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25/09/2015

INTRODUCCIN

HEMOCULTIVOS

El hemocultivo es una tcnica microbiolgica


cuya finalidad es la deteccin de
microorganismos en el torrente circulatorio.
El aislamiento de un microorganismo confiere
muchas ventajas, incluyendo la eleccin y
duracin ptimas del tratamiento antibitico.

Bacteremia
La ventaja del hemocultivo puede estar
limitada por distintos factores que determinan
resultados falsos positivos, falsos negativos.
Las cultivos contaminados han sido
reconocidas como un asunto problemtico por
dcadas y siguen una fuente de frustracin
igualmente para el clnico y el personal de
laboratorio.

Es la presencia de bacterias en la sangre,


puede ser transitoria, intermitente o continua.
Bacteremia transitoria
Bacteremia intermitente
Bacteremia continua

Epidemiologa de la Sepsis

Contina siendo causa importante de morbilidad y


mortalidad.
Se producen aproximadamente 250,000 casos de
sepsis en EE.UU. cada ao.
Incidencia en aumento por: mayor poblacin
aosa, mayor poblacin con inmunocompromiso,
incremento de intervenciones invasivas, aumento
de organismos resistentes.

25/09/2015

Indicaciones de Hemocultivo
Sospecha clnica de :

Sepsis
Meningitis
Endocarditis
Pelonefritis
Infeccin
intraabdominal

Fiebre de origen
desconocido
Infecciones graves de la
piel
Neumona
Osteomielitis
Artritis

Obtencin de la muestra de sangre para


cultivo

Cuando y donde puede ocurrir la bacterema


Las bacterias y hongos entran a la sangre de sitios
diversos:
Sitios intravascular (19%),
Tracto genito- urinario (17%),
Tracto respiratorio (12%),
Intestino y peritoneo (5%),
piel (5%),
Tracto biliar (4%),
Abscesos intra-abdominal (3%),
Otro conocido (8%) y
Sitios desconocidos (27 %).

Momento de la obtencin de la muestra

Momento de la obtencin de la muestra


Toma de muestra
Volumen sangre
Inoculacin de la sangre en los medios de
cultivo
Nmero de hemocultivos
Periodo de incubacin

Se ha documentado que el mejor momento para


obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30
minutos antes del pico febril .
Recoger el cultivo de sangre basada en la condicin
clnica del paciente y de la necesidad inmediata de
terapia antimicrobiana.
Tiempo entre cultivos de sangre en un perodo
24hr no es crtico.

Toma de muestra (1)

Toma de muestra (2)

Palpacin vena escogida


Limpieza de la zona con
alcohol etlico 70 durante 30
segundos
Aplicacin Povidona iodada al
10% durante 1 minuto
cubriendo una rea de unos 4
cms de dimetro.

Dejar secar el compuesto


iodado para que ejerza la
accin oxidante.
Evitar tocar con los dedos el
lugar de la venopuncin
No hablar ni toser en el
momento de realizar la
extraccin.
En los enfermos alergicos a los
compuestos iodados realizar
dos limpiezas con alcohol
etlico.

25/09/2015

Toma de muestra (3)

Colocar la aguja sobre la


vena con el bisel hacia
arriba e introduzca la aguja
en el centro de la vena sin
titubeos de 1-1,5 cm,
aproximadamente.

Volumen de sangre
El volumen de sangre obtenido para el hemocultivo
es la variable ms importante.
Esto es porque el nmero de MO presentes en sangre
de adultos es pequeo, tpicamente menos de 10
UFC/ml y a menudo menos de 1 UFC/ml.
El nmero de los microorganismos presentes por
mililitro de sangre cultivado de infantes y de nios
pequeos , tpicamente mayor de 100 a 1.000 UFC/ml,
el aumento del volumen de sangre , aumenta la
recuperacin microbiana.

Nmero de hemocultivos
Datos de 1980: 2 hemocultivos en un periodo
de 24 hr es suficiente para el diagnostico de
sepsis.
Weinstein et al ASM 2006: en 284 episodios, 1
frasco (73%), 2 (90%), 3 (96%), 4 (100%).
La obtencin de 2 a 3 hemocultivos en 24 horas
no slo aumenta la probabilidad de recuperar las
bacterias a partir de la sangre, sino que tambin
puede ser una gua para diferenciar una
bacteremia verdadera de una contaminacin.

Toma de muestra (4)


La sangre se vierte en el frasco
evitando producir hemlisis; el
tapn
de
caucho
debe
desinfectarse previamente con
yodo al 1-2%, si se trata de
frascos convencionales.
La
muestra
se
enva
inmediatamente al laboratorio
de microbiologa, debidamente
identificada.

Volumen de sangre
La proporcin entre el volumen de sangre obtenida y el
volumen de caldo de cultivo debe estar en una relacin de 1:5
1:10.
El volumen de sangre depender de la edad del paciente; por
cada venopuncin se recomienda:
Adultos: 10 30 mL
Nios: 1 5 mL
Lactantes: 1 2 mL
Neonatos: 0,5 1 mL
Para los adultos, cada mililitro adicional de sangre cultivado
aumenta la recuperacin microbiana hasta el 3%.

