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INTRODUCCION

La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual (ETS),


espiroqueta, el Treponema pallidum.

producida por un

Para el diagnstico de la sfilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de


pruebas. Por examen directo mediante microscopa en campo oscuro y por
fluorescencia directa, mediante serologa y por cultivo en clulas epiteliales de conejo.
Por serologa se tienen dos tipos de pruebas, las pruebas no treponmicas como
VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas treponmicas como FTAABS
(Fluorescenttreponemalantibodyabsorption) o como MHA-TP (Microhemaglutinacin
para T pallidum)1.
Las nuevas pruebas diagnsticas para la sfilis, incluyen enzimoinmunoensayo
(ELISA), Western bloty Reaccin en cadena a la polimerasa (PCR).
Los criterios utilizados para el diagnstico de las Treponematosis son: el rea
geogrfica, las manifestaciones clnicas, la observacin al microscopio de campo
oscuro y las reacciones serolgicas.

COMPETENCIA

Desarrolla una prueba macroscpica de floculacin no treponmico utilizada para


la deteccin rpida de reaginas (anticuerpos circulantes en suero) contra
Treponema pallidum.

MATERIALES Y MTODOS

Para el desarrollo de esta prueba se necesitar:

Suspensin antgeno RPR:


micropartcluas de carbn.
Suero problema
Suero control positivo y negativo
Tarjetas de reaccin
Baguetas y pipetas serolgicas.

suspensin

carbolipina

conteniendo

Y se llevar a cabo de la siguiente forma:


Prueba cualitativa en microplaca (fondo plano)
Equilibrar los reactivos y muestras a temperatura ambiente
Mediante una pipeta automtica depositar 50 L de cada muestra en un pocillo distinto
de la
microplaca. Emplear una punta nueva para cada muestra y desecharla tras su empleo.
En dos pocillos adicionales, depositar 1 gota de cada uno de los sueros control.
Dosificar 1 gota de antgeno en cada pocillo de la microplaca que contienen las
muestras a ensayar.
Depositar la tarjeta en el agitador rotatorio horizontal, previamente ajustado a 200 50
r.p.m., durante
20 minutos.
Observar con la ayuda de una lmpara de alta intensidad, sobre una superficie blanca,
la aparicin de cualquier signo de aglutinacin dentro del minuto siguiente a la retirada
de la microplaca del agitador
Lectura
Reactivo: presencia de aglutinacin visible en forma de grumos negros sobre el fondo
claro que indica presencia de "reaginas" en la muestra.
No reactivo: aspecto gris homogneo que indica ausencia de "reaginas" en la
muestra.
Las reacciones positivas se titulan usando solucin salina 0.9%
Fundamento:
El antgeno RPR-carbn es un preparado no treponmico especialmente diseado
para la deteccin y semi-cuantificacin por coaglutinacin macroscpica en porta o
microplaca de reaginas plasmticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra
componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum.

La determinacin rpida de las reaginas plasmticas, presentes en el suero de


individuos infectados con Treponema pallidum, se efecta ensayando el antgeno
una asociacin de lpidos complejos (cardiolipina, lecitina y colesterol) absorbidas
sobre partculas de carbn frente a las muestras problema. La presencia o ausencia
de una aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia e reaginas
plasmticas en las muestras ensayadas favorecidas por las partculas de carbn.

Metodo Cuantitativo
Ttulo

Suero

Nacl 0.9%

Ag

Procedimiento

Realizar 1ra dilucion:

100 ul

100 ul

1 gota +

1 gota

1/2

De la 1ra. dilucin suero-NaCl tomar:


De la 2da. dilucin suero-NaCl tomar:
De la 3ra. Dilucin suero-NaCl tomar:
De la 4ta. dilucin suero-NaCl tomar:
De la 5ta dilucin suero-NaCl tomar:

100 ul +
100 ul +
100 ul +
100 ul +
100 ul +

100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul

1 gota
1 gota
1 gota
1 gota
1 gota

1 gota
1 gota
1 gota
1 gota
1gota

1/4
1/8
1/16
1/32
1/64

+
+
+
+
+

Poner 1 gota de cada dilucin en la placa


Aadir a cada una de esas muestras una gota de antgeno.
Observar la formacin de grumos y reportar hasta el ttulo donde reaccione
Se reporta reactivo hasta el ttulo donde hay reaccin
Lectura
Como en la Prueba cualitativa. El ttulo de la muestra corresponde a la mxima
dilucin que presenta reactividad. La dilucin siguiente debe ser negativa
El ttulo estar dado por la inversa de la ltima dilucin que se observe reactiva.

RESULTADOS Y DISCUSIN

CONCLUSIN

REFERENCIAS

Diagnstico microbiolgico. 6ta edicin. Madrid: Editorial Panamericana; 2006.

Murray, Rosenthal, Pfaller. Microbiologa mdica. 6ta edicin. Madrid: Editorial


Elsevier; 2009.