UNA PLANTA MODELO

Kalanchoe daigremontiana

El gnero Kalanchoe (familia Crassulaceae, orden Saxifragales) presenta algunas

interesantes adaptaciones a climas ridos y clidos, tales como la apertura
nocturna de los estomas. Estos permanecen cerrados durante el da, reduciendo
la prdida de agua.
El proceso fotosinttico se caracteriza por un mecanismo alternativo de fijacin de
carbono, denominado metabolismo cido de las Crassulceas (CAM). Por la noche,
cuando las plantas abren los estomas, el carbono (CO2) es fijado en forma de
cidos. De da, cuando los estomas estn cerrados y en presencia de luz, ATP y
NADPH para el ciclo de Calvin, el CO2 es liberado de los cidos orgnicos e
incorporado como azcar. Las plantas CAM mantienen una divisin temporal entre
la fase luminosa de la fotosntesis y el ciclo de Calvin.
Dentro del gnero Kalanchoe encontramos especies que se reproducen siempre
sexualmente, formando flores y semillas. Tambin encontramos especies que se
pueden reproducir asexualmente mediante la formacin, en los bordes de las
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hojas, de embriones y plntulas que al desprenderse y caer al suelo, generan

plantas-hijas.
En algunas especies, como Kalanchoe beharensis (oreja de elefante), portadoras
de una versin del gen LEC1 que permite la formacin de semillas, la produccin
de embriones foliares solo ocurre inducida por condiciones de stress. En otras,
como Kalanchoe daigremontiana, portadoras de una mutacin en el gen LEC1 que
no les permite formar semillas, la reproduccin asexual es constitutiva
(obligatoria).
Los Kalanchoes presentan algunas propiedades medicinales e insecticidas, de
modo que pueden resultar txicas cuando son ingeridas por nios o animales de
pequeo tamao.
En el laboratorio de enseanza, adoptamos Kalanchoe daigremontiana como
planta modelo porque permite desarrollar sin mayores contratiempos todos los
estados de la micropropagacin: obtencin de los explantes, desinfeccin y
sembrado in vitro; multiplicacin mediante subcultivos sucesivos, transferencia a
tierra y aclimatacin.

BIBLIOGRAFA
GARCS H. M. P. et al. Evolution of asexual reproduction in leaves of the genus
Kalanchoe. PNAS 104:39,2007
MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagacin. Gua 80: El laboratorio de enseanza;
Gua 85: La desinfeccin de los instrumentos; Gua 90: La desinfeccin de los explantes y
Gua 96: Los medios de cultivo. http://www.bteduc.bio.br

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ACTIVIDAD PRCTICA

OBJETIVO

Reproducir los principales estadios de la micropropagacin.

MATERIALES

Una planta de Kalanchoe daigremontiana, frascos o tubos de ensayo con medio de

cultivo* estril, 1 azulejo limpio, 1 colador, 1 pinza, 1 cuchillo o bistur, alcohol
70, Clorin 10 (Dicloro isocianurato de sodio; 10,1 en cloro activo) **, vaso de
precipitados de 1 litro, agua destilada, vasos plsticos pequeos con tierra de
jardn, filme de PVC (Rolopac), macetas con tierra de jardn.

* El medio de cultivo es una solucin de sales minerales gelificado con agar

(0,7%). No es necesario agregar sacarosa o azcar cristal, ni agua de coco.
(Guas 111: Micropropagacin: medios clsicos y 112: Micropropagacin:
medios alternativos).
** Clor-in 10 es un producto comercial para la desinfeccin de
hortifrutcolas. Disolver una pastilla en 500 ml de agua, segn indicaciones
del fabricante. No es necesario enjuagar. Utilizar agua destilada en la
desinfeccin de los explantes y agua de grifo para desinfectar el colador.

PROCEDIMIENTO
Estadio 1: Separacin de los explantes y sembrado in vitro
Antes de comenzar: Desinfectar la pinza en alcohol 70 y el colador por
inmersin durante al menos 20 minutos en una solucin de Clor-in 10,
preparada disolviendo una pastilla en 500 ml de agua.
1. Separar los explantes: retirar los embriones foliares de la planta o cortar algunos
fragmentos de hoja.
2. Desinfectar los explantes por inmersin en una solucin de Clor-in 10, preparada
disolviendo una pastilla en 500 ml de agua destilada. Revolver continuamente.
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3. Eliminar con el colador la solucin desinfectante, reteniendo los explantes.

4. Con la pinza, transferir los explantes a los frascos que contienen medio de
cultivo.
5. Incubar los explantes en presencia de luz, a temperatura ambiente.

Estadio 2: Multiplicacin (Opcional)

La multiplicacin es posible cuando el explante
inicial es un fragmento de hoja sobre la cual se
desarrollan los embriones foliares, como se
observa en la imagen de al lado.
Repicar
aspticamente
los
embriones
transfirindolos a frascos con medio de cultivo
estril de la misma composicin. Incubar en
presencia de luz.

Estadio 3: Transferencia a tierra

Lavar bien las plantitas para retirar el exceso de agar y transferirlas a los vasos
con tierra. Despus de un tiempo, repetir el procedimiento, pero esta vez a las
macetas definitivas que sern colocadas en el exterior.

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NUESTRO COMENTARIO

Kalanchoe daigremontiana, nuestra planta modelo, crece en un medio de cultivo

sin azcar, de modo que el nmero de contaminaciones es muy bajo. En vez de
centralizar la actividad en la composicin del medio, como se hace habitualmente,
preferimos insistir en los estados de la micropropagacin. Por otro lado, el uso de
Clor- in 10 simplific enormemente la tarea de desinfeccin de los explantes.
Obtuvimos un buen nmero de clones con nuestro grupo de primer ao del Curso
Medio Tcnico de Biotecnologa. Las diferentes etapas del trabajo se muestran
ilustradas en las figuras anexas.

CMO MONTAR UN PROYECTO?

Seguir el crecimiento en medios de cultivo de diferente composicin.

Figura 1. Crecimiento in vitro de los explantes. Arriba, de izquierda a derecha: embrin

foliar, hoja y fragmento de hoja. Abajo, los mismos cultivos despus de un tiempo.

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Figura 2. Incubacin de embriones foliares

Figura 3. Transferencia a tierra

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Figura 4. Aclimatacin

Figura 5. Clones de Kalanchoe daigremontiana, preparados por el grupo de

primer ao del Curso Medio Tcnico de Biotecnologa, en la exposicin montada
en ocasin de la Semana Nacional de Ciencia y Tecnologa 2013 en el Instituto
de Tecnologia ORT de Rio de Janeiro.

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