Cromatografa de lquidos:

En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs

de una columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica
en HPLC es el resultado de las interacciones especficas entre las
molculas de la muestra en ambas fases, mvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos
de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography)
no est limitada por la volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas,
productos naturales lbiles, materiales polimricos y una gran variedad
de otros grupos poli funcionales de alto peso molecular. Con una fase
mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra disponible para la
selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que
permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms
posibilidades para la separacin.

La bomba:
La misin de la bomba es la de suministrar un caudal constante y libre
de pulsos de la fase mvil a travs de la columna, sin que el flujo sea
influido por la presin en cabeza de columna, ya que sta puede variar

por obstruccin de las lneas de conduccin, del filtro de la cabeza de la

columna, etc.

Sistemas de inyeccin:
El mtodo de introduccin de la muestra en CLAE, es de importancia
capital, pues un mal sistema de inyeccin puede dar lugar a
ensanchamientos de la banda cromatografa que deterioren la eficacia
del sistema cromatogrfico. Un inyector ideal debe tener las siguientes
caractersticas:
- Introducir la muestra en la columna como una banda lo ms estrecha
posible.
- Ser de fcil manejo.
- Dar lugar a resultados reproducibles, tanto en la cantidad de muestra
inyectada como en el ensanchamiento que origina en la banda
cromatogrfica.
- Ser capaz de trabajar a presiones elevadas.

Fundamentalmente existen dos tipos de inyectores manuales:

los de jeringa y los de vlvula.

Conducciones y conexiones:
Como ya es conocido, la presencia de volmenes muertos es uno de los
grandes problemas de los equipos de cromatografa de lquidos, ya que
stos dan origen a prdidas en la eficacia del sistema y, por lo tanto, en

la capacidad de separacin. En particular, todas las conducciones y

conexiones entre inyector y columna, y entre columna y detector son de
la mxima importancia.

Detectores
Un detector para cromatografa es un dispositivo que permite medir, a la
salida de la columna, una propiedad fsica del eluyente, que deber
depender de la composicin de ste. La deteccin en cromatografa se
realiza, habitualmente, en continuo, aunque es posible la utilizacin de
colectores de fracciones para la identificacin y cuantificacin de
pequeas fracciones del eluyente.

La columna:
La columna es el elemento fundamental de un cromatgrafo de lquidos,
puesto que es en ella donde tiene lugar la separacin; por lo tanto,
resulta fundamental una correcta eleccin de la columna adecuada para
cada separacin, ya que con una columna inadecuada o de mala calidad
se nunca se obtendrn buenos resultados aunque se disponga del.

Las columnas ms utilizadas en cromatografa de

lquidos son las de relleno; estas columnas consisten
en un tubo, generalmente de acero, relleno de una
fase estacionaria adecuada al tipo separacin que se
pretende llevar a cabo. El dimetro interno vara entre
2 y 60 mm dependiendo su utilizacin, a escala
analtica o semipreparativa, y su longitud vara entre
5 y 30 cm.mejor instrumental.