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Biologia e Fisiologia Celular

UNIDADE 3
ENDEREAMENTO DE PROTENAS
1. INTRODUO
A sntese de protenas que so codificadas a partir do genoma nuclear, nos organismos
eucariotos, pode ocorrer tanto nos ribossomos livres no citosol quanto nos ribossomos aderidos
face citoslica da membrana do Retculo Endoplasmtico Granuloso. Nestes organismos, a
sntese protica tambm pode ocorrer nas mitocndrias ou nos cloroplastos, a partir das
informaes contidas no DNA presente nestas organelas. Nesta unidade vamos discutir como as
protenas que so sintetizadas no citosol so endereadas aos seus destinos finais.
A primeira questo que devemos fazer : como a clula sabe para onde uma
determinada protena deve ser endereada? A resposta simples: a clula no sabe. Bem, mas
se a clula no sabe, como a protena chega, ento, ao seu destino correto? Quem respondeu a
essa pergunta pela primeira vez foi o cientista alemo Gnter Blobel no ano de 1970. Blobel
verificou que determinadas protenas apresentavam sequncias especficas de resduos de
aminocidos como parte de sua estrutura primria, e que estas sequncias eram responsveis
pelo endereamento da protena para um determinado compartimento celular. Estas sequncias
funcionam como verdadeiros cdigos postais biolgicos e so conhecidas como sequncia sinal
ou peptdeo sinal. Pelas suas contribuies no campo da biologia celular, Blobel foi contemplado
com o Prmio Nobel de Medicina e Fisiologia no ano de 1999.

2. SEQUNCIAS SINAIS
O endereamento de uma protena ao seu destino final crucial para garantir clula que
todos os processos fisiolgicos ocorram de forma adequada. As protenas de localizao
citoslica so as nicas que no apresentam uma sequncia sinal. Tais protenas so sintetizadas
nos ribossomos livres no citosol. As protenas das mitocndrias, dos cloroplastos, dos
peroxissomos, e do interior do ncleo (nucleoplasma), so sintetizadas nos ribossomos livres no
citosol (figura 3.1A). Por outro lado, as protenas do retculo endoplasmtico, do complexo
golgiense, dos endossomos, dos lisossomos, das vesculas secretoras e da membrana
plasmtica, so sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da membrana do retculo
endoplasmtico granuloso (figura 3.1B). O aspecto granuloso do retculo endoplasmtico deve-se
justamente presena dos ribossomos envolvidos na sntese destas protenas. nesta regio do
retculo, conhecida como retculo endoplasmtico granuloso (REG), onde ocorre a sntese da
cadeia polipeptdica de forma simultnea ao transporte da mesma para o interior do retculo
endoplasmtico (lmen do retculo).
Diversas sequncias sinais j foram descritas. A tabela 3.1 apresenta uma relao de
algumas sequncias sinais caractersticas para o endereamento para alguns compartimentos
celulares, incluindo sequncias sinais de reteno de protenas no retculo endoplasmtico e de
exportao de protenas do ncleo para o citosol. Estudos modificando as sequncias sinais
demonstraram que pequenas alteraes nas sequncias podem comprometer o endereamento
correto destas protenas para o seu destino final. Alm do mais, a insero de uma sequncia
sinal em uma protena de localizao citoslica, pode direcionar esta protena para um
determinado compartimento celular.
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Figura 3.1 Sntese e endereamento de protenas.

Destino

Sequncia Sinal

Transporte para o Ncleo

~Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val~

Exportao do Ncleo

~Leu-Ala-Leu-Lys-Leu-Ala-Gly-Leu-Asp-Ile~

Transporte

para

Retculo H3N -Met-Met-Ser-Phe-Val-Ser-Leu-Leu-Leu-Val-Gly-Ile-Leu-Phe-

Endoplasmtico
Reteno

Trp-Ala-Thr-Glu-Ala-Glu-Gln-Leu-Thr-Lys-Cys-Glu-Val-Phe- Gln~
-

no

Retculo ~Lys-Asp-Glu-Leu-COO (protenas solveis do lmen)


-

Endoplasmtico
Transporte

~Asp-Asp-X-X-COO (protenas integrais da membrana)

para

Mitocondrial

Matriz H3N -Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-Ile-Arg-Phe-Phe-Lys-Pro-AlaThr-Arg-Thr-Leu-Cys-Ser-Ser-Arg-Tyr-Leu-Leu~

Transporte

para

os ~Ser-Lys-Leu-COO

Peroxissomos

H3N -----Arg-Leu-X5-His-Leu~

Tabela 3.1 Exemplos de sequncias sinais. X representa qualquer resduo de aminocido


-

hidrofbico. COO representa a poro carboxi-terminal e H3N representa a poro amino-terminal.

