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INTRODUCCIN

La extraccin de biomolculas de ADN, ARN y protenas es el mtodo ms usado


en biologa molecular.
Estas biomolculas pueden ser aisladas a partir de cualquier material biolgico.
En el pasado los procesos de extraccin y purificacin de los cidos nucleicos
solan ser complejos.
En la actualidad existen sistemas automticos diseado para laboratorios
medianos y grandes ya que permiten un mayor rendimiento de las muestras.
Dos categoras envueltas en la purificacin del ADN: Aislacin del ADN
recombinante y aislamiento del cromosoma del ADN.
El ARN es una molcula inestable una vez que es extrado de la clula.
La extraccin de cell- based es el primer paso para la purificacin de casi todas
las protenas.
Mtodos usados: Lisis con detergentes, tratamiento con sal inica y rpidos
cambios en la presin.
Factores en la manipulacin de protenas: Temperatura(4c), pH.

EXTRACCIN DE ACIDOS
NUCLEICOS
1869
HISTORIA
El fsico suizo Friedrich Miescher realizo el primer aislamiento
de ADN.
El esperaba resolver los fundamentales principios de la vida
para determinar la composicin qumica de las clulas.
Para la separacin de ADN de las protenas a partir de su
extracto Miescher desarrollo dos protocolos:
1er protocolo: Fallo en producir material para su posterior
anlisis.
2do protocolo: Obtuvo largas cadenas de ncleos
purificados, a lo que se llam ms adelante cidos nucleicos
por su estudiante Richard altman.

EXTRACCIN DE PROTEINAS

EN EL SIGLO XVIII

las protenas fueron conocidas como una distintiva clase de molculas biolgicas por
Antoine Fourcroy y otros

EN 1983

El qumico holands Gerhardus


Johannes Mulder realizo la primera
descripcin de la proteina

Sus estudios en la composicin de


sustancias de origen animal,
principalmente la fibrina, albumina y
gelatina, mostro la presencia de carbono,
hidrogeno, oxgeno y nitrgeno

Extraccin de Ac. Nucleicos

Definicin : Sacar los componentes desde un compartimento


celular.
Involucra:
Lisis de las clulas que contienen a los AN
Inactivacin de nucleasas
Clarificacin: separacin de los AN de los restos celulares
(debris).

Etapas bsicas de un procedimiento


general para Extraccin y
Purificacin de AN
Disgregacin o fragmentacin del tejido

Lisis celular

Clarificacin
Purificacin
Cualitativo:
electroforesis

Anlisis

Cuantitativo:
espectrofotometra
UV

Mtodos de fragmentacin y lisis


celular para la extraccin de AN
El procedimiento ideal de lisis debe tener la fuerza necesaria para
romper el material de inicio (clulas o tejido) y la delicadeza requerida
para preservar las molculas de inters (ADN o ARN).
Mtodos fsicos
Homogenizacin mecnica,
Homogenizacin en solucin
Molienda manual en mortero
Bolitas de vidrio
Sonicacin

Mtodos qumicos
Detergentes

Mtodos enzimticos
Lysozima: rompe enlaces -1.4- entre N-acetil murmico y N-acetil
glucosamina de peptidoglicn de la pared celular de bacterias
Lyticasa: rompe enlaces -1.3 de glucano de levaduras
Proteasas: rompe enlaces peptdicos de prot. de pared y
membrana plasmtica e interacciones clula-clula.

Lisis Celular

2. Clarificacin. Eliminacin de restos celulares (debris)


Centrifugation
Filtracin
Mtodo mixto: enzimas + centrifugacin

3. Purificacin
Por qu purificar?
Nucleasas que se liberan al lisar las clulas degradan los cidos nucleicos.
Tcnicas:
Desproteinizacin con fenol, que al desnaturar protenas causa su precipitacin.
Precipitacin de protenas con sales (salting out)

EXTRACCION DE ACIDOS
NUCLEICOS
Mtodo convencional
1.-Extraccin tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo.

