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INSTITUTO TECNOLGICO

SUPERIOR DE APATZINGN.
INGENIERA BIOQUMICA.

TRABAJO No. 4:

UNIDAD IV: BIOSEPARACIONES.


OPERACIONES UNITARIAS I.

PROFESOR.
I.Q. JULIO CSAR PAZ RAMREZ.

PRESENTA:

No. de Control:

MORN AGUILAR XIOMARA.

13020109

6 SEMESTRE.
Apatzingn, Michoacn.

Fecha: 31/May/2016

INTRODUCCIN.
La comercializacin de nuevos productos obtenidos a travs del empleo de la
biotecnologa requiere un coordinado acople de operaciones unitarias a fin de
desarrollar un proceso eficiente. El objetivo general de este proceso es convertir
materia prima relativamente de bajo costo en productos de mayor valor comercial.
En este sentido la biotecnologa se puede definir como la coleccin de procesos
industriales que involucran el uso de sistemas biolgicos. El punto central de este
proceso es el biorreactor. En esta unidad de operacin se utilizan catalizadores
biolgicos (microorganismos, clulas vegetales o animales, enzimas, virus, etc.)
para la produccin de sustancias, alimentos, agentes teraputicos, etc. de inters.
No obstante, el biorreactor no existe aislado, sino que la eficiencia y xito de la
operacin depende de un adecuado upstream processing (procesado previo) que
incluye desde el diseo del medio de cultivo hasta la esterilizacin del mismo. Por
otro lado, la recuperacin del producto final requiere una serie de operaciones
referidas colectivamente como downstream processing (SP). Estas operaciones
comprenden todos los tratamientos que requiere el cultivo, una vez finalizado, para
la obtencin del producto en las condiciones de pureza y actividad deseadas
(Universidad Nacional de Quilmes, 2005).
Los productos que resultan de los proceso biotecnolgicos pueden ser muy
variados. La variedad estar dada por:
a).- La naturaleza qumica del mismo: sustancias simples (alcoholes, cidos
orgnicos);

protenas,

sustancias

con

actividad

teraputica

(antibiticos,

hormonas) etc. (Universidad Nacional de Quilmes, 2005).


b).- El volumen de produccin y la concentracin del producto en el caldo de
fermentacin: los llamados commodities (etanol, cido ctrico, etc.) se obtienen
de a cientos o miles de ton/ao y en altas concentraciones en la fermentacin.
Mientras que los agentes teraputicos de ltima generacin (hormonas, factores
de coagulacin, etc.) se producen slo algunos kg/ao y su concentracin en la

produccin es baja. Esto determina la escala de produccin (Universidad Nacional


de Quilmes, 2005).
c).- Los requerimientos de pureza del producto final. Las molculas a ser
utilizadas en salud humana requerirn una pureza final muy diferente a las
enzimas a ser utilizadas en los polvos para lavar o de un acidulante para alimentos
(Universidad Nacional de Quilmes, 2005).
d).- Dejar el proceso ms complejo (y por lo general ms caro) para el final. Se
usan estos mtodos cuando tenemos la sustancia a purificar concentrada y prepurificada (Universidad Nacional de Quilmes, 2005).

Biofiltros.
Tambin denominados filtros biolgicos son dispositivos que eliminan una
amplia gama de compuestos contaminantes desde una corriente de fluido (aire o
agua) mediante un proceso biolgico (Naranjo, 2012).

Funcionamiento general:
El aire es aspirado cerca del foco de emanacin y habitualmente guiado a una
cmara de acondicionamiento. Aqu es saturado de humedad y luego guiado a un
lecho de biomasa fijada. Las sustancias contaminantes se absorben a la
biopelcula de biomasa formada sobre el relleno y aqu posteriormente son
digeridos por microorganismos. En el proceso de digestin y metabolizacin son
transformados en compuestos que ya no huelen (Naranjo, 2012):

Los compuestos orgnicos son degradados.


As la superficie del relleno es siempre regenerada y no se satura. En principio
se trata de una oxidacin de los contaminantes a baja temperatura y los
microorganismos pueden entenderse como catalizadores de esta reaccin.
Los compuestos no voltiles (como los cidos formados) son arrastrados por el
agua

de

lluvia

el

agua

de

regado aplicado

sobre

la

biomasa.

En algunos casos, debido a la presencia de cidos el pH de los lixiviados puede

bajar a 1 o 2. Aun as, lo normal es que el relleno orgnico tenga una alcalinidad
suficiente como para neutralizar el pH de los lixiviados (Naranjo, 2012).

4.1.- FILTRACIN POR MEMBRANAS.

La membrana filtra fundamentalmente en la superficie de la misma.


Partculas

mayores

que

la

porosidad

nominal

permanecen

sobre

el

filtro, mientras que las partculas ms pequeas pasan el filtro, a no ser que otras
interacciones

en

el

filtro

retengan

stas

en

la

matriz

de la misma. La filtracin es claramente ms lenta que con filtros de profundidad


(Naranjo, 2012).
La ultrafiltracin consiste en la separacin por una membrana en donde se
aplica una alta presin (Naranjo, 2012).

