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ADHESIN BIOLGICA

Y MIGRACIN CELULAR
UTE BASES CIENTFICAS Y
CLNICAS PARA EL DIAGNSTICO
Escuela de Pregrado
Facultad de Odontol oga
Universidad de Chile

Vicente A. Torres, PhD


Lab de Biologa Cel ular y Mol ecular
Instituto de Investigacin en Cs Odontolgicas
Facultad de Odontologa
Universidad de Chile
Centro FONDAP-ACCDIS

TPICOS DE LA CLASE

I. AS PECTOS GENERALES - DEFINICIONES


Adhesin biolgica
Molculas de adhesin celular Matriz extracelular (MEC)
Transicin epitelio mesnquima

II. BASES MOLECULARES DE LA M IGRACIN CELULAR


Etapas de la migracin celular
Remodelamiento del citoesqueleto
Dinmica de las adhesiones celulares durante la migracin

INTERACCIONES DE LA CLULA CON SU


ENTORNO
MOLCULAS DE ADHESIN CELULAR

TIPOS DE TEJIDOS

LA
CLULA
PUEDE
PRESENT AR 2 T IPOS DE
INTERACCIONES:

Con otras
clulas

Con su matriz
extracelular

Procesos mediados por


protenas !

(No es inerte, sino dinmica, tanto en


tejido en desarrollo, como en adulto)

(Clase s de transduccin de
seales)

INTERACCIN DE UN
FIBROBLASTO C ON SU
MATRIZ EXTRACELULAR
TECNICA:
Imgenes de
microfotografas
electrnic as de barrido
INTERACCIN ENTRE
CLULAS DENDRTICAS Y
CLULAS ENDOTELIALES
FAGOCITOSIS

J Cell Sci 2003; 116: 247-257

ADHESIN BIOLGICA

Molculas de Adhesin Celular (CAMs)


Matriz Extracelular (ECM)

Tipos de Interacciones entre las CAMs


Interaccin homoflica entre CAM s del mismo tipo
Interaccin heteroflica entre CAM s de distinto tipo

Homoflicas

Heteroflicas

Las CAMs conectan el entorno de la clula (ECM o clula) con su citoesqueleto

Esquema general de organizacin de las adhesiones celulares


mediadas por CAMs:

Importancia del Citoesqueleto en la Adhesin Celular

Clula expandi ndose


sobre su s ustrato

Actina
ncleo

MOLCULAS DE ADHESIN CELULAR


Clula - Clula
CADHERINAS

SELECTINAS

SUPERFAMILIA DE
INMUNOGLOBULINAS

MUCINAS

Clula - ECM

INTEGRINAS

CLASIFICACIN DE LAS UNIONES CELULARES


Para que las clulas funcionen como un todo, de manera integrada en los
tejidos, stas se organizan de acuerdo a uniones especializadas

Estas uniones
especializadas estn
formadas por cluster
o grupos de CAMs

6 categoras de uniones
especializadas

4. Uniones de Hendidura
(Gap Junctions)

5. Hemidesmosomas
(Hemidesmoso me s)
6. Complejos Focales

1. Uniones Estrechas
(Tight Junctions)
2. Uniones Adherentes
(Adhe rens Junctions)
3. Desmosomas
(Desmoso mes)
4. Uniones de Hendidura
(Gap Junctions)

5. Hemidesmosomas
(Hemidesmoso me s)
6. Complejos Focales

CLULA-ECM

3. Desmosomas
(Desmoso mes)

CLULA-CLULA

2. Uniones Adherentes
(Adhe rens Junctions)

CLULA-ECM

1. Uniones Estrechas
(Tight Junctions)

CLULA-CLULA

CLASIFICACIN DE LAS UNIONES CELULARES

UNIONES ADHERENTES
(Adherens Juncti ons)

DESMOSOMAS

Tambin denominadas Desmosomas


de Cinturn (belt desmoso mes)

Comnmente conocidos como


Desmosomas de Botn

Ubicado inmediatamente debajo de


las Uniones Estrechas

Confieren fuerza mecnica

Comunes en clulas epiteliales


Ancladas a
DE ACTINA

MICROFILAMENTOS

Anclados
a
FILAMENTOS
INTERMEDIOS (KERATINA)

COMPONENTE

CENTRAL:

CADHERINAS

CADHERINAS
Molculas de adhesin celular que presentan interaccin homoflica
Esenciales en el desarrollo y diferenciacin de tejidos
Expresin variable segn el tipo de tejido.
Alteraciones en su expresin son asociadas
a enfermedades, como cncer y metstasis

