Cuestionario de técnicas en inmunología 2016 

Integrantes: ​
Sofia Bustos ­ Lorena Navarrete ­ Jocelyn Orellana 
Este  cuestionario  debe  ser  desarrollado  por  grupos  de  3  o  4  estudiantes.  Los 
grupos  se  indican  en  el  archivo  excel  que  está  en  la  carpeta  de  la  página  web  del  
curso. El tiempo máximo de entrega es el próximo 18 de marzo de 2016.  
1­  Los  anticuerpos  son  moléculas  ampliamente  utilizadas  en  técnicas  inmunológicas. 
Responda clara y brevemente las siguiente preguntas: 
 
a. ¿Qué es un anticuerpo?  
Los  anticuerpos  son  proteínas producidas en los vertebrados en respuesta a la 
exposición  a  estructuras  extrañas  conocidas  como  antígenos.  Los  anticuerpos 
son  increíblemente  diversos  y  específicos  en  su  capacidad  para  reconocer 
formas  extrañas,  y  son  los  principales  mediadores  de  la  inmunidad  humoral 
frente a todo tipo de microbios. (1) 
 
b. Mencione  al  menos  2  características  que hacen importante y necesario el 
uso de los anticuerpos en el desarrollo de técnicas inmunológicas. 
Los  anticuerpos  presentan  una  alta  especificidad  para  la  determinación  de  la 
cantidad  de  proteínas  u  otros  antígeno,  ya  que  son  capacidad  de  unirse  de 
manera  precisa  a  una   determinada  molécula blanco, lo cual es de gran utilidad 
en  el  caso  médico,  de  esta  forma  se  minimiza  la  posibilidad  de  dar  un 
diagnóstico falso a un individuo sano. 
Además  posee  una  gran sensibilidad a la hora de los resultados en pruebas de 
diagnóstico médico, son indicadores para detectar enfermedades​
.​
(2) 
 
c. Menciones  y  explique  3   técnicas  ​
diferentes  que  involucren  el  uso  de 
anticuerpos en técnicas inmunológicas. 
 
Western  blot:  ​
Esta  técnica  de  inmunotransferencia  permite  la  detección  y 
caracterización  de  proteínas  mediante  el  reconocimiento  entre  antígeno   y 
anticuerpo.Para  ello  debe  haber  una  separación   por  electroforesis  según  su 
peso  molecular,  estructura,  hidrofobicidad,  etc.  Posteriormente  se  realiza  una 
transferencia  cuantitativa  e  irreversible  a  una  membrana  de  PVDF  de  las 
proteínas  de  una  mezcla  compleja  (lisado  total  celular).  Los  antígenos  que se 
han  transferido  a  la membrana son reconocidos por anticuerpos monoclonales 
o  policlonales  específicos  de  ellos.  ​
Finalmente,  se  detecta  la  ​
unión 
antígeno­anticuerpo  por  ​
actividad  enzimática  o  ​
fluorescencia​
,  entre  otros 
métodos.(3) 
 
 

 los que evidenciarían la presencia de antígenos.  el  patrón de fluorescencia es característico para cada antígeno.  después  de  lavarlo.  Los  anticuerpos  unidos  se   revelan  después  con  un  microscopio   provisto  de  lámpara  de  luz  ultravioleta. (4)    2­Existen  diferentes  tipos  de  ensayos  de  ELISA  (​ Enzyme­Linked  ImmunoSorbent  Assay​ ).Inmunofluorescencia:  En  esta  técnica  se  utilizan  anticuerpos  unidos  químicamente  a  sustancias  fluorescentes  para  determinar  la  presencia  de  moléculas específicas.  Además  Nombre  al   menos  3  aplicaciones  del  método  de  ELISA  en  la  industria.  Este  proceso  puede  ser  usado   para  aislar  y  concentrar  un  proteína   particular  de una muestra que contiene muchos miles de proteínas distintas.  la  inmunoprecipitación  requiere  de  que  el anticuerpo este acoplado a un substrato sólido.  La  luz  ultravioleta  se  dirige  hacia  el  corte  a  través  del  objetivo.  inmovilizando  los  antígenos  que  se  presumen  está  dentro  de  esta.    ELISA  directo:  ​ En  esta   técnica  se  cubren  los  pocillos  con  la  muestra.  el  anticuerpo  se  aplica  sobre   el  corte.(4)    En  la  inmunofluorescencia  directa.  se  incuba  y  se  lava. ya sea con un cambio de  color o algún otro tipo.  Consulte  al  menos  2  tipos  de  ELISA. explicando breve y claramente cuál es  la  diferencia  y  los  alcances  de  cada  uno.  posteriormente  se  incuban  con  anticuerpos  marcados  capaz de  generar un producto detectable.  la solución de anticuerpos fluorescentes se  aplica  sobre  el  corte.    .  Haga uso de un dibujo o esquema  para su  explicación.  con  lo  que  el  campo  queda  oscuro  y  las  áreas  con  anticuerpos  presentan  fluorescencia  verde. (4)    Inmunoprecipitación:  ​ Es  la   técnica  mediante  la  cual   un  antígeno proteico es   precipitado  de  una solución usando un anticuerpo que  se une específicamente  a esa proteína. investigación o diagnóstico (sea específico)​ .(4)    En  la  inmunofluorescencia  indirecta.   En  algún  momento  del  procedimiento.  con  él  se  prepara  antiinmunoglobulina  fluorescinada   añadiendo antisuero.