3. ENOVELAMENTO DE PROTENAS
As protenas para exercerem a sua atividade biolgica necessitam adquirir a sua
conformao nativa, ou seja, uma estrutura terciria que permita uma interao com o(s) seu(s)
substrato(s) e conseqentemente permita o pleno exerccio de sua atividade biolgica. O
enovelamento de protenas o processo pelo qual as mesmas adquirem as suas estruturas
tridimensionais funcionais. As protenas sintetizadas nos ribossomos livres no citosol so
enoveladas por protenas especficas denominadas chaperonas. As chaperonas citoslicas so
importantes para prevenirem o dobramento incorreto das protenas antes do trmino da sntese e
por auxiliarem no enovelamento da protena para a aquisio da sua conformao nativa (figura
3.2). Dentro do lmen do retculo endoplasmtico granuloso tambm so encontradas
chaperonas. Estas chaperonas reticulares se ligam em regies hidrofbicas de protenas no33

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dobradas, prevenindo o seu transporte precoce para o complexo golgiense. Uma enzima bastante
importante no dobramento de protenas no lmen do retculo endoplasmtico a Dissulfeto
Isomerase, que catalisa a quebra e o estabelecimento de pontes de dissulfeto entre resduos de
cistena, permitindo o rearranjo correto destas pontes de dissulfeto e seu posterior enovelamento.
No enovelamento das protenas globulares, os resduos de aminocidos com cadeia lateral
hidrofbica tendem a ficar no interior da mesma, enquanto que os resduos de aminocidos com
cadeia lateral hidroflica tendem a ficar na superfcie das protenas, permitindo, assim, que a
protena seja solvel.

Figura 3.2 Enovelamento de Protenas. Modificado de


http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a9/Protein_folding.png

:: FIQUE POR DENTRO!! ::


A desnaturao um processo qumico no qual uma protena perde a sua
estrutura tridimensional funcional. Esse processo pode ser mediado por diversos
fatores, tais como: elevadas temperaturas, elevadas concentraes de solutos, pH
extremos, foras mecnicas ou desnaturantes qumicos. Sob certas condies,
algumas protenas podem recuperar o seu estado funcional de dobramento, porm,
na maioria dos casos, a desnaturao irreversvel. Uma protena completamente
desnaturada perde tanto a sua estrutura terciria como secundria. Um processo
clssico de desnaturao de protenas a alterao do estado fsico das protenas
que constituem a clara dos ovos quando o mesmo submetido elevadas
temperaturas.

4. MECANISMOS DE ENDEREAMENTO DE PROTENAS


As protenas que possuem sequncias sinais so endereadas para os demais
compartimentos celulares por meio de trs mecanismos distintos: transporte mediado (ncleo),
transporte vesicular (complexo golgiense, endossomos tardios, lisossomos e vesculas secretoras)
e transporte transmembranar (retculo endoplasmtico, mitocndrias, cloroplastos e
peroxissomos).

