelta

10-3-10-5 M

1-5 %

30 min

Potenciometra

Diferencia de
potencial

Disuelta

1-10-5 M

1-5 %

15 min

Culombimetra

Cantidad de
electricidad

Disuelta

10-3-10-5

1-5 %

15 min

Espectrometra de
masas

Relacin masa/carga

Gas/vapor

g ml-1/pg ml-1
(ppm/ppt)

5%

15 min

Slida o disuelta

mg
anlisis cualitativo

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Seal analtica y mtodo analtico

Tcnicas espectroscpicas
basadas en la interaccin de la radiacin
electromagntica con las molculas o especies:
Tipos de seales
Espectros de bandas

Interaccin de molculas con radiacin policromtica


Absorcin o Emisin

Espectros de lnea

tomos-radiacin electromagntica
Interacciones ms restringidas en cuanto al rango de la
longitud de onda que las originan
Absorcin o Emisin

22

Espectros de banda

23

Espectros de lnea

24

rea y altura de la seal

El rea de un pico o seal es una medida de la cantidad de un analito


presente en la muestra, siempre que la deteccin se produzca de
forma lineal
Ruido en la lnea base. La ausencia de ruido y la estabilidad de la lnea
base son indicadores de la calidad de la medida

25

Altura de la seal

La altura de los picos es una medida alternativa,


siempre que le pico sea gaussiano

26

Asimetra de la seal
Indica la intervencin de otras interacciones no previstas

Anchura de la seal

Es un indicador de la selectividad de la interaccin


27

Resolucin de las seales

Es el grado de separacin de dos seales


prximas

Resolucin elevada

Buena calidad del anlisis y de los resultados

28

Resolucin

Resolucin= Rs = 2(tR2 tR1)/(w1 + w2)

Si los picos son simtricos, se utiliza la anchura a la mitad de


la altura del pico de la seal, w0.5:

R=1

Rs (tR2 tR1)/(w0.5,1 + w0.5,2)


los picos estn resueltos al nivel de la lnea base
pueden medirse de forma precisa

En la prctica los picos no suelen ser iguales ni simtricos, y


se precisa una resolucin prxima a 2, o superior.

29

Distorsin de las seales

Las seales que finalmente se observan en un registro se


obtienen generalmente a partir de la respuesta del detector
que, en los instrumentos actuales se encuentra digitalizada

La seal (generalmente en forma de pico) se suaviza


electrnicamente o mediante un programa adecuado, y se
reconstruye con un convertidor D/A para su representacin final

Estas operaciones distorsionan el perfil inicial

30

Seal y ruido

Ruido

En el caso de una seal pequea de 10-15 A

gran importancia en la medida de la seal

La eliminacin del ruido mejora la seal

A veces es difcil eliminar el ruido cuando este tiene su


origen en efectos termodinmicos y cunticos imposible de
evitar en la medida

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Seal y ruido

Generalmente

El valor promedio del la seal correspondiente al ruido, R

El efecto del ruido en el error relativo de una medida

Constante
Independiente de la magnitud de la seal, S

aumenta al disminuir el valor de la cantidad medida

La relacin seal/ruido (S/R)

para describir la calidad de un mtodo analtico


o el funcionamiento de un instrumento
parmetro de calidad mucho ms til que el ruido solo

32

Seal y ruido

Para una seal de corriente continua, la magnitud del ruido


se define como:

la desviacin estndar de numerosas medidas de la


intensidad de la seal, la cual viene dada por la media de las
medidas

S/R = media/desviacin estndar

33

Seal y ruido

La relacin seal/ruido es la inversa de la desviacin estndar


relativa RSD del conjunto de medidas
S/R = 1/RSD

Es imposible la deteccin de una seal cuando S/R < 2 3

Espectro RMN de la progesterona


A) S/R = 4,3
B) S/R 43

34

Fuentes de ruido en anlisis instrumental

Ruido qumico:

