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Curso Superior em Nutrição (Bacharel

)
Disciplina: Bioquímica II
Profª. Séfura Maria A. Moura




Relatório ² Aula Prática




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Juliana Silva Sales

22, abril de 2010
Limoeiro do Norte ² Ceará


INTRODUÇÃO
Um dos métodos utilizados para dosagem de proteína é chamado de método de
Biureto. Esse método faz uso da propriedade de íons Cu2+, em meio alcalino de
formar ligações com o nitrogênio das ligações peptídicas. Desta reação (reação de
biureto) resulta uma coloração púrpura intensa. Este fato pode ser explorado para
se determinar por colorimetria a quantidade de proteína de uma solução. A cor
desenvolvida numa reação de íons de Cu2+ em meio alcalino, com estas proteínas
deve-se exclusivamente às ligações peptídicas, e a sua intensidade é proporcional a
quantidade de tais ligações.

OBJETIVOS
Caracterizar a presença de proteínas em material biológico;
Demonstrar as reações de coloração para proteínas;
Verificar experimentalmente a precipitação de proteínas com e sem desnaturação;
Relacionar as observações práticas com a teoria de propriedades gerais, estrutura e
isolamento de proteínas.

REAGENTES
Solução de proteína a 10%
Hidróxido de sódio 2,5mol/L
Solução de sacarose
Água destilada
Solução de sulfato de cobre a 1%
Ácido tricloroacético (TCA) a 10% - não utilizado
Acetato de chumbo a 5% p/v
Álcool etílico absoluto
Clara de ovo ´in naturaµ
Cloreto de sódio 1mol/L
Solução saturada de sulfato de amônio 76,6g% p/v ² não utilizado

PREPARAÇÃO DE REAGENTES
Os reagentes já se encontravam preparados, não havendo então necessidade de
preparação de nenhum deles.


MÉTODOS
Foi utilizado de dois tipos de reações. As de coloração e as de precipitação, onde cada
qual utiliza métodos distintos.
Reações de coloração:
Nessas reações, houve a formação de complexo entre PROTEÍNA ² REAGENTE.
Reação de Ácido Nítrico:
Reservou-se três tubos de ensaio, que foram chamados de tubos; 1, 2 e 3. No tubo 1,
colocou-se 5ml de proteína(clara de ovo) a 10%, a mesma foi adicionado 3ml de ácido
nítrico. No tubo 2, colocou-se 5ml de água destilada e a ela foi adicionado 3ml de ácido
nítrico. Ao tubo 3, foi colocado 5ml de solução de sacarose e junto a mesma adicionado
3ml de ácido nítrico.

Reação de Biureto:
Nesta reação também reservou-se três tubos de ensaio, sendo-os chamados de tubos; 4,
5 e 6. No tubo 4, foi colocado 5ml de proteína(clara de ovo) a 10%, junto com 1ml de
NaOH 2,5mol/L e três gotas de sulfato de cobre a 1%. No tubo 5, a mistura foi de 5ml
de água destilada, 1ml de NaOH 2,5mol/L e também três gotas de sulfato de cobre a
1%. Já no tubo 6, colocou-se 5ml de solução de sacarose, juntamente com 1ml de NaOH
2,5mol/L e três gotas de sulfato de cobre a 1%.

Reações de precipitação:
Nessas reações a proteína precipita, na maioria das vezes por desnaturação.
Ação do Calor:
Reservando um único tubo de ensaio e o nominando de 7, colocou-se no mesmo 5ml de
proteína(clara de ovo) a 10%, e aquecendo-a em banho-maria por três minutos.

Reações com reagentes para alcalóides:
Reservar-se-ia um tubo de ensaio, que seria denominado de tubo 8, onde seria
misturado 5ml de proteína(clara de ovo) a 10%, juntamente com 1ml de TCA a 10%. No
entanto essa reação, não foi realizada.


Reações com sais de metais pesados:
Reservando também um único tudo de ensaio, denominando-o de tubo 9. Nele foi
colocado 5ml de proteína(clara de ovo) a 10%, adicionando ao mesmo 1ml de acetato
de chumbo(sal) a 5%.

Reação com solventes orgânicos:
Novamente reservando apenas um tubo de ensaio, nominamos de tubo 10, onde no
mesmo misturou-se 5ml de proteína(clara de ovo) a 10% e 3ml de álcool etílico.

Efeito da adição de sais:
Em um novo tubo de ensaio denominado de 11, seria feita mistura de 5ml de
proteína(clara de ovo), juntamente com 4ml da solução saturada de sulfato de amônio,
em seguida adicionada 4 a 6 ml de água destilada, novamente em seguida adicionar-se-
ia solução de NaCl. Porém essa reação não foi realizada.