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MANUAL PRÁCTICO DE MICROBIOLOGÍA - Tomo II: Microbiología Ambiental II

Manacorda A. M., Álvarez A. S., Pezzullo S. D. & Cuadros D. P.

Capítulo 9

Año 2014

DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO (DBO)

Objetivo

Verificar la DBO de una muestra por el método de electrodo de membrana.

Introducción
La DBO es una inferencia de la cantidad de materia orgánica presente en un efluente, medida por
medio del consumo de oxígeno por parte de la flora microbiana de la muestra durante el proceso
de degradación.
La determinación de la DBO es una prueba empírica que se realiza para determinar los
requerimientos relativos de oxígeno de las aguas residuales, efluentes y contaminadas.
La prueba mide el oxígeno utilizado, durante un período de incubación especifico, para la
degradación bioquímica de la materia orgánica (requerimiento de carbono), y el oxígeno utilizado
para oxidar materia orgánica, como los sulfuros e ión ferroso. Puede medir también el oxígeno
utilizado para oxidar las formas reducidas del nitrógeno (requerimiento de nitrógeno) a menos que
se impida la oxidación por medio de un inhibidor.

Técnica para el análisis
Existen muchas variaciones de la determinación de la demanda de oxígeno basadas en los
períodos de incubación, entre las cuales se encuentra la DBO5 (de 5 días) que será la que
describiremos en el presente trabajo práctico.
El método consiste en llenar un frasco, con cierre hermético y tamaño especificado, con la
muestra hasta rebosar. Incubarlo a 20 º C durante 5 días, asegurándose de que la muestra tenga
bacterias, nutrientes y oxígeno suficiente. El oxígeno disuelto (OD) se mide antes y después de la
incubación y la DBO se calcula por medio de la diferencia de la medición inicial y final.

Procedimiento
Muestra
Es conveniente realizar el análisis inmediatamente después de tomada la muestra. De ser
imposible (tiempo mayor a 2 horas) se enfriará hasta temperatura próxima a la congelación (4
ºC), durante el menor tiempo posible. Antes de analizar la muestra calentarla hasta los 20 ºC.
Instrumental
3

Frascos de DBO, capacidad 250-300 cm .(ver Fig. 1)
Electrodo de membrana (oxímetro).
Estufa a 20 ºC sin luz (para evitar la producción de O2 por fotosíntesis).
Reactivos
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Solución de tampón fosfato.
Solución de sulfato de magnesio.
Solución de cloruro de calcio.
Solución de cloruro férrico.
Solución para neutralización (ácido sulfúrico/hidróxido sódico).
Solución de sulfito sódico.

Sinonimia: Requerimiento de oxígeno bioquímico (ROB)

