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UTILIZAO DO NDICE DE RETENO LINEAR PARA CARACTERIZAO DE COMPOSTOS VOLTEIS

EM CAF SOLVEL UTILIZANDO GC-MS E COLUNA HP-INNOWAX


Marcelo Caldeira Viegas* e Denisley Gentil Bassoli
Cia. Iguau de Caf Solvel, Departamento de Pesquisa & Desenvolvimento, Rodovia 369, km 88,
86300-000 Cornlio Procpio-PR, Brasil
Recebido em 27/11/06; aceito em 7/5/07; publicado na web em 9/11/07

Nota Tcnica

Quim. Nova, Vol. 30, No. 8, 2031-2034, 2007

LINEAR RETENTION INDEX FOR CHARACTERIZATION OF VOLATILE COMPOUNDS IN SOLUBLE COFFEE USING GCMS AND HP-INNOWAX COLUMN. Gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) is widely used for the
characterization of volatile compounds. However, due to the complexity of the soluble coffee matrix, a complete identification of the
components should not be based on mass spectra interpretation only. The linear index of retention (LRI) is frequently used to give support
to mass spectra. The aim of this work is to investigate the characterization of the volatile compounds in soluble coffee samples by GCMS using LRI values found with a HP-INNOWAX column. The method used allows a significant increase of the reliability of identifying
compounds.
Keywords: LRI; mass spectrometry; flavor.

INTRODUO
O caf caracterizado principalmente pelo impacto aromtico
que proporciona aos consumidores. Por isso, a composio dos
volteis responsveis pelo perfil aromtico do caf tem sido objeto
de estudo de vrios grupos de pesquisadores, onde se tem identificado mais de 850 compostos1.
Dentre os mtodos analticos que tm sido utilizados para estudar o perfil aromtico de amostras de caf, pode-se citar a
cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas (GCMS) como sendo amplamente utilizada para investigao dos componentes aromticos que apresentam maior contribuio para a
caracterstica aromtica de bebidas e cafs em p2.
A tcnica GC-MS juntamente com SPME em headspace dinmico tem sido utilizada3 para a identificao e a caracterizao
dos compostos volteis durante o processo de moagem de caf
torrado. As reas cromatogrficas de 47 picos de compostos volteis apresentaram coeficientes de variao (CV) prximos a 5%
e o perfil dos compostos volteis em cromatografia gasosa foi
similar quele extrado por solvente, exceo aos compostos altamente volteis, tais como 4-hidrxi-2,5-dimetil-3-(2H)-furanona
e 4-etil-guaiacol.
Apesar de a tcnica GC-MS ser uma poderosa ferramenta em
anlise qualitativa, muitas vezes as bibliotecas utilizadas poderiam no ser completas ou eficientes o suficiente para caracterizar
completamente alguns compostos, sendo que o ndice de reteno
pode auxiliar neste propsito, evitando-se assim uma identificao
equivocada.
O ndice de reteno de um componente um nmero, obtido
por interpolao, relacionando o tempo de reteno do componente em estudo com o tempo de reteno de dois padres (geralmente hidrocarbonetos) eludos antes e aps o pico do composto de
interesse 4.
Dentre os ndices de reteno encontrados na literatura podese citar o ndice Kovts e o ndice de reteno linear (LRI) como
sendo amplamente divulgados. O ndice Kovts sempre calcula*e-mail: mviegas@iguacu.com.br

do sob condies isotrmicas de temperatura. Quando se utilizam


temperaturas programadas de coluna, um valor similar pode ser calculado utilizando os nmeros extrados de seus algoritmos, sendo
que este valor chamado de ndice de reteno linear LRI4.
Os usurios de GC-MS tendem freqentemente a confiar simplesmente na biblioteca de espectro de massas na identificao de
compostos, mas devido complexidade das matrizes e ineficincia nas tcnicas de extrao, ao usar o LRI este processo bastante
aprimorado5.
Infelizmente, encontrar valores de LRI de referncia pode ser
um desafio. H poucas bases de dados disponveis na literatura e as
informaes so baseadas em tipos de colunas mais antigas, por
exemplo, C20M e OV101 e, muitas vezes, encontrar alguns compostos de interesse pode ser um problema.
Desta maneira este trabalho apresenta uma contribuio na
disponibilizao de tais dados, podendo ser utilizados como futura
referncia para clculo de ndice de reteno linear em coluna polar HP-Innowax com temperatura programada.
Este trabalho teve por objetivo utilizar a tcnica GC-MS para
caracterizar os componentes volteis responsveis pelo impacto aromtico1,3 de amostras de caf solvel e identific-los com o auxlio
da biblioteca de espectro NIST e valores dos ndices de reteno
linear (LRI) obtidos em coluna HP-Innowax.
PARTE EXPERIMENTAL
Material
As amostras de caf solvel foram fornecidas pela Cia. Iguau
de Caf Solvel, e foram obtidas utilizando-se caf arbica, cor de
torra 45 IR e liofilizado.
Os demais padres cromatogrficos foram adquiridos da SigmaAldrich, com especificao grau GC.
Preparo das amostras
Pesou-se em balana analtica 2,80 g de caf solvel. Aps a
pesagem, os frascos para headspace (Agilent 20 mL) foram sela-