2.-Mtodo de la
extraccin alcalina

4.-Gradiente de
centrifugacin de bromuro
de etidio (EtBr) -Cesium
Cloruro (CsCl)

3.-Mtodo de extraccin
CTAB

5.-Purificacin de poli (A)


+ RNA por Oligp (dT)
Celulosa cromatografa

EXTRACCIN CON TIOCIANATO


DE GUANIDINO FENOL
CLOROFORMO (MTODO DE
CHOMCZYNSKI):

Extraccin de cidos nucleicos utilizando una solucin del agente caotrpico


de Tiocianato de Guanidino que genera lisis celular y degradacin de
protenas con la liberacin de los cidos nucleicos.
Posteriormente el uso de solventes orgnicos fenol- cloroformo que permiten
su separacin de restos de protenas, lpidos y la posterior precipitacin de los
cidos nucleicos usando etanol o isopropanol.

EXTRACCIN DE ADN CON


SOLUCIN DE CHONCZYNSKI

Solucin de Tiocianato de
guanidinio a pH bsico

Muestra

LISIS DE MEM. CELULAR Y NUCLEAR


DEGRADACIN DE PROTENAS EINACTIVACIN
DE ENDONUCLEASAS

Fenol:
Cloroformo:
Alcohol Isoamilico
(25:24:1)

Centrifugacin
ADN +
Restos de
Lpidos y
Protenas

Restos de
alto peso
Molecular

Etanol

Centrifugacin
Centrifugacin
Fase Acuosa
(ADN)

ADN

Fase Orgnica

El exceso de sal es enjuagado con 70% de etanol y centrifugado para descartar el etanol supernadante. La
bolita de ADN es disuelto con un buffer TE o con agua destilada estril

EXTRACCION DE
CHOMCZYNSKI Y SACCHI
(1987)

Muestra

Mtodo de un solo paso:


Solucin cida que contiene tiocianato de
guanidinio , acetato de sodio , fenol y
cloroformo , seguido por centrifugacin.
Se agrega
Isopropanol para
precipitar ARN

ARN
Fase Acuosa
Interfase
Fase Orgnica

ADN y
protenas

EXTRACCION DEL ADN


PLASMIDICO
POR LISIS ALCALINA

FUNDAMENTO DEL METODO:


se basa en las diferencias de las propiedades de
desnaturalizacin y renaturalizacion del ADN de
plasmidico y ADN cromosmico.
Al aplicar NaOH en presencia de un detergente
fuertemente amoniaco Dodecilsulfato de sodio
(SDS), y Acetato de potasio

Se usa principalmente para extraccin de ADN


plasmdico de E. coli.

EXTRACCION DE ADN PLASMIDICO


POR LISIS ALCALINA

Crecimiento de
Cultivo
bacteriano de
E.coli

Detergente
SDS + NaOH

Cosecha de cultivo
bacteriano

- Lisis celular
- Desnaturaliza
Protenas
ADN cromosmico
ADN plasmidico

PH fuertemente
alcalino del medio

PH neutro del medio

centrifugacin

ADN plasmidico
se mantiene en
solucin

Acetato de
potasio

Precipitacin:
ADN
cromosmico
protenas

Mtodo de extraccin CTBA

Las clulas vegetales pueden lisarse con el detergente


inico bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB), que
forma un complejo insoluble con los cidos nucleicos
en medio hiposalino. De ese modo, los polisacridos,
los compuestos fenlicos y los dems contaminantes
permanecen en el sobrenadante y pueden eliminarse
por lavado

1.- Se debe moler la muestra despus de congelacin con Nitrgeno lquido

2.- Suspender la muestra en solucin tampon de extraccin, que contiene EDTA, Tris-HCl y CTAB

3.-Centrifugar, eliminar el sobrenadante y lavar

4.- Incrementar la concentracin salina

5.-Aadir etanol y ARNasa

ADN puro

Centrifugacin en gradiente
de BrEt - CsCl

Separa ADN plasmdico superenrrollado del ADN plasmdico


circular que est en estado relajado, concentrndolos por
centrifugacin en una gradiente de Bromuro de Etidio
Cloruro de Cesio(BrEt CsCl.)

