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Ctedra de Microbiologa II

Laboratorio - Carrera: Bioqumica


TRABAJO PRACTICO No 3
ETS SECRECIONES GENITALES
OBJETIVOS:
Conocer la tcnica laboratorial para la toma y el procesamiento
de muestras genitales.
Identificar los grmenes patgenos ms aislados de muestras
genitales a travs de bateras de identificacin.

MARCO TEORICO
TOMA DE MUESTRAS
Indicaciones previas
No tomar antibiticos 48 hs antes de la toma de muestra.
No colocarse vulos ni tabletas vaginales.
No tener relaciones sexuales 48 hs antes de la toma de
muestra.
Higiene de genitales externos con agua y jabn (no ducha
vaginal).
SECRECION DE GLANDULA DE BARTHOLINO:
Limpiar los genitales externos con gasa embebida en solucin
antisptica como cloruro de benzalconio u otra similar. Limpiar bien la
zona y descartar exudado superficial si se observa.
Pus del absceso de la glndula puede ser colectado por presin suave
del ducto. Tambin puede ser apropiado aspirar el lquido del ducto
(preferible) con aguja y jeringuilla de 1 ml.
CERVICAL O ENDOCERVICAL:
Visualizar el crvix mediante utilizacin de un especulo sin lubricante.
Limpiar el excedente de secrecin.
Remover la mucosa y secrecin del canal con un hisopo y descartarlo.
Con un nuevo hisopo estril de alginato de calcio, dacrn o algodn
no txico, obtener muestra del canal endocervical. Colocar el hisopo
en tubo con Cary Blayr o Stuart.
Con otro hisopo puede colectar muestra para colocarla en un tubo con
solucin salina para el examen directo.
OBS: Para Chlamydia trachomatis, utilizar el kit de toma de muestra
apropiado, haciendo girar el cepillito colector de modo a desprender
las clulas del endocervix.
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VAGINAL:
Obtenga la secrecin de la mucosa vaginal (fondo de saco) con un
hisopo estril y con la ayuda de un espculo estril si es necesario.
Con otro hisopo puede colectar muestra para colocarla en un tubo con
solucin salina para el examen directo. Esta muestra puede servir
tambin para confirmar vaginosis bacteriana, candidiasis vaginal o
Tricomoniasis.
SECRECION URETRAL VARONES:
Colecte la muestra al menos 1 hora despus que el paciente ha
orinado.
Inserte un hisopo urogenital 2-4 cm dentro del lumen de la uretra.
Rote el hisopo. Preferiblemente inocule directamente en un medio de
Thayer-Martin. Utilice otro hisopo para tomar muestra para el frotis
directo.

PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS


EXAMEN DIRECTO
Se debe informar la presencia y nmero promedio en 10 campos de
leucocitos y clulas epiteliales planas. Se puede informar la cantidad
en rangos promedio. Se recomienda contar hasta 30, en caso que la
cantidad sea mayor se puede informar como mayor a 30.
Casi todos los estudios han demostrado que la presencia de 4 o ms
leucocitos polimorfonucleares por campo, constituye un slido indicio
de uretritis en el varn, aunque en casi todos los casos esta infeccin
cursa con abundantes polimorfonucleares (ms de 10 por campo).
En secrecin vaginal, se debe observar cuidadosamente el examen en
fresco para detectar la presencia de Trichomonas vaginalis y esporos
micticos. Se informa su presencia o ausencia, por ej:
1) Se observan esporos micticos. No se observan Trichomonas
vaginalis.
2) Se observan Trichomonas vaginalis. No se observan elementos
micticos.
3) No se observan Trichomonas vaginalis ni esporos micticos.
COLORACIN DE GRAM
Se buscar presencia de:
Bacilos Gram positivos (Lactobacillus sp, Coryunebacterium sp)
Cocobacilos Gram Negativos (Gardnerella vaginalis)
Diplococos Gram negativos intra y extracelulares (Neisseria
gonorrhoeae)

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Cocos Gram positivos (Enterococcus sp, Streptococcus


agalactiae)
Flora anaerobia (Complejo GAMM)

CULTIVO
En general las muestras deben ser sembradas en agar chocolate,
sangre y Mac Conkey. Si se dispone de medio Thayer Martin es
preferible que este sea el primer agar a ser sembrado, y mejor si se
puede sembrar en la sala de toma de muestra una vez realizada la
misma.
El Medio Thayer Martin es agar chocolate enriquecido con
suplementos y al cual se le ha agregado adems una serie de
antibiticos tales como Colistin (para inhibir los bacilos Gram
negativos), Nistatina (para inhibir las levaduras) y Vancomicina (para
inhibir la flora Gram positiva). Este medio es utilizado para el
aislamiento de gonococos, ya que este microorganismo debe ser
aislado de muestras que pueden estar contaminadas con comensales.
El mtodo de siembra es el de aislamiento, previa inoculacin de la
muestra con hisopo.
Las placas de agar chocolate y agar Thayer Martin deben ser
incubadas en ambiente hipercpnico y hmedo, es decir, con un
algodn hmedo y una vela encendida dentro de la jarra de
incubacin si no se dispone de estufas especiales.
Las placas deben ser incubadas a 35 C y observadas a las 24 y 48 hs
de incubacin.

ACTIVIDADES
1) Realizar el procesamiento de la muestra recibida: Examen
directo, coloracin de Gram y cultivo.
2) Incubar las placas y observar a las 24 hs de incubacin. En
caso de presencia de colonias betahemolticas realizar
pruebas de CAMP para la identificacin de Streptococcus
agalactiae.
3) Leer e interpretar los resultados de las pruebas de
identificacin.
4) Completar el informe correspondiente.

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OBS: Por lo general no se requiere realizar antibiograma de las
muestras genitales, con excepcin del aislamiento de Neisseria
gonorrhoeae, cuya sensibilidad se realiza en un medio especial
llamado Agar GC.