Biologa

ESBI-FACI-UNJBG-2014
MITOSIS

I.

INTRODUCCION
La mitosis es un proceso biolgico en el que una clula origina otras dos genticamente
iguales. Es parte de un proceso continuo, caracterstico de clulas somticas diploides de los
eucariontes, al que se denomina ciclo celular, el cual consiste de dos fases: la interfase y la fase de
divisin. Durante la interfase los ncleos muestran una apariencia granular y difusa, los
cromosomas estn completamente desespirilizados y pueden notarse uno o ms cuerpos oscuros
denominados nuclolos. La interfase consta de tres subfases, en la interfase o fase S (de sntesis)
el ADN de cada cromosoma se replica produciendo dos copias exactas llamadas cromtidas
hermanas las que se encuentran unidas por el centrmero. La clula al termino de esta fase es 2n
4c, (dura 6 a 8 h). La fase S es precedida por una fase denominada G1 (gap: hueco o intervalo) y
seguida de otra fase llamada G2. La fase G1, en una clula prototipo es el periodo que sigue a una
divisin celular y suele durar (6 a 12 h), la clula dobla su tamao y masa debido a la expresin de
los genes que codifican para las protenas responsables de su fenotipo particular. El periodo
comprendido entre el termino de la replicacin del ADN y el inicio de la divisin de la fase G2 (3 - 4
h). Durante ella las clulas se preparan para la divisin de dos clulas hijas, en este periodo
sintetizan todas las enzimas que intervienen en la divisin celular. En la fase G2, adems, el
organizador de los microtbulos o centrosoma se divide en dos, y los dos productos migran hacia
los polos del ncleo.
II. OBJETIVOS
Observar e identificar las diferentes fases del ciclo de reproduccin celular de la mitosis.
Analizar los eventos morfolgicos y moleculares ocurridos durante los procesos de divisin celular.
III.
-

MATERIALES
Muestras de tejido en constante divisin celular
Lunas de reloj
Lminas portaobjetos
Lminas cubreobjetos
Mechero
Bistur
Pinzas
cido actico al 50%
Orceina cetica
Microscopios

IV. PROCEDIMIENTO
FUNDAMENTO: Con esta tcnica de tincin se vern los ncleos y cromosomas de color rosceo
morado. La orceina tie especficamente la cromatina, la asociacin de ADN y protenas, que
durante la interfase se encuentra relativamente descondensada ocupando todo el espacio del
ncleo, y durante la divisin se condensa formando los cromosomas.
Con el squash se rompen la estructura interna de la raz, las clulas se dispersan y extienden por
toda la preparacin, separndose unas de otras. Cuanto ms extendidas y ms planas por el
aplastado, mejor las observaremos.
En todas las clulas se podrn diferenciar: el citoplasma no teido, el ncleo densamente teido y
en cuyo interior se podr observar ocasionalmente una o dos regiones poco o nada teidas (los
nuclolos) que son muy ricos en RNA y no se tien de orceina. Como el ncleo tiene un volumen,
ms o menos esfrico, no se detectan cuando se encuentran en la cara opuesta. Allium cepa tiene
dos nucleolos, pero a veces se funden en uno, en estos casos tiene mayor tamao.
La pared celular, caracterstica de las clulas vegetales que se encuentra externa a la membrana,
no se tie pero deducimos su presencia por la forma rectangular o cuadrada que tienen las clulas,
a diferencia de las clulas animales que no la poseen y siempre tienen formas ms esfricas y
menos angulosas.
Los cromosomas se vern en aquellas clulas que se encuentran en mitosis.

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V.

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obtener raicillas de cebolla (Allium cepa) de la siguiente manera: las raicillas de cebolla se
obtiene colocando una semana antes de la prctica, un bulbo de cebolla sin catfilas externas y
quitndoles todas las raicillas secas. En la parte ecuatorial se introducen 3 4 mondadientes
distribuidas equidistantemente para suspender el bulbo en la boca de un vaso con agua
corriente, permitiendo que el lquido se pinga en contacto con el disco germinativo, para permitir
la emisin de nuevas races.
Con un bistur realizar un corte transversal de 2 3 raicillas entre los 2 3 mm del extremo
apical, obtenindose as una muestra por cada raicilla.
Colocar las muestras obtenidas en una placa Petri conteniendo el fijador (acido actico al 50
%) por un tiempo mnimo de 5 minutos (5 a 30 minutos).
Trasladar las muestras a un aluna de reloj y agregarle orceina actica en cantidad suficiente
para cubrir la muestra.
Realizar el calentamiento utilizando mechero de alcohol hasta la emisin de vapores, luego
se deja enfriar durante 5 minutos.
Repetir el calentamiento dos veces ms. Nota: el tiempo de coloracin est en funcin al
tamao de los cortes y a la maduracin del colorante.
Colocar la muestra en el centro de la lmina portaobjetos, agregar una gota de colorante. La
orceina tie de manera permanente los tejidos y la piel por lo que hay que tener cuidado con su
manejo, y no deben respirarse los vapores que se desprenden durante la tincin y el
calentamiento, para lo cual debe mantenerse la cabeza alejada y el brazo extendido. Asimismo,
debe ponerse varias capas de papel filtro al aplastar para evitar mancharse el dedo, ya que
adems de teir puede irritar levemente la piel al tener actico y clorhdrico.
Colocar una laminilla cubreobjetos.
Con una lpiz carboncillo golpee el cubreobjetos en forma concntrica de adentro hacia
afuera.
Con un papel filtro eliminar el exceso de colorante.
Cubrir la lamina preparada con papel filtro y presione fuerte, con el dedo pulgar, el
cubreobjeto (squash).
Observar en el microscopio con objetivo de mediano y mayor aumento.
Identificar las diferentes fases de la mitosis y graficarlos.
RESULTADOS

VI. DISCUSIN
VII. CONCLUSIONES
VIII. BIBLIOGRAFA
IX.
1.
2.
3.
4.
5.

CUESTIONARIO:
Cul es la accin de cido actico sobre las clulas de las races?
Cul es la fase mittica ms frecuente?
Qu sucede en la profase de la mitosis?
Describa como se lleva a cabo la citocinesis en las clulas animales?
Cmo estn formados los cromosomas de las glndulas salivales?