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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA

UNIDAD CUAJIMALPA

Casa  abier ta  al  tiempo

LABORATORIO DE INGENIERIA II
Licenciatura en Ingeniería Biológica
XI Trimestre 12--I
Profesora: Dras. Marcia Morales e Irmene Ortiz

I. Título de la práctica: Cuantificación de azúcares por el método
DNS
II. Objetivo:

Recordar y aplicar la técnica cuantitativa de azúcares reductores por un
método colorimétrico y lo aplique para conocer la concentración de una
muestra.
Elaborar una curva estándar de glucosa para la cuantificación de azúcares.

III . Introducción.
El método del ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), el cual se basa en la reducción del
DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro azúcar reductor al ácido 3-amino-5nitrosalicílico (de color rojo ladrillo), cuya presencia puede detectarse por lectura
de la Absorbancia en la zona de 540-570 nm.

IV Materiales y reactivos

















Glucosa
NaOH
Hielo
Ácido 3,5-dinitrosalicílico
Tartrato doble de sodio y potasio
(sal de Rachelle)
Fenol
Metabisulfito de sodio
Vaso de precipitados de 100 mL
Vaso de precipitados de 25 mL
Vaso de precipitados de 50 mL
Vaso de precipitados de 10 mL
Matraz aforado de 100 mL
Matraz aforado de 10 mL
Espátula
Balanza analítica
Agitador magnético
Parilla con agitación
1 pipeta automática de 100 µL –
1000 µL

Laboratorio de Ingeniería II













Caja con puntas de plástico
azules de 100 µL – 1000 µL
1 pipeta automática de 10 µL –
100 µL
Caja de puntas de plástico
amarillas de 10 µL a 100 µL
12 Tubos ependorff de 1.5 mL
Vortex
Espectrofotómetro
Gradilla para microtubos
Termómetro
Cronómetro
10 Celdas de plástico de 1 mL
Marcador permanente
Piseta con agua destilada
Guantes de latex

Dras. Marcia Morales e Irmene Ortiz

54 g de Fenol fundido 21. Almacene el reactivo DNS preparado a 4ºC protegido de la luz en frasco ámbar para evitar la degradación del mismo y pérdida de capacidad de desarrollo de la coloración en la reacción con azúcares reductores. En matraz aforado de 100 ml 70 mL de H2O destilada disuelva 1. Adicione en este orden: 0.1 0.3 0.4 0. Trabajo pre-laboratorio Lectura previa de la práctica y cálculos VI.UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA UNIDAD CUAJIMALPA Casa  abier ta  al  tiempo V.4 g de NaOH. A partir de la solución patrón de glucosa de 1 g/L y usando agua como solvente prepare por duplicado las siguientes concentraciones (tabla 1).4 0.2 0. Preparación la curva estándar de azúcares Tubo Solución Agua Volumen glucosa (mL) total (mL) (mL) Blanco 0 0.5 5 0. Preparación del Reactivo DNS Fundir el fenol en baño maría a 50 ºC.56 g Matasulfito de sodio Afore a 100 mL con agua. Preparación de la curva de calibración 1.5 0 0.0 g/L: Disolver 0. Tabla 1.5 0. Procedimiento Experimental VI.5 2 0. Etiquetar cada tubo con tinta indeleble.5 3 0.2 0.6 0.5-dinitrosalicílico (DNS) 0. 2.5 Laboratorio de Ingeniería II Concentración (g/L) 0 0.01 g de glucosa o dextrosa en 10 mL de agua destilada.2.1.1 0.75 g de Ácido 3.4 0. Marcia Morales e Irmene Ortiz . Solución patrón de glucosa 1.3 0.8 1 Dras.5 1 0. 0. VI.6 g de Tartrato doble de sodio y potasio (sal de Rachelle).2 0.5 4 0.

Elaborar una tabla como la que se indica en la Tabla 2 para anotar las lecturas obtenidas Tabla 2. 8. 6. Se toman 100µL de muestra o puntos de la curva de calibración. 7. lentes de seguridad y bata de laboratorio durante su manejo. Adicionar 1000µL de agua destilada.6 4 0. así que se debe usar cronómetro. 4.2 2 0. ajustando el cero del espctro con el blanco. situar en hielo 5 min. el tiempo necesario para obtener una solución homegénea. • Identifique cada material con un marcador indeleble. Laboratorio de Ingeniería II Dras. 2. utilizar guantes. Valores de absorbancia obtenidos en el espectrofotómetro Tubo Concentración Absorbancia Absorbancia (g/L) A 540 nm A 540 nm Blanco 0 1 0.3. Colocar en un baño maría 100ºC durante 5 min.4 3 0.UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA UNIDAD CUAJIMALPA Casa  abier ta  al  tiempo VI. Volver a agitar en Vortex. 9. 5. procurando que la mayor parte del vial este sumergido en este. Agitar en un Vortex. Inmediantamente después. Coloque los residuos en el recipiente para soluciones básicas Notas del Procedimiento: • Para el tratamiento de muestras En caso necesario diluir con agua para estar en el mismo rango de curva de calibración Tomar en cuenta el volumen de la muestra y la dilución para calcular la concentración de la muestra problema • No toque con los dedos los lados las celdas por donde pasa el haz de luz. 3. Leer en en un espectro UV-visible a 540nm.8 5 1 Muestra X Normas de seguridad y manejo de residuos El reactivo de DNS contiene hidróxido de sodio. • No utilice las micropipetas fuera del rango de trabajo. El tiempo debe ser exacto. Marcia Morales e Irmene Ortiz . Agregar 100µL del reactivo DNS. Procedimiento 1.

Porqué se recomienda realizar una curva estandar cada vez que se realizan los análisis 9.UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA UNIDAD CUAJIMALPA Casa  abier ta  al  tiempo VII. Explique otras alternativas para la medición de azúcares 8. Calcule la media de las lecturas y grafique la curva estándar 2. b y r2 3. Laboratorio de Ingeniería II Dras. Marcia Morales e Irmene Ortiz . Explique por que se deben realizar diluciones cuando la absorbancia es mayor a 1. 6. justifique su respuesta. Explique a que otra longitud de onda podría realizarse el ensayo de azúcares reductores por el método de DNS. Realice la regresión lineal para obtener m. Cuestionario y cálculos Cálculos 1. Mencione algunos errores/interferencia con el método de DNS y explique como se puede saber si un compuesto tiene interferencia con el reactivo. 7. Describa en 5 líneas el fundamento del método de DNS 2. 5. Obtener la concentración de la muestra Cuestionario 1. Para que se usa el metabisulfito de sodio y el fenol 4. Mencione tres áreas de estudio donde es importante medir la concentración de azúcares. Cual es la sensibilidad del método de DNS 10. ¿Qué tipo de reacción le sucede al DNS durante este ensayo? 3.