El BrEt ingresa y se intercala en la cadena de ADN


disminuyendo sudensidad, pero lo hace en mayor cantidad en
el ADN plasmdico enestado relajado que en el ADN plasmdico
superenrrollado, pudindoseseparar por centrifugacin en el
gradiente de densidad de CsCl.

Purificacin de poli (A) ARN por


cromatografa de afinidad en
columnas de oligo dT celulosa

El poli (A): extensin de 200-300


residuos de adenina en el ARNm
de las clulas eucariotas

Cromatografa de afinidad:
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas
proteicas por su afinidad o capacidad de unin a un determinado
ligando. En este caso, las protenas que se retienen en la columna
son aquellas que se unen especficamente a un ligando que
previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la
columna.

La cola poli A hibridara con la


cadena oligo dT, fijndose en la
columna

Lavar los ARN no fijados

ARN poli A se eluye y se precipita


con alcohol etlico frio.

MTODOS COMNMENTE
UTILIZADOS EN LA
SELECCIN DE POLI (A)

CROMATOGRAFA EN
COLUMNA DE OLIGO (DT)
COLUMNAS

CROMATOGRAFA POR LOTES

Es usada normalmente para la


purificacin de grandes
cantidades de ARN Poli(A) no
radiactivo aisladas de clulas
mamferas

cromatografa por lotes trabaja


con ARN mamfero en pocas
cantidades de muestras que
pueden ser radioactivos o no.

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE
ADSORCION

Se basa en la adsorcin y desorcin de los


cidos nucleicos en presencia de sales
caotrpicas. Bajo condiciones nativas, los
cidos nucleicos estn recubiertos de una
capa hidratante de molculas de agua que
mantienen la solubilidad del DNA en
soluciones acuosas.
Con la adicin de iones caotrpicos a los
cidos nucleicos, se destruye esta
ordenada estructura de molculas de agua
de la capa hidratante, por lo que las sales
caotrpicas crean un entorno hidrofbico
alrededor del DNA.

EXTRACCIN DE CIDOS
NUCLEICOS EN FASE SOLIDA
Logra una purificacin rpida y eficiente comparada con los
mtodos convencionales.
Los sistemas de fase solida absorbern los acidos nucleicos en el
proceso de extraccin dependiendo del pH y contenido de sales
del buffer

Extraccin de cidos
nucleicos en fase solida

El proceso de absorcin se basa en los


siguientes principios

la interaccin de unin
con
enlaces
de
hidrgenos con una
matriz hidrfila bajo
condiciones
caotrpicas

intercambio inico en
condiciones acuosas
por medio de un
intercambiador de
aniones

exclusin de afinidad y
de tamao de los
mecanismos

Pasos

Lisis celular

Adsorcin de
acidos
nucleicos

Elucin

Lavado

PASOS EN EL PROCESOS DE
EXTRACCIN EN FASE
SOLIDA (SPE)

1
2
3

Acondicionar la columna para la adsorcin de la muestra


(puede ser hecho utilizando un buffer a un Ph particular para
convertir la superficie o grupos funcionales sobre el solido
dentro de una forma qumica particular)

Luego la muestra la cual ha sido degradada por el uso de


buffer de lisis es aplicada sobre la columna

El acido nucleico deseado absorber a la columna con la


ayuda de pH elevado y concentracin de sales de la solucin
enlazante

Clasificacin de absorbentes
para la SPE
Clasificacin de absorbentes usados en el SPE de ADN

Clasificacin general del SPE

Grupo de absorbentes utilizados se


clasifican en los siguientes grupos:
gel de slice modificados
quimicamente
Polmeros absorventes
Grafitado o carbono poroso.

