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Nutrición y Medios de cultivo

MEDIOS DE CULTIVO

AGM - MG
Septiembre de 2014.

OBJETIVOS




Uso adecuado de la terminología.
Relacionar los conceptos químicos con la microbiología.
Estudiar las diferentes clasificaciones de los medios de
cultivo.
Relacionar la composición química de los medios de
cultivo con el tipo nutricional de los microorganismos.
Hacer los cálculos químicos correspondientes para la
formulación de los medios de cultivo.
Describir los cuidados en la preparación de los medios.
Determinar los puntos del Control de Calidad.
Aplicar los conocimientos adquiridos.

MEDIOS DE CULTIVO
Se pueden emplear para
el análisis de:
 Alimentos
 Muestras clínicas
 Productos farmacéuticos
 Zonas arqueológicas
 Muestras ambientales
(aire, suelo, agua), etc.

Mg - 2015-I

AGM

Nutrición y Medios de cultivo

MEDIOS DE CULTIVO
Hay para el
crecimiento
de los
diversos
grupos
microbianos
y se
emplean
para
estudiarlos
en el
laboratorio.

BACTERIAS

LEVADURAS

MOHOS

ALGAS

PROTOZOOS

DEFINICIÓN

Los medios de cultivo son
una mezcla equilibrada
de nutrientes
(compuestos orgánicos /
inorgánicas) que
permiten el desarrollo de
los microorganismos “in
vitro”.

DEFINICIÓN

En concentraciones
adecuadas y en
condiciones físicas
óptimas permiten un
buen crecimiento de
los microorganismos
CULTIVABLES.

Mg - 2015-I

AGM

MgSO4 NaCl CaCl2 FeCl3. NO3-. Glucosa. etc.5 g Source of vitamins and other growth factors 3. fino o granular. KNO3. Fósforo (P) Azufre (S) PO43H2S. compuestos orgánicos KH2PO4. and P 1. NO2-. (NH4)2SO4. compuestos orgánicos Nitrógeno (N) N2 NH3.0 Source of amino acids. compuestos Inorgánicos: NH4Cl. Na2S. o FeS H2O.Nutrición y Medios de cultivo SUSTANCIAS EMPLEADAS EN LA ELABORACIÓN DE MEDIOS ELEMENTO COMPUESTO FORMA UTILIZADA EN MEDIOS DE CULTIVO Almidón. acetato. Na2S2O3. compuestos orgánicos Oxígeno (O) H2O. SO42. Na2HPO4 Na2SO4. Mg . compuestos orgánicos Carbono (C) CO2. S. compuestos orgánicos Hidrógeno (H) H2O. piruvato.6 MEDIOS DE CULTIVO Generalmente se presenta en forma de polvo seco.compuestos orgánicos azufrados Potasio (K) Magnesio (Mg) Sodio (Na) Calcio (Ca) Hierro (Fe) K+ Mg2+ Na+ Ca2+ Fe2+ o Fe3+. FeSO4 FUNCIÓN DE LOS COMPONENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Component Beef extract Yeast extract Peptone Glucose Agar Water pH Amount Function of component 1.0 g C and energy source 15. orgánicos nitrogenados Orgánicos: aminoácidos bases nitrogenadas. malato.2015-I AGM .0 g Source of vitamins and other growth factors 6. peptonas. KH2PO4 MgCl2. O2. O2. S2-. H2O. Compuestos orgánicos azufrados: aa KCl.0 g inert solidifying agent 1000ml 6. N.

4 Medio sintético o químicamente definido: La composición química se conoce.075  Acido cítrico 0. cuya composición nutritiva exacta no se conoce y no se puede controlar.2 ¿C.2015-I AGM .04  CaCl2 2H2O 0. S. P. …. CLASIFICACIÓN  Ej.02  Agua destilada 1000 mL pH final 7.006  Na2CO3 0. Ej. CLASIFICACIÓN Medio natural. N.? Mg . complejo oMmmmmmmmmmmmmmmmmmm químicamente indefinido: Se prepara con componentes complejos.Nutrición y Medios de cultivo MEDIOS DE CULTIVO Puede presentarse también pre-hidratados o listos para usarse. Medios con Peptonas Ej: Agar nutritivo  Peptona de carne 5 g  Extracto de carne 3 g  Agua destilada 1000 mL pH 7.5  K2HPO4 3H2O 0. g  NaNO3 1.4 ± 0. tanto cualitativamente como cuantitativamente .

