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Yema de huevo (Lipasas)

Las lecitinas se clasifican como fosfogliceridos o fosfolpidos, un grupo de compuestos que contienen
cidos grasos, cido fosfrico, glicerol, y colina.
La yema de huevo es un indicador de la actividad de las
lipasas (o lecitinasa) en medios de cultivo. La yema de huevo
es una mezcla de lpidos, fosfolpidos, lipoprotenas y otros
componentes complejos La lecitinasa o factor de la yema de
huevo acta sobre el componente lipoproteico de la yema de
huevo; la hidrolisis de la leticina libera fosforo y colina en
etapas y la precipitacin de grasas insolubles (digliceridos) que
produce opalescencia. Un halo opaco rodea las colonias que
crecen en medios que contienen yema de huevo.
Resultados
Una prueba de lecitinasa positiva, consiste en la aparicin de
una zona opaca alrededor del crecimiento microbiano, como resultado de la hidrlisis de la lecitina de la
yema de huevo.

Agar Gelosa Sangre.

Hemlisis alfa: Si el halo es opaco, indica la hidrlisis de


los enlaces ster fosfato con la acumulacin extracelular de
di glicridos.

Hemlisis beta: el halo es translcido, indica la hidrlisis de


los enlaces ster y la utilizacin de los productos de los
cidos grasos.

Hemlisis gamma : ausencia de halo

Almidn.
El almidn es producido principalmente por plantas
superiores, est compuesto de amilosa y amilopectina.
Diversas enzimas amilolticas hidrolizan almidn y sus
productos.
Agar Almidn Sustrato: Almidn (polmero de glucosa).
Enzima: Amilasa (exoenzima). Producto: Glucosa.
Revelador: Lugol.
El lugol con el almidn forman un complejo color cafprpura que desaparece cuando el almidn ha sido
degradado.

Degradacin de la casena
Agar Leche Descremada
Sustrato: Casena (protena).
Enzima: Caseinasa (Proteasa, exoenzima).
Producto: Aminocidos.
Revelador: No requiere.
Las proteasas son excretadas al medio para
la degradacin de protenas, la casena es la
protena de la leche que le confiere el color
blanco, cuando la casena es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento
microbiano.

Gelatina Nutritiva.
La gelatina, una protena derivada del colgeno animal, se incorpora a diferentes medios de cultivo para
determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas proteolticas (proteinasas),
detectadas por digestin o licuefaccin de la gelatina.
Las enzimas capaces de producir gelatinosis se denominan gelatinasas. Estas enzimas proteolticas a
menudo son importantes factores de virulencia de algunos microorganismos.
El catabolismo de las protenas por parte de las gelatinasas es un proceso de dos pasos,

Protenas + H2O

Polipptidos + H2O

Gelatinasa
s
Polipptidos.

Proteinasa
s
Gelatinasa
s
Aminocidos Individuales
Proteinasa
s

Sustrato: Gelatina (protena).


Enzima: Gelatinasa (Proteasa, exoenzima).
Producto: Aminocidos.
Revelador: No requiere o puede emplearse el
carbn activado en polvo.

Gelatinasa
(+)
Gelatinasa
(-)

Medio de Leche tornasolada.


Medio de cultivo: Medio de leche tornasolada
Composicin:
a) Leche descremada
b) Agua destilada
c) Indicador de pH: Tornasol
cido: Color rojo (pH = 4.5)
Alcalino: Color azul (pH = 8.3)
Medio no inoculado: Azul purpreo (pH = 6.8)
Fundamento
Permite diferenciar organismos sobre la base de sus mltiples reacciones metablicas en un
medio lcteo como: fermentacin de lactosa, caselisis, y coagulacin de la casena. El
tornasol incorporado a la leche es un indicador de pH y de oxidacin-reduccin que hace que el
medio pueda indicar diversas funciones metablicas. La leche contiene lactosa, casena,
lactalbmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostrar una o varias
propiedades metablicas en la leche tornasolada ayudando as a la identificacin bacteriana:
1. Fermentacin de lactosa
2. Reduccin del tornasol
3. Formacin de cogulo
4. Peptonizacin (digestin)
5. Formacin de gas.

