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FORMAS DE CRECIMIENTO BACTERIANO

Formas del Crecimiento Bacteriano


Introduccin
En un sistema biolgico se define al crecimiento como el aumento ordenado de
las estructuras y los constituyentes celulares de un organismo. Segn ello, el
aumento de la masa celular producido por acumulacin de productos de reserva
(glucgeno, poli_- hidroxibutirato) no constituyen crecimiento.
Se puede considerar como crecimiento al incremento de clulas individuales por
un lado, y por otro lado se puede considerar al crecimiento del nmero de clulas
(proliferacin de la poblacin).
En lo que se refiere al crecimiento de clulas individuales, este consiste en el
aumento del tamao y peso de las clulas que precede a la divisin celular. Esta
divisin trae aparejada un aumento en el nmero de clulas (proliferacin de la
poblacin).
Las bacterias se dividen por fisin binaria, a travs de la una cual clula madre
al alcanzar un determinado volumen se divide dando dos clulas hijas. El
proceso de fisin binaria consiste en la autoduplicacin del material hereditario
seguido de la reparticin en as dos clulas hijas, las que se separan por
estrangulamiento de la membrana celular y formacin de la pared celular (Fig.
1).

Fig. 1. Divisin binaria de clulas procariotas. 1 El cromosoma circular est unido


a un punto de la membrana plasmtica 2El cromosoma se duplica. Las dos
copias estn fijas a la membrana en puntos cercanos 3 La clula se alarga, se
agrega nueva membrana plasmtica entre los puntos de unin 4 La membrana
plasmtica crece hacia el interior5 La clula original se ha dividido en dos clulas
hijas. La imagen corresponde al corte transversal de una clula procariota
durante la fisin binaria en una etapa similar a la fase 4 descripta.
Basado en el concepto que una clula se divide dando dos clulas hijas, y stas
a su vez se vuelven a dividir dando dos clulas cada una de ellas, se presenta
en el siguiente cuadro la proliferacin de una poblacin de clulas a partir de una
sola, con un tiempo de generacin de 30 minutos.

Ciclo normal del crecimiento


Las poblaciones microbianas raramente mantienen un crecimiento exponencial
prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo la tierra estara tapada de una masa
microbiana mayor que la de la tierra misma.
El crecimiento est normalmente limitado por el agotamiento de nutrientes o por
la acumulacin de productos del mismo metabolismo microbiano, que les son
txicos a la poblacin.
La consecuencia es que el crecimiento al cabo de un cierto tiempo llega a
disminuir hasta detenerse.
En la figura 4 se presenta la grfica de una curva tpica de crecimiento
bacteriana.

Como se puede observar, en la grfica se ha relacionado el tiempo transcurrido


con el logaritmo del nmero de clulas bacterianas. Cuando se realiza este tipo

de grficas se obtiene una lnea recta, sin embargo en esta slo un sector (fase
exponencial) corresponde a una recta.

Es posible distinguir cuatro fases:


1) fase de latencia o de retardo
2) fase exponencial
3) fase estacionaria
4) fase de muerte

En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las clulas sintetizan


las enzimas necesarias para la actividad metablica que deben llevar adelante.
Cuando se hacen mediciones del nmero de clulas en distintos tiempos dentro
de esta fase, el valor no cambia sustancialmente. En cambio, interiormente las
clulas trabajan activamente adaptando el equipo enzimtico al medio de cultivo.
La bacteria se prepara para hacer uso de los nutrientes que este medio le aporta,
por lo tanto es la fase de adaptacin al medio, con aumento de la masa celular
pero no del nmero de clulas. La edad del inculo va a influir en el tiempo de
latencia en el medio fresco debido a la acumulacin de materiales txicos y a la
falta de nutrientes esenciales dentro de la clula durante el crecimiento anterior.
En general, inculos viejos alargan la fase de latencia.
Pasado este perodo, el cultivo entra en la denominada fase de crecimiento
exponencial, donde la velocidad de crecimiento es mxima.
La velocidad de crecimiento que alcanza un cultivo, depende del tipo de
microorganismo que se trate y diversos factores ambientales como son la
temperatura, el pH, oxigenacin, etc.

