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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIOANALISIS
REGION XALAPA
PRACTICA 1
“DETERMINACIÓN DE AMILASA SERICA Y URINARIA”

FUNDAMENTO :
El almidón reacciona con el yodo y forma un compuesto de color azul que se
mide colorimetricamente. La digestión del almidón por la amilasa disminuye la
intensidad del color azul:
MATERIAL:
3 Tubos de ensaye de 13 x100
Foto colorímetro corning filtro verde
Material de vidriería y venopuncion.
REACTIVOS:
 Solución Amortiguadora de almidón.
 Solución de yodo 0.01 n
 1 ml de suero.
ALGORITMO:

Extraer 5 ml de Centrifugar 5 minutos
sangre a 2500 rpm.
Tubo 1 2
(r-1) sustrato 0.5 ml 0. 5 ml
(r-2) amortiguador - 5 ml
Baño maría a 37°c durante 5 minutos
Suero. - 0.02 ml
Mezclar incubar 37°C durante 7 minutos
Agua destilada 8.0 ml 8.0 ml
Reactivo color 1.0 ml 1.0 ml

CALCULOS:

Absorbancia.

Tubo 1 .35

Tubo 2 .2

=.35-.2/.35 x 800=320 U.A/100 ml
EL RESULTADO ES EN UNIDADES DE AMILASA POR 100 ML
VALORES NORMALES:
SUERO: 80-100 UA/100 ML
ORINA:80-135 UA/100 ML R
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PRACTICA 2
“GLICEMIA”
GENERALIDADES:

Si el organismo produce demasiada hormona hipofisaria o una cantidad de
insulina escasa, los niveles de azúcar en la sangre se elevan de forma anormal y
se origina hiperglucemia. En estas condiciones, la sangre puede contener hasta
cuatro veces la cantidad de azúcar normal. La hiperglucemia no es letal en sí
misma, pero es un síntoma de una enfermedad seria, la diabetes mellitus.
Algunas veces, la diabetes se debe a un tumor u otras anomalías en el páncreas
que impiden la formación de insulina. Los pacientes diabéticos no mueren por la
hiperglucemia pero, si no se les administran inyecciones de insulina, pueden
morir por la acumulación de sustancias tóxicas en el organismo. Estas
sustancias se producen por alteraciones en el metabolismo de las grasas ya que
los diabéticos consumen grasas en lugar del azúcar.

MATERIAL:
 MATERIAL DE VENOPNCION
 SUERO 1 ML
 CENTRÍFUGA
 FOTOCOLORIMETRO FILTRO VERDE
 3 TUBOS DE ENSAYE DE 13X100
ALGORITMO:

Extraer 5 ml de Centrifugar 5 minutos
sangre a 2500 rpm.

Añadir solución estándar glucosa 100 mg/100 ml
Tubos 1 2

Solución estándar 20 micro moles de 20 micro moles de
glucosa glucosa suero

reactivo 20 ml 20 ml

MEZCLAR Y INCUBAR A 37°C Y LEER LA ABSOSBANCIA

ABSORBANCIA

BLANCO 0

ESTANDAR 0.09

SUERO PROBLEMA 0.07

CALCULOS
A-blanco-A-probema/A-blanco
Glucosa=.07/.09x100=77.7

Valores normales: 70-110
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PRACTICA 3
“DETERMINACIÓN DE FRUCTOSA EN ORINA”
GENERALIDADES:
La fructosa se convierte en hidroxi-metil-furfural, este compuesto se
condensa con el resorcinol de Selivanoff y da como resultado un precipitado
de color rojo ladrillo. El precipitado deberá formar una solución roja en
etanol.
La fructosa puede aparecer en la orina de la diabetes mellitus, la fructosina
encuentra en el hígado y forma la fructosa 1-fosfato, también se ha
demostrado su presencia en el riñón y en el intestino
La inhibición del metabolismo de la fructosa, se llama intolerancia, uno de esos
errores es la deficiencia de fructoquinasa que produce la fructosemia esencial,
este defecto es raro, pero es posible que sea mas frecuente debido que no
tiene consecuencias graves por lo que pasa inadvertido.

MATERIAL Y EQUIPO:
1 Gradilla metálica
3 Tubos de ensaye de 15x150
Pipetas graduadas
Cazo, Mechero, Tripie, Tela de asbesto
1 Vaso p.p de250 ml
Muestra de orina de 24 horas.