Fermentacin de lactosa
Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce principalmente cido lctico,
con una condicin cida indicada por el cambio de color del medio que se vuelve rojo rosado.
A veces el cido butrico es el producto final.
Ciertas
bacterias
que
forman
lcalis
no fermentan lactosa, pero actan sobre las
sustancias nitrogenadas que se encuentran en la leche liberando amoniaco, y dando en
consecuencia un pH alcalino que se manifiesta por un color prpura azulado.
Lactosa
glucosa + galactosa
cido lctico
Glucosa

cido pirvico

cido butrico
CO2+ H2

Reduccin del tornasol


El tornasol es un
indicador de pH y un indicador de oxidacin
organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase.

reduccin;

algunos

Formacin de cogulo
Las enzimas proteolticas provocan la hidrlisis de las protenas de la leche lo que da
como resultado su coagulacin. La principal enzima responsable de la formacin de cogulo es la
renina.

La formacin del cogulo es causada por la precipitacin de la casena, por la formacin de cidos o
por la conversin de la casena en paracasena por la enzima renina. La casena es una fosfoprotena
compleja y es la protena ms importante de la leche.
Formacin de un cogulo cido
La precipitacin de la casena provocada por los cidos orgnicos a partir de lactosa en
condiciones cidas produce un cogulo firme y gelatinoso que no se separa de las
paredes del tubo.
Lactosa

cido lctico
Caseinasa

c. Lctico + casenato de Ca

caseingeno (pp)

Formacin del cogulo


Otra forma de cogulo es el cuajo, o sea el proceso de cuajado de la leche por la
conversin de la casena en paracasena por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina
contenidas en la leche. La renina provoca el cuajado de la leche convirtiendo la sal de
casena soluble en una paracasena insoluble que es el cuajo o requesn.
Renina

Casena
Peptonizacin (digestin)

paracasena (pp)
Ca

La hidrlisis de la casena por la actividad enzimtica produce una conversin final del
precipitado caseingeno en un lquido claro; el proceso se denomina peptonizacin y se
manifiesta por una aclaracin acuosa del medio causada por una digestin del precipitado (cogulo) y
las protenas de la leche por las enzimas proteolticas de las bacterias. Sin embargo, solo se
produce una peptonizacin cuando la bacteria que se desarrolla en la leche tornasolada
contiene la enzima proteoltica caseinasa.
Formacin de gas
Los gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la fermentacin de la lactosa.
Resultados:

Interpretacin de resultados:
Rojo rosado: cido; fermentacin de lactosa
Azul purpreo: No fermentacin de lactosa; sin cambio del indicador de pH.
Azul: Alcalino; Ausencia fermentacin de lactosa. El organismo ataca
nitrogenadas que se encuentran en el medio.
Blanco: Reduccin del tornasol a una leucobase.

las

sustancias

Formacin de cogulo: Coagulacin de la protena de la leche.


Aclaracin del medio: Digestin; se ha ingerido la protena de la leche.
Gas: Produccin de burbujas en la campana de Durham.

Prueba de reduccin de nitratos


Medio de cultivo: Caldo con nitrato
Ingredientes:
a) Extracto de carne
b) Peptona
c) Nitrato de potasio
d) Agar
e) Agua destilada
f) PH inicial = 7.0.

Fundamento
Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o en nitrgeno libre.
La reduccin de nitrato en nitrito y en gas nitrgeno tiene lugar generalmente en condiciones
anaerobias, en las cuales un organismo obtiene su oxgeno del nitrato. El oxgeno sirve como un
aceptor de hidrgeno.
Reduccin del nitrato en nitrito:
NO3 + 2 e 2 H+
NO2 + H2O
La reduccin de nitrato en nitrito est indicada por la aparicin de color cuando el nitrito

reacciona con los dos reactivos. La reaccin de color resultante se debe a la formacin de un
compuesto diazoico, p-sulfobenceno-azo- alfa-naftilamina.

Referencias:
- MacFaddin, Pruebas Bioqumicas para la Identificacin de Bacterias de Importancia Clnica,
Editorial Mdica Panamericana, Tercera edicin, Buenos Aires, 2003.
- http://enzymeindia.com/enzymes/cellulase-spanish.asp
- http://www2.uah.es/alorente/invest/nucleasas/nucleasas.htm