La velocidad de crecimiento comenzar a disminuir hasta hacerse nula cuando


alcance la fase estacionaria, ya que cambios en la composicin y concentracin
de nutrientes entre el cultivo del inculo y el medio fresco pueden desencadenar
el control y la regulacin de
la actividad enzimtica.
Esta fase se presenta por agotamiento del suministro de algn nutriente esencial
o por acumulacin de productos metablicos que sean txicos. Tambin puede

ser por la disminucin de la oxigenacin o cambios en las condiciones de pH del


medio de cultivo (acidificacin o alcalinizacin):
En esta fase se equilibran el nmero de clulas nuevas con el nmero de clulas
que mueren.
Por ltimo, el cultivo entra en la fase de muerte, en la que el nmero de clulas
que mueren se va haciendo mayor.
La pendiente de esta fase puede ser ms o menos pronunciada de acuerdo al
tipo de microorganismo de que se trate. Suelen presentarse pendientes menos
bruscas cuando el microorganismo presenta alguna forma de resistencia
(esporas, glicocalix).

Mtodos de medicin del crecimiento

El crecimiento se evala haciendo mediciones sucesivas en tiempos


determinados de la poblacin en estudio. En cada momento se evala cual es la
poblacin en ese instante.

Existen diversas formas de evaluar una poblacin bacteriana.

a. Conteo microscpico directo


Es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza un equipamiento fcilmente
disponible en un laboratorio de microbiologa, ya que consiste en contar con un
microscopio la cantidad de clulas presentes en un volumen determinado.
Para estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de recuentos ( cmara
de Petroff Hauser, cmara de Neubaver Fig. 5-). Una de las mayores ventajas
del recuento microscpico es brindar informacin adicional sobre el tamao y la
morfologa de los objetos contados
La muestra puede utilizarse tal cual, (leche, o cultivos puros en medio lquido), o
puede prepararse una dilucin.

Para hacer el conteo se procede de la siguiente manera. Si se posee una cmara


dividida en 25 cuadrados. El rea de los 25 cuadrados es conocida, como
tambin el volumen de muestra que esta rea admite.

Contando el nmero de bacterias presentes en los cuadrados (o algunos de


ellos) se puede conocer cuanto hay en volumen conocido. Suponiendo 50
bacterias en 25 cuadrados, y sabiendo que los 25 cuadrados corresponden a
0,02 mm3.

50 bacterias _______ 0,02 mm3

x = _______ 1000 mm3 (1 cm3)

x= 1000 mm3 * 50 bacterias 0,02 mm3

x = 2.500.000 bact./mL = 2,5.106 bact./mL

b. Conteo de clulas viables

El mtodo se basa en la consideracin que el crecimiento implica el aumento de


los microorganismos capaces de formar colonias.
Este mtodo puede hacerse con medios slidos o lquidos. El mtodo ms
frecuentemente empleado es el conteo en placas (medios slidos) formando
colonias.

Por lo tanto se determinan por este mtodo slo las clulas microbianas
VIABLES en las condiciones de trabajo (nutrientes, atmsfera, temperatura).
Para ello se siembra una cantidad conocida de la suspensin bacteriana cuyo
nmero se desea conocer. En un medio slido cada bacteria se multiplicar
formando una colonia visible a simple vista que puede ser contada. Como las
colonias pueden originarse tanto de una clula como de un grupo de clulas, se
utiliza el trmino: UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (u.f.c.), y esto
puede constituir una desventaja ya que si dos bacterias no se separan darn una
sola colonia, subestimando de esta forma el nmero de microorganismos en la
suspensin. Adems, a los efectos de que todas las clulas que queden en una
placa tengan una adecuada disponibilidad de nutrientes, y que los errores del
mtodo sean menores, se establece que las condiciones ptimas de conteo se
dan cuando desarrollan entre 30 y 300 colonias.