TECNICA:
Inmunof luoresc encia ;
deteccin d e un antgeno
en clulas en c ultivo

Citoesqueleto de actina
E-cadherina
Ncleo

Clu la de c ncer de mama (MCF1 0A)


sr.burnham.or g

CADHERINAS
Son CAMs dependientes de Ca 2+
1)Regin extracelular (N-term)
2)Regin transmembrana
3)Dominio citoslico (C-term)
Interaccin homoflica
Algunas de las ms estudiadas:
E-cadherina, VE-cadherina,
P-cadherina y N-cadherina

PROTENAS ADAPTADORAS :
-cateni na; -cateni na; p120

CADHERINAS
Funcin:
Arquitectura y Organizacin de Tejidos
Desarrollo y Diferenciacin
Experimentalmente, se puede
demostrar que la interaccin
entre cadherinas es homoflica
(CUALITATIVO)

El nivel de expresin de una


determinada cadherina, es
tambin un factor de regulacin
en la organizacin de tejidos
(CUANTITATIVO)

Citoesqueleto de actina
E-cadherina
Ncleo

Ca2+
Ca2+

Clu la de c ncer de mama (MCF1 0A)


sr.burnham.or g

Ca2+
Cmo Ocurre la Interaccin
Cadherina Cadherina?

Ca2+

http://php.med.unsw.ed u.au/cel lbio logy/i ndex.p hp?titl e=2011 _Group _5_Pr oject

Modelo de Unin Tipo Velcro


Molculas de cadherina
dispuestas en paralelo

Clulas adyacentes:
superposicin lateral de enlaces
moleculares dbile s

La sumatoria de cada uno de


estos enlaces contribuye a la
fuerza de la unin

La unin es dinmica

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INTERACCIN CLULA-CLULA

UNIONES ADHERENTES
DESMOSOMAS

INTERACCIN CLULA-ECM
CONTACTOS Y
ADHESIONES FOCALES
HEMIDESMOSOMAS

ADHESIN CLULA-MATRIZ EXTRACELULAR

Contribuyen a la arquitectura
del tejido
La ECM rodea tanto a
epitelios, como a la mayora
de las agrupaciones celulares
organizadas

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Matriz Extracelular

Organizacin de las
clulas en tejidos
Coordinacin de
la funcin celular

Entrega rutas para


que las clulas migren

Participa en la TRANSDUCCIN
DE SEALES (pr oli feraci n,
creci mi ento y muer te celular)

CONTACTOS Y
ADHESIONES FOCALES

HEMIDESMOSOMAS

Presentes en fibrobla stos y clulas


mesenquimticas

Presentes en clulas epiteliales,


interaccin con la membrana basal

Ancladas a
DE ACTINA

Anclados
a
FILAMENTOS
INTERMEDIOS (KERATINA)

MICROFILAMENTOS

Las CAMs involucradas son INTEGRINAS

Componente Central:
INTEGRINAS

12

Barczyk et al, Cell Tissue Res 2010; 339: 269

INTEGRINAS
Son receptores de la MEC
Heterodmeros compuestos por subunidades: y
Forman uniones especializadas: hemidesmosomas y adhesiones
focales

Anticuerpo anti-integrinas (rojo)


Agente intercalante de ncleo (azul)

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EJERCICIO: Comparacin de clulas epiteliales y mesenquimticas en


condiciones de cultivo celular
1. Cul tcnica de
microscopa fue usada?
2. Qu tipo de uniones se
observa en cada caso?
3. A qu tipo celular
corresponde cada caso?

1. Qu tcnica se ilustra?
2. A qu corresponde las tinciones en
verde/rojo/azul?

EJERCICIO: Los siguientes cortes histolgicos de tejido epitelial han


sido tratados con anticuerpos dirigidos contra distintos antgenos.
stos antgenos son:
A. INTEGRINA
B. E-CADHERINA
C. COLGENO

Colgeno

Qu tincin corresponde a
cada caso?

Integrina
E-cadherina

14

INTEGRINAS

Barczyk et al, Cell Tissue R es 201 0; 339: 269

Cun estable es la interaccin entre


estas molculas de adhesin con sus
sustratos?
Dependiendo del contexto fisiolgico,
es dinmica; tanto uniones mediadas
por cadherinas, como por integrinas
son sujetas a regulacin.