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4.1. TRANSPORTE MEDIADO


No transporte mediado, as protenas que apresentam sequncia de localizao nuclear
(SLN) so endereadas ao nucleoplasma atravs do complexo de poros nucleares. Esse
transporte mediado por protenas especializadas, denominadas importinas, que se ligam
especificamente s SLNs, que, ao interagirem com protenas fibrilares do complexo de poros
nucleares, realizam o transporte das protenas para o interior do ncleo. Algumas protenas, como
determinados fatores de transcrio, apresentam tanto SLN como um sinal de exportao nuclear,
circulando, assim, entre o citosol e o nucleoplasma, de acordo com o estado fisiolgico da clula.
4.2. TRANSPORTE TRANSMEMBRANAR
O transporte transmembranar mediado por protenas integrais transmembranares
presentes nas membranas de determinados compartimentos celulares. Estas protenas atuam
como translocadores proticos, formando poros, atravs dos quais as protenas so inseridas nos
compartimentos. Neste caso, as sequncias sinais das protenas interagem diretamente com os
translocadores proticos sem a necessidade de uma protena mediadora (como a importina, por
exemplo). No transporte para as mitocndrias, por exemplo, complexos proticos presentes na
membrana mitocondrial externa (TOM) e na membrana mitocondrial interna (TIM), alm de
protenas solveis do espao intermembrana, so responsveis pela importao das protenas
mitocndrias. Estas protenas so enoveladas aps a importao para a organela, por intermdio
de chaperonas mitocondriais e as suas sequncias sinais, de localizao amino-terminal, so
clivadas por peptidases presentes na organela. De forma diferente, as SLN no so clivadas das
cadeias polipeptdicas aps a importao das protenas nucleares. A nica exceo no transporte
transmembranar de protenas o direcionamento para o retculo endoplasmtico, uma vez que o
transporte ocorre de forma simultnea sntese protica na maioria das clulas eucariontes.
Vamos, agora, analisar, com mais detalhamento, como ocorre o transporte para o retculo
endoplasmtico. Uma vez iniciada a sntese protica no citosol, caso a protena apresente uma
sequncia sinal de localizao reticular, uma protena citoslica solvel, denominada Partcula de
Reconhecimento de Sinal (PRS), se liga sequncia sinal do peptdeo nascente e interrompe a
sntese protica (figura 3.3 passo 1). O complexo ribossomo/RNAm/peptdeo nascente/PRS ,
ento, direcionado face citoslica da membrana do retculo endoplasmtico, onde a PRS
interage com um receptor presente nesta membrana (receptor da PRS), ancorando todo o
complexo traducional na superfcie do retculo endoplasmtico (figura 3.3 passo 2). Em seguida,
a PRS se desliga do complexo traducional e do receptor da PRS, e o complexo traducional passa
a interagir com o translocador da membrana do REG. A sntese protica, ento, se reinicia, com a
cadeia polipeptdica sendo inserida para o lmen do retculo, caracterizando o transporte
simultneo traduo (figura 3.3 passo 3). Aps o trmino da sntese, o complexo traducional
desfeito, sendo liberado no citosol, e o translocador sofre mudanas conformacionais que levam
ao fechamento do poro na membrana reticular.
As protenas que so sintetizadas nos ribossomos aderidos membrana do REG podem
ter destinos diferentes. Algumas destas protenas so protenas solveis, liberadas no lmen do
REG, e podem ser direcionadas para o complexo golgiense (numa rota conhecida como via de
exportao ou via de secreo), sendo, em seguida, endereadas aos endossomos tardios, s
vesculas secretoras ou para a membrana plasmtica, onde sero liberadas no meio extracelular.
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No caso de protenas solveis do lmen do retculo, a sequncia sinal localizada na regio


amino-terminal da protena e clivada por uma peptidase reticular.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Faa uma pesquisa na internet e identifique protenas, ou polipeptdeos, que
so liberados no meio extracelular e cuja via biossinttica est associada ao retculo
endoplasmtico granuloso. Algumas destas molculas desempenham importantes
papis fisiolgicos.

Figura 3.3 Endereamento de protenas para o retculo endoplasmtico.

A grande maioria das protenas sintetizadas no REG so protenas integrais


transmembrana. Como vimos na unidade 2, estas protenas podem ser unipasso ou multipasso.
Nas protenas integrais unipasso a sequncia sinal pode estar localizada tanto na
extremidade amino-terminal quanto no interior da cadeia polipeptdica. No primeiro caso, a
sequncia sinal clivada e uma regio predominantemente lipoflica, rica em resduos de
aminocidos com cadeia lateral hidrofbica e conhecida como sequncia de parada de
transferncia (SPT), constituir o domnio transmembrana da protena. Nestas protenas, a poro
carboxi-terminal ficar exposta no citosol. Quando a protena apresentar uma sequncia sinal
interna (SSI), esta sequncia, alm de direcionar o transporte do complexo traducional para o
REG, atuar, tambm, como uma SPT, sendo que a poro carboxi-terminal da protena pode
ficar voltada para o lmen do retculo ou para o citosol.
A sntese das protenas integrais multipasso segue a mesma lgica das protenas integrais
unipasso. Os domnios transmembrana de tais protenas so formados pela intercalao de SSI
com SPT.
As protenas integrais unipasso ou multipasso podem seguir os mesmos destinos das
protenas solveis sintetizadas no REG. desta forma que so sintetizadas, por exemplo, todas
as protenas integrais transmembrana, que constituem, por exemplo, os receptores de superfcie
celular e os canais inicos.
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:: TA NA WEB!!! ::
Nos endereos abaixo voc encontrar ilustraes mostrando a forma de inseres
destas protenas na membrana do REG.
Protena unipasso com sequncia sinal clivvel
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2224
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f47.jpg
Protena unipasso com sequncia sinal interna
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2225
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f48.jpg
Protena multipasso
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2227
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f49.jpg