Algunas bacterias son difciles de contar en medios slidos (Nitritadores) y se


requiere de conteos en medios lquidos. Para ello se recurre a la tcnica de
determinacin del nmero ms probable (NMP) de microorganismos. Se basa
en la determinacin de la presencia o ausencia de un determinado tipo de
microorganismo (en funcin de que crezcan o de que produzcan determinada
reaccin en el medio o no), en diferentes cantidades de muestra.
Para poder determinar el NMP de microorganismo se debe diluir hasta tener una
densidad que sea menor a 1 clula por cada mililitro de diluyente. Por ejemplo,
para hacer diluciones hasta obtener 3 clulas en 5 ml se siembra 1 ml en cada
uno de 5 tubos con medio lquido adecuado, esperando que en 3 tubos haya
crecimiento de microorganismos y en 2 no ( si las clulas no se distribuyen 1 en
cada ml se pueden obtener otros resultados: 2 positivos y 3 negativos, o 1
positivo y 4 negativos). Los resultados posibles son al azar.
La interpretacin de los resultados, se hace en base a una distribucin
estadstica, y en general se emplean tablas preparadas de acuerdo a la cantidad
de muestra que se siembra en cada serie de tubos, teniendo en cuenta la dilucin
en la se observa proliferacin de microorganismos.

Este mtodo se emplea recuentos microbianos de Nitratadores por la dificultad


que presentan para ser visualizadas las colonias en medios slidos. Tambin es
til para determinar cargas microbianas bajas, menores de 10 por gramo, pero
puede igualmente emplearse para cargas mayores utilizando las diluciones
apropiadas. Se prefiere adems este mtodo cuando los microorganismos son
de lento crecimiento, o cuando han sido sometidos a condiciones adversas
(temperatura alta, desecacin, etc.).

c. Medicin de la densidad bacteriana

Es una tcnica en la que se mide la masa de microorganismos en una


suspensin. Para ello se utiliza un espectrofotmetro y se mide la cantidad de
luz que atraviesa en una suspensin de microorganismos, en comparacin con
un blanco que es el medio esterilizado y sin sembrar. Cuanto mayor es el nmero
de clulas en suspensin, tanto menor es el porcentaje de luz que atraviesa el
medio.

Para relacionar la transmitancia con al densidad bacteriana se requiere de hacer


curvas patrn de densidad conocidas.

d. Otros mtodos de recuento

Determinacin de ATP: Es una tcnica que permite determinar indirectamente


la masa de una poblacin bacteriana. Se considera que la proporcin de ATP
encontrado en una muestra es proporcional con la presencia de clulas vivas
Recuento electrnico: Los contadores electrnicos permiten realizar recuentos
de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de hongos y
microorganismos filamentosos o miceliares. Estos instrumentos constan de
electrodos que miden la resistencia elctrica del sistema. Un volumen fijo de una
suspensin bacteriana es forzado a pasar desde un compartimiento al otro a
travs del pequeo conducto. Cuando pasa un microorganismo, la resistencia al
pasaje de una corriente elctrica se incrementa debido a que la conductividad de
la clula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son
convertidos en pulsos y contados. Este tipo de recuento presenta algunos
inconvenientes. No pueden medirse soluciones muy concentradas de
microorganismos, debido a que el pasaje de ms de una clula en un breve
perodo de tiempo va a ser tomado como una clula ms grande, y es comn la
obstruccin del orificio por microorganismos muy grandes.

Bibliografa

Brock, T. & M. Madigan. 1993. MICROBIOLOGA. 6ta Edicin. Prentice Hall


Hispanoamrica S. A. Mxico.
Ranea, F. 2002. http://www.microbiologia.com.ar/fisiologia/crecimiento.html