1

Determinación de OD inicial (ODi) Determinar el OD inmediatamente después de realizar las diluciones con el electrodo. de forma que la inserción del tapón desplace todo el aire sin dejar burbujas. los blancos de dilución y. Para las muestras en que el cloro no se disipa en un corto plazo se deberá añadir solución de de sulfito sódico. Álvarez A. En algunas muestras le cloro desaparecerá en el plazo de 1 a 2 horas después de su exposición a la luz. Alternativamente. la temperatura debe ajustarse a 20 ºC +/.5 y 7. Control del AD: se realiza para comprobar su calidad.1 ºC antes de hacer las diluciones. las muestras sembradas con efluentes tratados biológicamente y las aguas fluviales. 3. sembrada si es necesario.0. de agua destilada. A partir de este valor y de uno conocido de la dilución del material de siembra (en el agua de dilución) se determina la captación de OD de la simiente. D.Tomo II: Microbiología Ambiental II Manacorda A. tubos o frascos limpios. En las muestras supersaturadas de OD (contienen mas de 9 mg de OD/ lt. 2-cloro-6-(tricloro metil) piridina (TCMP). Mezclarla bien evitando la entrada de aire.MANUAL PRÁCTICO DE MICROBIOLOGÍA . La cantidad de reactivo añadido no debe diluir la muestra más del 0. 2 . & Cuadros D.1. Control de glucosa-ácido glutámico: debido a que la prueba de la DBO es un bioensayo sus resultados pueden verse influidos en gran medida por la presencia de sustancias tóxicas o por el uso de un material de siembre de baja calidad. Añadir la cantidad deseada de muestra en el frasco de DBO. Muestras control 1.. Inhibidor de la nitrificación. Satúrese con OD agitando en la botella parcialmente llena o aireando con aire filtrado libre de materia orgánica. Preparación del agua de dilución (AD) Se toma 1 ml de tampón fosfato. P. cloruro férrico y cloruro de calcio y se diluye en 1 lt. los controles. S.. Solución de glucosa-ácido glutámico. en cuyos casos habrá que sembrar microorganismos en el agua de dilución. Antes de preparar el AD debe ponerse a temperatura de 20 ºC. La captación de OD en 5 días a 20 ºC no debe ser mayor de 0. Si es posible se deben evitar las muestras que contengan cloro residual. Siembra Es necesario tener presente una población de microorganismos capaces de oxidar materia orgánica biodegradable de la muestra.5 por 100. sulfato de magnesio. Si se desea inhibir la nitrificación deberán añadirse 3 mg a cada frasco de 300 ml antes de taparlos. En caso de que haya debe eliminarse. M. en todas las diluciones de las muestras. 5. Determinar la DBO del material de siembra como para cualquier otra muestra. 4.2 mg/l. 8. Técnica de dilución Se deben hacer varias diluciones de la muestra preparada para obtener captación de OD en un intervalo de 1 a 2 mg/l después de 5 días. 2. Las muestras con alcalinidad cáustica o acidez deberán neutralizarse a un pH entre 6. Debe protegerse la calidad del agua utilizando material de vidrio. Año 2014 7. Algunas muestras no contienen una población microbiana suficiente. Pezzullo S.5. luego llenar los frascos con agua de dilución. Entre las muestras que requieren inhibición de la nitrificación se incluyen los efluentes tratados biológicamente. a 20 ºC) debe reducirse el OD hasta la saturación a 20 ºC calentando la muestra aproximadamente a esa temperatura en frascos parcialmente llenos mientras se agitan con fuerza o se airean con aire limpio. 9. Pretratamiento de la muestra 1. cuando sea apropiado. Esto suele ocurrir durante el transporte o manipulación de la muestra. simiente control. 2. almacénese en frascos taponados con algodón durante el tiempo suficiente para que el agua se sature de OD. Solución de cloruro de amonio.

Álvarez A. Incubar junta a los demás frascos. mg/l. S.MANUAL PRÁCTICO DE MICROBIOLOGÍA . B1= OD del control de simiente antes de la incubación.. 1: Frasco de DBO de 300 ml.(B1 – B2 ) f / P Cuando: D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente después de su preparación. P.1 ºC durante 5 días. La captación de OD no deberá ser mayor de 0. Cálculos: Cuando el AD no está sembrada: DBO5 mg/l = D1 – D2/ P Cuando el AD está sembrada: DBO5 mg/l = (D1 – D2 ) . Determínese el OD inicial y final.Tomo II: Microbiología Ambiental II Manacorda A.. mg/l. Incubación Incubar los frascos sellados a 20 ºC +/. B2 =OD del control de simiente después de la incubación. 3 . f =proporción de la simiente de la muestra diluida con respecto a la del control de simiente = (% de simiente en la muestra diluida) / (% de simiente en el control de simiente). Determinación de OD final (ODf) Pasados los 5 días. Año 2014 Blancos de agua de dilución Utilizar un blanco de agua de dilución como un control aproximado de la calidad del agua de dilución no sembrada y de la limpieza de los frascos de incubación. & Cuadros D. D. mg/l. M. Pezzullo S. P = fracción volumétrica decimal de la muestra utilizada.2 mg/l. mg/l. determinar el OD nuevamente con el electrodo en todas las las muestras incubadas. D2 = OD de la muestra diluida después de 5 días de incubación a 20 ºC. Si se inhibe la nitrificación expresar los resultados como DBOC 5 Fig.1-0.

M. Álvarez A. American Water Works Association & Water Pollution th Control Federation. S. APHA. & Cuadros D. Washington. 4 . D. D.Tomo II: Microbiología Ambiental II Manacorda A..MANUAL PRÁCTICO DE MICROBIOLOGÍA . 17 ed.. Año 2014 Bibliografía American Public Health Association (APHA).USA.C. Pezzullo S. P. Standard Methods for the examination of Water and Wastewater. Part 9000. 1989.