  ya que  el  segundo  anticuerpo  permite  amplificar  la  señal.  luego  de  lavar  el  exceso  se  agrega  la  muestra. se agrega un segundo anticuerpo con una marca.  que  será  retenida  al  ser  reconocida  por  el  primer  anticuerpo.  Luego  de  un  segundo  lavado  donde  se  retira  el  material o adherido al anticuerpo.         Aplicaciones del método ELISA:  ­Diagnóstico para el VIH  ­Test de embarazo  ­Enfermedades autoinmune  ­Enfermedades producidas por virus en frutas  ­Enfermedades producidas por bacterias como ​ Mycobacterium tuberculosis  ­Cuantificación de inmunoglobulinas IgG ​  IgE ​  IgA  .  sin  embargo  solo  permite   la  detección  del antígeno y no del anticuerpo (5).  Esta  variedad   de  ELISA  posee  mayor  especificidad  y  sensibilidad  que  los  demás.    ELISA  Sandwich:  ​ En  este  tipo  de  elisa  se  adhiere   al  pocillo  un  primer  anticuerpo  anti  antígeno.

  fluorescentes  y  luminiscentes.  Bioluminiscencia.  siendo  las  unidades  relativas  de  fluorescencia  (fotones de luz emitidos) proporcionales a la cantidad de producto analizado  Este  método  de  cuantificación  es  ligeramente  más sensible que el colorimétrico.  la  enzima  convierte  el  sustrato  en  un  producto  de  reacción  que  emite  fluorescencia  cuando  es  excitado   a  una  determinada  longitud  de  onda.  La  cantidad  de  sustancia  formada  depende  de  la  cantidad  de  anticuerpo  presente.3­  Para  realizar  la  detección  de  los  complejos   antígeno­anticuerpo  formados  durante  el  ensayo  de  ELISA  y  proceder  a  realizar  su  cuantificación  existen  3  sistemas:  colorimétricos. ya  que  amplía  el  rango  de  medida  a  pesar   de  ser  susceptible   a  cambios  en   el  pH.  se  agrega  un  cromóforo  al sustrato.  igual  que  en  la  fluorescencia.  concentración  iónica.  y  a  la  matriz sólida. (7)    Luminiscencia:  ​ Similar  a  la  fluorescencia.  hay  distintas  formas  de  luminiscencia  dependiendo  de   la  forma  en  que  se  alcanza  el estado excitado.  posteriormente  para  conocer  la  concentración  exacta  se   compara  la  absorbancia  del  problema  con  la  absorbancia   del  blanco  y  las  muestras  de  referencia  que  contienen   concentraciones  conocidas  de  anticuerpos  y  que  se  habían  procesado  en  paralelo  realizando rectas de calibrado con las concentraciones conocidas.  secado.  temperatura.  una  enzima  transforma  un  substrato  e  un producto que emite fotones en lugar de dar color visible.  concentración  de  detergente.  En  qué  consiste  cada  método​ .      Colorimétrico:  al  formarse  el  producto.  la  excitación  se  alcanza  mediante  la  utilización  de   un  compuesto   que  emite luz  al ser  degradado  como  luciferina  o  luciferasa. lo cual puede conducir a distorsión de luz. siendo esta última el método más sensible  debido a la posibilidad de multiplicación y amplificación de señal (7)        . y éste  acoplado  a  la  reacción  dará lugar a  una sustancia coloreada que puede ser medida  por un espectrofotómetro. (7)    Fotoluminiscencia:   la  excitación  se  alcanza  mediante  luz  de  una  determinada  longitud  de  onda. (6)      Fluorescente:  ​ variación  del  colorimétrico.   Quimioluminiscencia:  la  excitación  se  alcanza   mediante  una  reacción química.  es  decir.

