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1.

MTODOS ANALTICOS BASADOS EN LA


UNIN Ag-Ac
La cualidad ms sobresaliente de los Ac es su capacidad de unirse especficamente
al Ag. Esta unin tiene lugar tanto in vitro como in vivo, y puede ponerse de
manifiesto por diversas tcnicas que constituyen los mtodos serolgicos (se llaman
as porque el suero sanguneo es el vehculo habitual de los Ac). La reaccin Ag-Ac
es una reaccin reversible. Esta caracterstica permite el aislamiento y purificacin
del Ag o Ac.
Aunque el principio es idntico (Ag unido al Ac) existen diversos mtodos basados
cada uno de ellos en un procedimiento distinto para visualizar el complejo Ag-Ac.
As tenemos:
-

TCNICAS DE PRECIPITACIN:
o Se utilizan Ag solubles cuando la reaccin se realiza en determinadas
condiciones el complejo Ag-Ac se inestabiliza y precipita apareciendo
una turbidez. Son poco sensibles pero muy especficas. Se utilizan solo
en investigacin y ATIII porque son caras.

TCNICAS DE AGLUTINACIN:
o Cuando el Ag se encuentra unido o formando parte de clulas, bacterias
o partculas (decimos que el Ag se encuentra en forma insoluble), la
reaccin Ag-Ac puede ser detectada por el aglutinado formado que es
fcilmente cuantificable.
o Muy sensibles pero poco especficas, dan lugar a reacciones cruzadas

REACCIN DE FIJACIN DEL COMPLEMENTO

TCNICAS DE FLUORESCENCIA:
Fluorescencia
Radioistopos
Enzimoinmunoensayo
o El Ac se marca con un fluorocromo. Los fluorocromos son sustancias que
absorben la luz UV de una longitud de onda determinada y emiten una
radiacin luminosa de longitud de onda mayor.

TCNICAS DE RAYOINMUNOENSAYO (RIA):


o En estas tcnicas se emplean para la deteccin y cuantificacin del
complejo Ag-Ac los isotopos cuyo seguimiento se hace por la
radioactividad exigida por los mismos.

TCNICAS INMUNOENZIMOENSAYO:
o En estas tcnicas el Ac se une a una enzima siendo posible la
cuantificacin del complejo a travs de la accin que dicha enzima
ejerce sobre un sustrato, cuyos cambios son fcilmente cuantificables.
Se conoce tambin como ELISA.

TCNICAS DE NEFELOMETRA o INMUNOTURBIDIMETRA:


o En la TUBIDIMETRA se mide la cantidad de luz bloqueada (cantidad de
luz que no es transmitida por la suspensin y no es capaz de emerger
de sta en la misma direccin que el rayo incidente). Si un Ag y un Ac
se combinan en un medio lquido, se forman agregados de

inmunocomplejos que quedan en suspensin, dando un aspecto turbio a


este lquido. Cuando las partculas detectadas por turbidimetra son
inmunocomplejos la tcnica se llama inmunoturbidimetra. Tcnica
cuantificativa.
-

TCNICAS DE INMUNOCROMATOGRAFA:
o Muy rpidas, son tcnicas cualitativas.

2.

REACCIONES DE PRECIPITACIN

Para que tengan lugar estas reacciones el Ag tiene que ser soluble.
Poco sensibles y muy especficos. Para investigacin.
Pueden ser cualitativas (Rh, test embarazo) y cuantitativas (ATIII test de
Manchinni, test de embarazo inhibicin de la aglutinacin).
Clasificacin:

- En medio lquido:

o Cuantitativas
o Cualitativas: Ring test

- En medio semislido (en gel):

o Sin aplicacin de corriente lquida:


Inmunodifusin:
Cualitativas:
o I. simple unidimensional
o I. doble:
Unidimensional
Bidimensional
Cuantitativas :
o I. simple bidimensional
o Con aplicacin de corriente lquida:
Inmunoelectroforesis :
Cualitativas
Cuantitativas

Consideramos unidimensional cuando la difusin se realiza en un tubo capilar, de


hemlisis o de ensayo
Y bidimensional cuando empleamos una superficie como porta o placa Petri.
Por otro lado hablaremos de:
- Difusin doble cuando difunden los 2 componentes de la reaccin, o sea, el Ag
y el Ac
- Difusin simple cuando solo difunden uno de los dos componentes, el Ag o el
Ac (el otro reaccionante deber estar incorporado en el medio para que se
pueda dar la reaccin Ag-Ac).