Variaciones de temperatura o presin

Fluctuaciones en la humedad relativa

Produce estratificacin de los slidos pulverulentos

Cambios de la intensidad de la luz

modifica el contenido de humedad de las muestras

Vibraciones

afectan al equilibrio qumico

afectan a materiales fotosensibles

Humos del laboratorio

interaccionan con las muestras o los reactivos


35

Fuentes de ruido en anlisis instrumental

Ruido instrumental:

Asociado a los componentes de un instrumento


El ruido de los componentes puede tener distinto origen
Es una mezcla compleja difcil de caracterizar

36

Tipos de ruido instrumental

Ruido trmico o Johnson


Ruido de disparo
Ruido de parpadeo o 1/f
Ruido ambiental

37

Ruido trmico, o ruido Johnson

Origen:
Agitacin trmica de los electrones u otros transportadores
de cargas
en las resistencias, condensadores, detectores de radiacin,
celdas electroqumicas y otros elementos resistivos de un
instrumento

Se produce aleatoriamente

Origina peridicamente heterogeneidades de carga


Crean variaciones de tensin que aparecen como ruido en la
lectura

Existe incluso en ausencia de corriente de un elemento


resistivo y solo desaparece en el cero absoluto (0 K, -273 C)
38

Ruido trmico

raz cuadrtica media o valor eficaz del ruido de la tension dentro de


un ancho de banda de frecuencia de f Hz,
K: constante de Boltzmann (1,38 x 10-23 J/K)
T: temperatura en kelvin
R: resistencia del elemento resistivo en ohmios
Relacin entre el tiempo de ascenso t y el ancho de banda f en un
amplificador:

t: (t de ascenso) tiempo de respuesta, en segundos, a un cambio


brusco de la seal de entrada - se toma como el tiempo necesario
para que la seal de salida aumente del 10 al 90 % de su valor final

39

Ruido trmico

Estas variables tambin se utilizan para

determinar la capacidad de los instrumentos completos


para detectar y transmitir informacin

El ruido trmico puede disminuir al estrecharse el


ancho de banda
Sin embargo, cuando el ancho de banda se
estrecha

el instrumento tarda ms en responder a una variacin de


la seal y se necesita ms tiempo para realizar una
medida fiable
40

Reduccin del ruido trmico

El ruido trmico se puede reducir:

Disminuyendo la resistencia elctrica de los circuitos


instrumentales
La temperatura de los componentes de los instrumentos:

Al reducir T de un detector desde T ambiente a la T del nitrgeno


liquido (77 K) reducir el ruido trmico a la mitad

El ruido trmico depende

del ancho de banda de la frecuencia


pero es independiente de la propia frecuencia

A veces se denomina ruido blanco por analoga con la luz


blanca, la cual contiene todas las frecuencias visibles

El ruido trmico es independiente del tamao fsico de la


resistencia
41

Ruido de disparo

Se origina siempre que se produce un movimiento de


electrones o de otras partculas cargadas a travs de
una unin

En un circuito electrnico caracterstico

Las uniones se encuentran en las interfases pn

fotoclulas
tubos de vaco

la unin es el espacio vaco entre el nodo y el ctodo

Las corrientes en tales dispositivos implican una serie


de procesos cuantizados

transferencia de electrones individuales a travs de la unin


42

Ruido de disparo

Sin embargo, hay una componente aleatoria y la velocidad a la cual


ocurren esta sujeta, por tanto, a fluctuaciones estadsticas que se
describen con la ecuacin

irms: raz cuadrtica media o valor eficaz de las fluctuaciones de


corriente relacionadas con la corriente continua promedio, I,
e: carga del electrn, 1,60 x 10-19 C
f : ancho de banda de las frecuencias consideradas