  Una  de  las   características  analíticas  más  importantes  de  los  citómetros  de  flujo  es  su  capacidad  de  medir  múltiples  parámetros  celulares. pues le dan a la célula linfocítica componentes  fenotípicos únicos de la etapa de diferenciación en que estén.  como  el  tamaño. entre otros padecimientos. (10)   b.  midiendo  parámetros  como  número  y  clasificación de células sanguíneas.   forma  y  complejidad   y  componentes  celulares  o  función  que   pueda  ser  marcada  con  un  fluorocromo.  etapa  de  la  diferenciación  celular y  actividad  de  esta  misma.  Una  de  las  formas  más  utilizadas  para  la  identificación  de  las  células  del  sistema  inmune   es  a  través  del  uso de anticuerpos  que  reconocen  moléculas  específicas  en  la  superficie  celular.  En   este  sentido.     Esta  técnica  es  empleada  también  en  el  conteo  de  subpoblaciones  de  linfocitos  en  pacientes  con  el  virus  de  la  inmunodeficiencia  humana.  La  información  producida  puede  agruparse  en   dos  tipos  . ¿Qué es la citometría de flujo?    La  citometría  de  flujo  es  un  método   analítico  que   permite  la  medición  rápida  de   ciertas  características  físicas  y  químicas  de  células  o  partículas  suspendidas  en  líquido  que  producen  una  señal  de  forma  individual  al  interferir  con  una  fuente  de  luz.  También se conocen como cúmulo de determinantes o de designaciones.  responda clara y brevemente:    a.  ¿Cómo  se  mide  e  interpreta  la  expresión  de  estos  CDs  en  las  células  del  sistema inmune?  Son  moléculas  marcadoras  en  la  superficie  celular.  Las  aplicaciones  más  relevantes  de  la  citometría  de  flujo  en  la  práctica  médica  se  relacionan  con  la  hematología  e  inmunología  clínicas.4­  En  inmunología  es  muy  importante  tipificar  los  diferentes  tipos  celulares  y  sus  características  funcionales  específicas.  Es  un  sistema  de  antígenos  de  superficie  celular  de  los  leucocitos humanos. permitiendo  la  categorización  de  los  leucocitos  y  otras  células  hematopoyéticas  (de  la  sangre).  Debido  a  que  durante  la  maduración  y  diferenciación. ¿Qué  es  un  ​ “Cluster  of  differentiation”  (CD)  y  para qué se usan? Además.  que  reconocen  ciertos  anticuerpos.  así  como  la  caracterización  de  leucemias agudas y síndromes linfoproliferativos crónicos.  y  aon  utilizadas   para  la  identificación  del  tipo  de   célula.    El principio en el que se basa esta técnica:  Hacer  pasar  células  u   otras  partículas  en  suspensión  alineadas  y  de  una  en  una  por  delante  de  un  haz  luminoso.  que se caracterizan mediante anticuerpos monoclonales.  se  denomina  a  dichos  compuestos  marcadores  de ​ diferenciación.  los  linfocitos  inmaduros  van  recibiendo  en  su  superficie  una  serie  de  receptores  inmunitarios.

¿Qué  son  los  anticuerpos  acoplados  a  fluorocromos  y  qué  ventajas  tiene  usarlos?    Los  anticuerpos  acoplados  a  fluorocromos  o  fluoróforos  son  capaces  de  teñir   diversas  estructuras  para  lograr  ​ examinar  muestras  teñidas  con  dichos  anticuerpos  a  diferentes  longitudes  de  onda  de  excitación  y   de  emisión.  mediante   el  uso  de  microscopía confocal o de fluorescencia. (12)                .  por  ejemplo.fundamentales:  la  generada  por  la  dispersión  de  la  luz  y  la  relacionada  con  la emisión de  luz  por  los  fluorocromos  presentes  en  la  célula  o  partícula  al   ser  excitados  por  el  rayo  luminoso.  Con  este  sistema  se  pueden  observar  diferentes moléculas blanco mediante el uso de diferentes fluoróforos a alta resolución.     Este  tipo  de  tinción  o  marcaje  es  posible  utilizarla. Las señales luminosas detectadas se transforman en  impulsos eléctricos que se  amplifican  y  se  convierten  en  señales  digitales  que  son procesadas por una computadora  (11)    c.

