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UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOANLISIS


CATEDRA DE INMUNOLOGA

Introduccin al Inmunodiagnstico.

Csar Prez-Maldonado,PhD.
2009.

INMUNIDAD

Mecanismos de Defensa
(Especficos / Inespecficos)
CELULARES
Linfocitos T

HUMORALES
Sntesis de Anticuerpos. Linfocitos B.

Destruccin / Inactivacin de agentes extraos


(no-propio)

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INFECCIN

Respuesta

CUANTIFICACION

DETECCION

Antgenos / Anticuerpos
(liquidos biolgicos)

Inmunodiagnstico
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RESPUESTA INMUNE A LA INFECCIN


Los linfocitos B sintetizan anticuerpos clase IgG,
IgG IgM,
IgM e IgA
en respuesta a la mayora de las infecciones.
IgE en reacciones alrgicas.

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DEFINICIN
Tcnicas basadas en la reaccin antgeno-anticuerpo.
De utilidad en la deteccin de antgenos o anticuerpos en diferentes

muestras biolgicas (suero, saliva, lquidos biolgicos, tejidos, etc.)


Permite evidenciar infecciones, respuestas inmunes y componentes

biolgicos.

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ASPECTOS PRCTICOS
La sensibilidad su capacidad para detectar los analitos en los

casos estudiados.
La especificidad permite asegurar que el resultado positivo de una

prueba indica con precisin la presencia del analito en cuestin.


Anticuerpos Monoclonales - Protenas Recombinantes

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APLICACIN DEL INMUNODIAGNSTICO.


Estudios del Sistema Inmune:
- Salud.
- Enfermedad.
Aspectos a evaluar:
- Evaluacin del Sistema Inmune
- Deteccin de Enfermedades Infecciosas.
- Anlisis General en el Laboratorio.
Hormonas, Drogas, Medicamentos, etc.

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* Desarrollo de Mtodos Diagnsticos.


Aplicacin en otras reas especialidades.

Bioanlisis
Medicina
Veterinaria
Industria Farmacutica.

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MTODOS DIAGNSTICOS

Mtodos directos
Ponen de manifiesto la presencia del antgeno
- Visualizacin directa
- Deteccin de ciertos componentes
Mtodos indirectos
Permiten detectar la presencia de ciertos productos derivados
de la infeccin (Anticuerpos).

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MTODOS DIAGNSTICOS
Enfermedades infecciosas:
Diagnstico directo: deteccin de antgenos.

a) En enfermedades infecciosas: VHB.


b) Para identificar microorganismos en el laboratorio.

Diagnstico indirecto: deteccin de anticuerpos.

a) Enfermedades infecciosas: VIH, VHC, CMV,sfilis.

b) Determinacin del estado inmunitario de individuos y


poblaciones. Conocer el porcentaje de personas de una poblacin
expuesta a infecciones. (Herramienta epidemiolgica) .

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APLICACIONES

Como pruebas de tamizaje (cribado):


En estudios poblacionales donde se desea investigar la existencia de probables
infecciones (aguda o crnica) mediante la deteccin de anticuerpos. Las mas
utilizadas en la actualidad son las tcnicas inmunoenzimticas.

Determinacin del antgeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg)


Bsqueda de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC) en bancos de
sangre.
Deteccin de anticuerpos contra el virus de la rubeola en mujeres no vacunadas.

En el diagnstico clnico:

Se utilizan como complemento de las pruebas de tamizaje. Cuando se sospecha


de una determinada enfermedad infecciosa.
Deben ser muy sensibles y especficas:
aglutinacin con ltex, hemaglutinacin, inmunofluorescencia e
inmunoenzimticas.

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Pruebas Serolgicas.
FACIL REALIZACION.
EVITAN PROCEDIMIENTOS INVASIVOS.
PERMITEN DETECTAR ANTIGENOS Y ANTICUERPOS
PERMITEN LA REALIZACION DE ESTUDIOS EPIDEMIOLGICOS DE
MANERA MS EFECTIVA.
SON ALTAMENTE ESPECFICAS Y SENSIBLES.

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DIAGNSTICO INMUNOLGICO

La clase IgM se producen nicamente en la respuesta primaria.


(fase aguda)
aguda
Su presencia se interpreta como exposicin-infeccin reciente,
reciente o
activa.
activa
Las IgM, no atraviesan la placente humana.
Importantes en diagnstico de recin nacidos (infeccin fetal)
fetal

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Diagnstico Serolgico.
Las clase IgG pueden permanecer -incluso a tasas elevadas- mucho
tiempo (aos) despus de que la infeccin est resuelta.
Contactos posteriores con Antgenos producen una respuesta de Acs clase
IgG (Respuesta Secundaria).
En el caso de microorganismos intracelulares puede persistir toda la vida.
(Toxoplasmosis, Herpesvirus etc..).
Memoria Inmunolgica : Respuesta ms inmediata y con mayor intensidad
(RESPUESTA ANAMNESICA).

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Cnetica - IgG e IgM

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Produccin de Anticuerpos Monoclonales

Inmunizacin de un ratn para


estimular la produccin de
anticuerpos
Linfocitos B
aisladas de Bazo

Clulas tumorales crecen


en cultivos tisulares

Linfocitos B se fusionan
con clulas tumorales
cultivadas
HIBRIDOMA

Produccin de anticuerpos
por los hibridomas

Separacin de clones de hibridoma


productoras de anticuerpo

Obtencin de anticuerpos
monoclonales.

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Pruebas Serolgicas.
Fijacin del Complemento

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Aglutinacin
Prticulas de Ltex Sensibilizadas con Anticuerpos

Prticulas de Ltex Sensibilizadas - Muestra

Aglutinaci
n.

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Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Aglutinacin.
Clulas completas
- Bacterias
- Protozoos
- Eritrocitos
Partculas inertes
- Ltex
- Bentonita
- Gelatina

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Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Hemaglutinacin.
Clulas completas
- Eritrocitos

Antgeno
Antcuerpo
Eritrocitos
Fase Slida

Muestra

Mallas de Aglutinacin

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Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Hemaglutinacin.
Clulas completas
- Eritrocitos

Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Precipitacin.
Medio Semisolido
- Antgeno o Anticuerpo difundido en medio

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Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Precipitacin.

Precipitado formado

Medio Semisolido
- Antgeno o Anticuerpo difundido en medio

Zona de exceso
de Ac-Ag

Zona de equivalencia

Zona de exceso
de Ac-Ag

Concentracin creciente de antigeno


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Pruebas Serolgicas.
Inmunofluorescencia.
Conjugado Fluorescente
- Antgeno o Anticuerpo marcado con Fluorocromo

Directa

Indirecta

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Pruebas Serolgicas.
Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

S
E

Antigeno
Buffer de bloqueo
Anticuerpo

Conjugado Enzimtico
- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima

Enzima acoplada con un anti-Ig


Substrato
Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

Pruebas Serolgicas.
Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

Antigeno
Buffer de bloqueo
Anticuerpo

Conjugado Enzimtico
- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima

Enzima acoplada con un anticuerpo


Substrato

Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

Pruebas Serolgicas.
Inmunoensayo Enzimtico ELISA.
(Auro-Dex Helicobacter pylori MultiTest)

Dr. Csar Prez-Maldonado.2009

G racias por su
atencin