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Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos
Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)
Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires

Programa para el mejoramiento de la
evaluación de forrajes y alimentos
- PROMEFA -

Guía de procedimientos analíticos
Año 2009

G. Jaurena
M. Wawrzkiewicz

Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)
Departamento de Producción Animal
Facultad de Agronomía – Universidad de Buenos Aires
Tel: 4524-8005; cisna1@ agro.uba.ar

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Tabla de contenidos

TABLA DE CONTENIDOS ....................................................................................................... 2
PROTOCOLOS ANALÍTICOS ............................................................................................ 4
FIBRA DETERGENTE NEUTRO (AFDN) – V1 .......................................................................... 4
CENIZAS 600ºC × 2 H – V1.................................................................................................. 7
CENIZAS 550ºC × 4 H – V1.................................................................................................. 9
CENIZAS 450ºC × 12 H – V1.............................................................................................. 11
FIBRA DETERGENTE ÁCIDO (FDA) – V1.............................................................................. 13
RECUPERACIÓN DE N (AOAC, 1996 – 4.2.09) – V5............................................................ 16
LIGNINA EN DETERGENTE ÁCIDO CON ÁCIDO SULFURICO (LDAAS) – V2 ................................ 20
MATERIA SECA PARCIAL – V2............................................................................................. 23
MATERIA SECA TOTAL – V2 ............................................................................................... 25
NITRÓGENO TOTAL (KJELDAHL) – V1.................................................................................. 27
PROTOCOLOS MISCELÁNEOS ...................................................................................... 32
CORRECCIÓN DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS POR MATERIA SECA TOTAL – V2................... 32
MODELOS PROPUESTOS PARA PREDECIR LA CONCENTRACIÓN ENERGÉTICA DE LOS ALIMENTOS
PARA RUMIANTES – V1 ...................................................................................................... 34

PROCESAMIENTO ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS – V2.................................. 38

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Equipamiento • Balanza analítica.Universidad de Buenos Aires Protocolos Analíticos Fibra Detergente Neutro (aFDN) – v1 Por equipo ANKOM (Ankom. • 10 ml de trietilengilcol. • 6. • 4. • El Lauril sulfato de sodio puede irritar las mucosas.com For evaluation only.56 g de fosfato dibásico de sodio anhidro. • Sellador por calor. hemicelulosa y lignina) se obtiene luego de disolver con detergente neutro los compuestos presentes en el contenido celular junto con sustancias de la pared celular de fácil digestión (e. • Estufa de secado regulada a 105ºC.ANKON 200/220 FIBER ANALYZER • Bolsitas filtrantes.foxitsoftware. . Principios El residuo fibroso (aFDN. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .ANKON Technology F57 filter bags • Desecador.81 g de tetraborato de sodio decahidratado.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. fundamentalmente celulosa. Usar máscara y guantes cuando esté manipulando este reactivo y trabajar bajo campana. Precauciones • La acetona es altamente inflamable. • Aparato de digestión. • Asegurarse que el tamaño de partícula de la muestra sea de 1 mm. Manipular la acetona con la campana funcionando evitar la inhalación y el contacto con la piel. pectinas). Reactivos a) Solución de detergente neutro (SDN): por cada litro de solución • 30.61 g de EDTA-sodio dihidratado. 2005) Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos.g. • 18.0 g de lauril sulfato de sodio (SDS).

3. Cerrar y sellar el vaso de digestión.alfa amilasa bacteriana termoestable. Interrumpir la agitación y el calentamiento. e.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. d) Acetona. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2 para los blancos). las restantes deberán ser sometidas a un lavado por inmersión con acetona durante 3 min y luego las muestras se deben secar completamente antes de ser sometidas a la digestión. 5.5 g (+/. Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.foxitsoftware. g.5g/50ml de NDS) de sulfito de sodio en la solución en el vaso de digestión. Procedimiento 1. Si se procesan menos de 20 bolsas se agregan 100 ml/bolsa de la SDN.Universidad de Buenos Aires • Agitar y calentar la solución hasta ebullición para garantizar la estabilidad de la misma. El volumen mínimo de solución es de 1500 ml. Pesar aproximadamente 0. c. 6. En caso de no realizar el procedimiento secuencial para la determinación de fibra en detergente ácido (FDA) adicionar también 20 g (0. 2.com For evaluation only.9 y 7.05 g) de la muestra molida y secada a 65°C (MH1) (para alimentos con bajo contenido de agua solo es necesario molerlos) directamente en la bolsa de filtro. Exceptuando las muestras de forraje. Pesar dos bolsitas de filtro para determinar el blanco (Tbco1). La válvula se abre primero .Use un grado que esté libre de colores y que no tenga niveles elevados de evaporación. 4 mm) cuidando que el lado interno de las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado. 4. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Ajustar el rango de pH entre 6. b) Alfa-amilasa-. actividad = 340. b. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez que la solución está caliente. Si se realizará el procedimiento secuencial de determinación de FDA se debe omitir el agregado de sulfito de sodio. Preparación de la muestra (pueden procesarse un máximo de 24 bolsas por digestión).1. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml de solución de Detergente Neutro (SDN) dentro del vaso de digestión. colocar en el vaso digestor. a. Digestar durante 60 minutos.000 modificado Wohlgemuth Units / ml c) Sulfito de sodio. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.Na2SO3 anhidro. f. d. Calentar hasta 90-100°C la SDN dentro del vaso digestor antes de colocar las muestras. Pesar las bolsas de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.a.0. abrir la válvula y dejar salir la solución (precaución: la solución dentro del vaso está bajo presión). Agregar 4 ml de la alfa amilasa termoestable durante la digestión.

com For evaluation only. 1975. P. Inc.. 7. H.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. The Univ. Accessed 9/5/2007. Australia. Armidale. Se cierra el vaso y se prende el agitador por 3 – 5 min. Tbco2 (g): Promedio de pesos de bolsas para blanco final (luego de la digestión con el detergente) Referencias Ankom.a. . PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Cálculos aFDN (%bs) = 100 x {(T+aFDN) . Subject: Neutral Degerteng Fiber in Feeds.). Handbook No 379. McDonald and A. OR. Nutritional Ecology of the Ruminant. Digestion and Metabolism in the Ruminant. 2007.foxitsoftware. Van Soest P. Warner (Eds. Remover el exceso de acetona por presión. 1970. Se agrega c. Tbco1 (g): Promedio de pesos de bolsas para blanco inicial (previo a la digestión con el detergente). MS105 (g/g): coeficiente de materia seca a 105°C. Van Soest. Unit. 9. 1982. 2005. Forage fiber analisys. 2000 ml de agua destilada a 70-90°C con 4 ml de alfa amilasa. Luego completar el secado a 105°C durante 4 horas. J. J. C. Enfriar en desecador y pesar las muestras (T+aFDN) y los blancos (Tbco2). %bs: Porcentaje sobre base seca. Agric. and Van Soest. Goering. Una vez liberada la solución se debe volver a cerrar la válvula. Filter bags technique (ANKOM200). MH1 (g): peso de la muestra. T1 (g): Peso de la bolsa vacía. ARS. Lavar las bolsitas con acetona por inmersión durante tres minutos.[T1 x (Tbco2/Tbco1)]} / (MH1 x MS105)} Donde. Después de que la solución ha salido toda del vaso se abre la tapa del mismo. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I.. para luego abrir la tapa del vaso. Luego se libera el agua y se repite el procedimiento cuatro veces en total. I. P. USDA. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. 8. Corvallis. W. J. K. siendo solo en los dos primeros que se agrega la amilasa. T+aFDN (g): peso final de la bolsa con la fibra. O and B Brooks. Sacar las bolsas del digestor y sacar el exceso de agua de las mismas presionándolas.Universidad de Buenos Aires para liberar la presión. New England Publ.

Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente 2 g) (MH) 16. dejar enfriar y pesar (T+Cen). 13. 17. Principios La materia orgánica de la muestra es combustionada. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estar completamente secas. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 2 horas. Procedimiento 10.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.Universidad de Buenos Aires Cenizas 600ºC × 2 h – v1 Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos (según la referencia para alimentos y plantas). El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras. 15. 11.foxitsoftware. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200°C. Retirar las cápsulas en desecador. eliminándose como CO2. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos desde la tarde anterior. Registrar el peso de la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se debe retirar con pinza la cápsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado. regular la temperatura .com For evaluation only. por lo que el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (independientemente de su origen funcional en el material de origen). 12. 18. Cápsulas de porcelana Desecador Mufla Reactivos No hay. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un día para otro. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Regular la mufla a 600ºC y encenderla una vez que las cápsulas están en su interior. 15-30 min. Se retiran las cápsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.) 14. Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio. 19. Equipamiento • • • • Balanza de precisión. 20.

Nro. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Official Methods of Analysis. Cálculos Cen (%) = {[(T+Cen.) – T] / MH} × 100 Cen (%bs) = [(T+Cen. Arlington. VA: AOAC International. 21.foxitsoftware.05. Una vez pesadas las cápsulas y finalizada la determinación de MS 105°C se procede desde el punto 7 del presente protocolo. 942.com For evaluation only.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Se puede continuar con la determinación de cenizas a partir de las cápsulas preparadas con que se determinó materia seca a 105°C.Universidad de Buenos Aires en 110ºC. %bs Cen: MH (g): MS105 (%): T (g): % en base seca Cenizas Materia húmeda o tal cual % MS secada a 105ºC Tara Referencias AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). 1990. . de esta manera las cenizas se mantendrán secas.) – T] / (MH × MS105 / 100) × 100 Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100) Donde.

27. Cápsulas de porcelana Desecador Mufla Reactivos No hay.com For evaluation only.) 26. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente 2 g) (MH) 28. Registrar el peso de la cápsula (T) en una balanza analítica. 30. 15-30 min. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras. Regular la mufla a 550ºC y encenderla una vez que las cápsulas están en su interior. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos desde la tarde anterior. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estar completamente secas. por lo que el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (independientemente de su origen funcional en el material de origen). Principios La materia orgánica de la muestra es combustionada. 25.foxitsoftware. Se retiran las cápsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. Para ello se debe retirar con pinza la cápsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado. Procedimiento 22. 23. . PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.Universidad de Buenos Aires Cenizas 550ºC × 4 h – v1 Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos. eliminándose como CO2. Retirar las cápsulas en desecador. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC. dejar enfriar y pesar (T+Cen). Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio. 24. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 4 horas. Equipamiento • • • • Balanza de precisión. 31. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200°C. 29.

Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .foxitsoftware. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un día para otro.Universidad de Buenos Aires 32. Una vez pesadas las cápsulas y finalizada la determinación de MS 105°C se procede desde el punto 7 del presente protocolo. .com For evaluation only. regular la temperatura en 110ºC.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Nro. 1990. Official Methods of Analysis. 942. %bs Cen: MH (g): MS105 (%): T (g): % en base seca Cenizas Materia húmeda o tal cual % MS secada a 105ºC Tara Referencias AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists).05. VA: AOAC International. (%) = [((T+Cen) – T) / MH] × 100 Cen (%bs) = [((T+Cen) – T) / (MH × MS105 / 100)] × 100 Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100) Donde. Se puede continuar con la determinación de cenizas a partir de las cápsulas preparadas con que se determinó materia seca a 105°C. Arlington. Cálculos Cen. de esta manera las cenizas se mantendrán secas. 33.

Wawrzkiewicz y G. por lo que el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (independientemente de su origen funcional en el material de origen). MH) 40. Principios La materia orgánica de la muestra es combustionada. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC. Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio. Para ello se debe retirar con pinza la cápsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Equipamiento • • • • Balanza de precisión. Se retiran las cápsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos desde la tarde anterior. Procedimiento 34. eliminándose como CO2. 15-30 min. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.Universidad de Buenos Aires Cenizas 450ºC × 12 h – v1 Recopilación: M. 39. Registrar el peso de la cápsula (T) en una balanza analítica. Regular la mufla a 450ºC y encenderla una vez que las cápsulas están en su interior. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estar completamente secas. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente 2 g.) 38.foxitsoftware.com For evaluation only. Jaurena Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos. 41.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. . Cápsulas de porcelana Desecador Mufla Reactivos No hay. 35. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 12 horas. 37. 36.

(%) = [((T+Cen.) – T) / MH] * 100 Cen (%bs) = [((T+Cen.foxitsoftware.Universidad de Buenos Aires 42. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Retirar las cápsulas en desecador.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. dejar enfriar y pesar (T+Cen). de esta manera las cenizas se mantendrán secas. Cálculos Cen. 44. Una vez pesadas las cápsulas y finalizada la determinación de MS 105°C se procede desde el punto 7 del presente protocolo. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200°C. regular la temperatura en 110ºC. %bs Cen: MH (g): MS105 (%): T (g): % en base seca Cenizas Materia húmeda o tal cual % MS secada a 105ºC Tara .com For evaluation only. 45. Se puede continuar con la determinación de cenizas a partir de las cápsulas preparadas con que se determinó materia seca a 105°C. 43.) – T) / (MH * MS105 / 100)] * 100 Cen (%bs) = Cen (%) * (MS105 / 100) Donde. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un día para otro.

com For evaluation only. Bolsitas filtrantes .Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Manipular la acetona con la campana funcionando evitar la inhalación y el contacto con la piel. Sellador por calor. Solución de Detergente Ácido (SDA): por cada litro de solución • 20 g bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB o Cetrimida) • 27. • El CTAB puede irritar las mucosas.Universidad de Buenos Aires Fibra Detergente Ácido (FDA) – v1 Por equipo ANKOM Recopilación: M. Acetona. Reactivos a. Precauciones • La acetona es altamente inflamable. Use un grado que esté libre de colores y que no tenga niveles elevados de evaporación. Principios Se denomina fibra insoluble en detergente ácido (FDA) al residuo fibroso que queda luego de disolver el contenido celular y las hemicelulosas de la FDN (fibra insoluble en detergente neutro) empleando detergente ácido. . • Asegurarse que el tamaño de partícula de la muestra sea de 1 mm. Wawrzkiewicz y G.foxitsoftware.7 ml ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado. • Usar guantes y la campana cuando manipule el ácido sulfúrico. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . “Al sulfúrico no le gusta que lo mojen”. el cuál está constituido fundamentalmente por celulosa y lignina .ANKON Technology F57 filter bags Desecador. Usar máscara y guantes cuando esté manipulando este reactivo siempre bajo campana. b. Sea muy cuidadoso cuando agregue el ácido sulfúrico al agua.ANKON 200/220 FIBER ANALYZER Balanza de precisión. Equipamiento • • • • • Aparato de digestión. Jaurena Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos.