Al igual que el ruido trmico, el ruido de disparo es un ruido blanco

Slo puede minimizarse reduciendo el ancho de banda

43

Ruido de parpadeo

Es inversamente proporcional a la frecuencia de la seal


que se observa

A veces, se le denomina ruido 1/f

Causas no muy bien conocidas


Se reconoce por su dependencia de la frecuencia
Es significativo para f < 100 Hz

Ejemplo:

deriva con el tiempo observada en amplificadores de


corriente continua, medidores y galvanmetros

Puede reducirse bastante usando en vez


de resistencias de carbn habituales

Resistencias de filamento enrollado


o resistencias de pelcula metlica
44

Ruido ambiental

Mezcla de distintos tipos de ruidos procedentes del entorno

Cada conductor de un instrumento acta como una antena potencial


capaz de captar radiacin electromagntica y convertirla en una
seal elctrica

En el entorno existen numerosas fuentes de radiacin


electromagntica

Lneas de alimentacin de corriente alterna


Emisoras de radio y de televisin
Sistemas de encendido de los motores de gasolina
Conmutadores de arco elctrico
Escobillas de motores elctricos
Alumbrado
Perturbaciones ionosfricas (ionosfera: parte de la atmsfera ionizada
permanentemente debido a la fotoionizacin que provoca la radiacin
solar)
45

Ruido ambiental

Algunas fuentes, como las lneas de alimentacin y las estaciones de


radio

originan ruidos con anchos de banda de frecuencia relativamente limitada

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Aumento de la relacin S/R

Existen mtodos de hardware y software para mejorar la relacin


seal/ruido de un mtodo instrumental:

Hardware :
filtros, cortadores, escudos, moduladores.
Eliminan o atenan el ruido sin afectar de manera significativa a
la seal analtica

Software:
utilizan distintos algoritmos de ordenador
permiten extraer las seales de entornos ruidosos
Necesitan suficiente hardware para acondicionar la seal de
salida del instrumento y transformarla de analgica a digital

47

ANEXO

48

Calibrado mediante adicin estndar

Se aaden cantidades conocidas de analito al


problema, cuyo contenido en analito se quiere
determinar

A partir del aumento de seal se deduce cuanto


analito haba en la muestra problema

Este mtodo requiere una respuesta lineal frente al


analito

La adicin de patrn es especialmente apropiada


cuando la composicin de la muestra es
desconocida o compleja y afecta a la seal
analtica
49

Ejemplo de adicin estndar

Anlisis por emisin atmica


Una muestra de concentracin inicial desconocida de analito [X]i
da una intensidad de emisin Ix.
Se aade una concentracin conocida de patrn, S, a una alcuota
de la muestra y se mide la intensidad de emisin Is+x de esta
segunda disolucin.
La adicin del patrn a la muestra modifica la concentracin
original del analito debido a la dilucin, [X]f,, es la concentracin
diluida del analito, donde f significa "final".
Designamos la concentracin del patrn en la disolucin final como
de [S]f
La emisin es directamente proporcional a la concentracin del
analito

Concentracin de analito en la disolucin inicial


Seal de la disolucin inicial
=
Concentracin de analito + patrn en la disolucin final
Seal de la disolucin final

50

Ecuacin de la adicin estndar

[X ]i
[S ] f + [X ] f

IX
I S+X

51

Ejemplo
El contenido en Na+ de un suero dio una seal de 4,27 mV en un anlisis por emisin
atmica. A continuacin se aadieron 5,00 ml de NaCl 2,08 M a 95,0 ml suero. Este suero
enriquecido dio una seal de 7,98 mV. Hallar la concentracin original de Na+ en el
suero.
Los moles de NaCl aadidos son (5,00 x 10-3 l) x (2,08 M) = 0,0104 mol, y la concentracin
final de NaCl aadido es 0,0104 mol/0,100 = 0,104 M. A partir de la ecuacin 27:

[Na ]
+

[0,104M ] + 0,950[Na + ]i

[Na ]
+

4,27 mV
Na + i = 0,113M
7,98mV

[ ]