2032

Viegas e Bassoli

Quim. Nova

dos imediatamente com septos de silicone para que a composio


dos compostos volteis presentes em cada amostra permanecesse
inalterada.
Metodologia headspace SPME (HS-SPME): extrao
Os frascos selados foram mantidos em banho de leo
termostatizado, temperatura constante de 70 C. Aps atingido o
equilbrio de temperatura nos frascos, com a fibra retrada na agulha, o septo foi perfurado e a fibra foi exposta ao headspace da
amostra. Aps 30 min de extrao, a fibra foi inserida diretamente
no injetor do GC-MS para dessoro trmica dos compostos volteis e transferncia para a coluna cromatogrfica.
Cromatografia gasosa com detector de espectrometria de
massas
As anlises foram conduzidas em um sistema Agilent 6890N
(Modo Scan - varredura 35 a 400 u.m.a) acoplado com detector de
massas (GC-MS). Foi utilizada uma coluna capilar polar HP-Innowax
(60 m x 320 m x 0.25 m). O injetor operou em modo splitless com
temperatura constante de 250 C. O forno foi programado para uma
temperatura inicial de 40 C (5 min), 40 a 60 C 4 C/min (5 min), 60
a 250 C 8 C/min (3 min). O gs de arraste hlio (5,0 analtico)
manteve o fluxo constante igual a 1,2 mL/min.
O detector de massas operou nas seguintes condies: energia de
ionizao: 70 eV, temperatura da interface: 280 C, temperatura do
quadripolo: 150 C, temperatura da fonte de ions: 230 C. Os dados
gerados foram analisados utilizando o software MSD Chemstation
acoplado com a biblioteca de espectros de massa NIST/2002.
Determinao do ndice de reteno linear (LRI) coluna
Innowax
Uma mistura padro de n-Alcanos (Sigma-Aldrich C8 -C40) foi
utilizada para verificar o desempenho do sistema GC-MS e calcular o ndice de reteno linear (LRI) de cada composto na amostra.
O padro (1 L) destes alcanos foi injetado no sistema GC-MS
operando nas condies descritas acima, e seus respectivos tempos
de reteno foram usados como padro externo de referncia para
o clculo do LRI, juntamente com os tempos de reteno de cada
composto de interesse. O LRI de cada componente foi calculado
conforme a Equao 1

(1)
onde: LRI - ndice de reteno linear; tc - tempo de reteno do
composto de interesse; tn+1 - tempo de reteno do hidrocarboneto
posterior; n - n de carbonos do hidrocarboneto anterior.
Para auxiliar na identificao e caracterizao dos compostos
volteis, os valores de ndice de reteno linear calculados foram
comparados com valores encontrados na literatura para colunas de
mesma polaridade.

Figura 1. Cromatograma CG/MS HS-SPME - caf soluvel (arbica)