CD16    3. (19)  En  ​ inmunología  se  denomina   CD13  (del  ​ inglés  cluster  of   differentiation  13)  o  aminopeptidasa  N  a  un  tipo  de  ​ antígeno  CD  propio  del  sistema  inmune  de  mamíferos.(17) (18)    En  ​ inmunología  se  denomina   CD16  (del  ​ inglés  cluster  of   differentiation  16) o FcγRIII a un tipo de antígeno CD propio del  sistema  inmune  de  ​ mamíferos​ . en  inglés​ ). ε:20 kDa y su naturaleza  bioquímica lo encuadra dentro de la familia de las  inmunoglobulinas.(14)  En inmunología se denomina CD3 (del inglés cluster of  differentiation) a un tipo de antígeno CD propio del sistema  inmune de mamíferos. (15)(16)    CD68(Cúmulo de diferenciación 68 o cluster of differentiation  68.  La macrosialina es el equivalente de CD68 en ratones.CD8    3. Escriba  al  menos  3  marcadores  o  “CD”  que  permitan  identificar  las  siguientes  células.CD4    2. La función de CD68 parece ser  la captación de lipoproteínas de baja densidad.  Se  expresa  específicamente  en  neutrófilos.  Implicada  también  en  la  maduración  ​ tímica   de  linfocitos  T   y  en   la  transmisión  de   señales intracelulares durante la activación del HLA I. D4) de tipo ​ inmunoglobulinas​ . expresión del TCR en  la superficie de la célula y asociación a este último receptor. Su función biológica en la célula es:  intervenir en la transducción de señales.  y  mediar  en  la  fagocitosis  y  citotoxicidad  debida  a  células  dependientes  de  anticuerpos.   conocidos  como  citolíticas.CD68    2. además explique qué significa cada uno de los marcadores que eligió:    Tinciones  Qué es cada molécula  Linfocitos  1. D2.d.  Se  ​ expresa  específicamente  en  células mielomonocíticas​ . (13)  CD8 (Cúmulo de  diferenciación  8 o cluster of differentation.  Se  caracteriza  por  poseer  un  peso  molecular   de  50­80  ​ kDa  y  su   naturaleza  bioquímica  lo  encuadra  dentro  de   la  familia  de  las  ​ inmunoglobulinas​ . Se caracteriza por poseer un peso  molecular de γ: 25­28; δ: 20.CD3  Monocitos o  macrófagos  1.  células NK y macrófagos​ .  Se  caracteriza  por poseer  un ​ peso  molecular  de  150­170 ​ kDa y su naturaleza  bioquímica  lo  encuadra  dentro  de   la  familia  de  ​ enzimas  metaloproteasas. en inglés) es una glicoproteína expresada en la membrana  plasmática de los macrófagos.  FcγRIII. (20)  .  Su  función biológica  en la ​ célula es:  actuar  como componente  del  receptor  de  baja  afinidad  para  ​ Fc​ .  Es  una   glucoproteína  monomérica  de 59  ​ kDa  de  peso  que contiene  cuatro dominios  (D1. Se  expresa específicamente en timocitos y células T.  es  una  molécula  que  se  expresa  en  la   superficie  de  algunas   ​ células  T​ .CD13  Es  una  ​ molécula  que   se  expresa   en  la  superficie  de  algunas  células  T  y  en  las  ​ células  dendríticas​ .  Una   de  sus  ​ funciones  biológicas  conocidas  hasta hoy en  la  célula  es: hidrolizar  proteínas  con  su actividad   metaloproteasa   de  zinc.  Es  una  glucoproteína dimérica de  65­70​ kDa que  cruza  la ​ membrana y  participa  como  co­receptor en  la  estabilización  de la adhesión  del  receptor  de  linfocitos T a ​ moléculas del Complejo Mayor de  Histocompatibilidad  tipo  I  (MHC  I). D3.