Se realiza para separar partculas de 0.01 a 0.1 micrmetros.

Realiza una remocin del 90%.

Presenta una reduccin de costos (Naranjo, 2012).

Parmetros para la ultrafiltracin.


Separacin en donde se remueven las partculas coloidales y dispersas de
un lquido al hacerlo atravesar por una membrana aplicando alta presin. Permite
separar molculas de alto peso molecular, como agua, sales, aminocidos,
protenas,

etc.

(Naranjo,

2012).

Remueve partculas de 0,001-0,1 micrmetros.

Remueve ms del 90% de los contaminantes.

Reduce costo de disposicin y/o reciclado hasta el 10%.

Requiere poca energa (Naranjo, 2012).

Tabla No. 1.- Separacin por membranas.

Fuente: (Mireia, 2009).

4.1.1.- CARACTERIZACIN DE MEMBRANAS.


Las membranas son derivados de la celulosa (acetatos y nitratos). Las
fibras sintticas son de poliamidas, polisulfonas, etc. y sus matrices polimricas
densas estn compuestas por una mezcla de polmeros, quitosano, entre otros
(Mireia, 2009).
Los polmeros termoplsticos estn constituidos por polipropileno, difluoruro
de polivinilideno, politetrafluoruro de etileno, etc. (Mireia, 2009).

Figura
Membrana

de

No.

1.-

acetato

de

celulosa (Mireia, 2009).

Figura
Membrana

politetrafluoroetileno

(Mireia, 2009).

de

2.-

poliamida

(Mireia, 2009).

Figura No. 3.- Membrana


de

No.

Figura No. 4.- Membrana


de

polietersulfona

2009).

(Mireia,

Tabla No. 2.- Caractersticas de las membranas.

Fuente: (Mireia, 2009).

4.1.2.- DISEO DE MEMBRANAS.


Tabla No. 3.- Parmetros de diseo.

Fuente: (Mireia, 2009).

El diseo se basa en laminar el caudal punta de 13,680 m3/d en el


homogeneizador y tratar el caudal mximo de 8,550 m3/d. El caudal ser
bombeado desde el homogeneizador al bioreactor y de ste mediante bombas
enviar el caudal necesario hasta los tanques de membranas para el tratamiento de
filtrado y el caudal necesario para mantener la concentracin de slidos ptima
dentro de los tanques y recircular el fango activo hasta el recinto biolgico previo
al sistema de membranas de ultrafiltracin (UPC, 2007).
Una vez alcanzado el mximo nivel de concentracin de slidos en el
reactor ser necesaria la purga de fangos hasta el espesador de fangos, dispuesto
en planta depuradora (UPC, 2007).

Tabla No. 4.- Parmetros fsicos.

Fuente: (UPC, 2007).

Tabla No. 5.- Diseo Preliminar. Valores.

Fuente: (UPC, 2007).

El diseo se basa en la utilizacin del bioreactor existente, despus de


modificar la infraestructura, para las zonas aerobias y las anxicas. Construyendo
nuevos tanques de acero prefabricado alineados para membranas en el espacio
entre el bioreactor y el decantador secundario (UPC, 2007).

Tabla No. 6.- Caractersticas carretes de membranas.

Fuente: (UPC, 2007).

El diseo se basa en poner un tren fuera de servicio para la limpieza u otros


servicios de mantenimiento durante el caudal medio diario, durante el caudal
mximo diario un tren puede ser puesto fuera de servicio durante un perodo de
tiempo < 24 horas al da (UPC, 2007).

Figura No. 5.- Membranas enrolladas en espiral (Mireia, 2009).

Figura No. 6.- Fibras huecas (Mireia, 2009).

4.1.3.- SELECCIN DE MEMBRANAS.


Cuando los ingenieros de proceso necesitan separar, clarificar o fraccionar
corrientes de proceso, y cuando exigen un rendimiento confiable y repetible, los
sistemas de filtracin por membranas se estn convirtiendo, cada vez con ms
frecuencia, en su primera eleccin (Pearson, 2016).
En su nivel ms bsico, la filtracin por membranas implica separar un
nico flujo en dos corrientes, una ms concentrada que la otra, utilizando presin
para que los materiales atraviesen, en forma selectiva, una barrera fsica
semipermeable: una membrana. Luego, las corrientes separadas pueden pasar
por un procesamiento adicional o, en el caso de una corriente de desechos, ser
desviadas a una salida adecuada (Pearson, 2016).
Con la capacidad de separar partculas de las especies disueltas y separar
las especies disueltas en s, un sistema de membranas puede utilizarse para
producir un producto final ms concentrado o purificado. Con la seleccin correcta
de las membranas, el proceso de filtracin puede aislar especies disueltas de
tamaos especficos mientras que permite que otros componentes disueltos
traspasen la membrana (Pearson, 2016).
Uno de los factores de decisin principales utilizados para elegir la
membrana adecuada es la naturaleza del lquido de los procesos. Conocer el
contenido de los slidos disueltos, el peso molecular de las especies disueltas y la
naturaleza y la carga de cualquier material en suspensin orientar a los
ingenieros hacia la seleccin y la geometra correctas de las membranas. El pH y
la temperatura de la corriente de proceso entrante tambin son factores
importantes al momento de tomar la decisin final (Pearson, 2016).