Utilizando-se a tcnica de GC-MS identificaram-se vrios compostos citados na literatura3,6 como sendo componentes importantes
para a qualidade aromtica do caf solvel.
A Tabela 1 apresenta 88 compostos, identificados usando-se o
sistema GC-MS com padres externos, interpretao de espectros
de massas (NIST) e LRI, este ltimo com o objetivo de auxiliar no
processo de caracterizao. Foram estabelecidos 20 valores de LRI
inditos na literatura consultada.
Pode-se perceber pelos resultados apresentados na Tabela 1 que
para a maioria dos compostos estudados os valores de LRI obtidos
neste trabalho esto coerentes com os valores encontrados na literatura.
Utilizando-se a metodologia proposta, compostos importantes
citados na literatura3,6, tais como metional, furaneol, 2-furfuriltiol e
cido isovalrico, foram identificados neste trabalho.
Dentre os compostos identificados destacam-se alguns compostos altamente volteis, tais como 2,3-butanodiona e 2,3pentanodiona, que possuem descritivos sensoriais avaliados como
amanteigados conforme descrito na literatura3.
A degradao de Strecker leva formao de vrios compostos
relatados6 como importantes na formao do aroma, tais como 2metil-butanal e 3-metil-butanal, que so perceptveis sensorialmente
mesmo em altas diluies.
Muitas pirazinas resultantes de reaes de Maillard foram
identificadas neste trabalho, dentre elas pode-se citar 2,3-dimetilpirazina, 2,6-dimetil-pirazina.
O metanotiol apresentou discrepncia entre a biblioteca NIST e
o LRI, sendo confirmado pelo padro externo. Este composto, que
individualmente tem aroma fortemente ptrido, um produto da
degradao trmica do metional.
Este estudo est de acordo com a literatura7 que descreve que
mais de 80% dos compostos volteis presentes em amostra de ch e
leos podem ser identificados com segurana com o uso de GC-MS
juntamente com o ndice de reteno linear.
A importncia do uso dos valores de LRI acentua-se ainda mais
nos compostos para os quais no se utilizou padro externo, pois apesar de dispormos de um total de 38 padres externos comerciais, o
preo elevado em geral inviabiliza a compra de padres para todos os
compostos possveis de serem identificados, sendo que a utilizao
do LRI aumenta a confiabilidade de identificao destes compostos.
CONCLUSES

RESULTADOS E DISCUSSO
A Figura 1 apresenta o cromatograma obtido empregando-se a
metodologia proposta.
Pode-se perceber pela Figura 1 que o cromatograma apresenta
uma quantidade representativa de compostos que caracterizam o
caf solvel.

A utilizao dos valores de ndice de reteno linear (LRI) aumentou a confiabilidade dos resultados obtidos em GC-MS, quando se utiliza apenas a interpretao de espectros de massas e a biblioteca NIST, o que contribuiu de forma significativa para identificao e caracterizao dos compostos volteis individuais precursores do perfil aromtico de amostras de caf solvel.

Vol. 30, No. 8

Utilizao do ndice de reteno linear para caracterizao de compostos volteis

2033

Tabela 1. Compostos volteis identificados em GC-MS e identificados pela biblioteca de espectro de massas e LRI
Composto
metanotiol
etanal
propanal
acetona
acetato de metila
2-metil-furano
butanal
acetato de etila
2-butanona
2,3-diidro-4-metil-furano
2-metil-butanal
3-metil-butanal
1-metil-piperidina
2,3-butanodiona
decano
1,2,3,6-tetraidro-1-metil-piridina
2,3-pentanodiona
dissulfeto de dimetila
hexanal
3-penten-2-ona
etil-benzeno
2,4-dimetil-3-pentanona
3,5-dimetil-isoxazol
4,5-dimetil-oxazol
piridina
limoneno
pirazina
3-hexen-2-ona
1-etil-3-metil-benzeno
2-(metoximetil)-furano
1-(2-metil-1-propenil)-pirrolidona
metil-pirazina
4-metil-tiazol
3-hidrxi-2-butanona
2,6,11-trimetil-dodecano
1-hidrxi-2-propanona
2,5-dimetil-pirazina
2,6-dimetil-pirazina
etil-pirazina
2,3-dimetil-pirazina
2-metil-2-ciclopenten-1-ona
4,5-dimetil-tiazol
3-etil-piridina
2-etil-6-metil-pirazina
2-etil-5-metil-pirazina
2,3,5-trimetil-pirazina
2-etil-3-metil-pirazina
2-n-propil-pirazina
3-metil-2-buten-1-ol
2,6-dietil-pirazina
2-furil-metanotiol
2,5-dimetil-3-etil-pirazina
cido actico
metional
furfural
2-etil-1-hexanol
2,3-dietil-5-metil-pirazina
2-acetil-furano
benzaldedo
acetato de 2-furilmetila

CAS

LRI Obtido

LRI Ref.

Mtodo de Identificao*

Ref.