 maduras  CD22 Células B  CD23 Células B  CD24 Células B.Información Extra ​ (21) (22) (23)(24)​ :   Anticuerpos   monoclonales:  sustancias  homogéneas  con   acción  sobre  un  solo  determinante antigénico (epitopo: epi=sobre  topo=lugar). granulocitos :Se expresa específicamente en células mielomonocíticas. granulocitos  CD16 Receptor Fc de IgG sobre células K y neutrófilos  CD19 Células B  CD20 Células B  CD21 Células B. aumenta la afinidad de la interacción celular. células pre­B  y plaquetas  CD10 Antígeno de leucemia linfoblástica aguda común. granulocitos.  CD3  Células T  CD4  Células T   moléculas superficiales.  CD15 Monocitos.  CD11 Células T supresoras.  CD1A   Timocitos  CD2  Receptor de E rosetas. células NK (Natural killers = destructoras naturales)  CD8  Células T. monocitos. moléculas superficiales. células NK. granulocitos  CD25 Células portadoras de receptor IL­2  CD34 Células progenitoras  CD35 Células portadoras de complemento CR1  CD45 Leucocitos    . producidos por un clon celular. cooperadoras/inductoras  CD5  Células T . granulocitos  CD13 Monocitos. citotóxicas /supresoras  CD9  Células T activadas. subpoblación de células beta  CD6  Células T  CD7  Células T. granulocitos  CD14  Monocitos. molécula de adhesión celular.

  densidad.  Además  con  base  en  el  tamaño  (forward  scatter)  y  complejidad  de  la  célula   (side  scatter)  se  pueden  identificar  de  una  manera  “gruesa”  los  diferentes  tipos celulares que se están analizando​ . interprete los siguientes gráficos:      .  Mientras  más  arriba o   Son  del  mismo  color   más  a  la  derecha  aquellos  que  tengan  el  ­­>mayor es la señal.   mismo  número  de  eventos.           Diagrama de puntos  Histograma:   Muestra  un  Tamaño  (FSC)  y  único  parámetro  v/S  complejidad (SSC)  Muestra  dos  número de eventos  parámetros  Este  gráfico  es  de  simultáneamente.5.    Con base en esta información y en lo consultado.  ​ Los  resultados  que  arroja  el  citómetro  de  flujo  son  gráficos  de  frecuencia  representados  como  diagramas  de  puntos  (cuando  se  analizan  dos   marcadores  en  simultáneo)  o  histogramas de frecuencia (cuando se analiza la expresión de  un solo   marcador).

  los  linfocitos son células de menor  tamaño y granularidad que los  Monocitos  y  Granulocitos.        Respuesta:  A: Granulocito  B: Monocito  C: Linfocito  Fundamento:  ​ Debido  a  que  FSC.  linfocitos  y  granulocitos.  corresponde  a  la  complejidad celular o granularidad.  aquellas  que  sean  más complejas o granulares tendrán un valor mayor en el  eje y.  pero  sí  en  cuanto  a  su   granularidad.  Por  ende.  Con  base  en  el  tamaño  y  granularidad  de  cada  una  de  estas  poblaciones  celulares  indique  en  el  siguiente diagrama de puntos donde se ubica cada una de ellas.   En  este  caso.a.  son los granulocitos los que poseen mayor granularidad.  no  hay  mucha  diferencia  de  tamaño  entre  Monocitos  y   Granulocitos.   Por  otra  parte. Por lo  tanto.0)).  El  SSC.  corresponden  a  la  población  celular  marcadas  con  la  letra  C.  En  cambio.  corresponde  al  tamaño  de  la  célula  en  este  caso. Una  muestra  de  sangre  periférica  contiene  los  siguientes  leucocitos:  monocitos.  Aquellos  elementos  de  menor  tamaño  están  hacia  la  izquierda  del  eje  x  (hacia  el  punto  de  coordenadas  (0.        .  al  comparar  respecto  a  la  granularidad  entre  monocitos  y  granulocitos.

  Reconocen  péptidos  cortos  que  contiene  residuos  de  N­formilmetionina.  es  sabido   que  se  expresan  sobre  las  membranas   plasmáticas  de  células  dendriticas.  la  proteína  G  ligada  a  GTP activa a  numerosas   enzimas  celulares  entre  ellas  una  fosfolipasa  C  específica  del  fosfatidilinositol  cuya  función  es  elevar  el  calcio  intracelular  además  de  activar  la  proteína cinasa C.   fijadoras  de  GTP  con  siete  dominios  transmembrana.  leucocitos  y  macrofagos.  Estos  receptores  están  acoplados  a  una  proteína  G.   ­   Lectinas  de  tipo   C:  corresponde  a  una  familia  de  moléculas  de  carbohidratos  dependientes  de  calcio.  se  expresan  en  neutrofilos  y   macrofagos  respectivamente.  (25)    ­   .b. Ubique  en  forma  de  diagrama  de  puntos.  como  se  verían  las  poblaciones  celulares indicadas debajo de cada gráfico:   Respuesta:   6­  El  sistema  inmune  es  capaz  de  reconocer  y  responder  ante   distintas  señales  ya  sean  provenientes  de  patógenos  (PAMPs)  o  de  elementos  propios  del   organismo  (DAMPs).  la  unión  del  ligando  al  receptor  genera  un  cambio  de  GTP  por  GDP.  Permiten  a  los  fagocitos  identificar  y  responder  a  moléculas  microbianas  ya  que  en  todas las bacterias hay  proteínas  que  comienzan  con  N­   formilmetionina  y  por  lo  demás  muy   pocas  de  mamíferos  las  poseen.  El  mecanismo  de  acción  de  algunas  de  estas  consiste  en  identificar  estructuras  presentes  en  los  carbohidratos  de  la   pared  celular  de  algunos  microorganismos  pero  que  no  se  encuentran en células de  mamíferos.(25)    ­ Receptores  N­formil  Met­Leu­Phe:  un  ejemplo  de  estos  FPR  y  FPRL1.  Mencione  al  menos  dos  tipos  de  receptores  que  reconocen  estos  patrones y expliquen su mecanismo de acción.