REACTIVOS:
Reactivo de Selivanoff

ALGORITMO:
Extraer 5 ml de Centrifugar 5 minutos
sangre a 2500 rpm.

Pasar a ebullición El tubo 1 café claro y 2 violeta
durante 5 min y palido.
enfriar.

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PRACTICA 4
“ DETERMINACIÓN DE BETA LIPOPROTEINAS”

REACTIVOS:
 Solución de cloruro de calcio.
 Solución de heparina al 1% en cloruro de cloro al 0.9%
METODO:

Algotritmo:

Extraer 5 ml de Centrifugar 5 minutos
sangre a 2500 rpm.

Tubo: 1 2 3

Sol. Cacl2 5 ml 5 ml 5 ml

Agua destilada 0.1 ml 0.1 ml -

Sol. Heparina 0.1 ml - 0.1 ml

Suero. - 0.1 ml 0.1 ml
A agitar y dejar Leer la
reposar durante 5 absorbancia en el
minutos foto colorímetro.

RESULTADOS:

ABSORBANCIA

TUBO 1 0.02

TUBO2 0.18

E= 104(.18- 0.02 )
=104( 0.16 )
=16.64 UP/P
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PRACTICA 5
“TRIGLICÉRIDOS”
FUNDAMENTO:
Los triglicéridos presentes en la muestra originan, según las
reacciones acopladas al descrito a continuación.
Triglicéridos + H2O lipasa Glicerol +Ácidos grasos

Glicerol + ATP Glicerol quinasa Glicerol-3P + ADP

MATERIAL:
Baño de agua 37°C
Espectrofotómetro.
Suero o plasma
Anticoagulantes con heparina, EDTA

ALGORITMO:

Extraer 5 ml de Centrifugar 5 minutos
sangre a 2500 rpm.
Dejar a temperatura ambiente el reactivo durante unos minutos a t.
Ambiente.
Pipetear los tubos de ensaye como sigue:

Tubo Blanco patrón muestra

Patrón triglicéridos ---- 10 ml ----

Muestra ---- ---- 10 ml
Reactivo. 10 ml 10 ml 10 ml

Agitar y incubar los tubos 15 minutos a temperatura ambiente (16-25°C) a 5
minutos a 37°C

CALCULOS: A-muestra/A-patrón x 200= mg/dl triglicéridos
=0.61/0.57x200=214 mg/dl

Absorbancia
Abs. mv 0.61
Abs. po 0.57
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PRACTICA 6
“ LÍPIDOS TOTALES”

FUNDAMENTO:

Los lípidos forman con ácido sulfurico/acido fosforico/vainilina un
complejo.

ALGORITMO:

Extraer 5 ml de Centrifugar 5 minutos
sangre a 2500 rpm.
Tubos: blanco estándar prueba

Solución 1 - 0.05 ml -

Prueba - - 0.05 ml

Ácido sulfúrico - 2.00 ml 2.00 ml

Mezclar bien con una torunda de algodón y poner exactamente 10
minutos en baño de agua hirviendo en termoblock. Enfriar con agua
fría.

Pipetear de nuevo en los tubos de ensaye seco:

De la mezcla de la reacción - 0.10 ml 0.10 ml
Ácido sulfúrico 0.10 ml - -
Solución 2 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
Mezclar muy bien y dejar reposar 30 minutos a 20-25°C y verter
las soluciones en las cubetas seca y medir extinciones de la prueba
y del estándar frente al blanco reactivo dentro próximo de 30
minutos.
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PRACTICA 7
“CUERPOS CETONICOS”
FUNDAMENTO:

Acetonuria, presencia de acetona y de cuerpos diacéticos en la orina. La acetona es un cuerpo

cetónico, que se produce en el metabolismo oxidativa, y que está presente en la orina normal del

ser humano en cantidades muy pequeñas.

Existen diversas situaciones en las que la acetona aparece en cantidades mayores en la orina,

como ocurre en el embarazo, en situaciones de ayuno, en la cetoacidosis alcohólica y en la

cetoacidosis diabética, por indicar las más frecuentes. Todas estas situaciones tienen en común

una acumulación anormal de cetonas en el organismo, a consecuencia de la insuficiencia o de la

inadecuada utilización de los hidratos de carbono. En vez de éstos, se comienzan a utilizar como

fuente metabólica los ácidos grasos, cuyos productos finales, las cetonas, se van acumulando y,

en consecuencia, su presencia se va haciendo patente en la orina.

