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MARCO TEORICO

La tinción de Gram es un método que no tiñe igualmente todas las
células, es un proceso denominado tinción diferencial. La tinción de este
tipo más extensamente utilizada es la tinción de Gram, denominada así
por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram, quien la desarrollo.
Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas. Debido a su
importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias,
describiremos aquí con cierto detalle la tinción de Gram. Las células
fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen primero con una solución
de cristal violeta (otros colorantes básicos no son tan efectivos) y son
lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado
todas las células, tanto las Gram negativas como las Gram positivas,
están teñidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una
solución de yodo (I2) – yoduro potásico (KI). El ingrediente activo es aquí
el yodo, el yoduro potásico simplemente hace soluble el yodo en agua.
El yodo entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con
el cristal violeta. De nuevo tanto las células Gram positivas como las
Gram negativas se encuentran en la misma situación. Se lleva a cabo
después de la decoloración, usando bien alcohol o bien acetona,
sustancias en las que es soluble el complejo yodo – cristal violeta.
Algunos organismos (Gram positivos) no se decoloran mientras que
otros (Gram negativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos
tipos de células está, por lo tanto, en la resistencia a la decoloración.
Después de la decoloración las células Gram positivas son todavía
azules, pero las Gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto
las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la
fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células Gram
negativas son rojas mientras que las Gram positivas permanecen azules.
Deben destacarse dos aspectos cruciales de la tinción de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento de
yodo. El
yodo por sí solo tiene poca afinidad con las células.
2) La decoloración debe realizarse con poco agua para evitar que
pierdan la
tinción las células gram positivas. El proceso de decoloración debe ser
corto y
es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados
satisfactorios. Finalmente, el carácter de gram positivo no es siempre un
fenómeno del todo o nada. Algunos organismos son más gram positivos
que otros y algunos son gram variables, es decir, unas veces gram
positivos y otras gramnegativos.

estas cadenas se encuentran unidas entre sí mediante péptidos. Que en esta oportunidad será para los microorganismos como Bacillus sp.También existen mordientes que sirven para fijar colorantes en tinciones biológicas de células animales o vegetales. A su vez. albúmina). y evita que la célula estalle en medios hipotónicos. Este término es usado principalmente en la industria textil para designar a aquellas sales metálicas (de aluminio. La función del mordiente es favorecer la fijación del colorante en las fibras.La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico. Positivos Las eubacterias Gram. El Mordiente: El mordiente es una sustancia empleada en tintorería que sirve para fijar los colores en los productos textiles. El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la célula. Por fuera de la membrana citoplasmática se encuentra la pared celular que está compuesta por una ancha capa de peptidoglicano. Las células se encuentran envueltas por una membrana citoplasmática formada por una bicapa fosfolipídica y proteínas. Microorganismos Gram. y E. que son pequeñas cadenas de aminoácidos que se entrecruzan. Positivas son células con una gruesa pared celular de peptidoglucano. Microorganismos Gram Negativos Las eubacterias Gram. coli La observación microscópica puede realizarse a partir de una muestra (examen directo) y se debe tener en cuenta. hierro. Negativas son células con una delgada capa de peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa. Estás células poseen una membrana citoplasmática con fosfolípidos y proteínas. plomo) también sustancias orgánicas (caseína. gluten. Staphylococcus sp. Por encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida a unas lipoproteínas de anclaje que fijan la membrana externa. . Estos puentes peptídico son característicos de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto más completo sea el entrecruzamiento. Al ser porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalíticas y productos de secreción hacia el exterior de la célula.

Por el contrario la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negativas es muy fina. L. Cuarta edición.. como para aumentar su porosidad. J. 6. Klein.M. Por estos motivos. también es posible que el tratamiento con alcohol extraiga suficientes lípidos de la envoltura de las células Gram negativas. (Microorganismos vivos) Se utiliza normalmente para ver movilidad de las bacterias. se cree que el alcohol contrae los poros de la gruesa capa de peptidoglicano. Fundamente como la Gram positiva mantiene el color primario.1999.1.P. .. En el caso de hongos y protozoos. Mac GrawHill-Interamericana.Examen al Fresco. Microbiología. Madrid. el alcohol elimina más fácilmente el complejo cristal violeta-yodo de las bacterias Gram negativas. más bien actúa como una barrera de permeabilidad para evitar la pérdida de cristal de violeta. que es posible gracias a la naturaleza física de sus paredes celulares. En consecuencia. Bibliografía:  Prescott. Cuando a continuación se decolaran las bacterias Gram positivas con etanol o acetona. Harley & D. Durante el proceso las bacterias se tiñen primero con cristal y luego se trata con yoduro (lugol) para favorecer la retención del colorante. El peptidoglicano no se tiñe propiamente.. además. La tinción de Gram es una tinción diferencial que permite distinguir bacterias Gram positivas de Gram negativas. el complejo colorante-iodo no es eliminado durante la fase de decoloración y las bacterias Gram positivas continuaran de color azul. sin tantos enlaces y con poros de mayor tamaño.A. permite determinar además características morfológicas.

 Michael T. . Brock Biologia de los Microorganismos. Pearson. Madigan 2009. Duodecima edición.