  los  macrofagos  y  los  linfocitos  B.además  péptidos  unidos   a  moléculas  del  MCH­1  son  reconocidos  por  linfocitos  tCD8.  estos  reconocen  principalmente  péptidos  derivados  de  proteínas   extracelulares  que  se  internalizan  en  las  células  presentadoras  de  antígeno.  Indique  cuáles  células expresan MHC de  clase  I y cuáles  células expresan MHC de clase II y qué función cumplen (La función  relaciónela con linfocitos T).  se  expresan  todos los alelos heredados de ambos progenitores de igual forma.   las  moléculas  MHC­1  contienen  dos  cadenas  polipeptídicas  unidas   de  forma  no  covalente.  Además  permiten  la  diferenciación  de  lo  propio y lo ajeno.   ­ ­ 8­  Los  genes  MHC  son  altamente  polimórficos.   La  ventaja  de  este  polimorfismo  consiste  en  que  al  heredar un grupo de alelos del  padre  y  otro  grupo   de  la  madre  hay  un  significativo  aumento   del  número  de  moléculas  del   MHC disponibles para unirse  a péptidos y presentarlo a los linfocitos  T.  recesividad.  los  péptidos  unidos  a  moléculas  del  complejo  MHC­2  son  reconocido  por  los  linfocitos  TCD4.  como el caso del rechazo de injertos de piel de una cepa no consanguínea (26).7­  ¿Qué  es  el  complejo  mayor  de  histocompatibilidad.  estos   últimos  reconocen  péptidos  derivados  de  proteínas  citosólicas  y  de  síntesis  endógena.  es   decir. etc)  ¿Qué ventaja  tiene que estos  genes se expresen de esa forma?  ­ Estas  glicoproteínas  se  expresan  de  manera  codominante.  unas   de  sus  funciones  principales  es  la  de  presentar   antígenos  al  linfocito  T.  es  posible  presentar  un  mayor  número  de  péptidos  derivados  del  patógeno  durante  una  determinada  infección.  expresan  moléculas  del  MCH­2 (26).  así  ocurre  un  mejoramiento  de  la  potencia  de  la  respuesta  inmune  contra  el  patógeno  debido  a  que  se  aumenta  el  número de linfocitos T específicos del patógeno activado (27).  Usted  hereda  un  grupo   de  alelos  tanto  del padre como de la madre.  conocido  en  inglés   como  MHC  (Major  Histocompatibility  Complex)?.   ­       .  las  celulas  dendriticas.   ­ El  MHC  corresponde  a  un  conjunto  de  proteínas  especializadas  y  que  están  codificadas  en  los  genes  del  locus  llamado  complejo  mayor  de  histocompatibilidad. ¿De qué forma se expresan  estas glicoproteínas?  (Utilice  conceptos  como  dominancia.  las  moléculas  del  MHC­1  se  expresan  en  general en todas las células humanas nucleadas (26).  es  decir.