La cetoacidosis diabética es una complicación de la diabetes insulinodependiente y tiene lugar
cuando se produce un déficit de insulina y un aumento de la concentración de glucagón. Se
caracteriza por la presencia de acetonuria, la pérdida de potasio en la orina y el aliento con un
olor afrutado por la presencia de acetona

MATERIAL:
 Placa excavada
 Espátula
 Orina
 Reactivo rothera
 Agitador
ALGORITMO:

1.-E n un placa excavada de porcelana depositar 5 gotas de orina

2.-Mas reactivo de rothera aplicarlo con una espátula

3.-.Revolver con el agitador

4.-Anotar los resultados: color violeta = R +
color amarillo = R-
5.- Verificar con las tiras reactivas
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PRACTICA 8
“COLESTEROL”

Colesterol, alcohol complejo que forma parte de todas las grasas y aceites animales.

Actúa como precursor en la síntesis de vitamina D. El colesterol pertenece a un

grupo de compuestos conocidos como esteroides, y está relacionado con las

hormonas sexuales producidas en las gónadas y las hormonas de la corteza

suprarrenal.

Cuando el colesterol se eleva en la sangre por encima de unos niveles, considerados

como normales, se produce una enfermedad conocida como hipercolesterolemia. Se

consideran normales, valores de colesterol en la sangre iguales o inferiores a

200 mg/dl. En las hipercolesterolemias leves los valores de colesterol se sitúan

entre 200 y 249 mg/dl; en las hipercolesterolemias moderadas se sitúan entre 250

y 299 mg/dl y en las hipercolesterolemias graves los valores de colesterol superan

los 299 mg/dl. Sin embargo, hay que considerar que, aunque el colesterol es el

factor de riesgo más importante de las cardiopatías isquémicas en pacientes

menores de 50 años, existen otros factores de riesgo cardiovascular, como la
hipertensión, la diabetes, el tabaquismo o la obesidad, cuyos efectos se suman a la

hora de facilitar un evento cardiovascular.

sterol a unos rangos satisfactorios.

MATERIAL:
 Solución patrón 1 y 2
 Agua destilada
 Reactivo colesterol 1
 Pipetas
 Ácido sulfúrico
 Vaso pp.
 Baño maria
 Foto colorímetro corning

ALGORITMO:

1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

2.-Preparar una serie de tubos como sigue:

Problema Patrón Blanco
Suero .05 ml - -
Solución patrón 2 - 0.05 ml -
Agua destilada - - 0.05 ml
Reactivo de 2 ml 2 ml 2 ml
colesterol 1
Al cabo de 10-60 minutos pipetear cada tubo
Ácido sulfúrico 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
B-M a temperatura 15-25 °C por 5 minutos

RESULTADOS:
COLESTEROL
Epr/Ep x 300= mg/100 ml 0.04/0.2x300=60 mg/100 ml
Absorbancia:
Parton: 0.2
Problema:0.04

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PRACTICA 9

“TGP”
FUNDAMENTO:

Transaminasa, conjunto de enzimas que catalizan la transferencia de un grupo amino

desde un alfaaminoácido a un alfacetoácido. Entre ellas destacan varias enzimas

séricas, especialmente la aminotransferasa aspártica (AST o GOT) y la

aminotransferasa de alanina (ALT o GPT), que aportan una importante información

clínica para poder identificar y valorar distintos trastornos hepatocelulares. La ALT

es una enzima casi exclusivamente hepática, mientras que la AST está presente en

muchos otros tejidos.

Cuando se produce una necrosis hepática en el curso de una enfermedad, la

cantidad de estas enzimas aumenta, en mayor o menor grado. Esto ocurre por

ejemplo en cuadros de hepatitis virales agudas, hepatopatías tóxicas o en un colapso

de la circulación hepática prolongado.

MATERIAL:
 Sustrato TGP
 BM a 37°C
 Suero
 Agua destilada
 Reactivo 2,4 DNFH
 Diluyente para enzimas

ALGORITMO:
1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

250

2.-Preparar una serie de tubos como sigue:

Sustrato TGP 0.5 ml 0.5 ml
Blanco. Problema.