Matrices de
slica

Tierra de
diatomeas

Partculas de vid

Transportadores
de intercambio
inico

Absorbentes generales del SPE

PARTCULAS DE VIDRIO

Gel de agarosa involucrado en el uso de sales caotropicas facilitan el


enlazamiento de ADN a vidrio comn de slice.
La absorcin de acido nucleicos es el sustrato de vidrio ocurre debido al
mecanismo y principio similar al de la absorcin de cromatografa de
adsorcin
Esta invencin ha descubierto que una mezcla de gel slice y partculas de
vidrio puede ser usada para separar acido nucleico de otras sustancias en
la presencia de soluciones de sales caotropicas

matrices de slice
El sodio juega un rol como un catin enlazante o puente que
atrae al oxigeno cargado negativamente en los fosfatos de las
cadenas de acidos nucleicos

matrices de slice
El principio de purificacin de las matrices de slice se basa en la alta afinidad del ADN
cargado negativamente hacia las partculas de slice cargados positivamente.

TIERRA DE DIATOMEAS

Es una roca
Resultado de la descomposion del
esqueleto de las diatomeas
Las diatomeas son algas unicelular

Slice hasta un 94%

Estn formadas por partculas


perforadas conteniendo agujeros de
aprox. 1 um en dimetro.
Es usado en cromatografa de
absorcin y como apoyo en la fase
acuosa en cromatografa de particin

Tierra diatomeas
(como filtrante )

Tierra diatomeas
(soporte de columna cromatografica)

Agente caotrpico

Molculas de slice -------- molcula de ADN


Molculas de slice -------- molcula de ADN

Purificacin de cidos
nucleicos basados en partculas
magnticas

Figura: de una perla magntica de


silica adherida con el ADN

Se producen apartir de:


diferentes polmeros sintticos
biopolmeros
vidrio poroso
o basadas en partculas magneticas inorgnicas
tales como el oxido de hierro

El principio se basa en el comportamiento de los imanes. Magnetismo


es: La fuerza invisible que tiene la habilidad de desarrollar trabajo
mecnico de atraccin y repulsin de materiales magnetizables
Figura: , uso de las perlas
magnticas

Caractersticas partculas
magnticas

1. Tamao gama 0.1 ~ 10mm


2. Posee una rea de gran superficie que
promueve reacciones eficientes y rpidos.
3. El Aislamiento y purificacin de las muestras
son mas fciles de realizar
4. la superficie de las perlas se pueden adaptar,
para optimizar la captura de una variedad de
muestras tales como ADN, ARN, ARNm

Se caracteriza: porque pueden ser capturados fcilmente a partir de cualquier lquido y ser resuspendido en el mismo lquido, que al mismo tiempo pueden unirse y separarse de un imn desde
una pared que los contiene

Purificacin de cidos
nucleicos basados en
partculas magnticas

los cidos nucleicos se unen selectivamente a bolas paramagnticas en presencia de


sales caotrpicas mientras que el resto de los contaminantes son eliminados de la
muestra.

Purificacin de cidos nucleicos


basados en partculas magnticas

Figura: uso de varilla magntica

CUENCAS DE ZIRCONIA

Estas microesferas tienen una gran disposicin a la superficie de unin y se puede


dispersar en la solucin
Solucin caotrpica: tiocianato de guanidinio
Dilucin de las muestras: isopropanol

RESINA DE
INTERCAMBIO IONICO

El uso de resinas hidrocarbonadas con estructuras rgidas en tres


dimensiones permite que la superficie se encuentre cargada con
alguna sustancia como el dietilaminoetilo que puede protonarse
en medio cido y quedar cargado positivamente por lo que
interacciona con los grupos fosfatos del ADN.

Resinas:
Metilaminoetanol
Dietilaminoetil celulosa

Tamao del poro

Figura A: poro de menor tamao


= menor capacidad de unin

Figura B: poro de mayor tamao


= mayor capacidad de unin

EXTRACCIN DE PROTENAS

Figura : membrana plasmtica

Figura : primer paso de la extraccin


es la lisis celular

CLASIFICACIN DE METODOS DE
EXTRACCIN DE PROTEINAS

CROMATOGRAFIA DE
INTERCAMBIO IONICO
Es un mtodo que
permite la separacin de
molculas basada en sus
propiedades de carga
elctrica. Se compone de
dos fases :
Fase estacionaria
(intercambiador
inico)
Fase movil

