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Seminrio de

Microbiologi
a
Bordetella sp
Odontologia 2 Diurno - 2005
Grupo:
Gisele Ebling
Juliane Aline Teixeira
Karen Cristina O. Gomes
Patrcia de Barros Guimares
Patrcia Zolini
Priscila Cavalcante de Paula
Stfane Carolina Cau
Suzana Amaral
Vanessa Mendona Muller

1. INTRODUO
A coqueluche uma doena respiratria comum altamente infecciosa e grave que afeta
predominantemente bebs e crianas pequenas. O agente causador a Bordetella pertussis,
que transmitido atravs das secrees respiratrias de um indivduo infectado para o trato
respiratrio de um novo hospedeiro humano. O alcance populacional elevado: apenas nos
EUA so registrados cerca de 5000 novos casos a cada ano. Os casos mais graves ocorrem
geralmente em crianas menores de 1 ano de idade, com ndices expressivos de mortalidade
entre lactentes menores de 6 meses de idade. A infeco resulta em imunidade por tempo
prolongado doena, mas pode no prevenir contra uma infeco subseqente. No h
evidncias de um portador crnico. Embora a Bordetella pertussis seja suscetvel maioria
dos antibiticos, estes no so eficientes no tratamento, principalmente porque quando o
quadro diagnosticado, a bactria j causou danos ao trato respiratrio.

1.1.

CLASSIFICAO E METABOLISMO

O gnero Bordetella constituido de cocobacilos Gram-negativos delicados. Eles so


aerbios obrigatrios (necessitam de oxignio livre para a respirao) e no fermentam
carboidratos como a glicose. Englobam 3 espcies: Bordetella pertussis, Bordetella
parapertussis (causa infeco respiratria semelhante coqueluche; entretanto, o paciente
no apresenta o quadro de tosse paroxstica), Bordetella bronchiseptica ( uma bactria
primariamente patognica para animais -coelho, cobaia, rato, porco, cachorro e outros- sendo
suas infeces freqentemente epidmicas. Raramente causa infeco no homem).

1.2.

CARACTERSTICAS CULTURAIS

A Bordetella pertussis cresce somente em meios especiais contendo sangue. Ela sofre
mutaes de vrios tipos, quando submetida a culturas sucessivas no laboratrio. Estas
mutaes, que alis so freqentes, determinam alteraes profundas na estrutura,
metabolismo e virulncia da bactria. Dependendo da existncia e do grau dessas alteraes,
ela pode se apresentar em 4 fases: na fase 1, caracterstica da fase recm-isolada, a bactria
portadora de todas as suas estruturas, produz seus fatores de virulncia e bastante exigente
com relao aos seus requerimentos nutritivos. Na fase 4, deixa de apresentar muita de suas
estruturas, praticamente avirulenta e no apresenta exigncias nutritivas. As fases 2 e 3 so
intermedirias com relao a essas caractersticas. Somente as culturas de Bordetella
pertussis, em fase 1, devem ser utilizadas no preparo de vacinas.

2. EPIDEMIOLOGIA
A coqueluche considerada uma sndrome que pode ser causada por vrios agentes,
mas apenas a Bordetella pertussis est associada com as coqueluches endmica e epidmica e
com o cortejo de complicaes e de mortes em humanos.
Os humanos (mucosa respiratria) so os hospedeiros da Bordetella pertussis e da
Bordetella parapertussis.

O grupo de maior risco o das crianas com menos de seis meses de idade cujo
calendrio de vacinao ainda no est completo, mas qualquer pessoa pode ser suscetvel,
com exceo daquelas que j foram vacinadas ou aquelas que j adquiriram a doena.
A transmisso se d, principalmente, pelo contato direto de pessoa doente com pessoa
suscetvel, atravs de gotculas de secreo da orofaringe eliminadas por tosse, espirro ou ao
falar. Em menor incidncia, pode ocorrer por transmisso por objetos recentemente
contaminados com secrees do doente.
Considera-se que o perodo de transmisso se entende de sete dias aps o contato com o
doente fase catarral at trs semanas aps o inicio dos acessos de tosse tpicos da doena
fase paroxstica caso no haja uso de terapia com antibiticos. A maior transmissibilidade
da doena ocorre na fase catarral (inicio da doena, logo aps o perodo de incubao).
A coqueluche muito comum em muitos pases em desenvolvimento. No Brasil, a
morbidade da coqueluche j foi elevada. Na dcada de 1980, foram notificados mais de 40
mil casos anuais, e o coeficiente de incidncia era superior a 30/100.000 habitantes. A partir
de 1983 houve uma queda acentuada da incidncia e, desde ento, uma tendncia decrescente
em relao a estes nmeros, mantendo-se um coeficiente de incidncia em torno de 1/100.000
habitantes.