g. e. 8. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Pueden procesarse un máximo de 24 bolsas por vez. Pesar 0.com For evaluation only. 3. 4 mm) cuidando que el lado interno de las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado. Completar el secado a 105°C durante 4 horas. Después de 60 minutos interrumpir la agitación y el calentamiento. para luego abrir la tapa del vaso.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 7. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2 para los blancos). En caso de utilizar el procedimiento secuencial para la determinación seguir el protocolo desde el punto siguiente "g") b. Enfriar en desecador y pesar las muestras (T1+FDA) y los blancos (Tbco2) . Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c. Una vez liberada la solución se debe volver a cerrar la válvula. d. La válvula se abre primero para liberar la presión.0.foxitsoftware. Pesar la bolsa de filtro (T1) y llevar a cero la balanza. Se agrega aproximadamente 2000 ml de agua destilada a 70-90°C. 5. Lavar las bolsitas con acetona por inmersión durante tres minutos. Pesar una bolsa de filtro y digerirla para determinar el blanco (Tbco1). Calentar hasta 90-100°C la solución de detergente dentro del vaso digestor antes de colocar las muestras. Luego se libera el agua y se repite el procedimiento dos veces más o hasta obtener pH neutro en el agua de lavado descartada. colocar en el vaso digestor. Remover el exceso de acetona por presión. c. 2. 4. Precaución: la solución dentro del vaso está bajo presión. Después que la solución ha salido del vaso se abre la tapa del mismo.a. Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas. Sacar las bolsas del digestor y sacar el exceso de agua de las mismas presionando con los dedos.5g (+/.05 g) de la muestra molida y secada a 65ºC (MH1). Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez caliente la solución. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml de solución de Detergente Ácido dentro del vaso de digestión.Universidad de Buenos Aires Procedimiento 1. Se cierra el vaso y se prende el agitador por 5 minutos. Cerrar y sellar el vaso de digestión. El volumen mínimo de solución es de 1500 ml. Preparación de la muestra a. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. f. abrir la válvula y dejar salir la solución. Si se procesan menos de 20 bolsas se agrega la solución SDA a razón de 100 ml/bolsa. 6.

Forage fiber analices. Van Soest. Official Methods of Analysis. ARS. Agric. Unit. Nutritional Ecology of the Ruminant. Pag. Handbook No 379. J.18. VA: AOAC International. Van Soest P. Goering.com For evaluation only. 82. Australia. USDA. H. 1982. P.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Arlington. J. Corvallis.. Nro. 1990. P. K. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .Universidad de Buenos Aires Cálculos FDA (%bs) = 100 x {(T1+FDA) .).. Digestion and Metabolism in the Ruminant.foxitsoftware. W. Inc. T1 (g): peso de tara de la bolsa T1+FDA (g): peso final de la bolsa con la fibra. The Univ. 1975. %bs: Porcentaje sobre base seca. Acid detergent fiber in feeds. Tbco1 (g): Promedio de pesos de bolsas para blanco inicial (previo a la digestión con el detergente). I Warner (Eds. Filter bag technique (ANKOM200). Tbco2 (g): Promedio de pesos de bolsas para blanco final (luego de la digestión con el detergente) Referencias Ankon. O and B Brooks. OR. 2005. AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). 1970. J.[T1 x (Tbco2/Tbco1)] / (MH1 x MS105)} Donde. McDonald and A. and Van Soest. Armidale. New England Publ. C. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. Ankon Technoligy. 973. MH1 (g): peso de la muestra MS105 (g/g) : coeficiente de materia seca a 105°C. .

Argentina).2%N. pureza: 99.33% N. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .a. Precauciones Hay que ser especialmente cuidadoso en la manipulación de los digestores y el ácido sulfúrico concentrado. utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor. Procedimiento Pesar una alícuota de la muestra y registrar el peso (MH1. por lo que es necesario manipularlos con los recaudos correspondientes. 1996 – 4. 971106.65.6. c. Dado que la cantidad de N puesta a digestar es conocida se espera recuperar el 100%. sulfato de amonio o fosfato diácido de amonio para chequear el proceso completo de digestión y destilación. pureza: 99. 0.14. PM = 182. 21. Para chequear el método completo estándar de referencia consultar NIST Nº194 (National Institut of Standards and Technology). Proceder de acuerdo a las determinaciónes de N por Kjedahl (Prtcl NT 01) o por método de Dumas (Prtcl NT 02). L-Lisina monoclorhidrato (C6H14N2O2HCl.15% N) o Lisina clorhidrato de alta pureza (e.com For evaluation only. PM: 132. Biopack. Jaurena y M. Se asume que la técnica es satisfactoria si se recupera más del 98% del N. • Lisina (Art. Catalogo L-5626: C6H14N2O2. Principios Se emplean lisina.3%N.HCl.2.Universidad de Buenos Aires Recuperación de N (AOAC. Se trata de materiales higroscópicos. L-lisina Sigma Nr. . 15. 15.g.foxitsoftware. PM: 182.9%.9%. Características de los patrones provistos por el Promefa: • Sulfato de amonio (Art.1 g de NH4H2PO4 o lisina).PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. pureza mínima 98%). H8N2O4S. 961506. Biopack. El resto de los reactivos son los mismos de la determinación de N por Kjedahl (Prtcl NT 01).09) – v5 Recopilación: G. Equipamiento • • • • • Balanza analítica Tubos de digestión Erlenmeyers Equipo digestor y destilador para Kjeldahl Bureta Reactivos Usar NH4H2PO4 certificado (12. Argentina). Wawrzkiewicz Alimentos de aplicación Sólo aplicable sobre los estándares apropiados.

bs) = 15.4 x N(SO4H2) NT (%.999 T1 (ml): Tbco. bs) / NTE (%. %.999 NTE (Lisina.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. C6H14N2O2HCl. %. bs): MH1 (g): MS105 (g/g): Titulación con SO4H2 de la muestra Titulación con SO4H2 del blanco Normalidad del SO4H2 de titulación N total esperado para los reactivos provistos N total medido en la alícuota ensayada Peso de la muestra Coeficiente de materia seca a 105ºC .) x 1.foxitsoftware. bs): NT (%. bs) = -----------------------------------------------MH1 x MS105 % Recuperación de N = NT (%. (ml): N(SO4H2)(N): NTE (%.2 x MS105 × 0. bs) × 100 Donde. NTE (H8N2O4S.com For evaluation only.3 × MS105 × 0. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .Universidad de Buenos Aires Cálculos (T1 – Tbco. bs) = 21.