PROPIEDAES DE
INTERCAMBIADORES
INICOS

Intercambiadores
catinico

Intercambiadores
Anicnico

La matriz puede estar hecha de diferentes materiales. Los


de uso mas corriente como son el dextrano, la celulosa,
policrilamida, copolimeros de estrieno y divinilbenceno

2.- APLICACIN Y LAVADO

1.- EQUILIBRIO

3.- ELUSION

4.- REGENERACION

CROMATOGRAFIA DE
FILTRACION EN GEL

La cromatografa de filtracin en gel se


separan molculas en virtud de sus
diferencias de tamao. La capacidad
separadora reside en el gel cuya matriz
consta de un gran nmero de esferas
porosas microscpicas. Estas esferas
estn constituidas por largas cadenas
de polmeros unidas entre si por
enlaces qumicos para formar una red
tridimensional.

CROMATOGRAFA DE
FILTRACIN EN GEL

La separacin de molculas puede ser


dividida en tres tipos principales:
-Exclusin total, las molculas grandes
no pueden entrar sus poros y elur de
manera rpida.
-Permeacin selectiva, molculas de
tamao intermedio pueden entrar en los
poros y, tal vez, tengan una duracin
promedio dependiendo de su tamao y
forma.
-Lmite total de permeacin, molculas
pequeas tienen la mayor duracin en
ella una vez que entran en los poros de
la columna

MATERIALES PARA LA
FILTRACIN EN GEL

Los geles normalmente


utilizados son de tres tipos:
dextrano,
agarosa
y
poliacrilamida. El gel de
dextrano
(polmero
ramificado de glucosa,
entrecruzado y formado en
pequeas bolitas)

CROMATOGRAFIA DE
AFINIDAD
La Cromatografa de Afinidad
Ofrece
la
mayor
especificidad y selectividad
para
el
aislamiento
y
purificacin de biomoleculas
En esta tcnica la molcula
que se une especficamente a
la protena se conoce con el
nombre de ligando mientras
que otras pasan por la
columna

Las protenas que tienen una fuerte afinidad


hacia los grupos qumicos especficos como los
ligandos, se unirn y enlazaran covalentemente
a la columna matriz mientras las otras protenas
atravesarn la columna.

El enlace entre el ligando y las molculas de protenas


debe ser reversible para permitir que las protenas
sean removidas de forma activa. Despus del lavado
de los contaminantes, el ligando asociado debe
retener su enlace de afinidad especfico hacia las
protenas fijadas.

TIPOS DE
LIGANDO

MOLCULAS DIANA

Enzima

Anlogo de sustrato, inhibidor, cofactor

Anticuerpo

Antgeno, virus

Lectina
cido nucleico

Polisacrido, glicoprotena, receptor de superficie celular,clula


Secuencia de bases complementaria, histonas, nucleico
polimerasa de cido, la protena de unin de cido nucleico
Receptor, protena portadora

hormonas y
vitamina
El glutatin
Glutatin-S-transferasa o protenas de fusin GST
Los iones metlicos Poli (su) protenas de fusin, protenas nativas con histidina,
cistena y residuos / triptfano en sus superficies

ELECTROFORESIS
Materiales de
soporte

TIPOS

De frente
mvil

determinacin
de las
movilidades y
puntos
isoelctricos de
las protenas.

Continua
Zonal
se basa en analizar
mezclas, la pureza
de una mezcla y la
purificacin de
sustancias, y para
detectar cambios
de movilidad o
conformacin.

La muestra se
aplica tambin
en una zona,
pero se
suministra
continuamente
a lo largo del
proceso.

Papel y film( polisacaridos de gran pm y


lipolisacaridos)
Acetato de celulosa isoenzimas anlisis de
suero
Geles agarosa y poliacrimalida

Electroforesis en gel
(E. poliacrilamina)Tcnica de separacin de protenas cargadas
por migracin en un campo elctrico se separan en funcin a su
carga elctrica al electrodo de carga contraria .
No desnaturalizantes: separamos por CARGA y TAMAO PAGE

PAGE
resultado de una polimerizacin qumica es una mezcla de
acrilamida y bis acrilamida, controlando la conc. De ambas se
obtiene diferente grado de reticulacin diferente poro.