4.3. TRANSPORTE VESICULAR


O terceiro mecanismo envolvido no endereamento de protenas o transporte vesicular.
As protenas que so sintetizadas nos ribossomos aderidos membrana do retculo
endoplasmtico, sejam integrais da membrana ou solveis do lmen do retculo, podem ter
diferentes destinos celulares. A figura 3.4 representa um diagrama com as possveis rotas para
estas protenas. Independente da destinao celular (ou mesmo extracelular), tais protenas so
transportadas de um compartimento para o outro atravs de vesculas especializadas. Trs vias
de transporte vesicular so encontradas nos organismos eucariotos: via de exportao, via de
recuperao e via endoctica.
A via de exportao tem incio no retculo endoplasmtico e pode seguir trs destinos: a
formao dos lisossomos, a secreo constitutiva (SC) e a secreo regulada (SR). As enzimas
lisossomais (hidrolases cidas) so endereadas aos endossomos tardios (vesculas que recebem
o material endocitado do meio extracelular) para constiturem os lisossomos. Na secreo
constitutiva, as vesculas, contendo as protenas sintetizadas no REG, so direcionadas
imediatamente para a membrana plasmtica, sendo este processo fundamental para manuteno
das funes primordiais desta membrana (transporte, sinalizao, adeso ou reconhecimento). As
vesculas envolvidas na secreo regulada, no entanto, necessitam de sinais extracelulares para
liberarem os seus contedos no meio extracelular. O aumento dos nveis de clcio intracelular
responsvel pela fuso destas vesculas com a membrana plasmtica e conseqente liberao do
contedo vesicular no meio extracelular. atravs da secreo regulada, por exemplo, que a

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insulina liberada pelas clulas das Ilhotas de Langerhans em resposta ao aumento da glicose na
corrente sangunea.

Figura 3.4 Diagrama ilustrativo do trfego vesicular. VEx = via de exportao. VR = via de
recuperao. VEn = via endoctica. SC = secreo constitutiva. SR = secreo regulada.

:: FIQUE LIGADO!! ::
Os lisossomos so organelas ricas em enzimas responsveis pela
degradao de uma srie de substratos de origem extracelular. Entre as enzimas
lisossomais podemos destacar as nucleases, proteases, glicosidases, lipases,
fosfatases, fosfolipases e sulfatases. Estas enzimas so conhecidas como hidrolases
cidas, uma vez que as reaes catalisadas por estas enzimas so reaes de
hidrlise que ocorrem em meio cido. A hidrlise enzimtica consiste em uma reao
qumica catalisada por uma enzima que utiliza a molcula de gua para clivar outra
molcula. O pH cido dos lisossomos mantido por uma bomba de prtons que
+

transporta, ativamente, prtons H para o lmen lisossomal. As hidrolases cidas so


sintetizadas no REG e transportadas, por vesculas, at os endossomos tardios, vindo
a constituir os lisossomos.

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:: FIQUE DE OLHO!! ::
Diversos processos fisiolgicos dependem da fuso das vesculas de
secreo regulada com a membrana plasmtica, entre os quais podemos destacar
a secreo de insulina, a neurotransmisso e a fertilizao. Em todos os casos, o
aumento da concentrao de ons clcio diretamente responsvel pela fuso das
vesculas secretoras com a membrana plasmtica.

:: TA NA WEB!!! ::

No

endereo

http://www.johnkyrk.com/golgiAlone.pt.html

voc

ir

encontrar uma animao sobre endereamento de protenas e trfego vesicular.

:: PERGUNTAS?? ::
Tanto o retculo endoplasmtico quanto o complexo golgiense possuem
protenas que desempenham suas atividades nestas organelas, sendo conhecidas
como protenas residentes do retculo ou do complexo golgiense. Faa uma
pesquisa e descubra quais so os mecanismos responsveis pela reteno destas
protenas nestas organelas.

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