3. MORFOLOGIA E COLORAO
A bactria Bordetella pertussis considerada uma bactria pequena, com
aproximadamente 0,8 por 0,4 micrmetros. um cocobacilo encapsulado e no produz
esporos. Arranja-se isoladamente ou em grupos pequenos e no distinguida facilmente da
espcie haemophilus.
Essa bactria possui vrias protenas de membrana, algumas com funo de aderncia na
clula hospedeira, outras de antgenos de superfcie e muitas ainda com funes
desconhecidas.
A colorao utilizada para o estudo microscpico dessas bactrias, o mtodo de Gram,
que consiste, essencialmente, no tratamento sucessivo do esfregao bacteriano, fixado pelo
calor, utilizando cristal violeta, lugol, lcool e fucsina como reagentes. Utilizando essa
colorao, podemos constatar que a bactria Bordetella pertussis trata-se de uma bactria
Gram negativa, apresentando-se avermelhada aps tal tratamento.

4. CONDIES DE CULTIVO
Bordetella pertussis tem sido isolada somente do trato respiratrio humano. Elas tm
crescimento lento e se duplicam somente uma vez a cada 4 horas, sob condies timas. Elas
podem ter dificuldade pra obter crescimento logartmico, sugerindo que sob condies
semelhantes somente um sub-sistema da bactria sofre replicao, at mesmo se a densidade
da cultura aumentada. Bordetella pertussis sensvel a cidos gordurosos, e Dacron swabs,
em vez de algodo, so usados para transferir a bactria. Bordet-Gengou Agar o meio de
crescimento mais comumente usado para cultivo em laboratrio. O meio base contm infuso
de batata, cloreto de sdio e glicerol, e pode ser complementado com casena ou peptona
digerida. Depois de autoclavado, 15% de sangue desfibrinado estril (normalmente sangue de
ovelha) adicionado ao Agar resfriado. Uma vantagem para o uso de Agar Bordet-Gengou
que permitida a visualizao de hemlise, que mediada pela toxina Adenil Ciclase, uma
protena que s expressada quando a bactria est em estado virulento.
3

Muitos laboratrios clnicos usam Regan- Lowe charcoal Agar para cultivar B. pertussis
de uma amostra clnica apropriada. O meio Regan-lowe tem maior tempo de uso que BordetGengou,o que importante visto que geralmente pertussis espordica e caro manter
constante o estoque do meio que somente adequado para o cultivo dela. Colnias de B.
pertussis podem ser identificadas em qualquer um dos dois meios como pequenas colnias
cinza que podem levar 7 dias para se desenvolver. As colnias tem um aspecto de gotinha
de mercrio, ou de prola num campo dissecado. Elas so oxidase positivas e no
crescem em Agar chocolate.

5. PATOGENICIDADE (Fatores de Virulncia)


Esta uma representao esquemtica das principais etapas e dos fatores envolvidos na
patognese da coqueluche, ocasionada pela bactria Bordetella pertussis que sero melhor
explicados na apresentao.

Inalao de Aerossis
Bordetella pertussis

Aderncia a clulas epiteliais ciliadas


(hemaglutinina filamentosa toxina
pertssica)

Aderncia a fagcitos

Produo de toxinas

Fase intracelular

Dano s clulas epiteliais


(toxina traqueal,
toxina pertssica,
adenil-ciclase)

Ingesto

(?)

Inibio da
migrao de
moncitos e
reduo da
resposta
oxidativa dos
fagcitos
(toxina
pertssica e
adenil-ciclase)

Ao sobre os neurnios
(adenil-ciclase, toxina pertssica, LPS)

Tosse paroxstica

6. DIAGNSTICO LABORATORIAL
Diversos mtodos de diagnstico so descritos para a confirmao laboratorial de
Bordetella:
Isolamento de Bordetella pertussis - cultura: o mtodo mais empregado para a
confirmao laboratorial e est padronizado. H mais sucesso durante a fase catarral. Deve
ser feito atravs de cultura de material colhido (secrees de nasofaringe, colhida da faringe
posterior). O melhor mtodo para isolamento de Bordetella est em gar mdio de Bordet4