74-93-1
75-07-0
123-38-6
67-64-1
79-20-9
534-22-5
123-72-8
141-78-6
78-93-3
34314-83-5
96-17-3
590-86-3
626-67-5
431-03-8
124-18-5
694-55-3
600-14-6
624-92-0
66-25-1
3102-33-8
100-41-4
565-80-0
300-87-8
20662-83-3
110-86-1
5989-27-5
290-37-9
763-93-9
620-14-4
13679-46-4
2403-57-8
109-08-0
693-95-8
513-86-0
31295-56-4
116-09-6
123-32-0
108-50-9
13925-00-3
5910-89-4
1120-73-6
3581-91-7
536-78-7
13925-03-6
13360-64-0
14667-55-1
15707-23-0
18138-03-9
556-82-1
13067-27-1
98-02-2
13360-65-1
64-19-7
3268-49-3
98-01-1
104-76-7
18138-04-0
1192-62-7
100-52-7
623-17-6

593
702
763
788
804
853
859
878
894
901
907
912
959
977
994
1030
1056
1066
1077
1125
1125
1133
1135
1151
1182
1195
1214
1218
1220
1245
1260
1267
1286
1287
1299
1301
1328
1335
1337
1353
1373
1379
1384
1389
1395
1409
1411
1425
1430
1440
1444
1453
1454
1469
1478
1494
1501
1516
1537
1550

690
823
834
817
867
885
875
903
906
976
1000
1056
1081
1089
1121
1138
1152
1181
1184
1196
1308
1274
1284
1265
1308
1334
1340
1339
1355
1367
1378
1397
1388
1395
1414
1407
1437
1421
1439
1459
1418
1466
1493
1494
1497
1518
-

NIST + PE
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI
NIST + LRI
NIST + LRI
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST+ LRI
NIST+ LRI
NIST+ LRI
NIST + PE
NIST
NIST+ LRI
NIST + LRI + PE
NIST+ LRI
NIST + LRI + PE
NIST
NIST+ LRI
NIST
NIST
NIST+ LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST
NIST+ LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST+ LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST
NIST
NIST+ LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
PE+ NIST

29
17
16
9
25
10
19
19
18
23
9
19
16
13
19
21
27
18
11
18
16
13
13
18
12
13
13
12
13
20
13
12
13
13
13
12
12
13
19
24
12
24
12
12
20
23
-

2034

Viegas e Bassoli

Quim. Nova

Tabela 1. continuao
Composto
linalol
cido propanico
5-metil-2-furanocarboxaldedo
propanoato de 2-furilmetila
(1-metil-etenil)-pirazina
2-ciano-1,5-dimetilpirrol
2-acetil-piridina
5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopentapirazina
acetil-pirazina
butirolactona
2-furil-metanol
cido isovalrico
2-(2-furimetil)-5-metil-furano
3,4-dimetil-2,5-furanodiona
2-hidrxi-3-metil-2-ciclopenten-1-ona
1-(2-furilmetil)-1H-pirrol
guaiacol
lcool benzlico
2-hidrxi-3-etil-2-ciclopenten-1-ona
2-feniletanol
maltol
furaneol
4-etil-guaiacol
2-pirrolidona
cido nonanico
4-vinil-guaiacol
2,4-ditert-butil-fenol
isoeugenol

CAS

LRI Obtido

LRI Ref.

Mtodo de Identificao*

Ref.

78-70-6
79-09-4
620-02-0
623-19-8
38713-41-6
56341-36-7
1122-62-9
23747-48-0
22047-25-2
96-48-0
98-00-0
503-74-2
13678-51-8
766-39-2
80-71-7
1438-94-4
90-05-1
100-51-6
21835-01-8
60-12-8
118-71-8
3658-77-3
2785-89-9
616-45-5
112-05-0
7786-61-0
96-76-4
97-54-1

1545
1555
1588
1606
1609
1612
1618
1636
1644
1652
1669
1680
1693
1755
1831
1850
1882
1899
1910
1931
1988
2042
2058
2073
2173
2217
2315
2366

1566
1531
1570
1603
1599
1630
1617
1667
1680
1663
1831
1859
1878
1939
1968
2002
2032
2177
2134
2321
2250

NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI
NIST
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST + LRI + PE
NIST
NIST + LRI
NIST + LRI + PE
NIST + LRI
NIST + LRI + PE

28
20
12
12
13
13
13
21
26
22
20
20
15
28
20
26
20
21
11
21
14

NIST = Identificao feita atravs da biblioteca de espectrometria de massas (NIST); LRI = Identificao feita atravs do ndice de
reteno linear; PE = Identificao feita atravs de padres externos
Os valores de LRI apresentados neste trabalho apresentam uma
importante contribuio no que diz respeito aos valores de referncia deste parmetro em colunas polares, especificamente em colunas mais recentes como a HP-Innowax.
REFERNCIAS
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