Criterios de seleccin.
1.- Volumen de lquido a filtrar: laboratorio o industrial.

2.- Fuerza impulsora: gravedad, presin, vaco, fuerzo centrifuga.


3.- Grado de separacin: tamao de poro.
4. Producto que se selecciona: filtrado o torta.
5.- Resistencia trmica: el filtro debe esterilizarse.
6. El filtro debe ser compatible con el fluido: Tablas de compatibilidad entre
filtros y disolventes.
7.- Rgimen de trabajo: continuo o discontinuo (Fernndez, 2008).

4.1.4.- MICROFILTRACIN.
La filtracin mediante membranas sigue el principio de la separacin de
partculas basada en el tamao de los poros y en su distribucin. Las membranas
de microfiltracin tienen tamaos de poro que varan de 0.075 micrones a 3
micrones. La microfiltracin es un proceso de filtrado donde se opera con
membranas semi-permeables de baja presin. El objetivo de este proceso es la
eliminacin de slidos en suspensin pero no retiene el paso de sales disueltas y
macromolculas. La microfiltracin no altera las propiedades qumicas de la
solucin (Valencia, 2012).
Las membranas empleadas en este proceso son de estructura simtrica y
microporosa con tamao de poro entre 0.1
m a 10 m. La diferencia de presin vara
entre 0.1 y 2 atm. Esta operacin unitaria
es utilizada para la remocin de partculas,
bacterias, coloides y las macromleculas
orgnicas de una solucin acuosa en las
plantas de tratamiento de aguas (Valencia,
2012).
Figura No. 7.- Proceso de
microfiltracin (Valencia, 2012).

En la microfiltracin se alcanzan grandes velocidades de fluido en flujo


cruzado a travs de la superficie del filtro mientras que la velocidad perpendicular
a la superficie es relativamente pequea. De esta manera se evita la formacin de
la torta filtrante y los problemas debido a la elevada resistencia de la torta. Este
tipo de filtracin es una alternativa debido que las levaduras y bacterias son
mucho ms difciles de tratar por su pequeo tamao. Por ejemplo Los micelios
fngicos se pueden filtrar relativamente bien por un proceso de filtracin debido a
que la torta filtrante micelial tiene una porosidad superficial grande (Doran, 1998,
citado por Valencia, 2012).
Una parte de la contaminacin viral es atrapada en este proceso ya que, a
pesar de que los virus son de menor tamao que los poros de la membrana, stos
pueden acoplarse a las bacterias y por tanto ser eliminados (Valencia, 2012).
La microfiltracin puede ser aplicada a muchos tratamientos de agua
cuando se necesita retirar de un lquido las partculas de un dimetro superior a
0.1 mm (Valencia, 2012).

Figura No. 8.- Microfiltracin y Ultrafiltracin (Valencia, 2012).

La microfiltracin es bsicamente lo mismo solo que el tamao del poro es


ms pequeo (Valencia, 2012).

Tipos de membranas.
Las membranas estn hechas de materiales como cermica, polmeros y
metales sinterizados. Mientras las cermicas y los metales se usan generalmente
en aplicaciones industriales, las membranas polimricas se estn convirtiendo en
una herramienta comn para el tratamiento de agua potable y aplicaciones
municipales (Valencia, 2012).

Membranas a presin.
Las primeras membranas comercialmente disponibles estaban diseadas
como lminas planas enrolladas para formar membranas en espiral. Estas
membranas no podan tolerar slidos y requeran altas presiones para operar. El
elevado costo operativo de estas membranas dio lugar a que fueran poco usadas
para la microfiltracin en aplicaciones municipales. Las membranas enrolladas en
espiral generalmente se usan en la nanofiltracin y smosis inversa, y por lo
general se usan en la desalinizacin de agua salobre y agua de mar para la
produccin de agua potable (Valencia, 2012).
Las membranas de fibra hueca se desarrollaron en la ltima dcada como
un medio para abordar las necesidades de la microfiltracin con bajos costos de
consumo energtico. Ellas rpidamente se convirtieron en el estndar de la
industria y varias empresas empezaron a elaborar estas membranas de gran
superficie para aplicarlas al rea de agua potable (Valencia, 2012).
Existen dos tipos de membranas de fibra hueca operadas a presin:
Membranas de adentro hacia afuera, en las que el afluente ingresa al
interior del lumen de la membrana y el agua limpia se obtiene al pasar del interior
de la membrana al exterior (Valencia, 2012).
Membranas de afuera hacia adentro, en las que el afluente viene por
fuera de la membrana y el agua limpia se obtiene al pasar del exterior de la
membrana al interior (lumen). (Valencia, 2012).

Figura No. 9.- Modalidades de filtracin Membranas de fibra hueca


(Valencia, 2012).

