INSTITUO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN

CARRERA INGENIERÍA BIOQUÍMICA PERIODO: FEBRERO –JULIO 2016
SEMESTRE: Sexto
GRUPO 601-B
DOCENTE: M. en C. Yolanda Retama Ortiz

CALIFICACIÓN: ____________
OBSERVACIONES: ___________________________________________
FECHA 1.
(Realización de la práctica)

FECHA 2.
(Entrega del reporte

Practica 7. Preparación de un frotis bacteriano y tinción simple.

Introducción: La preparación de un frotis o extensión sobre un portaobjetos es imprescindible para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permita la observación de las bacterias al microscopio. tiende a desprenderse con facilidad en los lavados posteriores. Si las bacterias se encuentran resuspendidas en agua la fijación puede hacerse por calentamiento de la muestra sobre el portaobjetos. solución safranina 0. la fijación al calor. Colorantes para tinción: solución de cristal violeta al 1%.5%.INSTITUO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN CARRERA INGENIERÍA BIOQUÍMICA PERIODO: FEBRERO –JULIO 2016 SEMESTRE: Sexto GRUPO 601-B DOCENTE: M. . extendiéndola y fijándola sobre un portaobjetos limpio. se realiza tomando una pequeña cantidad de cultivo bacteriano. Se debe procurar además que este proceso altere lo menos posible la morfología bacteriana. puesto que las bacterias carecen de coloración. Yolanda Retama Ortiz Objetivo: Al finalizar la práctica el alumno será capaz de utilizar el microscopio al máximo aumento con el correcto empleo al aceite de inmersión para la observación de la morfología bacteriana y tinción simple. resulta indispensable teñirlas para poder observarlas al microscopio y determinas su tamaño y morfología. pues la capa de materia orgánica que contiene la bacteria una vez realizada la extensión. en C. Material:       Mechero bunsen Asa de siembra Pinzas Portaobjetos Cultivos bacterianos de E. no da en este caso buen resultado. La fijación de bacterias se halla en su propio medio de cultivo debe hacerse empleando un procedimiento alternativo como la fijación con metanol. De esta manera no se pierde en los pasos de lavado necesarios para la tinción. Es sumamente importante no excederse en este proceso para que las bacterias no se deformen o se rompan. coli y staphilococcs ssp. La fijación de una extensión bacteriana es fundamental para que las bacterias queden inactivas y adheridas al vidrio.

Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar el proceso por simple presión entre dos papeles filtro. no es necesario realizar estos dos primeros pasos. Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. uno de ellos con cristal violeta y el otro con safranina. Remover la mezcla hasta formar una suspensión homogénea y extenderla para facilitar el secado. Fijar las bacterias al portaobjetos: a) Por el calor (bacteria procedentes de medios solidos). para ello inclinar los portaobjetos y aplicar el chorro de agua en la parte superior. Seleccionar un buen campo de observación y dibujarlo ilustrando la morfología y agrupación de las bacterias. Lavar las preparaciones con agua pura eliminar el exceso de colorante. Retirar de inmediato el exceso de metanol del portaobjetos golpeándolo por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo. en un cultivo en medio líquido. en C. Basta con colocar y extender una muestra de la suspensión bacteriana directamente sobre el portaobjetos). Cubrir los frotis con abundancia colorante. 4. Cuestionario: . Dejar enfriar el portaobjetos entre los pasos. Con el asa de siembra previamente flameada. 2. Esperar a que el metanol se evapore por completo. 6. Tinción simpe: 5. transferir una pequeña cantidad de cultivo bacteriano en medio solido a la gota. 3. Esperar hasta que la fina película de líquido se evapore (no eliminar el calor). Eliminar al máximo cantidad de agua de los portaobjetos golpeándolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo.INSTITUO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN CARRERA INGENIERÍA BIOQUÍMICA PERIODO: FEBRERO –JULIO 2016 SEMESTRE: Sexto GRUPO 601-B DOCENTE: M. 7. 9. Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Observar la preparación al microscopio con el objeto de inmersión. b) Por el calor (bacterias procedentes de medio liquido). Colocar una pequeña gota de agua en un portaobjetos limpio. 8. Dejar actuar los colorantes por dos minutos. No dirigir el agua directamente sobre el frotis pues podría arrastrar parte del frotis consigo. (si el material de partida. Yolanda Retama Ortiz Técnica: Preparación de un frotis bacteriano 1. permitiendo que resbale sobre el frotis.

INSTITUO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN CARRERA INGENIERÍA BIOQUÍMICA PERIODO: FEBRERO –JULIO 2016 SEMESTRE: Sexto GRUPO 601-B DOCENTE: M. Suelo: metanol. coli y Staphylococcus? E. Coli Morfología : bacilo corto . en C. ¿Qué fin tiene la fijación de las muestras al realizar la frotis bacteriano? Las bacterias quedan inactivas y adheridas al vidrio así alteran lo menos posible la morfología. se debe tener un cuidado muy extremo así como también la rapidez posible en la tinción . una colonia re suspendida en agua? Yogurt: metanol. solo se puede conocer su forma Resultados y observaciones: Conclusiones: Se entiende por tinción (o coloración) simple al teñido de los microorganismos aplicando sólo Una solución colorante. Ventajas : permite observar estructuras que en su forma natural carecen de coloración Desventajas : las bacterias pueden morir rápidamente . ¿Con los resultados de una tinción simple se puede saber si la muestra es un cultivo puro? No. yogurt. 5. 4. una muestra de suelo. ¿Qué tipo de morfología y agrupación aparece en los frotis de cultivos de E. Señale el tipo de fijación que emplearía para preparar una extensión de las siguientes muestras. Yolanda Retama Ortiz 1. Señale las ventajas y desventajas de la tinción simple respecto del examen fresco. Este tipo de tinciones pueden ser positivas o negativas. Colonia re suspendida: por calor 3. no porulado Agrupación : enterobacteria Staphylococus Morfología : cocos Gram positivos Agrupación : estafilococáceas 2. .

El colorante se aplica al extendido fijado durante un determinado tiempo y luego se lava y al final se seca.. razón por la cual se usa más concentrado y se deja actuar durante más tiempo Bibliografía: http://es. en C. En ocasiones se agrega una sustancia química a la solución para intensificar la coloración. El azul de metileno es el colorante más débil de los tres.com/doc/54663106/Clasificacion-morfologica-bacteriana#scribd . este aditivo se denomina mordiente. Yolanda Retama Ortiz Una tinción simple es una solución acuosa de un colorante básico único.INSTITUO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN CARRERA INGENIERÍA BIOQUÍMICA PERIODO: FEBRERO –JULIO 2016 SEMESTRE: Sexto GRUPO 601-B DOCENTE: M.scribd. el propósito general de esta tinción es destacar por completo el microorganismo completo para que se véanlas formas y las estructuras básicas.