también contiene nitrógeno orgánico.).Nutrición y Medios de cultivo SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Peptonas: Productos de la digestión (con ácidos o con enzimas) de material proteico (carne. Mg . se obtienen diferentes tipos de peptonas. Ej. vitaminas y sales minerales. •Disponible en pasta o polvo. gelatina. SUSTANCIAS EMPLEADAS EN LA FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Extracto de carne: •Digerido acuoso de carne magra de res. etc. compuestos de nitrógeno orgánico. De acuerdo a la proteína y al método de digestión usado. SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Extracto de levadura: Extracto acuoso de células de levadura. Comercialmente disponible en polvo.2015-I AGM . vitaminas y compuestos de carbono. Peptona de caseína. Una fuente muy rica en vitaminas del complejo B. caseína. •Contiene carbohidratos.

durante la marea baja. que se obtiene a partir de diversas especies de algas rojas de los géneros: Gelidium y Gracilaria. aunque el nombre corresponde a una palabra malaya que significa "alga marina".Nutrición y Medios de cultivo SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO El agar es originario de Japón. Japón es el primer productor mundial de agar. aunque las de mejor calidad son las que se obtienen a mayor profundidad.6-anhidro-Lgalactosa y ácido Dglucorónico. Mg . AGAR  Químicamente es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa. Estas algas se suelen recolectar en la playa.2015-I AGM . 3. SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO El agar es una mezcla de carbohidratos complejos.

Es un gel termoreversible.7 %) Sólidos (agar 1.2015-I AGM .2 a 0. La mayoría de los microorganismos no lo degrada. Al contacto con agua fría se hincha y puede aumentar hasta 20 veces su volumen.5 a 2. Es un hidrocoloide completamente soluble en agua a 100°C. Clasificación ESTADO FÍSICO  Líquidos  Semisólidos (agar 0. Sólidifica entre 35°C y 43°C y se funde entre 85°C y 95°C. No tiene sabor ni aroma y carece de color. Es el agente gelificante más empleado en los laboratorios de microbiología.Nutrición y Medios de cultivo AGAR Características: No aporta ningún nutriente.0%)  MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS Mg .

Se emplean para observar la movilidad de algunos microorganismos.8 % de agar. Son útiles en: a) la propagación de microorganismos. SIM. Mg . Sirven para llevar los especímenes que contienen a los microorganismos. Por lo general todos sus componentes son solubles en agua. Desventaja • No se ven los contaminantes. del sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el estudio. Ej. O/F MEDIOS DE CULTIVO SEMISÓLIDOS Algunos de ellos se emplean como medio de transporte. así como la determinación del tipo de metabolismo.Nutrición y Medios de cultivo MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS También conocidos como caldos. b) activación y c) evaluación de ciertas actividades metabólicas.2015-I AGM .2 a 0. MEDIOS DE CULTIVO SEMISÓLIDOS •Contienen alrededor de 0.

5 y 2. Mg . Stuart MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Contienen entre 1. CULTIVO EN AGAR INCLINADO (PICO DE FLAUTA) •Se emplea para conservar microorganismos. Estos medios están en: •cajas Petri o en •tubos (medio inclinado).0 % de agar.2015-I AGM . Esta cantidad permite que el medio tenga una consistencia dura. la concentración esta en función de su grado de pureza.Nutrición y Medios de cultivo MEDIOS DE CULTIVO SEMISÓLIDOS Estos medios impiden que se altere la proporción original de la flora microbiana en los especímenes Ej.

2015-I AGM .Nutrición y Medios de cultivo MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Los medios sólidos en caja se emplean para: a) obtener crecimiento en la superficie del medio (colonias). MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Los medios sólidos en caja se emplean para: a) obtener crecimiento en la superficie del medio (colonias). MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Se emplean para: b) cuantificar microorganismos. Mg .

Nutrición y Medios de cultivo MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Se emplean para hacer : c) pruebas de sensibilidad a antibióticos. entre otros. MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Se emplean para hacer: d) muestreo de superficies.2015-I AGM . MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS Para que los resultados sean satisfactorios. la dureza del gel debe estar entre 300 y 500 dinas/cm2 Mg .