Colocar en baño maria a 37°C uno minutos y luego agregar
Suero .2
Agua destilada .2
Mezclar por agitación suave e incubar 30 minutos y agregar
Reactivo 2,4 DNFH .05 ml 0.5 ml
Mezclar y dejar 10 minutos a 37°C Y agregar:
Diluyente para enzimas 5 ml 5 ml

RESULTADOS:

Absorbancia problema= 0.03= 7 U/I

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PRACTICA 10
“TGO”
FUNDAMENTO:

Transaminasa, conjunto de enzimas que catalizan la transferencia de un grupo amino

desde un alfaaminoácido a un alfacetoácido. Entre ellas destacan varias enzimas

séricas, especialmente la aminotransferasa aspártica (AST o GOT) y la

aminotransferasa de alanina (ALT o GPT), que aportan una importante información

clínica para poder identificar y valorar distintos trastornos hepatocelulares. La ALT

es una enzima casi exclusivamente hepática, mientras que la AST está presente en

muchos otros tejidos.

Cuando se produce una necrosis hepática en el curso de una enfermedad, la

cantidad de estas enzimas aumenta, en mayor o menor grado. Esto ocurre por

ejemplo en cuadros de hepatitis virales agudas, hepatopatías tóxicas o en un colapso

de la circulación hepática prolongado.

ALGORITMO:
1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

250

2.-Preparar una serie de tubos como sigue:

B D
Sustrato TGO 0.5 ml 0.5 ml
Colocar en baño maria a 37 °C y agregar
Suero 0.01 ml
Agua destilada 0.01 ml
Mezclar por agitación suavemente e incubar 30 minutos y agregar
Reactivo 2,4 DNFH
Mezclar e incubar 10 minutos A 37 °C Y agregar
Diluyente para enzimas 5 ml 5 ml

RESULTADOS:

3.- Leer la absorbancia del tubo problema.
=0.03= 7 U/I
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PRACTICA 11
“UREA”
FUNDAMENTO:

Urea, compuesto cristalino incoloro, de fórmula CO(NH2)2, con un punto de fusión

de 132,7 °C, conocido también como carbamida. Se encuentra abundantemente en la

orina de los humanos y otros mamíferos (véase Aparato urinario). En cantidades

menores, está presente en la sangre, en el hígado, en la linfa y en los fluidos

serosos, y también en los excrementos de los peces y muchos otros animales

inferiores. La urea se forma principalmente en el hígado como un producto final del

metabolismo. El nitrógeno de la urea, que constituye la mayor parte del nitrógeno de

la orina, procede de la descomposición de las células del cuerpo, pero, sobre todo, de

las proteínas de los alimentos. La urea está presente también en mohos de los

hongos así como en las hojas y semillas de numerosas legumbres y cereales. Es

soluble en agua y en alcohol, y ligeramente soluble en éter. La urea se obtiene
mediante la síntesis de Wöhler, que fue diseñada en 1828 por el químico alemán

Friedrich Wöhler.

Debido a su alto contenido en nitrógeno, la urea preparada comercialmente se

utiliza en la fabricación de fertilizantes agrícolas. La urea se utiliza también como

estabilizador en explosivos de nitrocelulosa y es un componente básico de resinas

preparadas sintéticamente

Material:

 Ureasa

 Micropipeteas

 Baño maria

 Rreactivo 1 y 2

 Solucion standard

ALGORITMO:

1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

250
2.-Preparar una serie de tubos como sigue:

B S D
Standard - 20 -
Suero - - 20 ul
Ureasa 1 gota 1 gota 1 gota
Mezclar por agitación suave e incubar a 5 minutos a 37°C
Reactivo 1 1 ml 1 ml 1 ml
Reactivo 2 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar por agitación suave e incubar a 5 minutos a 37°C
AGUA 10 ml 10 ml 10 ml
DESTILADA

RESULTADOS:

Calculos:
Urea(g/l)=D x factor
Factor=0.60 g/l /s
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PRACTICA 12
“UREMIA”
FUNDAMENTO:

La uremia es la intoxicación producida por la acumulación en la sangre de los
productos de desecho que suelen ser eliminados por el riñón. Aparece en la
fase final de las enfermedades crónicas del riñón y se caracteriza por
somnolencia, cefalea (dolor de cabeza), náuseas, insomnio, espasmos,
convulsiones y estado de coma. El pronóstico es negativo, sin embargo, el
desarrollo de las diferentes técnicas de diálisis periódica en la década de
1980, cuyo objetivo es eliminar de la sangre los productos de desecho y
toxinas, y la generalización de los trasplantes de riñón han supuesto un gran
avance para estos pacientes.
ALGORITMO:

1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

250

2.-Preparar una serie de tubos como sigue:
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PRACTICA 13
“CREATININA”
FUNDAMENTO:

CREATININA
En los seres humanos la orina normal suele ser un líquido transparente o amarillento. Se

eliminan aproximadamente 1,4 litros de orina al día. La orina normal contiene un 96% de agua

y un 4% de sólidos en solución. Cerca de la mitad de los sólidos son urea, el principal producto

de degradación del metabolismo de las proteínas. El resto incluye nitrógeno, cloruros,

cetosteroides, fósforo, amonio, creatinina y ácido úrico.

MATERIAL:
 Standard
 Orina
 Agua
 Reactivo 1 y 2
 Suero
 Fotocolorimetro
 Centrífuga.
ALGORITMO:
1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

250

2.-Preparar una serie de tubos como sigue:

B S D D
Desproteínizad - - 3 ml 3 ml
o
Standadrd. - 0.5 ml - - -
Orina - - - 0.5 ml
Agua 1 ml 0.5 ml - 0.5 ml
Reactivo 1 2 ml 2 ml 2ml 2 ml
Reactivo 2 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Mezclar por inversión y incubar 20 minutos y leer absorbancia

RESULTADOS:

CALCULOS:
Creatinina en suero mg/i=d xf
F=20 mg/L
F=20 mg/i/0.07=285x0.5=142ml/l
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PRACTICA 14
“BILIRRUBINA”
FUNDAMENTO:
La hemoglobina es una proteína contenida en los eritrocitos que constituye,

aproximadamente, el 35% de su peso. Para combinarse con el oxígeno, los eritrocitos

deben contenerla en cantidad suficiente y esto depende de los niveles de hierro que

existan en el organismo, los cuales se obtienen de los alimentos por absorción en el

tracto gastrointestinal y se conservan y reutilizan de forma continua. La deficiencia

de hemoglobina originada por la carencia de hierro conduce a la anemia.

La hemoglobina transporta más de veinte veces su volumen de oxígeno. Su unión con

el monóxido de carbono es irreversible, es decir, no puede volver a unirse al oxígeno

ante lo que se origina la asfixia. Los eritrocitos se destruyen en el bazo o en la

circulación sanguínea después de una vida media de 120 días; entonces, su

hemoglobina se degrada hasta sus constituyentes y el hierro se reintegra en los

eritrocitos nuevos que se forman en la médula ósea. Cuando se produce la ruptura de
un vaso sanguíneo, como en una lesión, estas células se escapan hacia los tejidos.

Aquí se degradan y la hemoglobina se convierte en los pigmentos biliares,

responsables de la coloración amarillenta de los hematomas.

Las alteraciones de la estructura de la hemoglobina pueden ocasionar

enfermedades mortales. De éstas, la más importante es la anemia de células

falciformes, que implica un cambio hereditario en uno de los aminoácidos que

constituyen la molécula. Las talasemias son un grupo de enfermedades hereditarias

con un origen similar.

MATERIAL:
 Solucion fisiológica
 Pipeta y reloj
 Fotocolorimetro corning
 Suero
 Centrífuga.

Algoritmo:

1.- Extraer 5 ml sangre y centrifugar a 2500 r.p.m

250

2.-Preparar una serie de tubos como sigue:
Tubo P B
H2so4 0.2 ml 0.2 ml
NaNo3 1 gota -
Acelerador. 1.0 ml 1.0 ml
Suero. 0.2 ml 0.2 ml

Mezclar y dejar reposar 10 a 60 minutos a temperatura 15 °C
Solucion fehling 1.0 ml 1.0 ml
Mezclar. Medir. 5 a 30 minutos

BILIRRUBINA DIRECTA
TUBO P B
H2SO4 0.2 ml 0.2 ml
Nano2 I gota -
Solicion salina 2.0 ml 2.0 ml
Suero 0.2 ml 0.2 ml
Mezclar incubar 15 a 25 °c

Calculos:
Concentración de bilirrubina directa
=Ex13.7 mg/100 ml
=E x 235 mol/L
=0.14 mg/100 ml
Concentración de bilirrubina indirecta
=E x 14.0 mg/100 ml
=E x 240 mol/L
=0.14-0.157=0.017 mg/100 ml