Estufa termorregulada a 105ºC. 10. aluminio o acero inoxidable.). Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estar completamente secas. Procedimiento 9.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.com For evaluation only. Cápsulas de porcelana. Alimentos de aplicación Sólo aplicable sobre los estándares apropiados. Se debe realizar una determinación en duplicado para cada uno de los patrones. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Reactivos No hay.Universidad de Buenos Aires Determinación del porcentaje de materia seca de los patrones Se realizará la determinación del porcentaje de materia seca de los patrones (sulfato de amonio y lisina) para luego realizar las correcciones necesarias. Retirar las cápsulas de la estufa en desecador y dejar enfriar (aprox. Poner las cápsulas con muestra en una estufa regulada a 105°C y dejar durante 4 . MH1) 14. consecuentemente el residuo remanente permite estimar gravimétricamente el contenido de materia seca (MS105) del material puesto a secar inicialmente. Equipamiento • • • • Balanza de precisión. Colocar en la cápsula una alícuota del patrón de peso conocido (aproximadamente 500 miligramos. 12. Principios El agua se evapora por encima de los 100ºC.foxitsoftware. 15-30 min. Para ello se debe retirar la cápsula del desecador con pinza y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado (T1) 13. 11. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos desde la tarde anterior. Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio. Prestar atención al manejo de las estufas para evitar el ingreso de muestras húmedas nuevas en momentos cercanos a la finalización del secado. dado que pueden afectar la determinación. Registrar el peso de la cápsula en una balanza analítica. Desecador.

1991. 1965. R. GA: Micro-Macro Publishing. NY: Academic Press Incorporated. Benton.Universidad de Buenos Aires horas o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche. Athens. Cálculos MS105 (%) = [((T1+MS1) – T1) / MH1] × 100 MST (%) = MS105 (%) MH1 (g): MS105 (%): MS1 (g): MST (%) T1 (g): Material tal cual. Arlington. Bradstreet. Retirar de la estufa en desecador. Jones. 1995. Referencias AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Official Methods of Analysis.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. New York. VA: AOAC International. dejar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar (T1+MS1). MS obtenida luego de secar a 105ºC. J. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . no más). .com For evaluation only. MS secada a 105ºC. Materia seca total (%) Peso del recipiente empleado para el secado a 105ºC. 15.foxitsoftware. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen.

634 g/l (a 20°C) o 24. Use un grado que esté libre de colores y que no tenga niveles elevados de evaporación .00 N. • Usar guantes y la campana cuando manipule el ácido sulfúrico. Principios El residuo de la fibra ácido detergente consiste principalmente de lignocelulosa. Agregar 1200 g de ácido sulfúrico a 440 ml de agua destilada. “Al sulfúrico no le gusta que lo mojen”. La cutina también es retenida y consecuentemente se toma como si fuera parte de la lignina.foxitsoftware. • Estufa de secado regulada a 105ºC. Precauciones • La acetona es altamente inflamable. Acetona a. El grado del ácido sulfúrico es de 1.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Mezclar manualmente para estandarizar el reactivo.Universidad de Buenos Aires Lignina en detergente ácido con ácido sulfurico (LDAAS) – v2 Por equipo ANKOM Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos. Sea muy cuidadoso cuando agregue el ácido sulfúrico al agua. • Bolsitas filtrantes—ANKON F57 Filter bags • Desecador • Vasos de precipitado Reactivos 16. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Ácido sulfúrico (72% peso en peso) a. quedando la lignina y la ceniza insoluble en ácido en el residuo final recuperado. Manipular la acetona con la campana funcionando evitar la inhalación y el contacto con la piel. Equipamiento • Balanza de precisión. la solución de ácido sulfúrico (72%) disuelve la celulosa. 17.com For evaluation only.

d. 4 mm) cuidando que el lado interno de las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado. 21. 1 En el protocolo sugerido por ANKOM Technology (2005) indica emplear “agua de grifo” sin indicación de temperatura. Considerando la variabilidad en calidad de agua disponible entre los laboratorios participantes pareció mas conveniente utilizar el procedimiento anterior.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Agitar 30 veces cada 30 min presionando con el vaso de precipitado de 500 ml. Complete el secado a 105 °C durante 4 horas.com For evaluation only. Enjuagar con acetona durante 3 min para luego secar las bolsas a temperatura ambiente. 20. 250 ml) de H2SO4 al 72 % p/v. Pesar los crisoles para los blancos (T3) y llevar a la mufla junto con las muestras. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c. e. 23.Universidad de Buenos Aires Procedimiento 18.a.05 g) de la muestra molida y secada a temperatura ambiente (MH1). 19. c. Luego poner la bolsa en una cápsula previamente pesada (T2) y llevar a 525°C en la mufla durante 3 horas. Preparación de la muestra a. 22. Poner un vaso de 500 ml dentro del vaso de 1 l para que las muestras queden sumergidas en el ácido sulfúrico. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Pesar la bolsa de filtro (T1) y llevar a cero la balanza. g. Pueden procesarse un máximo de 24 bolsas por vez. h. luego pesar (T2+Cen). En caso de utilizar el procedimiento secuencial seguir el protocolo desde el punto "b)" del procedimiento para determinar FDA (Prtcl FDA 01). Pesar una bolsa de filtro vacía para usar como blanco e incorporarla en el procedimiento junto con las muestras.0. Poner las 24 bolsas con muestra digerida en solución DA y las bolsas “blanco” dentro de un vaso de precipitados de 1 litro y agregar suficiente cantidad (aprox. Determinar FDA con el “ANKON Fiber analyzer” (Prtcl FDA 01 desde el punto “2” al “7”). Después de tres horas sacar el ácido sulfúrico y enjuagar con agua destilada (90100ºC1) para remover los restos del ácido. Pesar 0. f. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2 para los blancos). Importante: las bolsas deben estar completamente secas y a temperatura ambiente antes de agregar el ácido. Repita este procedimiento hasta que el pH esté neutro.foxitsoftware. Enfriar en desecador y pesar la bolsa (T1+LDAyCen). . b. Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.5g (+/. luego registrar el peso (T3+Cen).

J. Official Methods of Analysis. ANKOM Technology. Inc. Nro. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . McDonald and A. The Univ. 82. New England Publ. 1982. O and B Brooks. Digestion and Metabolism in the Ruminant. Handbook No 379. 1990.. P. VA: AOAC International. Referencias Ankom. Method for determining acid detergent lignin in beakers. A (g): cenizas insolubles de la muestra MH1 (g): peso de la muestra MS105 (g/g): coeficiente de materia seca a 105°C T1 (g): tara del sobre para muestras T1+LDAyCen (g): peso final de la bolsa con la lignina y las cenizas T2 (g): tara del crisol para muestras T2+Cen (g) peso final del crisol mas las cenizas de la muestra T3 (g): tara del crisol para blancos T3+Cen (g) peso final del crisol mas las cenizas del blanco Tbco1 (g): tara del sobre en blanco inicial Tbco2 (g): tara del sobre en blanco final. Arlington. Australia. 1975. Goering. H. 1970. Unit. J. 973.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Corvallis. Van Soest.1)] Donde. Forage fiber analices. Pag. J. USDA.com For evaluation only. .foxitsoftware. and Van Soest.. 2005. OR. ARS.18. Armidale. P.). Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. K. Nutritional Ecology of the Ruminant. Van Soest P. AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Agric. I Warner (Eds. C.Universidad de Buenos Aires Cálculos LDA (%bs) = 100 x {T1+LDAyCen – [T1 x (Tbco2/Tbco1) – A] / (MH1 x MS105)} A = (T2+Cen – T2) – [T1 x (T3+Cen – T3) / Tbco.