TRANSICIN EPITELIO-MESNQUIMA (EMT)


La Transicin Epitelio-Mesnquima (Epithelial to Mesenchymal Transition,
EMT) corresponde a un conjunto de cambios en las caractersticas
morfolgicas, adhesivas, migratorias y de sealizacin en clulas
epiteliales. Se caracteriza por una prdida de la adhesin clula-clula,
disminucin en la expresin de la E-cadherina y un aumento en el potencial
migratorio e invasivo. La EMT es esencial en numerosos procesos del
desarro llo, tale s como la formacin del mesodermo y del tubo neural.

1. Desarrollo Embrionario y de tejidos


2. Re-programacin de clulas troncales pluripotentes
3. Condiciones patolgicas: ej, cncer metastsico

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TRANSICIN EPITELIO-MESNQUIMA (EMT)


Expresin de E-cadherina
Caractersticas
de tipo epitelial

EMT

Caractersticas
de tipo
mesenquimticas

TRANSICIN
EPITELIO-MES NQUIMA
( epithelial-mesen chymal transition, EMT)
BioEssays 2 001; 2 3: 912

Expresin de componentes
estructurales de AJ
E-CADHERINA

Migracin celular de tipo


fibroblasto

TRANSICIN EPITELIO-MESNQUIMA (EMT)


EVENTOS MOLECULARES
DURANTE LA EMT
Transcripcion al

Post-traduccional

Switch molecular
E-cadherina N-cadherina

Cancer Metast Rev 2009; 28: 15 33

16

TRANSICIN EPITELIO MESNQUIMA

Nat Rev Mol Cell Biol 2004; 5: 816-826

LOCALIZACIN DE E-CADHERINA EN CLULAS DERIVADAS DE


EPITELIO NORMAL Y EPITELIO CANCEROSO INVASIVO

NO INVASIVO

INVASIVO

17

Cancer Res 2006;


66 (17): 9

DIFERENCIAS PRINCIPALES
Polaridad Apica l
y Basolateral
Adhesin celu lar e
inhibicin por contacto
AJ, TJ, GJ y
desmosomas
E-cadherina y
citoqueratinas
Microtbulos longitudinal es
actina circ unferencial

MORFOLOGA
CARACTERSTICAS
FSICAS
UNIONES
INTERCELULARES
MARCADORES
MOLECULARES
ORGANIZACIN
CITOESQUELETO

Asimetra: extremo
lder y posterior
Movilidad cel ular e
invasividad
Adhesiones focal es /
GJ transitorios
N-cadherina, vimentina,

metaloproteasas
Microtbulos astrales /
Fibras de estrs

II. BASES MOLECULARES DE LA MIGRACIN


CELULAR
Etapas de la migracin celular
Remodelamiento del citoesqueleto
Dinmica de las adhesiones celulares durante la migracin

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POR QU MIGRAN LAS CLULAS?

MIGRACIN CELULAR
La migracin celular es un proceso fundamental en organismos multicelulares
Desarrollo embrionario
Respuesta inmune

Reparacin de tejidos

Formacin de tumores y
metstasis

La migracin celular es
particularmente relevante durante la
metstasis de clu las tumorale s

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MIGRACIN CELULAR

Cancer Sci 2007;


98(10): 1512-152 0
Adhesin celular

Remodelamiento
del citoesqueleto

Desensamble de
adhesiones
TRENDS Cell Biol 2004; 1 4(5)

Cules son los mecanismos moleculares implicados en la


migracin celular?

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MIGRACIN CELULAR: MECANISMOS MOLECULARES


FACTORES QUE INFLUYEN EN
LA MIGRACIN CELULAR
ADHESIN CELULAR
CITOESQUELETO
FACTORES EXTRACELULARES
(ECM, QUIM IOQUINAS, ETC)
PROTENAS DE SEALIZACIN
INTRACELULAR
EXPRESIN GNICA
Mol Biol C ell 2 010; 21: 369

Modelo de estudio: migracin celular sobre sustrato 2D


Segn este modelo, la migracin celular puede ser descrita como una serie
sucesiva de etapas

MIGRACIN CELULAR: Secuencia de etapas repetitivas

POLARIZACIN CELULAR

EXTENSIN O PR OTRUSIN
(leading edge)

FORMACIN DE C ONTACTOS
CON LA ECM

CONTRACCIN CELULAR

DESENSAMBLE Y
LIBERACIN DE LOS SITIOS
DE CONTACTO

21

MIGRACIN CELULAR: Secuencia de etapas repetitivas


Polarizacin celular (Cdc42, Rac)
POLARIZACIN CELULAR

EXTENSIN O PR OTRUSIN
(leading edge)

Science 2003; 302: 5

golgi
ncleo

MDA-MB-23 1

Contraccin (Rho)