3.

REACCIONES DE AGLUTINACIN

FUNDAMENTO:
Son reacciones Ag-Ac en las cuales el Ag es forme
Las partculas que dan forma a los Ag pueden ser:
- Vitales: hemates, leucocitos, mo
- Inertes: carbn vegetal, ltex, gelatina. Lo ms utilizado: el ltex
Ac IgM
Las ventajas que presentan las reacciones de aglutinacin frente a las de
precipitacin son:
- Ms baratas: no requieren material especializado
- Ms sensibles
- Ms rpidas
- Ms fciles de visualizar
Pueden ser:
- Cualitativas (grupo AB0 y Rh)
- Cuantitativas (puedo cuantificarlo con diluciones seriadas en base 2 o 10)
Importante el momento de la extraccin por el periodo ventana.
Extraccin periodo ventana 0
Primer test cualitativo despus si el primero es + se realiza un test cuantitativo
Reacciones cruzadas: que ese Ac reacciona contra otro Ag aparte del que
nosotros buscamos, por tanto, menos especificidad.
Suero del paciente: determinacin de Ac (normalmente) pero tambin de Ag en
algunas ocasiones
Ej: aglutinacin que determinamos Ag diagnstico hepatitis B (busco en el suero
del paciente el Ag HBs (s = superficie o australia))
DEFINICIONES:
- TTULO: es la inversa de la mxima dilucin con la que la reaccin ha dado
positivo

SENSIBILIDAD: cantidad mnima de sustancia problema que es capaz de


detectar la prueba
utilizada para hacer la determinacin

UNIDAD MNIMA DETECTABLE: es igual a sensibilidad: cantidad mnima


que se detecta en la
tcnica (UMD)

TASA o CONCENTRACIN: se calcula multiplicando el ttulo por la UMD o


sensibilidad. Su unidad
de medida ser la de la
sensibilidad porque el ttulo no tiene unidad

4.

Ag FEBRILES

Algunos mo son capaces de producir una sintomatologa con fiebre elevada como es
el caso de numerosas salmonelas, proteus y brucelas.
Para diagnosticarlos se recurre a los llamados Ad Febriles que son suspensiones
bacterianas especialmente preparadas para realizarlas en seroaglutinacin y
detectar la presencia de Acs especficos asociadas a dichas infecciones.

PREGUNTAS DEL PROTOCOLO DE Ag FEBRILES


1. Cul es el Ag y el Ac? Dnde se encuentran?
Ag Suspensin de Brucella, Proteus.. En los reactivos
Ac El correspondiente Ac de dicha suspensin. En el suero del paciente
2. Qu te llama la atencin sobre los reactivos? Comntalo
Que tienen un tipo de color para cada Ag, tambin tiene distinta cantidad
para cada Ag y distinto tiempo de incubacin
3. Qu significa el control positivo polivalente? Cules son los
resultados esperados?
Es un suero con Acs antitodos los Ag. Que siempre aglutinar, saldr siempre
positivo
4. Es fiable utilizar un reactivo caducado? Raznalo
No porque las suspensiones antignicas caducadas pueden presentar
reacciones negativas falsas
5. Define ttulo
Inversa de la mxima dilucin con la que la reaccin ha dado positivo
6. Comenta las causas de error que debes evitar segn el protocolo
o No utilizar reactivos caducados porque pueden dar falsos negativos.
Tambin pueden dar falsos negativos los pacientes con tto de
antibiticos
o Tener cuidado con la contaminacin bacteriana de las suspensiones,
muestras o solucin salina, la congelacin de los Ag y trazas residuales
de detergente en los tubos, y los sueros viejos pueden dar falsos
positivos
7. Control de calidad: qu es y para qu se utiliza?
Son controles positivos y negativos, as como tubos control de las
suspensiones.
Para confirmar el correcto funcionamiento del reactivo

Ag FEBRILES CROMATESTPRUEBA CUALITATIVA


(PLACA VISUALIZADORA

ROSA DE VENGALA CON PLACA VISUALIZADORA


(BRUCELLOSIS)

MEZCLAR CON PALILLO


AGITAR 4

Ag FEBRILES CROMATEST PRUEBA EN TUBO