Todas las membranas de fibra hueca a presin estn instaladas dentro de


recipientes presurizados que sirven para aplicar la presin necesaria para la
transferencia adecuada del fluido. La presin de operacin tpica de estas
membranas es de 15 a 30 psi (Valencia, 2012).

Membrana de fibra hueca operada al vaco Membrana ZeeWeed.


El proceso de tratamiento de agua potable basado en la membrana
ZeeWeed es un proceso revolucionario que usa poca energa y consta de
mdulos de microfiltracin con membranas de fibra hueca de afuera hacia adentro
que se sumergen en el agua de alimentacin. Este microfiltro tiene un tamao de
poro nominal de 0.085 micrones y un tamao de poro absoluto de 0.2 micrones, lo
cual asegura que no pasar al agua tratada ninguna partcula mayor a 0.2
micrones (Valencia, 2012).

Las membranas operan bajo una succin pequea creada dentro de las
fibras huecas por una bomba de filtracin. El agua tratada pasa a travs de la
membrana, entra a las fibras huecas y es bombeada para su distribucin. Se
introduce un flujo de aire en el fondo del mdulo de la membrana para crear una
turbulencia que frota y limpia el exterior de las fibras de la membrana y les permite
funcionar a una tasa de flujo alta. Este aire tambin oxida el hierro y otros
compuestos orgnicos, con lo que se obtiene agua de mejor calidad que la
suministrada por slo microfiltracin (Valencia, 2012).

Figura No. 10.- Concepto operativo de una membrana de afuera hacia


adentro sumergida sin casco (Valencia, 2012).

Aplicaciones.

Esterilizacin por fro de bebidas y productos farmacuticos.

Aclaracin de zumos de frutas, vinos y cerveza.

Separacin de bacterias del agua (tratamiento biolgico de aguas


residuales).

Tratamiento de efluentes.

Separacin de emulsiones de agua y aceite.

Pre-tratamiento del agua para nanofiltracin y smosis inversa.

Separacin

slido-lquido

para

farmacias

industrias

alimentarias

(Valencia, 2012).
Microfiltracin en la industria alimenticia.
Microfiltracin como proteccin de huevos y leche lquida. Usualmente para su
control se usa la pasteurizacin, proceso trmico que elimina los agentes
patgenos sensibles al calor pero algunos microorganismos resistentes a este
factor pueden sobrevivir. El consumidor puede evitar la infeccin si aplica una
adecuada coccin de los huevos antes de consumirlos, la microfiltracin ofrece
una nueva posibilidad para compensar las posibles deficiencias de la
pasteurizacin (Valencia, 2012).
En la industria lctea, genera una reduccin bacteriana significativa y al operar
a bajas temperaturas, posibilitan la obtencin de productos con excelentes
caractersticas organolpticas y una calidad bacteriolgica satisfactoria (Valencia,
2012).

4.1.5.- NANOFILTRACIN.
Es un proceso de filtracin por membranas que se da por la aplicacin de
presin; donde solutos de bajo peso molecular (1000 daltons) son retenidos,
mientras que algunas sales pueden pasar, total o parcialmente, a travs de la
membrana con el filtrado (Abadiano, 2013).
El principio de la filtracin se basa en la difusin de ciertas soluciones
inicas (como sodio y cloruro), iones monovalentes, divalentes y multivalentes
(Abadiano, 2013).

La presin operativa es ms baja en la Nanofiltracin que en la smosis


Inversa (Abadiano, 2013).

Figura No. 11.- Tipo de filtracin y su dimetro de partculas


(Abadiano, 2013).
Las membranas orgnicas presentan una resistencia adecuada al pH entre
pH 2 y pH 11, en la mayora de los casos; sin embargo, su resistencia a la
temperatura es por el momento inferior a los 100 C, y estas membranas todava
son demasiado sensibles a los solventes orgnicos y a algunas molculas como
los surfactantes. Estos son los factores que limitan actualmente el desarrollo de la
nanofiltracin en la industria qumica o la petroqumica (Abadiano, 2013).

Tabla No.7.- Caractersticas de utilizacin de las principales


membranas de nanofiltracin.

Fuente: (Abadiano, 2013).

Aplicaciones.

Industria

Lctea:

Reduce

costos de

transportacin

as como de

recuperacin de lactosa.

Eliminacin de nitratos y slidos de protenas de suero.

Industria de Alimentos y Bebidas: Desalinizacin de gelatina para mejores


propiedades de batido y para mejorar la claridad de color.

Industria Farmacutica: Incrementa el valor de los productos farmacuticos


al obtenerlos ms purificados.

Industria: Desalinizacin de tintes para un producto de valor ms alto.

Reciclaje de aguas residuales en lavanderas.

Agroindustria: La eliminacin de pesticidas de las aguas subterrneas


(Abadiano, 2013).

4.1.6.- SMOSIS INVERSA.


smosis. El fenmeno de la smosis est basado en la bsqueda del
equilibrio.