=95 ml x Na + i /(95 + 5 ml), porque 95,0 ml de suero se diluyeron con 5,0 ml de

patrn.
A menudo debemos calcular la concentracin de una muestra, despus de diluirla desde
un volumen inicial Vi a Vf. En el ejemplo anterior la disolucin de NaCl 2,08 M se diluy
desde un Vi= 5,00 ml a un Vf = 5,00 + 95,0 = 100,0 ml. La concentracin del NaCl se
diluye, pues, de 2,08 M a (Vi/Vf) x (2,08 M) = 0,104 M. La cantidad (Vi/Vf) se llama
factor de dilucin. Por lo general, se usan factores de dilucin en lugar de clculos ms
laboriosos de moles y litros.

52

Procedimiento grfico para la adicin


estndar

La ecuacin de la recta es y = mx + b.
La abcisa en el origen se obtiene haciendo
y=0
0 = mx + b
X = -b/m
La incertidumbre de la abscisa en el origen
(la desviacin estndar de [X]f, sXf ) es
Sy
m

1
+
n m2

(x

donde Sy es la desviacin estndar de y (Sy/x), m es la


pendiente de la recta de mnimos cuadrados, n es el
nmero de puntos (5), y es el valor medio de los 5 datos
de y, y x es el valor medio de los 5 valores de x.
53

Calibracin mediante adicin de un


patrn interno

Un patrn interno es una cantidad conocida de un compuesto,


diferente del analito que se aade a la muestra desconocida.

La seal del analito se compara con las del patrn interno, y de


ese modo se determina el analito presente en el problema.

En la adicin estndar, el patrn es la misma sustancia que


el analito. En la calibracin con patrn interno este es una
sustancia distinta al analito.

54

Calibracin mediante adicin de un


patrn interno

Los patrones internos son especialmente tiles cuando la cantidad de


muestra analizada o la respuesta del instrumento varan algo de
experiencia a experiencia, por razones que son difciles de
controlar.

Por ejemplo, una variacin de los caudales de gas o de lquido en


una experiencia cromatogrfica, puede variar la respuesta del
detector.

Una curva de calibrado solo es valida si se mantiene el conjunto de


condiciones como se obtuvo.

Sin embargo, la respuesta relativa del detector para el analito y el


patrn es normalmente constante en un amplio intervalo de
condiciones.
55

Calibracin mediante adicin de un


patrn interno

Si la seal del patrn aumenta en un 8,4%, a causa de un cambio en


el caudal del disolvente, la seal del analito de ordinario aumenta
tambin en un 8,4%.

Mientras sea conocida la concentracin de patrn, se puede deducir


la concentracin correcta del analito.

Cuando la respuesta relativa del instrumento al analito y el patrn


permanece constante a lo largo de un intervalo de concentraciones,
decimos que hay una respuesta lineal.

En trabajos rigurosos, esta suposicin debe verificarse, porque no


siempre es verdadera.

56

Calibracin mediante adicin de un


patrn interno

Si el detector responde de igual


manera al estndar que al analito, F
= 1. Si el detector con intensidad
doble al analito que al estndar, F =
2. Si el detector responde con una
intensidad mitad al analito que al
estndar, F = 0,5.

Factor de respuesta :

rea de la seal del patrn


rea de la seal del analito

= F
Concentracin de analito
Concentracin de patrn

AX
AS
= F

[X ] [S ]
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CUESTIONES

1.- Realizar el anlisis de regresin y calcular sensibilidad, LD y


LC para los siguientes datos. Para un absorbancia de 1,582,
calcular la concentracin y el error asociado:
Xi
(g/l As)

Yi
(absorbancia)

0,5

0,154

0,299

0,53

1,296

10

2,592

2.- En el anlisis de Fe en un material de referencia certificado


de suelo se determin mediante espectroscopa atmica una
concentracin media (n=30) de 15 0,2 mg/kg. Si el valor
certificado es de 18 mg/kg, calcular la exactitud y %RSD
58