Péptidos:  A  (para  MHC­I).9­  Defina  qué  significa  el siguiente termino:  restricción de MHC (en inglés. se  emplea para determinar histocompatibilidad en trasplantes.  es  decir.  H­2d;  H­2b/d  (Posee  ambos  haplotipos).  Además  indique  cómo  mediría  usted  que  los  LT   maduraron  o  no  (marcadores  “CD”  y  secreción de citoquinas)  . self­MHC  restriction)?  ¿Qué experimento hicieron Zinkernagel and Doherty para demostrarlo?  Y qué relación tiene con la reacción mixta linfocitaria o “MLR”?  ­ ­ ­ La  restricción  de  MHC  es  una  consecuencia  de  los procesos de selección durante  la  maduración de los linfocitos T en el timo . Macrophage (H­2b/d)  b. Células  presentadoras:  Dendritic   cell  (H­2b).     El  experimento  de  los  científicos  demostró  que  el  sistema  inmune  es  capaz  de  distinguir  lo  propio  de  lo   extraño.  cuando  los  fibroblastos   infectados  provenían   de  cepa  de  ratones  cuyos  antígenos   de  histocompatibilidad   eran  distintos  ocurría  que  eran  ignorados  por   los  linfocitos  T  inmunes.    10­  Un  co­cultivo  es  un  experimento  en  el  que  se  ponen  en  contacto  2  tipos  de  células  distintas:  células   presentadoras   de  antígenos  y  linfocitos  T.  Lung  Epithelial  cell  (H­2b).  Los  péptidos  se  cargan  inmediatamente  en  los  respectivos  MHC  y  pueden  ser  reconocidos  por los linfocitos T en cuestión. durante esta.  Con  base  en  la  información  consultada  y  considerando  el  concepto  de  la  restricción  del  MHC  ¿Cuáles   son  las  posibles  combinaciones  entre  células  presentadoras  de  antígenos  y  linfocitos?  Necesariamente  tiene  que  escoger  una  célula  presentadora.   . CD8 T cell (H­2b)   c. Si ocurre   liberación  de  cromo  como  resultado  de  citotoxicidad.  Para  realizar  el  experimento  usted  cuenta con los siguientes componentes murinos (de ratón):  a.  cuando  linfocitos  y  fibroblastos  si  compartian antígenos de histocompatibilidad esto significaba que los   reconocían como propios (29).  Para  demostrar  esto  los  científicos  utilizaron  linfocitos  provenientes  de  células  del  bazo  de  ratones  inmunizados  contra  el  virus  coriomeningitis  linfotoxica  (LCMV)  y  fibroblastos  infectados  con  el   mismo  virus  y  marcados  con  cromo.  esto  con  el  fin   de  evaluar  la  activación  de  estos  linfocitos  T.   un  péptido y  un linfocito (Esto es una combinación).  B  (para  MHC­II). las células que expresan  receptores  del  antígeno  específicos  frente  a  los   péptidos  propios  asociados  al  MHC  son  seleccionadas  para  vivir  y  así  se  da  muerte   a  aquellas  células  que  no  diferencian el MHC propio (28).  Nota:  Haplotipos:  H­2b. Linfocitos: CD4 T cell (H­2d).  La  reacción  mixta  linfocitaria  ocurre  cuando  hay  proliferación  de  linfocitos  al   ser  estos  incubados  en presencia de otras células con antígenos MCH II diferentes.entonces  no   se  producía  ataque.

  Entre  ellas  se  destacan  dos  tipos  de  moléculas:  Citoquinas  y  Quimioquinas.  las  cuales  son  producidas  principalmente  por  .  epitelial  o  macrófago)  puede  actuar  como  célula  presentadora. que regulan y estimulan la respuesta inmunitaria.  ya  que  todas   las  células nucleadas del cuerpo poseen MHC­I.   Las  citoquinas  y  quimioquinas  son  moléculas  que  permiten  la  comunicación  mediante la interacción con receptores de superficie específicos. Defina cada una de ellas Haciendo énfasis en sus diferencias.  Los  linfocitos  T  CD8+  tienen  una  restricción  MHC  de  clase   Y.  por  lo  que  una  combinación  apropiada  para  este  tipo  sería  :  ​ Célula  dendrítica.  Su  acción  fundamental  consiste  en  la  regulación  del  mecanismo  de  la ​ inflamación​ .  Las  citoquinas  son  proteínas  producidas  de  forma  breve  y  autolimitada  por  las  células linfoides y de otros tipos. porque  sólo  reconocen  péptidos  unidos  a  moléculas  MHC  de  clase  II  en  la  membrana  de  las  células  presentadoras.​  (32)  11­ La comunicación entre las células del sistema  inmune se da a través de diversas  señales.  únicamente  si  se  encuentra  unido  a  una  molécula  MHC  en  la   membrana de la célula presentadora.   provocando  la   activación  de  los  macrofagos.   Por  lo  tanto.Antecedentes y respuesta:  La  restricción  de  MHC  tiene   relación  con  el  reconocimiento  del  péptido  antigénico  por  el  linfocito  T.  porque  solamente  son  capaces  de   reconocer  péptidos  antigénicos  que  se  presenten  unidos  a  moléculas  MHC  de  clase  I  en  la  membrana  de  otra  célula.  epitelial  o  macrofago  (las  3 expresan MHC­II) + CD4+  T + péptido B (para MHC­II).  estas  pueden  actuar  sobre  diferentes  tipos  celulares  e  inducir diversas respuestas.   El  radio  de  acción  de  las  citoquinas  es  corto  y  generalmente  tienen  función   autocrina  (sobre  la  misma  célula que la  produce).  Estas  pueden  ser  pro  inflamatorias.  epitelial  o  macrófago  +  CD8+  t   +  péptido A (para MHC­I)​  ​ (31)  Por  otra  parte.   los  linfocitos  T  CD4+  tienen  una  restricción MHC de clase II.  Cualquiera   de  las  3  células  antes  mencionadas(Dendrítica.  péptido  y  linfocito  es  :  Célula  dendrítica.  en  este  caso  la  combinación   apropiada  entre  célula  presentadora.  favoreciendo  de  esta  manera  la  aparición  de  fiebre  y  refuerzan  la  respuesta  inflamatoria. yuxtacrina (sobre la célula  vecina  mediante  la  expresión  en   membrana  de  la  citoquina)  o  paracrina  (sobre  la  célula  vecina  al  liberarse  de  forma  soluble).