Periodo de incubacin
Cultivar por cinco das es suficientes para
recuperar casi todos los microorganismos
significativos (el 99%).
El periodo de cultivo para brucella spp. haba
sido polmicos hasta el estudio por Bannatyne
et el al. (1997) que demostr que 90 de 97
pacientes bactermicos llegaron a ser cultivos
positivos en un plazo de 5 das. Tiempo de
observacion hasta 21 dias.

25/09/2015

MEDIO DE HEMOCULTIVO

MEDIO DE HEMOCULTIVO

Anticoagulantes:

MEDIO

Tripticase soy broth


soybean-casein digest (SCD) broth.
Brain heart infusion (BHI) .
Columbia broth base.

MEDIO DE HEMOCULTIVO
Anticoagulantes:

MEDIO DE HEMOCULTIVO

La heparina puede ejercer actividad antimicrobiana.


Citrato de sodio de 0.5%- al 1% puede inhibir CGP.
El amilosulfato de sodio (SAS) inhibe K. pneumoniae.
EDTA inhibidor de ciertos microorganismos.

Polianetol sulfonato de sodio (SPS) al 0.025 a 0.050% . El


SPS inhibe la lisozyma, inactiva aminoglucosidos y
polymyxin B, inhiben la fagocitosis y el complemento.
El SPS inhibe el crecimiento de Neisseria meningitidis de N.
gonorrhoeae.
Gardnerella Vaginalis , Streptobacillus
moniliformis , Peptostreptococcus anaerobius , Francisella
tularensis , Moraxella catarrhalis .
Es posible neutralizar el efecto inhibidor del SPS agregando
gelatina (1.2%) a los medios de cultivo.

MEDIO DE HEMOCULTIVO
Sacarosa (10-30%).
Estabilizador
osmotico,
recuperacin
en
bacteremias por BGN en pacientes sometidos a
terapia antimicrobiana, casos en la que se prevee
un numero reducido de bacterias 10 UFC/ml o
menos.
La sacarosa ejerce un efecto protector sobre MO
que han sufrido dao de sus paredes celulares
(previniendo los cambios de presin osmtica).

MEDIO DE HEMOCULTIVO
Agente removedor de antimicrobianos :
En muestras de pacientes que reciben agentes antibiticos
betalactamicos, se puede agregar penicilinasa al medio
para inactivarlos.
Los sistemas comerciales de hemocultivos automatizados
contienes agentes removedores de antibiticos que es una
resina
no-especifica
absorbe
cualquier
agente
antimicrobiano presente en la sangre del paciente.
Las resinas polimricas capaces de unirse a las regiones
hidrfobicas de cualquier agente antimicrobiano.

PROCEDIMIENTO EN CASO DE HEMOCULTIVOS POSITIVOS

25/09/2015

Incubacin 35 C

Subcultivo con jeringa

Observacion de crecimientos en los medios

Placas a utilizar

Incubacin 35 C

Identificacin de colonias

Identificacin y Antibiograma

Microrganismos aislados de Hemocultivos


Microorganismo

(%)

257

63

Klebsiella pneumoniae

30

Staphylococcus aureus

16

Escherichia coli

16

Candida especies

15

Estreptococos viridans

12

Burkholderia cepacia

11

Enterococcus especies

11

Pseudomonas aeruginosa

10

Otros

32

Estafilococos coagulasa negativo

Total de Hemocultivos
Procesados :
3840
Positivos :
10.6 %

Total

410 100

MIELO CULTIVO
Cultivo de Medula sea
Control : 21 das
Toma de muestra:
mdico
En medios bifsicos
Grmenes:
Salmonella
Brucella

25/09/2015

Hemocultivos percutaneos vs a travs de catter vascular


Cuando los cultivos de sangre obtenidos a travs
de un cateter vascular son positivos, los
resultados podran indicar una de tres
posibilidades: Bacteremia, colonizacin del
catter, o contaminacin del cultivo.
Los estudios han demostrado que de 15 a 25% de
catteres venosos centrales son colonizados
rpidamente, generalmente por los estafilococos
coagulasa-negativo, sin que los pacientes tengan
alguna evidencia de infeccin .

Los cultivos de sangre obtenidos a travs del cateter,


tenan una sensibilidad del 89%, comparada con el 78%
para los cultivos perifricos, con un valor predictivo
positivo de 63% para los cultivos a travs del catter,
contra el 73% para las cultivos percutaneos
Los criterios clnicos no son suficientes para emitir un
diagnstico de infeccin relacionada a catter, es por eso
que el diagnstico correcto y definitivo se establece
mediante cultivo de la punta y para ello es necesario
retirar el catter.

Bacteriemia relacionada con catter: Hemocultivos positivos


y catter colonizado por el mismo microorganismo.

Tcnica de Maki
METODO SEMICUANTITATIVO

Diagnstico de infecciones asociadas


a dispositivos intravasculares del

torrente sanguneo.

En 1977, Maki et al. demostraron que el aislamiento de 15 o ms unidades formadoras de colonias


(UFC) del cultivo semicuantitativo de la superficie externa de la punta de un catter se relacionaba
mejor con la presencia de infeccin que el cultivo cualitativo de este segmento en un medio lquido.

Preguntas?

Se cultiva la superficie externa de la punta del catter. Para ello se rueda la punta distal
del CIV en una placa de agar sangre con la ayuda de pinzas estriles. Es la tcnica de
referencia.