Cuando

se

ponen

en

contacto

dos

fluidos

con

diferentes

concentraciones de slidos disueltos se mezclarn hasta que la concentracin sea


uniforme. Si estos fluidos estn separados por una membrana permeable (la cual
permite el paso a su travs de uno de los fluidos), el fluido que se mover a travs
de la membrana ser el de menor concentracin de tal forma que pasa al fluido de
mayor concentracin (Binnie et. al. 2002).
Al cabo de un tiempo el contenido en agua ser mayor en uno de los lados
de la membrana. La diferencia de altura entre ambos fluidos se conoce como
Presin Osmtica (Binnie et. al. 2002).
smosis inversa. Si se utiliza una presin superior a la presin osmtica,
se produce el efecto contrario. Los fluidos se presionan a travs de la membrana,
mientras que los slidos disueltos quedan atrs (Binnie et. al. 2002).
Para poder purificar el agua necesitamos llevar a cabo el proceso contrario
al de la smosis convencional, es lo que se conoce como smosis Inversa. Se
trata de un proceso con membranas. Para poder forzar el paso del agua que se
encuentra en la corriente de salmuera a la corriente de agua con baja
concentracin de sal, es necesario presurizar el agua a un valor superior al de la
presin osmtica. Como consecuencia a este proceso, la salmuera se concentrar
ms (Binnie et. al. 2002).
Por ejemplo, la presin de operacin del agua de mar es de 60 bar
(Binnie et. al. 2002).

Figura No. 12.- Diferencia de smosis y smosis inversa


(Imagen de la derecha). (Abadiano, 2013).

1.- El agua fluye de una columna con un bajo contenido de slidos disueltos
a una columna con una elevada concentracin de slidos disueltos
2.- La presin osmtica es la aplicada para evitar que el agua siga fluyendo
a travs de la membrana y de esta forma crear un equilibrio.
3.- Para poder alcanzar una presin superior a la presin osmtica, el agua
debe fluir en sentido contrario. El agua fluye de la columna con un alto contenido
en solidos disueltos a la columna con bajo contenido en slidos disueltos
(Binnie et. al. 2002).

Figura No. 13.- smosis inversa (Mireia, 2009).

Calidad de las membranas.


1.- Alta retencin de sales minerales y compuestos orgnicos: TASA DE
DEPURACIN.
2.- Alta permeabilidad al agua pura.
3.- Poco espesor.

CAUDAL.

Baja biodegradabilidad.

Elevada inercia qumica.

Margen de pH amplio.

Buena resistencia mecnica.

Buena estabilidad en el tiempo (Mireia, 2009).

Figura No. 14.- Instalaciones de


smosis Inversa (Mireia, 2009).

4.1.7.- ELECTRODILISIS.
Procedimiento de separacin con
membranas que tiene por objeto concentrar
o

diluir

mediante

disoluciones

de

el

membranas

uso

de

electrolitos
de

intercambio inico y la aplicacin de un


potencial elctrico (Mireia, 2009).
Figura No. 15.- Electrodilisis
(Mireia, 2009).

Resinas de intercambio inico.


Sustancias insolubles en agua que tienen iones lbiles fcilmente
intercambiables por otros iones del mismo signo presentes en una
solucin acuosa (Mireia, 2009).
Son cadenas polimricas de elevado peso molecular unidas por
un enlace inico a un contrain (Mireia, 2009).

Figura No. 16.- Resinas de intercambio inico (Mireia, 2009).

Figura

No.

17.-

Electrodilisis (Mireia, 2009).

Inconvenientes:

Bajo rendimiento: 40 66% electrolitos.

No elimina molculas no ionizadas ni coloides (Mireia, 2009).

Aplicaciones:

Produccin de agua potable a partir de agua salobre de baja mineralizacin


(0.8 a 2 g/).

Desalinizacin de soluciones coloidales u orgnicas (desmineralizacin de


sueros). (Mireia, 2009).

4.2.- TCNICAS ELECTROFORTICAS.


ELECTROFORESIS.

La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la


movilidad de estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual
finalmente las separa por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de
la tcnica que se use (Morales, 2008).

Figura No. 18.- Electroforesis (Morales, 2008).

La tcnica clsica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa


impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depsitos
independientes que contienen ambos al electrolito y estn unidos a los electrodos
del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeo trazo
transversal en la tira. La distancia de migracin se mide en relacin un marcador
interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o
reactivos en particular (Morales, 2008).

Fundamentos y Conceptos Bsicos.


La electroforesis capilar (CE) es una tcnica de separacin que se ha
desarrollado gracias a los avances de la cromatografa lquida de alta eficacia
junto con los procedimientos ms tradicionales de electroforesis. Esta tcnica
permite separar bastante bien biomolculas, donde la cromatografa lquida se
muestra menos eficaz, y compuestos de pequea masa molecular, difciles de
estudiar por los procedimientos clsicos de electromigracin en soporte (Morales,
2008).

Figura No. 18.- Esquema representativo de la electroforesis (Morales, 2008).