26.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware. ésta técnica no elimina toda el agua contenida en la muestra y consecuentemente se trata de una MS parcial que elimina aproximadamente el 95% de la humedad (Harris. silajes). dejarlas enfriar sobre una mesada hasta que se equilibren con el ambiente y pesarlas (T1+MS1). Llevar a estufa a una temperatura de 65ºC durante 48 h o hasta peso constante. El contenido de materia seca parcial (MSp) de la muestra se obtiene luego de haber eliminado por evaporación parcialmente el agua y equilibrado dicha muestra con la humedad ambiente. Colocar una alícuota de la muestra en el recipiente previamente pesado y registrar el peso de la misma habiendo llevado a cero la balanza con el recipiente (MH1). Bandejas de aluminio. Equipamiento • • • Balanza de precisión. 27. Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio.Universidad de Buenos Aires Materia seca parcial – v2 Alimentos de aplicación Forrajes y alimentos con más de un 20% de humedad. 1970). Principios Este procedimiento se utiliza para preparar las muestras con alto contenidos de humedad (>20%) y dado que en general tiene un mínimo efecto sobre la composición química permite almacenar las muestras y efectuar posteriormente los análisis necesarios. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Registrar el peso del recipiente en el cual se colocará la muestra a secar (T1) 25. La muestra así secada debe ser molida y preservada en un envase de vidrio o plástico . La muestra debe quedar uniformemente esparcida sobre el recipiente para permitir una rápida evaporación del agua.g.com For evaluation only. Reactivos No hay. el secado en estufa eliminará los compuestos volátiles junto con el agua y consecuentemente la determinación de humedad por esta vía estará sobrestimada. En alimentos con alto contenido de sustancias volátiles (e. Estufa con termorregulación a 65ºC. Procedimiento 24. Retirar las muestras de la estufa. 28. Dado que el agua se evapora a 100°C.

Cálculos MS65 (%) = [((T1+MS1) – T1) / MH1] × 100 Donde. L. MS obtenida luego de secar a 65ºC por 48 h (g) Estimación del contenido de MS parcial luego de eliminar el agua en estufa a 65ºC.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 1970. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .com For evaluation only.Universidad de Buenos Aires con un cierre que no permita la entrada de aire. T1 (g): MH1 (g): MS1 (g) MS65 (%): Peso del recipiente vacío.foxitsoftware. Fl (USA). Material húmedo o tal cual (g). Referencias Harris. Gainesville. . Compilación de datos analíticos y biológicos en la preparación de cuadros de composición de alimentos para uso en los trópicos de America Latina. University of Florida. E.

consecuentemente el residuo remanente permite estimar gravimétricamente el contenido de materia seca (MS105) del material puesto a secar inicialmente. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estar completamente secas. dado que pueden afectar la determinación. Para el caso de muestras secas (humedad <20%) es la única determinación que se requiere para estimar el contenido de materia seca total (MST). siendo complementaria a la de 65°C efectuada sobre las muestras húmedas. Se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos desde la tarde anterior. 30.). PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Registrar el peso de la cápsula en una balanza analítica. Cápsulas de porcelana. 32.Universidad de Buenos Aires Materia Seca Total – v2 Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos con bajo contenido de humedad (<20%) y aquellos previamente acondicionados por secado parcial (Prtcl – MS Parcial 01).foxitsoftware.g. N soluble). a excepción de cenizas. Retirar las cápsulas de la estufa en desecador y dejar enfriar (aprox. Procedimiento 29. 15-30 min. Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio. Principios El agua contenida en los alimentos se evapora por encima de los 100ºC.com For evaluation only.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Ésta determinación permite estimar el contenido de agua del alimento. almidón. En forma similar se procesan las muestras de forraje fresco o conservado húmedo que se muelan con hielo seco y que ingresen a la secuencia de análisis como material fresco (e. El material una vez sometido al secado en estufa a 105ºC no es apropiado para efectuar determinaciones analíticas adicionales. Para ello se debe retirar la . Desecador. 31. Prestar atención al manejo de las estufas para evitar el ingreso de muestras húmedas nuevas en momentos cercanos a la finalización del secado. aluminio o acero inoxidable. Reactivos No hay. Estufa termorregulada a 105ºC. Equipamiento • • • • Balanza de precisión.

Referencias AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .com For evaluation only. VA: AOAC International. AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Correcciones 2007 Mayo.15. Retirar de la estufa en desecador. no más). VA: AOAC International. MS obtenida luego de secar a 65ºC por 48 h MS secada a 105ºC MS obtenida luego de secar a 105ºC Estimación del contenido de MS luego de eliminar el agua en estufa a 65ºC. Peso del recipiente empleado para el secado a 105ºC.foxitsoftware. 1990. Arlington. dejar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar (T2+MS2). Nro. Official Methods of Analysis. G. Cálculos MS105 (%) = [((T2+MS2) – T2) / MH2] × 100 MST (%) = MS65 (%) × MS105 (%) / 100 Donde. 1990. 15th Edition. Poner las cápsulas con muestra en una estufa regulada a 105°C y dejar durante 4 horas o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente 2 g. 130.Universidad de Buenos Aires cápsula del desecador con pinza y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado (T2) 33. Official Methods of Analysis. 167. . MH2) 34. Nro. Shirley Furtado y Gabriela Arias Bollati. materia seca total (%) Peso del recipiente empleado para el secado a 65ºC. 35. Arlington.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. MS65 (%) = {(T1+MS1) – T1] / MH1} × 100 MH1 (g): MH2 (g): MS1 (g): MS105 (%): MS2 (g): MS65 (%): MST (%) T1 (g): T2 (g): Materia húmeda o tal cual Material tal cual o muestra de material húmedo previamente secado a 65ºC.03.

mientras que la lisina y el ácido nicotínico son usados para chequear el proceso de digestión. mientras se reduce el N a amonio. Principios En este paso se oxida la materia orgánica a CO2 y H2O. El procedimiento para la determinación de los blancos es igual a la de las muestras pero sin la colocación de la misma y debe ser reconfirmada frecuentemente. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Hay que ser especialmente cuidadoso en la manipulación de los digestores y el ácido sulfúrico concentrado.com For evaluation only. La recuperación porcentual del nitrógeno agregado en el patrón indica la eficiencia de la técnica (se esperan valores de recuperación mayores al 98%).Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Este procedimiento debe ser incorporado como rutina a modo de control del funcionamiento de la técnica. Precauciones Básicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades de laboratorio.foxitsoftware. Una vez finalizada la digestión. Una sal de amonio puede ser usada para testar el proceso de destilación de la técnica.Universidad de Buenos Aires Nitrógeno Total (Kjeldahl) – v1 Alimentos de aplicación Todo tipo de forrajes y alimentos. Equipamiento • • • • • Balanza analítica Tubos de digestión Erlenmeyers Equipo digestor y destilador para Kjeldahl Bureta Reactivos Ácido Bórico al 2%: a) Hervir 20 g de ácido bórico en 500 ml de agua destilada para solubilizarlo b) Agregar 250 ml de agua fría c) Cuando llega a temperatura ambiente agregar: i) 10 ml de Verde de Bromocresol (100 mg / 100 ml etanol) ii) 7 ml de Rojo de Metilo (100 mg / 100 ml etanol) d) Llevar a 1 litro en matraz con agua destilada . utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor. se tiene en solución: MO CO2 + H2O N (NH4)2SO4 El éxito de la técnica de determinación de nitrógeno puede controlarse mediante el uso de sustancias patrón de concentración conocida de nitrógeno. Se deberán realizar blancos para determinar posibles aportes de nitrógeno por los reactivos y materiales empleados.

PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.14 × SO4H2 (ml) .1 N valorado o comprado (T1) ii) Preparar 3 erlenmeyers con: (1) 10 ml SO4H2 a valorar (2) agregar 30 ml agua destilada (3) agregar 3 gotas de fenolftaleina (4) titular con NaOH 0.Universidad de Buenos Aires Hidróxido de Sodio: a) 40 g NaOH (grado reactivo) / 100 ml agua :::: 800 g / 2000 ml ::: 1600 g / 4000 ml Acido sulfúrico 0.1 N Se emplean 6 ml SO4H2 (96-98% grado reactivo)/ 2000 ml agua destilada Valoración con Biftalato de potasio i) Preparar 3 erlenmeyers con: (1) 200 mg de Biftalato de potasio (registrar el peso exacto PBif) (2) agregar 30 ml agua destilada (3) agregar 3 gotas de fenolftaleina (4) titular con NaOH 0. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . b) Titular el ácido a valorar.23 x 10 Valoración con patrón primario (Trometamina.1 N valorado o comprado (T2) iii) Cálculo de la valoración: ml (T2) x mg (PBif) N (SO4H2) = ----------------------------------------ml (T1) x 204. a) Disolver el patrón primario en agua y agregar 2 o 3 gotas del indicador.foxitsoftware. tris PM: 121. mg Trometamina (mg) N (SO4H2) = ------------------------------------121.14) Usar verde de bromocresol como indicador (azul en medio básico. amarillo en medio ácido).com For evaluation only.

8) La digestión de las muestras se llevará a cabo hasta que la solución dentro de los tubos quede de color verde translúcido (dependiendo de las muestras y equipo. 9) Retirar los tubos con la gradilla del block digestor y dejar enfriar sin retirar la tapa recolectora de vapores. Al enfriarse la solución se torna incolora y translúcida 10) Agregar 20 ml de agua destilada en cada tubo y dejar enfriar agitar 2 ó 3 veces cada 5 minutos para evitar que se formen cristales grandes de Sulfato de potasio. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . se debe elevar la temperatura del digestor a razón de 100°C cada 30 minutos hasta los 400°C y a partir de entonces contar las 2 horas de digestión.Universidad de Buenos Aires Procedimiento Digestión 1) Pesar un alícuota de la muestra y registrar el peso (MH1) (0.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.1 g MS 65°C carne)2 2) Colocar la muestra en tubos de digestión 3) Agregar 15 g de Sulfato de potasio (SO4K2) 4) Agregar 1 ml de Sulfato de cobre 10% (SO4Cu 10%) 5) Agregar 25 ml de ácido Sulfúrico concentrado (SO4H2 concentrado) 6) Encender el digestor a 400°C 7) Activar el mecanismo necesario para evitar el escape de vapores al ambiente. puede tomar entre 30 min a 4 h).5 g MS 65°C forrajes y 0. 11) Dejar enfriar para comenzar la destilación Destilación 1) Preparar tantos erlenmeyer como tubos para destilar haya preparados con 25 ml de Ácido Bórico 2% 2) Colocar un erlenmeyer con ácido bórico 2% en la salida del refrigerante del equipo con el final del tubo de vidrio sumergido en la solución (así quedará hasta inmediatamente antes de apagar la bomba generadora de vapor para concluir el destilado) 3) Colocar el tubo con la muestra digestada en el destilador asegurándose que el cierre superior con la goma sea completo (se recomienda presionar en sentido ascendente desde el tubo) 4) Dosificar el Hidróxido de Sodio 40% hasta neutralizar la solución del tubo (el color del la solución del tubo pasa de incoloro-blanco a marrón o celeste en caso de exceso de NaOH) 2 En caso de ser muestras líquidas o de elevado contenido de agua (>30% de humedad.com For evaluation only. .foxitsoftware.

1995. Jones. 1991. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. Bradstreet. VA: AOAC International. 7) Retirar el tubo del equipo cuidando los goteos de solución desde la goma y el erlenmeyer 8) Una vez destilados todos los tubos se debe lavar el frente del equipo de las salpicaduras de NaOH y vaciar y enjuagar la bomba generadora de vapor desde el robinete superior y descargando la suciedad hacia la canaleta trasera de la mesada. GA: Micro-Macro Publishing. R. 6) Apagar la bomba generadora de vapor. B. 150 ml en el erlenmeyer. (ml): N SO4H2 (N): MH1 (g): MS105 (g/g): * 6.1 N hasta cambio de color verde a rosa intenso (mantener siempre el mismo criterio de color final en la titulación de todas las muestras). Athens.25 Titulación con SO4H2 de la muestra Titulación con SO4H2 del blanco Normalidad del SO4H2 de titulación Peso de la muestra Coeficiente de materia seca a 105ºC El valor asume que todo el nitrógeno del alimento se encuentra en forma de proteína y que está presente en ella en un 16% Referencias AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists).25* Donde. . 1965.) x 1. NY: Academic Press Incorporated. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Benton.Universidad de Buenos Aires 5) Destilar hasta recoger c. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Arlington.4 x N SO4H2 Nt (%bs) = -----------------------------------------------MH1 x MS105 PB (%bs) = Nt (%bs) x 6. New York.a. J. Official Methods of Analysis.foxitsoftware.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. (T1) Cálculos (T1 – Tbco. Titulación • Con Ácido Sulfúrico 0.com For evaluation only. T1 (ml): Tbco.

com For evaluation only.foxitsoftware.Universidad de Buenos Aires .PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .

e. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Los análisis (e.g. i. por lo que el contenido de agua puede variar entre laboratorios y aún para un mismo laboratorio a lo largo del tiempo. establecen un equilibrio con la humedad ambiente. 65ºC o en el caso de las muestras del Promefa tal como llegan al laboratorio). Procedimiento A partir de los procedimientos explicados en el Prtcl MS Total 01 se puede estimar la materia seca obtenida por secado a 105ºC (MS105) de cada muestra con la cual se procederá a corregir los valores analíticos obtenidos sobre las muestras parcialmente secas (MS 65º y equilibradas con la humedad ambiente del laboratorio).foxitsoftware.Universidad de Buenos Aires Protocolos misceláneos Corrección de los resultados analíticos por Materia Seca Total – v2 Alimentos de aplicación Todas las muestras de las pruebas interlaboratorios del Promefa (previamente secadas a 65ºC). aFDN. Una alícuota de la muestra recibida se usará para estimar la MS105 (secando a 105ºC) Una vez obtenidos los resultados analíticos y la MS105 se procederá a efectuar la corrección.com For evaluation only. Principios Las muestras de alimento. aplicando la siguiente fórmula (ejemplificado para aFDN): aFDN (g/kg MS bs) = aFDN (g/kg MS bps) / MS105 (g/kg MH2) / 1000 donde: aFDN (g/kg MS bs): contenido de aFDN expresado en base seca (bs) aFDN (g/kg MS bps): contenido de aFDN expresado sobre base parcialmente seca (bps) MS105 (%): materia seca obtenida luego de secar la muestra a 105ºC de acuerdo al Prtcl MS Total 01 Ejemplo . Los resultados analíticos se deben reportar sobre base seca total para evitar las variaciones debidas a la humedad residual contenidas en las muestras. PB) se llevan a cabo sobre las muestras parcialmente secas (base parcialmente seca [bps].

2. 3.953 MS105 (g/g) 0.foxitsoftware. PROMEFA Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .9513 0. Se toma una alícuota de la muestra a analizar y se procede de acuerdo al Prtcl MS Total 01 Repetición r1 r2 T2 (g) 8.014 2. del siguiente modo: 450 (g aFDN/kg MS bps) / 0.9558 g/g MH2 (parcialmente seca). 0. i.e.941 MS2 (g) 1. bps) y el resultado es 450 g de aFDN por kg de muestra parcialmente seca (bps).988 MH2 (g) 2.2 .Universidad de Buenos Aires 1. Consecuentemente se pesan aproximadamente 500 mg de la muestra parcialmente seca (base parcialmente seca. Simultáneamente con lo hecho en el punto 1.918 9. Cálculo de la materia seca a 105ºC promedio.com For evaluation only. se inicia una corrida analítica para determinar el contenido de aFDN.9558 = 831 g/kg MH Entonces: aFDN (g/kg MS bst) = 470. Se corrige el resultado analítico (bps) por el contenido de MS105 para obtener el valor en base seca total (bst).002 7. 4. Resultados: MST = MS65 × MS105 Si MS65 fuese 870 g/kg MH MST = 870 × 0.0 aFDN (g/kg MH) = 391.034 MS2 + T2 (g) 9.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.8 aFDN (g/kg MS bps) = 450.9602 T2: tara MH2: peso de la muestra parcialmente seca MS2: peso de la muestra luego de haber sido secada a 105ºC.8 (g aFDN /kg MS bst) 5.916 1.9558 (g/g bps) = 470.

La valoración comercial de los alimentos para animales requiere de métodos objetivos.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Tablas del NRC) dado que éstos tampoco está claramente explicado como fueron obtenidos. entendido como la combinación de consumo. La aplicación de estas ecuaciones presenta varias limitaciones que deben ser tenidas en cuenta: • Aún cuando se trate de alimentos similares. repetibles y económicos que permitan efectuar predicciones sobre la capacidad de los alimentos para suministrar los nutrientes y la energía necesarios para cubrir los distintos procesos vitales de los animales y preservar su estado de salud y la calidad de los productos obtenidos a partir de ellos. Existen dos alternativas para predecir el aporte energético de los alimentos a partir de muestras en el laboratorio: sistemas de valoración in vitro y análisis químicos. • En las mayoría de los casos no hay evidencia de valoraciones independientes de las mismas. es que la predicción de la concentración energética de los alimentos es un paso crítico del sistema de valoración de alimentos. Es aceptado que la productividad animal lograda como consecuencia del suministro de un dado alimento constituye el criterio último para valorar un alimento. • . • No siempre está específicamente establecido en que forma se obtuvieron los datos analíticos para su calibración (e. No es sencillo realizar constataciones respecto a valores de referencia publicados (e.com For evaluation only. Por las razones antes expuestas. FDN o FDNMO) o bajo que condiciones de manejo se efectuaron los experimentos de calibración in vivo.g. El valor nutritivo (VN. • En su gran mayoría se trata de ecuaciones obtenidas por instituciones extranjeras en condiciones no necesariamente comparables.g. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía .Universidad de Buenos Aires Modelos propuestos para predecir la concentración energética de los alimentos para rumiantes – v1 Introducción Un objetivo primordial de los sistemas de evaluación de alimentos para animales es predecir con razonable exactitud la producción animal a partir del suministro de los alimentos analizados. Las ecuaciones son específicas para cada tipo de alimento y su exactitud es función de la de los análisis de los laboratorios y de los experimentos in vivo sobre los cuales fueron ajustadas. su aplicación no deja de ser una extrapolación respecto a los datos originales sobre los cuales se ajustaron. Los primeros en sus distintas variantes presentan buenas asociaciones con los valores obtenidos a partir de ensayos in vivo. Las determinaciones químicas del laboratorio son empleadas para predecir la digestibilidad de los alimentos en base a relaciones empíricas descritas por ecuaciones que suelen basarse en las asociaciones negativas de la digestibilidad con el contenido de la fibra de los alimentos. digestibilidad y eficiencia en el uso de los nutrientes) se relaciona estrechamente con la producción animal y es sobre este principio (y sobre las asociaciones empíricas descritas entre los componentes del VN y las determinaciones efectuadas en el laboratorio) que se basa el funcionamiento de los sistemas de alimentación animal (congruencia entre la valoración de alimentos y la predicción de los requerimientos animales). pero esta situación de valoración ideal está estrictamente circunscripta al trabajo de investigación desarrollado en instituciones especializadas.foxitsoftware.

En general.82 EM = 3. sobre base seca). vainas.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.4 Mcal/kg MSD EM = ED × 0. son alimentos con baja concentración energética. así como otros productos con más de 18% de fibra cruda o más de 35% de pared celular (FDN.com For evaluation only. Ejemplo de alimentos groseros: cáscaras. Ecuaciones de predicción para las distintas clases de alimentos Los alimentos se clasifican en base a su composición (fundamentalmente por su contenido de fibra y proteína) y uso en la formulación de dietas (Jaurena and Danelón. Ejemplo de forrajes secos: heno. paja. 2001). .Forrajes secos y alimentos groseros Todos los forrajes y materiales groseros cortados y secados. En las secciones que siguen se presentan las definiciones de las categorías de alimentos que aportan energía junto con las ecuaciones propuestas para estimar el contenido de EM (Mcal/kg MS) de los alimentos. Clase I .foxitsoftware.Universidad de Buenos Aires No obstante lo anterior la falta de normalización respecto al uso de éstas formulas ha llevado a que distintos laboratorios suelan emplear fórmulas diferentes para predecir el valor energético de alimentos similares llevando en consecuencia a introducir una fuente de error adicional y espuria. rastrojos. las “clases” pueden resultar arbitrarias y en ciertos casos un alimento es asignado a una clase de acuerdo a su uso en la práctica corriente. Es deseable que en el futuro cercano se cuenten con validaciones experimentales de las mismas o desarrollo de ecuaciones específicas para nuestras condiciones. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Para las conversiones de las unidades de energía se emplearon los siguientes supuestos: DMS = TND ED = DMS × 4. Con el objeto de evitar esta fuente de error es que en este documento se proponen una serie de ecuaciones que fueron seleccionadas en base al consenso de los participantes del PROMEFA.6 × TND o DMS Donde %FDA: %FDN: %LDA: %TND: DMS: ED: EM: MS: MSD: fibra insoluble en detergente ácido expresada en g/100 g MS fibra insoluble en detergente neutro expresada en g/100 g MS lignina detergente ácido expresada en g/100 g MS total de nutrientes digestibles expresada en g/100 g TND Digestibilidad de la materia seca (kg/kg MS) Energía digestible (Mcal/kg MS) Energía metabolizable (Mcal/kg MS) Materia seca Materia seca digestible. Como en cualquier clasificación.