Factores que afectan la


electroforesis:

carga neta
Tamao
intensidad de campo elctrico
temperatura
medio de soporte buffer

Electroforesis en gel de
poliacrilamida SDS
(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)

SDS llamado dodecil sulfato de sodio es un detergente


anionico se une a las protenas por fuerzas
intermoleculares(cadenas polipeptidas
Y le dan carga negativa a la protena en funcin de su
tamao.
Separa las protenas en funcin de su masa molecular
-mercaptoetanol para reducir los puentes disulfuro, separando as las
subunidades de la protena y permitiendo que se extiendan por efecto del SDS

La protena es desnaturalizada ,el gel produce una fuerza de resistencia ,friccin


hidrodinmica a la accin de la fuerza impulsora del campo elctrico.

Cmo se realiza la electroforesis en


gel de poliacrimina y SDS?

Se visualiza aadiendo colorante azul Coomaissie

Marcadores de peso molecular:


Mezcla de diferentes protenas pre
teidas de las que conocemos el
peso molecular. Por comparacin
podemos averiguar el PM aparente
de nuestra protena

Que es la electroforesis bidimensional ?


ISOELECTROENFOQUE

ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA CON SDS

tcnica de alta resolucin cuyo objetivo es la separacin de mezclas de protenas


altamente complejas. Estas proteinas , separadas en un gel con gradiente de pH en
condiciones desnaturalizantes de acuerdo PI
primera dimensin mediante isoelectroenfoque ?
segunda dimensin segn peso molecular mediante electroforesis en poliacrilamida.

ISOELECTROENFOQUE

Las molculas anfotricas,


como los aminocidos, se
separan en un medio en el
que existe una diferencia de
potencial y un gradiente de
pH . La regin del nodo es
cida y la del ctodo es
alcalina

Tcnicas de blotting:
Southern,Northern,Western
La tcnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la
autorradiografa, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel de
electroforesis, bien sea de protenas o de cidos nucleicos:
protenas
Western blot.
ADN
Southern blot
ARN
Northern blot.

Western blot o Inmunoblot


Resultado del western blot
Es una tcnica analtica
para detectar y caracterizar
protenas especificas de una
muestra que se basa en el
especificidad de
reconocimiento entre
antgeno y anticuerpo

Directo
Indirecto

emplean anticuerpos virales (cultivo celular )y mediante la electroforesis (


separan las protenas x PM) .seguidamente se transfiere a un papel de
nitrocelulosa y se incuba con el suero problema ,los anticuerpos se
detectan aadiendo una Anti IgG humana marcada con una enzima
peroxidasa que produce una banda coloreada al aadir el sustrato.

Southern Blot
Detecta la presencia de una secuencia de ADN de una
mezcla de una mezcla de acido nucleico.
Usa la tcnica de electroforesis en gel en gel de
agarosa para separar los fragmentos de ADN por su
longitud.

Perfil de ADN

Northern blot

Permite detectar ARN, la tcnica consiste en


extraer ARN de las clulas y su extraccin por
tamao mediante la electroforesis en gel de
agarrosa.

Las molculas son transferidas y unidas al filtro al igual


que el Southern blot despus de la hibridacin con
una sonda marcada las bandas en el gel indican la
ubicacin de los tipos de RNA que sean
complementarios con la sonda .

Extraccin de biomolculas
all-in-one
El kit todo en uno esta diseado para poder extraer simultaneamente
RNA, DNA genmica y protenas de la misma muestra biolgica (celulas
eucariticas, tejidos vegetal o animal). Este kit contiene un buffer y una
columna basada en silica para purificacin y separacin de cidos
nucleicos.
DNA obtenido es efectivo en PCR, digestiones, etc.
RNA obtenido es efectivo para generacion de sondas, RT-PCR, Northern
blot, etc.
Proteinas : anlisis por SDS-PAGE o Western blots
Todo en menos de una hora.