La electroforesis capilar constituye una adaptacin particular de la tcnica
de electroforesis. Esta tcnica separativa se basa en la migracin de las especies
de la muestra en disolucin, portadoras de una carga elctrica global, bajo el

efecto de un campo elctrico y en contacto con un soporte (medio de


desplazamiento) adecuado (Morales, 2008).

Figura No. 19.- Electroferograma (Morales, 2008).

En electroforesis capilar la tira se reemplaza por un tubo capilar abierto en


sus extremos, fabricado con un dimetro pequeo (15 a 150m). El capilar oscila
entre 20 y 80 cm, y est lleno de una solucin buffer. Un detector se encuentra
ubicado en un extremo del capilar, cerca del compartimiento catdico. La seal
obtenida es la base de la obtencin del electroferograma, que muestra el registro
de la composicin de la muestra. Solo las especies que se dirigen hacia el ctodo
sern detectadas (Morales, 2008).

Mtodos de Deteccin.
En la deteccin UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a travs
del capilar en una pequea zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco
(Morales, 2008).

Figura No. 20.- Detector (Morales, 2008).

La deteccin por fluorescencia resulta ms sensible si se emplea una fuente


lser muy intenso, asociado a menudo a un procedimiento de preformacin de
derivados de los analitos portadores de un fluorforo (Morales, 2008).

4.2.1.- CLASIFICACIN DE TCNICAS


ELECTROFORTICAS.
1.- Electroforesis capilar en zona o en disolucin libre (CZE).
Es el procedimiento de electroforesis ms habitual, en el cual el capilar es
recorrido por el electrolito a travs de un medio buffer que puede ser cido (fosfato
o citrato), bsico (borato), o anftero (carcter cido y bsico). El flujo
electroosmtico crece con el pH del medio electrofortico (Morales, 2008).

2.- Electroforesis capilar electrocintica micelar (MEKC).


En esta variante del procedimiento anterior se aade a la fase mvil un
compuesto

catinico

aninico

para

formar

micelas

cargadas.

Estas

pequesimas gotitas inmiscibles con la disolucin retienen a los compuestos


neutros de un modo ms o menos eficaz, por afinidad hidrfila-hidrfoba. Se
puede utilizar este tipo de electroforesis para molculas que tienen tendencia a
migrar sin separacin, como es el caso de algunos enantiomeros (Morales, 2008).

3.- Electroforesis capilar en gel (CGE).


Esta es la transposicin de la electroforesis en el gel de poliacrilamida o de
agarosa. El capilar est relleno con un electrolito que contiene al gel. Se produce
un efecto de filtracin que ralentiza a las grandes molculas y que minimiza los
fenmenos de conveccin o de difusin. Los oligonucletidos, poco frgiles, se
pueden separar de este modo (Morales, 2008).

4.- Isoelectroenfoque capilar (CIEF).


Esta tcnica, tambin conocida como electroforesis en soporte, consiste en
crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que contiene un
anftero. Cada compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su
punto isoelctrico (al pI su carga neta es nula). Seguidamente, bajo el efecto de
una presin hidrosttica y manteniendo el campo elctrico, se desplazan las
especies separadas hacia el detector. Las altas eficiencias obtenidas con este
procedimiento permiten separar pptidos con pI que apenas difieren entre s 0.02
unidades de pH (Morales, 2008).

Electrocromatografa Capilar.
Este tipo de separacin asocia la electromigracin de los iones, propio de la
electroforesis, y los efectos de separacin entre fases presentes en la
cromatografa. La tcnica consiste en la utilizacin de un capilar relleno con una
fase estacionaria, cuyo papel es doble: acta como material selectivo que debe,
por otro lado, participar en la migracin del electrolito (Morales, 2008).

Figura No. 21.- Detector fluorimtrico (Morales, 2008).

El factor de separacin es muy elevado, pero existen un cierto nmero de


problemas que limitan su aplicacin, como el efecto de los modificadores
orgnicos sobre el flujo electroosmtico y la dificultad de un control preciso del
volumen de muestra introducido en el capilar (Morales, 2008).

4.2.2.- DISEO Y SELECCIN DE TCNICAS


ELECTROFORTICAS.
Diseo.
Se aplican pequeas cantidades de la
disolucin de protenas a un soporte slido, que se
impregna con una solucin tampn. Los soportes son
en general polmeros y forman un gel poroso que
restringe el movimiento de las molculas a travs del
medio durante la electroforesis y disminuyen los
flujos de conveccin del solvente (Krause, 1996).
Como soporte han sido utilizados papel
Figura No. 22.- Mtodos
electroforeticos zonales
(Krause, 1996).

(celulosa), almidn, poliacrilamida, agarosa y acetato de


celulosa, entre otros. Este mtodo tiene gran poder
resolutivo por que se aplica una cantidad pequea de

protena a una zona estrecha, mientras que la longitud


del trayecto es mucho mayor que la zona de aplicacin
(Krause, 1996).