91 × %FDA] Clase II .foxitsoftware.789 Log10 [LDA/FDA×100]) – 12.Alimentos energéticos Alimentos con menos de 20% de proteína bruta (PB) y 18% de fibra cruda (FC) o 35% de FDN (sobre MS).025 × %FDA Clase IV . 1970) EM (Mcal/kg MS) = 3. 1976) EM (Mcal/kg MS) = 3.50 .473 – 0.Pasturas y forrajes frescos Agrupa a todos los alimentos forrajeros consumidos en forma directa (pasturas y verdeos) o cortados y suministrados en fresco. aún cuando estos productos se encuentren ensilados.. Clase III .)) EM (Mcal/kg MS) = 3.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.16 – (0.055 × %FDA Concentrados Ecuación IVb (Menke and Steingass. por ejemplo granos.Universidad de Buenos Aires De uso general Ecuación Ia (Sumativa de Van Soest. sorgo. Se sugieren las mismas ecuaciones que las presentadas para la Clase I. 1976) EM (Mcal/kg MS) = 3.035 × %FDA .6 / 100 × {(100 .98 + %FDN × × (1. et al.3 – 0.. 1988) EM (Mcal/Kg MS) = 3.6 × [92. subproductos de molienda.9} Gramíneas y leguminosas Ecuación Ib (Rohweder.028 x %FDA Leguminosas Ecuación Ic (McLeod and Minson. frutas y tubérculos.Silajes Esta clase agrupa a los forrajes ensilados: maíz.%FDN) × 0. Grano de maíz entero Ecuación IVa (Pennsylvania State) EM (Mcal/kg MS) = 3. excluyendo a los silajes de pescado. Silaje de planta entera de maíz Ecuación IIIa (Schmidt.0.com For evaluation only. etc. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . (Goering and Van Soest.32 – 0. vísceras. et al.20 – 0. praderas. alfalfa. granos o raíces.

1988. Danelón. 2001. Jorgensen. Journal of Anim. and J. R. R. Sci. Ames. 1987)) EM (Mcal/Kg MS) = 3. A. Marten. .. Jaurena. Jordon. Forage Fiber Analysis. and D.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Steingass. 28:209-221. McLeod.. 1970.41 – 0. 1976. D.. USDA. N. Agronomy Journal. Buenos Aires. G. Iowa (USA). Barnes. Hach. Estimation of the energetic feed value obtained from chemical analysis and in vitro gas production using rumen fluid. Dev. and H.6 × [81. ARS. Goodrich. J. Schmidt.foxitsoftware. 1:61-72. Rohweder.Universidad de Buenos Aires Mezcla de granos Ecuación IVc (New York State Pred. G. The analystical and biological accuracyof estimating the dry mater digestibility of different legume species. C.48 × %FDA] Referencias Goering. H. 68:403-406. K. Feed analysis manual. M. ßes. and P. M. and Technol. Hach Co. Van Soest. M.com For evaluation only. H. R. L. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . . Minson. Animal Feed Sci. Anim. 1987. Hemisferio Sur. 68:403-. Relationships among agronomic characteristics of corn and sorghum cultivars and silage quality. Hach. K. C. Eq. J. 1976. Tabla de composicion de alimentos para rumiantes de la region pampeana Argentina. 379. and J. Menke. Iowa. and H. Ames..

foxitsoftware. Ámbito de apicación del Test de Dixon El test de Dixon (Dixon. pérdida de material durante el procedimiento. α = 0.01 para el número de repeticiones especificado). la muestra será analizada nuevamente por la misma característica y se reportarán ambos valores (el “outlier” en el lugar consignado en la planilla para tal fin).01.926 5 0. falla fehaciente del equipo) • En el caso de resultados sospechosos de “outliers” se aplicará el test de Dixon (Q test.994 4 0.g. aFDN) y sólo se permite reemplazar un dato (“outlier” confirmado) por conjunto de repeticiones.e.01 3 0. el valor sospechoso será descartado si supera el Q tabulado (α = 0. . Regla de decisión.821 3.01). (para n < 7): q = (D – N)/R Donde D: valor sospechoso.g.com For evaluation only. 1951) permite aplicar un criterio de discriminación de datos “outliers” a nivel del operador del laboratorio. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . Sin embargo cabe considerar algunas situaciones excepcionales por las cuales puede ser necesario reemplazar un resultado: • Medición perdida (resultado extraviado). Calcular el parámetro q. R: rango total 2. de repeticiones Valor Q para α = 0. Valores para aplicar el test de Dixon (Q) para outliers Nr. Tabla 1) Tabla 1. se deberá repetir la determinación inmediatamente para reemplazar el resultado • Razón a priori debidamente fundamentada (e. Este test se deberá aplicar una sola vez por conjunto de repeticiones para una misma determinación (e.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Comparar el valor q contra el Q tabulado (α = 0. En el caso de rechazar el resultado. Procedimiento 1.Universidad de Buenos Aires Procesamiento estadístico de los resultados analíticos – v2 Principios Los resultados analíticos no deberán sufrir selección alguna y se reportarán sobre base seca total (Prtcl MS 105 01). i. N: valor mas cercano al valor sospechoso. previo al envío de los resultados al coordinador del programa interlaboratorio.

3. J. Ann.60 q < Qn=4. 22(1):68-78. W.Universidad de Buenos Aires 4. Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y Alimentos Centro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA) Facultad de Agronomía . 1% no se rechaza el valor bajo sospecha (D) Téngase en cuenta que para fallar éste test el valor D debería ser superior a 626.com For evaluation only. Stat. Math. se deberá proceder a reemplazar el dato por uno nuevo. Ratios involving extreme values. J. Cálculo de q El resultado sospechoso es r4. Ejemplo 6. por lo tanto D = 610 N = 580 R = 610 – 560 = 50 q = (610 – 580)/ 50 = 30/50 = 0. 1951.foxitsoftware.PROMEFA Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Resultados analíticos Repeticiones analíticas r1 r2 r3 r4 Resultado (g/kg MS) 560 580 570 610 Valor mínimo Valor máximo 7. Referencias Dixon. . Inmediatamente luego de tomada la decisión de descartar un dato.