 monocitos y linfocitos t. como el  de  cualquier  otra  técnica  de  tinción  es  una  evidente  visualización  de  la  localización  del  componente marcado.  angiogénesis.   Esta  técnica  es  un   método  de  localización  específico  de  un  antígeno  en  el  tejido  o  en  la  célula.  desarrollo  de  células  hematopoyéticas  e  inmunes.   .  las  quimioquinas  regulan  la  adhesión.  de  esta  forma son consideradas citoquinas proinflamatorias.  direccionando  el  movimiento  de  los  leucocitos  hacia  el  sitio  de  la  lesión.  celulas  dendriticas  activadas  y   linfocitos.  de  esta  forma  son  capaces  de  activar receptores de  neutrófilos.  degranulación.  a  la  cual  se  le  agrega  un  anticuerpo  marcado  con  fluorescencia. así  como la génesis de órganos linfoides.  además  de   su  ubicación  en  las  células  infectadas  ¿Qué  técnica   utilizaría  usted  en  un  corte  histológico  pulmonar  para  determinar  la  ubicación  de  una  proteína  de  interés?  Explique  el   fundamento de esta técnica y sus aplicaciones​ .  ya  que  esta  técnica  permite  identificar  la  ubicación  celular  y  subcelular.  ya  que  están  ligadas  a  la  heparina. donde el principio básico de este método.  como  también  anti inflamatorias  (33)(34)  Las  quimioquinas  son  proteínas  de  bajo  peso   molecular.  glicosaminoglicanos  y  moléculas  de  azúcar  cargadas  negativamente  de  la  superficie  celular.  La  inmunohistoquímica  tiene  sus  orígenes  en  la  histoquímica.  en  este  caso  una  proteína.  Además.  realizaremos  una  inmunohistoquímica.(34)(35)    12­  Un  ratón  fue  infectado  con   el  Virus  Respiratorio  Sincicial  (RSV)  y  se  quiere   evaluar  la  presencia  de  proteínas  virales   en  el  pulmón.  que  se  asocian  a  la  respuesta  inflamatoria.  pero  extendida  a  una  gran  variedad  de   componentes   del tejido.  de  esta  forma  se  genera  un  complejo  entre  la  proteína  y  el  anticuerpo  marcado.   En  cuanto  a  la  ubicación  de  la  proteína.monocitos  y  macrofagos.  migración  transendotelial. basado en el reconocimiento antígeno­anticuerpo. basófilos.  quedando  adherido  en  la  muestra  del  corte  histopatológico  pulmonar.  Para  evaluar  la  presencia  de  proteínas  virales  se  puede  realizar  un  ELISA  para  la  detección del antígeno mediante anticuerpos específicos del virus respiratorio sincicial.  ​ generando  una  respuesta  inmune adaptativa  que  se  denomina  quimiotaxis.  pudiendo  determinar  la  ubicación de dicha  proteína.  La  forma  en  que   las  quimioquinas  dirigen  el  movimiento  de  las  células  mononucleares  por  el  organismo  ​ es  a  través del gradiente hacia las zonas con una  mayor  concentración  de  quimioquina.

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