Los geles de poliacrilamida se forman


por polimerizacin de la acrilamida por accin
de un agente entrecruzador, es qumicamente
inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser
preparado de forma rpida y reproducible.
Forma, adems, geles transparentes con
estabilidad mecnica, insolubles en agua,
relativamente no inicos y que permiten buena
visualizacin de las bandas durante un tiempo
Figura No. 23.- Electroforesis en gel de

prolongado. Adems tiene la ventaja de que

poliacrilamida (Krause, 1996).

variando la concentracin de polmeros, se


puede modificar de manera controlada en el
tamao del poro, lamentablemente cada vez
se emplea menos en diagnostico debido a su
neurotoxocidad (Krause, 1996).
El uso de geles de poliacrilamida que
tienen un gradiente creciente de concentracin
de

archilamida

bisacrilamida,

en

consecuencia un gradiente decreciente en el


tamao del poro, pueden tener ventajas sobre
los geles de concentraciones uniformes de
acrilamida. En un gel en gradiente la protena
migra hasta alcanzar una zona donde el
tamao de poro impida cualquier avance. Una
vez se alcanza el lmite del poro no se produce
una migracin apreciable aunque no se detiene
completamente. Una de las ventajas de este
tipo de geles es que resuelve mejor las bandas
pues las concentra en regiones ms estrechas,
adems

de

incrementar

el

rango

de

Figura No. 24.- Electroforesis en gel de gradientes

pesos moleculares que se pueden resolver en

(Krause, 1996).

un mismo gel comparado con los de una


concentracin fija. (Krause, 1996).

La

agarosa

es

un

polisacrido

(originalmente obtenido de algas, como el agaragar, pero de composicin homognea), cuyas


disoluciones (tpicamente de 0.5 a 2 %) poseen
la propiedad de permanecer liquidas por encima
de 50 grados C y formar un gel, semislido al
enfriarse. Este gel est constituido por una

matriz

trama

tridimensional

de

fibras

polimricas embebida en gran cantidad de


medio lquido, que retarda el paso de las
molculas, se usa usualmente para separar
Figura No. 25.- Electroforesis en gel
de agarosa (Krause, 1996).

molculas

grandes

de

alrededor

20.000

nucletidos (Krause, 1996).

La electroforesis capilar se basa

en los mismos principios de las tcnicas


electroforticas

convencionales,

pero

utiliza condiciones y tecnologa distinta


que nos permiten obtener una serie de
ventajas al respecto, Esta separacin de
pptidos realizada sobre un capilar de
silica fundida a potenciales elevados 20
a 30 Kv en un campo de 400 a 500 v/cm

refrigerados por aire. (Krause, 1996).

Figura No. 26.- Electroforesis capilar (Krause,


1996).

Se basa en el desplazamiento de las molculas en


un gradiente de pH. Las molculas amfotricas, como los
aminocidos, se separan en un medio en el que existe una
diferencia de potencial y un gradiente de pH. La regin del
nodo es cida y la del ctodo es alcalina. Entre ambos se
establece un gradiente de pH tal que las molculas que se
han de separar tenga su punto isoelctrico dentro del
rango. Las sustancias que inicialmente se encuentran en
regiones de pH inferior a su punto isoelctrico estarn
cargadas positivamente y migraran hacia el ctodo,
mientras aquellas que se encuentran en medios con pH
ms bajos que su punto isoelctrico tendrn carga
negativa y migraran hacia el nodo. La migracin les
conducir a una regin dnde el pH coincidir con su

Figura No. 27.- Isoelectroenfoque


(Krause, 1996).

punto isolctrico, tendrn una carga

neta nula y se

detendrn. De esta forma las molculas amfotricas se


sitan en estrechas bandas donde coincide su punto
isoelctrico con el pH (Krause, 1996).

La

electroforesis

bidimensional se basa en separar


las protenas en una mezcla
segn

sus

dos

moleculares,

una

propiedades
en

cada

dimensin. El procedimiento ms
usado se basa en la separacin
en

una

primera

dimensin

mediante isoelectroenfoque y la
segunda dimensin segn peso
molecular mediante electroforesis
en poliacrilamida. (Krause, 1996).
Figura No. 28.- esquema de una electroforesis
bidimensional (Krause, 1996).

La electroforesis permite separar bastante bien biomolculas, donde la


cromatografa lquida se muestra menos eficaz, y compuestos de pequea masa
molecular, difciles de estudiar por los procedimientos clsicos de electromigracin
en soporte (Cruz et al, 2016).
La electroforesis capilar constituye una adaptacin particular de la tcnica
de electroforesis. Esta tcnica separativa se basa en la migracin de las especies
de la muestra en disolucin, portadoras de una carga elctrica global, bajo el
efecto de un campo elctrico y en contacto con un soporte (medio de
desplazamiento) adecuado (Cruz et al, 2016).

Tipos de mdulos:
Fibras huecas-capilares: membrana de dimetro muy pequeo.
Tubular: se soportan mediante una vasija a presin.
Monolticos:

se

convierte

en

un

mdulo

mediante

la

conexin

de accesorios terminales y un medio de recoleccin de filtrado.