Extraccin de biomolecular all-in-one


Proceso de obtencin
Muestra :
tejidos o
clulas

El Tampn SK ( contiene detergente y


desnaturalizante caotropico )

Buffer SK
(lisis ARN)

Aade Etanol

Carga en columna
spin

ADN

ARN

Solucin de
lavado de la
IE

Solucin de lavado A

Tampon de
elucion F

Solucin de elucion A

ADN
GENOMICO

ARN
TOTALES

microARN

protenas

Carga en
columnamicro ARN
Solucin de
lavado A

gel de SDSPAGE

Solucin de
elucin A

Solucin de
lavado y
elucin C

microARN

PROTEINAS

Similar al mtodo de aislamiento de un solo paso de Chomczynski y Sacchi (1987).


Este mtodo implica la lisis de las
clulas con isotiocianato de
guanidina
y fenol en una
solucin monofsica .

despus de la adicin
decloroformo donde se
extraen el ADN y las
protenas, dejando el ARN
en el sobrenadante acuoso.

Fase acuosa

Precipitacin
isopropanol

ARN

Fase orgnica

Precipitacin
con etanol o
osipropanol

Obtiene : ADN
Y PROTEINAS

ADN genmico

ARN total y micro ARN

Protenas totales

Una sola muestra biolgica simultneamente

No utiliza
fenol

acetona
cloroformo

cultivos de
clulas y
tejidos de
origen animal
y humano.

DEFINICION : Es un sistema de extraccin automtico en el cual se utiliza una


instrumentacin grande, costosa y compleja diseada para el
procesamiento de muestras de alto rendimiento, esto simplifica el
aislamiento de cidos nucleicos.
REQUISITOS :
las extracciones automatizadas deben ser ms consistente y reproducible.
La velocidad, precisin y fiabilidad de toda extraccin de proceso debe ser
mxima y al mismo tiempo minimizar el riesgo de contaminacin cruzada.
BENEFICIOS :
reduce el tiempo de trabajo.
disminuir la mano de obra y costos.
aumentan la seguridad del trabajador y ofrece la oportunidad de la
reproducibilidad y la calidad de resultados.

MagPurix 12s Automated Nucleic Acid Purification System


es un sistema automatizado de mesa para la purificacin rpida
de cidos nucleicos de muestras biolgicas usando la tecnologa
de separacin con microesferas magnticas.
Sistema Maxwell 16
lleva a cabo la purificacin automatizada que ahorra tiempo y
trabajo porque elimina los pasos de la preparacin de reactivos,
pipeteo y centrifugacin.

InviGenius
El sistema esta incorporado con una pantalla tactil y
computadora

AutoGenFlex STAR
AutoGen ha desarrollado una nueva plataforma automatizada para la
purificacin de DNA genmico de grandes volmenes de sangre total.

el proceso de extraccin tarda unos 20 minutos desde el


inicio hasta el final. Se realizan los siguientes pasos :
aadir las muestras
lquidas del reactivo
de cartucho

colocar el
reactivo de
cartucho en la
mquina

presionar el botn Start. ADN


se eludir en un buffer de
elucin al final del proceso.

Mejora
de
los
Sistema de extraccin
automatizada

La combinacin de la
extraccin all-in-one
de biomoleculas y el
mtodo con sistema
de
extraccin
totalmente
automatizado puede
ser un prospectivo
invento en el futuro

un sistema porttil
de extraccin

Miniaturizacin ser
la futura tendencia
de la automatizacin
robtica en los
laboratorios.

Desde el primer aislamiento del ADN en 1869 hasta la actualidad se han


desarrollado muchas tcnicas para la purificacin de biomolculas.
La extraccin con guanidinium se utiliza ampliamente en la extraccin del ADN y
ARN y purificacin por cromatografa que es mtodo para la inmunotransferencia
que se utiliza para extraer las protenas.
La extraccin de biomolculas ayudan a los investigadores y cientficos en el
anlisis dentro de la biologa molecular.
El sistema de extraccin de cidos nucleicos automatizado se ha desarrollado por
el crecimiento de la tecnologa, adems de poseer mltiples beneficios para la
investigacion.
En un futuro se debe implementar metodos de extraccin mas rpidos , porttiles ,
eficaces y precisos .