FORMACIN DE C ONTACTOS
CON LA ECM

CONTRACCIN CELULAR

DESENSAMBLE Y
LIBERACIN DE LOS SITIOS
DE CONTACTO

GTPasas de la Familia Rho


Cdc42
Rac
Rho

Polarizacin celular, filopodios


Protrusiones celulares, lamelipodios,
polarizacin celular
Contraccin celular, maduracin de
adhesiones focales, fibras de estrs

GTPasa pequea:
Protenas de bajo peso molecu lar
que u nen GTP, modulando su
actividad biol gic a

Dev Biol 2004: 265: 23

22

MIGRACIN CELULAR: Secuencia de etapas repetitivas


Importancia del citoesqueleto en la
adhesin y migracin celular

POLARIZACIN CELULAR

EXTENSIN O PR OTRUSIN
(leading edge)

FORMACIN DE C ONTACTOS
CON LA ECM

15

45

60

CONTRACCIN CELULAR

DESENSAMBLE Y
LIBERACIN DE LOS SITIOS
DE CONTACTO
Clula expandindose sobre fibronectina. Tincin de actina con
faloidina. J Cell Sci 2013; 126(17): 3835

DINMICA DEL CITOESQUELETO Y LA MEM BRANA PLASMT ICA


ESTRUCTURAS EN
PROTRUSIONES:
Filopodios
Lamelipodios
Ruffles
Adhesiones Focales

Nat Cell Biol 2007; 9(10): 1110

23

DINMICA DEL CITOESQUELETO Y LA MEM BRANA PLASMT ICA


Queratocito, microscopa de luz

Podosomas

Fibroblasto, microscopa electrnica de barrido

Molecular Biology of the Cell (Alberts, cap 16)

Invadopodios

Nature Rev Mol Cell Biol 2004; 5: 2647

DINMICA DEL CITOESQUELETO Y LA MEM BRANA PLASMT ICA


FIBRAS DE ESTRS (fibras de tensin)

Mol Cancer Ther 2005; 4 (5): 772-77 8

http://flylib.com/books/en/2.953.1.12/1/

www.lifetechnologies.com

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Regulacin de la dinmica del citoesqueleto


PROTENAS Rho GTPasas
Rho

Rac

Cdc42

MIGRACIN CELULAR: Secuencia de etapas repetitivas


Formacin y desensamble de los sitios
de contacto celulares

POLARIZACIN CELULAR

EXTENSIN O PR OTRUSIN
(leading edge)

FORMACIN DE C ONTACTOS
CON LA ECM

TRENDS Cell Biol 2004; 14(5)

CONTRACCIN CELULAR

Estos sitios de contacto se encuentran


principalmente en la interfase clula-ECM

DESENSAMBLE Y
LIBERACIN DE LOS SITIOS
DE CONTACTO

25

FORMACIN DE CONTACTOS CON LA ECM


INTEGRINAS

FORMACIN DE CONTACTOS CON LA ECM


1. Unin ligando extracelular (ECM)/Activacin
2. Reclutamiento de protenas adaptadoras

3. Anclaje del
citoesqueleto (actina o
filamentos intermedios)
4. Formacin de
complejos
macromoleculares

26

FORMACIN DE CONTACTOS CON LA ECM


Complejos Focales

Filamentos de Actina
Paxilina

Complejos Macromoleculares Formados por las


Integrinas
Sitio de
Iniciacin

CONTACTOS
FOCALES

Adhesiones
Focales

ADHESIONES
FOCALES

Madurez del complejo de adhesin

DESENSAMBLE DE CONT ACTOS CON LA ECM


Sitio de
Iniciacin

CONTACTOS
FOCALES

ADHESIN
FOCAL

Madurez del complejo de adhesin

ADHESIN
FOCAL

CONTACTOS
FOCALES

Sitio de
Iniciacin

?
MECANISMO POCO CLARO
Protenas de sealizacin:
Kinasa de Adhesin Focal
(FAK), Pyk2, Src, MAPK

Traffic 2009; 10: 81 1818

Se ha postulado que el trfico


endosomal es esencial en el
desensamble de los complejos de
adhesin

Proteasas: Calpanas
Componentes de la endocitosis:
Dynamin, AP-2, Clathrin, Rabs

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MARCACIN DE ADHES IONES Y CONT ACTOS FOCALES


(GFP-vinculina, transfeccin transitoria de clulas de cncer de mama
MDA-MB-231 )

FIN de la
CLASE
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CLNICAS PARA EL DIAGNSTICO
Escuela de Pregrado
Facultad de Odontol oga
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