Espiral: la membrana de lmina puede adaptarse a un mdulo
barato

compacto

mediante

enrollado

espiral

placa y estructura: es el nico modo comnmente empleado en la ED (Cruz et al,


2016).

4.3.- CROMATOGRAFA PREPARATIVA.


Es parte de los proceso de separacin utilizada para separar molculas
dispersas en mezclas homogneas (Cruz et al, 2016).
La cromatografa preparativa comprende un amplio campo de aplicaciones,
desde el aislamiento de 1 g. de muestra para identificacin espectroscpica
hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g. La

cromatografa preparativa se diferencia de la tcnica bsica en muchos aspectos,


desde la preparacin de la papilla. sta debe hacerse con menos agua que de
ordinario. Una papilla ms espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas que
se precisa para una carga de mayor magnitud. El espesor ptimo oscila desde un
mnimo de 1 mm. hasta un mximo de 2 mm. (textoscientificos.com, 2007).
Las placas utilizadas en cromatografa preparativa son placas grandes, de
aproximadamente 20x20 cm. que permiten separar aproximadamente 1 g. de
mezcla utilizando unos 35 g. de adsorbente (textoscientificos.com, 2007).
La siembra de la muestra se realiza mediante la ayuda de una jeringuilla o
tubo capilar. La siembra se realiza a lo largo de una lnea recta (existen en el
mercado diverso utensilios para evitar torcerse). Si al terminar la primera siembra
todava queda muestra, se seca la primera siembra y se aplica la segunda,
intentando que sta quede sobre la anterior, para as conseguir que el frente sea
lo ms estrecho posible. La siembra debe realizarse a lo ancho de la placa
(textoscientificos.com, 2007).
Una vez sembrada la muestra se desarrolla la cromatografa. Se utiliza un
adsorbente con indicador fluorescente para ver en la lmpara ultravioleta donde
han quedado las manchas de los diferentes compuestos, dichas manchas se
marcan (textoscientificos.com, 2007).
Una vez localizados los compuestos, stos se extraen de la fase
estacionaria, uno a uno, con la ayuda de una esptula, sobre un papel de filtro u
otro soporte. Posteriormente se coloca cada componente en un Erlenmeyer, y se
mezcla con un disolvente (metanol). Una vez disuelto el compuesto se filtra varias
veces para separar el compuesto y la fase estacionaria. Una vez separado se
elimina el disolvente (destilacin), con lo cual se obtiene el componente separado
(textoscientificos.com, 2007).

Si no se dispone de indicador fluorescente, no se pueden usar reveladores


qumicos sobre toda la placa. El proceso a seguir es el siguiente: se raya la placa
separando totalmente una pequea franja de placa, sobre la cual se aplica el
revelador qumico, y a partir de esta franja se marcan las franjas de compuestos
(textoscientificos.com, 2007).

4.3.1.- CLASIFICACIN.
De acuerdo al estado de agregacin de la fase lquida los sistemas
cromatogrficos se dividen en (Cruz et al, 2016):

Cromatografa de gases (GC).

Cromatografa lquida (LC).

Cromatografa de fluidos supercrticos (SFC).

Cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC).

Cromatografa en capa fina (TLC).

De acuerdo a la naturaleza de las molculas de adsorcin y la


superficie del adsorbente (Cruz et al, 2016):

Molculas gaseosas/Superficie slida.

Molculas lquidas/Superficie slida.

Molculas gaseosas/Superficie lquida.

Molculas lquidas/Superficie lquida.

4.3.2.- SELECCIN Y DISEO.


Seleccin.
Depende del:

Rendimiento.

Productividad.

Economa.

Escala de separacin.

Velocidad de separacin.

Presin.

Adsorbente.

Fase mvil (Cruz et al, 2016).

Diseo.
Columna:

Corriente continua dado un dimetro interior y una longitud.

Acero inoxidable vidrio o materiales plsticos.

Estable mecnicamente y qumicamente (Cruz et al, 2016).

Tabla No.8.- Diseo de la cromatografa.

Fuente: (Cruz et al, 2016).

CONCLUSIONES.
Las bioseparaciones son muy importantes como una operacin unitaria en
la produccin de alimentos, ya que permite separar impurezas y/o sustancias de
inters que se encuentran en ellos, por medio de membranas capaces de retener
partculas diminutas de hasta dimetros de unas cuantas micras (0.1 a 15). As
mismo, estas tcnicas son muy utilizadas en la purificacin del agua para hacerla
potable. Debido a que su finalizad es para consumo humano, sta requiere de una
estricta calidad y cumplimiento de normas de higiene. Para ello, se aplican las
membranas, quienes son capaces de retener impurezas del agua, ya sea de
carcter fsico, qumico o biolgico (en el caso de los microorganismos retenidos
que se encuentran presentes en el agua).
Gracias a la filtracin por medio de membranas se pueden separar
endotoxinas, virus, protenas, microplasmas, levaduras, hongos y bacterias.
Es importante mencionar que en una bioseparacin interfiere la porosidad
del medio, la presin del filtrado, el rea de la membrana, resistencia mecnica
del material, tiempo, temperatura, y el espesor.

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