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EQUIPO 12

UNIDAD 2
TURBIDIMETRIA Y NEFELOMETRIA
2.2 INSTRUMENTOS
El instrumento usado en la turbidimetra es el turbidmetro que es un fotmetro de
filtro.
El instrumento usado en la nefelometra, el nefelmetro
El procedimiento de la nefelometra generalmente es emprico y slo se
consideran
3
factores:
1. La concentracin: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es la dispersin.
2. Tamao de la partcula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla,
concentracin
de
los
reactivos
y
la
fuerza
inica.
3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero
si estn coloreadas, se debe escoger una porcin del espectro electromagntico
en la que la absorcin del medio se reduzca al mnimo.
Diferencias turbidimetria y nefelometra
La nefelometra se basa en la medicin de radiacin dispersa, en cambio la
turbidimetra en la medicin de la intensidad de un haz disminuido.
2.3 APLICACIONES

INMUNOPRECIPITACION

La inmunoprecipitacion cuantificada por turbidimetria o nefelometra se emplea


hoy en los laboratorios de autoinmunidad para determinar el factor reumtide.
Tanto en los reactivos como en el suelo puedes exitir partculas que produzcan
una dispersin de luz no deseada.
Ejemplo: lipoprotenas, quilomicrones. Tambin puede interferir la suciedad.

INMUNODIFUSION RADIAL

En este caso se aade un antisuero especfico a la agarosa que, a su vez, se


vierte sobre las placas. Se forma pozos en el gel y se colocan en ellos estndares
de protenas y problemas (antgenos). El antgeno difunde en el gel durante varias
horas y va reaccionando con el Ac. En la zona equivalencia se produce un anillo
de precipitacin.

INMUNODIFUSION DOBLE O TECNICA DE OUCHTERLONY

Se forman pozos en el gel de agarosa, generalmente en patrn de roseta. Se


depositan antisueros especficos en los pozos centrales y los estndares de
protenas y los problemas en los pozos circundantes. Al difundir las muestras en el
gel, donde el anticuerpo y el antgeno alcanzan la equivalencia, se forman bandas
de precipitacin insolubles.
La posicin y forma de la banda se determinan segn la concentracin del
antgeno y del anticuerpo, y sus tamaos. La distancia de las bandas con respecto
al anticuerpo es directamente proporcional a la cantidad de antgeno presente.
2.4 ANALISIS DE PROCESOS
Factores para la eleccin entre turbidimetra y nefelometra:

- Intensidad de la radiacin transmitida o dispersada con la intensidad de la


radiacin procedente de la fuente.
La mejor eleccin cuando la muestra contiene pocas partculas
dispersantes es la nefelometra. La turbidimetra es buena cuando las muestras
contienen grandes concentraciones de partculas dispersantes.
- Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra la intensidad de
la radiacin dispersada a 90 es mayor si las partculas son bastante pequeas
para que se produzca una dispersin Rayleigh. Si las partculas son mayores la
intensidad de la dispersin disminuir.
En turbidimetra la seal consiste en la disminucin relativa de la radiacin
transmitida, por lo que el tamao de las partculas dispersantes es menos
importante.