Gengou ou mdio de Regan-Lowe. Para melhorar a probabilidade de sucesso, diferentemente


dos procedimentos utilizados para coleta de material por "swab" (cotonete com algodo), a
amostra deve ser colhida com basto especial, cuja ponta coberta por dcron ou de alginato
de clcio, isto porque o algodo interfere no crescimento da Bordetella pertussis. A seguir,
deve ser transportada para os meios de cultura especiais (Regan-Lowe ou Bordet-Gengou),
contendo sangue. Deve estar incubada a 35-36C, com oxignio e suficiente umidade. O
isolamento pode ser obtido em mdia aps 3-4 dias de incubaoe as colnias observadas so
minsculas, acinzentadas. O crescimento (que lento), em condies ideais, consegue-se em
torno de 60 a 76% das vezes.
O segundo mtodo para identificao da B. pertussis a tcnica de DFA (direct
fluorescent antibody), teste direto para anticorpos fluorescentes em secreo nasofarngea.
Tem baixa sensibilidade e especificidade varivel, no sendo usado como critrio de
confirmao laboratorial.
Tcnicas imunolgicas tambm podem ser empregadas, mas a sorologia deve ser
reservada para diagnsticos mais tardios ou levantamentos epidemiolgicos. Anticorpos
circulantes no sangue aparecem na 3 semana da doena e h um pico entre a 8 e 10 semana.
Uma evidncia de infeco natural quando so detectadas especficas IgA. Testes
sorolgicos de anticorpos aglutinantes, Elisa, tm sido, h muito tempo, usados para
coqueluche. Porm, alm de no haver uma padronizao, apresentam limitao por sua
variao na sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade. O DNA da Bordetella pode ser
detectado atravs de PCR, tcnica de reao em cadeia de polimerase. rpido e possui alta
sensibilidade. Pode ser realizado desde que acompanhado da cultura. Em nosso meio, essa
tcnica no est implantada na rotina, s est disponvel em certos laboratrios e no
padronizado.
Outros Mtodos Laboratoriais: neutralizao da toxina, deteco do antgeno pelo
mtodo com anticorpos monoclonais e mtodo da adenilatociclase: tm alta sensibilidade e
especificidade, porm no foram padronizados. So aplicveis ao diagnstico de fase aguda.
O hemograma pode evidenciar, nas primeiras semanas de doena, leucocitose (20.000
- 50.000 cls./mm3). H linfocitose absoluta e caracterstica no final da fase catarral e
paroxstica. Mas, pode no ocorrer leucocitose em crianas ou em casos leves, por exemplo.
Velocidade de Hemossedimentao (VHS): a coqueluche oferece uma condio
singular, apresenta VHS normal ou diminuda, embora seja de origem infecciosa, o que
permite distingui-la dos demais processos catarrais das vias respiratrias, nos quais a VHS se
encontra, em geral, acelerada.
Exames Radiolgicos: recomenda-se a realizao de RX de trax em menores de 4
anos, para auxiliar no diagnstico diferencial e/ou presena de complicaes.

7. DIAGNSTICO CLNICO (Sintomas)

O diagnstico clnico da infeco por Bordetella pertussis, causadora da coqueluche,


baseado em sintomas bastante caractersticos da doena. uma infeco respiratria aguda
marcada por episdios de tosse severa e espasmdica, que pioram a noite, tambm
apresentando um quadro de leucocitose. A doena pode apresentar complicaes graves como
broncopneumonia e encefalopatia aguda, com quadros de convulso que podem levar a
morte.
Aps um perodo de incubao, assintomtica, de uma a duas semanas inicia-se a fase
catarral, quando a bactria j se proliferou nos pulmes e comea a tacar toda a rvore
respiratria. Essa fase dura de uma a duas semanas e usualmente caracterizada por febre
baixa, mal estar, coriza e tosse progressiva, com secreo clara e viscosa, lembrando os
sintomas da gripe. uma fase altamente contagiosa. O doente espirra com freqncia, perde o
apetite e aparenta cansao, rosto fica avermelhado e os olhos lacrimejantes.
A fase subseqente a paroxstica, que dura de duas a quatro semanas, caracterizada
pelos episdios de tosse severa e espasmdica, podendo ou no ser acompanhada de vmitos.
O paciente apresenta congesto facial e sensao de asfixia. No pico dessa fase, o nvel total
de leuccitos no sangue pode atingir nveis parecidos com os obtidos em casos de leucemia (
100,000/mm3).
A fase convalescente, que dura de uma a trs semanas, caracterizada por um contnuo
declnio da tosse antes que o paciente volte ao normal. nesse perodo que podem ocorrer as
complicaes j citadas.
Alguns indivduos podem apresentar formas atpicas da doena, por no estarem
adequadamente imunizados, fugindo dos sintomas clssicos. Lactentes jovens constituem o
grupo de mais propenso a apresentar formas graves, muitas vezes letais. Alm das j citadas,
existem outras complicaes da doena como ativao de tuberculose latente, enfisema,
ruptura de diafragma, otite, hemorragias intra-cerebral e sub-dural, surdez, entre outros.

8. TRATAMENTO
O tratamento varia tanto em relao gravidade da doena quanto no que concerne
idade do paciente. Em situaes em que a coqueluche se apresenta de forma a exibir um
quadro clnico mais comprometedor ou de forma j complicada com outras morbidades, e em
situaes em que se trata de um paciente menor de seis meses de idade, a internao
recomendvel. Em mbito hospitalar, todas as medidas necessrias para que seja possvel
evitar conseqncias mais srias da doena, como desnutrio e infeces secundrias, devem
ser institudas com rigor e vigilncia constante.
Especificamente, para o tratamento da coqueluche, devem ser utilizados
antimicrobianos, mesmo que seu uso seja controverso devido s diversas condies: na
coqueluche grave, a antibioticoterapia parece no funcionar to eficazmente in vivo quanto in
vitro; o perodo catarral o nico em que uma melhora clnica pode ser evidente com o uso
de medicaes que combatem a bactria; no perodo paroxstico, os antimicrobianos no
parecem exibir qualquer trao de melhora na evoluo da doena. Uma das melhores
justificativas para o uso de antibiticos para o tratamento da coqueluche, apesar de alguns
argumentos, o de impedir a infectividade do paciente acometido.
O antibitico de escolha a eritromicina, pertencente categoria dos Macroldeos,
produzida pelo Streptomyces erytreus. Indivduos comunicantes ntimos de pacientes com
coqueluche devem receber profilaxia com eritromicina e uma dose de vacina como reforo.

9. PREVENO
No Brasil, a imunizao contra a coqueluche deve ser feita em toda criana com 2, 4 e
6 meses de idade e, aos 15 meses de idade, realiza-se uma Quarta dose de reforo. Esta vacina
conjugada a duas outras, contra Ttano e Difteria, recebendo ento o nome de DPT
(Difteria, pertussis e Ttano Trplice Bacteriana).
H dois tipos de vacinas: DPT e DPTa. Ambas so compostas por Toxoide Tetnico
(vacina anti-tetnica) e Toxoide Diftrico (vacina anti-Difteria). A DPT, contm a vacina
contra pertussis, cuja bactria est inteira e que d uma maior incidncia de efeitos colaterais
de moderados a graves, ou seja, dor e inchao no local da injeo, febre alta e irritabilidade,
que pode ser muito intensa, semelhante a sintomas de encefalite. Embora no haja
comprovao cientfica quanto encefalite associada vacina DPT, as estatsticas em sade
pblica demonstram seus sintomas parecidos com encefalite, muitas vezes exigindo exames
invasivos, como coleta de lquido cefalorraquidiano e tratamento hospitalar.
Conseqentemente, em 1993, houve uma grande epidemia de Coqueluche, relatada nos
Estados Unidos.
Foi desenvolvida ento, a partir de 1993, a DPTa (acelular), que contm apenas alguns
componentes da bactria, que garantem a mesma proteo que a DPT, porm, com menor
intensidade das reaes adversas vacinais.

10. BIBLIOGRAFIA
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/diseaseinfo/pertussis_t.htm
http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch031.htm
http://medic.med.uth.tmc.edu/path/00001492.htm
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http://www.phac-aspc.gc.ca/msds-ftss/msds19e.html
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http://www.pomerode.vicofarma.com.br/ver_noticias.asp?id=17
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http://www.pomerode.vicofarma.com.br
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SES-PR (http://www.saude.mg.gov.br/coqueluche.htm)
Microbiologia Mdica Jawetz, Helnick e Adelberg. Ed. Guanabara Koogan. Rio
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Microbiologia Trabulsi, Luiz Rachid. Ed. Ateneu So Paulo. 3 ed. 1986.
Fundamentos de Bacteriologia e Micologia Veterinria Carter, G. R. Ed. Rocca.
So Paulo-1998
Coqueluche - uma doena reemergente, Dra. Telma Regina M. P. Carvalhanas