Ej. Medios generales Son aquellos que permiten el desarrollo de los microorganismos más comunes. K2HPO4. Se usan para determinar necesidades nutricionales específicas. Agar nutritivo. agua). Mg . variar la fuente de carbono. MM (base: NH4Cl. MgSO4.2015-I AGM .Nutrición y Medios de cultivo Clasificación de los medios Por su uso:  Mínimos  Generales Selectivos  Diferenciales  De enriquecimiento   Enriquecidos De transporte  Perfil bioquímico  De conservación  Medios mínimos Contienen los nutrientes mínimo necesarios para la multiplicación microbiana. Ej.

0 Lactosa Peptona 10. Es una propiedad del grupo coliforme.2 Medios de cultivo diferenciales La composición de estos sustratos permite distinguir la fisiología particular de los microorganismos . pH* y temperatura* Ej. Caldo Bilis Verde Brillante 2%. La detección esta basada en características de desarrollo microbiano. la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes. Agar LD Caseina (+)   Mg . la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. el medio a doble concentración. colorantes (cristal violeta). Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Bilis de buey deshidratada 20. pH final: 7. antibióticos.2 ± 0. Ejemplos de inhibidores: Sales biliares. 75 g/L Ej. Preparar además.0133 Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua destilada. apariencia en el medio o por la adición de reveladores. Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham. Fundamento En el medio de cultivo.2015-I AGM .0 10. y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.com [NaCl]. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.dibico.0 Verde brillante 0. alta concentración de NaCl. Agar EMB Agar almidón Ej. Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales.Nutrición y Medios de cultivo Medios de cultivo selectivos Sólo permiten el crecimiento de los microorganismos de interés e inhiben el desarrollo de los que no son de interés para el estudio. por la técnica del número más probable. la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas. Manitol sal agar Caldo bilis verde brillante Agar Saboraud * Buscar en: www.

Manitol (-) MSA 37°C G(+) 24 h rojo de fenol Manitol ( + ) Medio de cultivo selectivo y diferencial Hay medios de cultivo que pueden ser selectivos y diferenciales a la vez. Agar EMB Lac ( . Ej. Ej.2015-I AGM .Nutrición y Medios de cultivo Medio de cultivo selectivo y diferencial Hay medios de cultivo que pueden ser selectivos y diferenciales a la vez.) G(-) Mg .) G(-) Lac ( + ) Medio selectivo y diferencial Lac ( + ) Agar Mac Conkey Lac ( .

2015-I AGM . Tienen un exceso de nutrientes y/o se le adiciona un extra de suplementos (sangre [NAD y hemina]. tratamiento químico o físico) Ej Caldo Selenito Recuperación de Salmonella a partir de alimentos. favorecen el desarrollo de un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de crecimiento de la flora acompañante. cholerae de mariscos pH=9 Medios enriquecidos Se utilizan para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales (fastidiosos). Medios de enriquecimiento Ej Agua alcalina para recuperar a V.Nutrición y Medios de cultivo Medios de enriquecimiento   Tienen sustancias que permiten la recuperación de microorganismos de diversas muestras. Estos medios son útiles cuando los microorganismos están sometidos a condiciones de estrés (congelamiento. Agar Baird Parker  Sangre de carnero yema de huevo Mg . vitaminas. huevo.) Agar sangre  Ej. entre otros. refrigeración desecación.

beta y/o gamma) Medios de transporte Son sustratos que se emplean para trasladar las muestras sin alterar la viabilidad y la proporción de microorganismos. Para visualizar su perfil bioquímico se suele emplear reveladores y/o indicadores.2015-I AGM . H2S citritasa Mg .Nutrición y Medios de cultivo Medio enriquecido y diferencial Agar sangre Enriquecido: sangre Diferencial: hemólisis (alfa. con amortiguador de pH y están reducidos en nutrientes para preservar la viabilidad de los microorganismos por varias horas. Para pruebas bioquímicas Son medios de cultivo con sustratos específicos para poner en evidencia la actividad enzimática o vía metabólica de un microorganismo puro. Tienen consistencia semisólida.

2015-I AGM . con sello de glicerol estéril a 4ºC (varios meses dependiendo del microorganismo). Mg . Medios de conservación Algunos medios de cultivo son empleados para la conservación temporal de microorganismos. La leche descremada se emplea en la liofilización. como son: •Medio de agar inclinado a 4ºC (hasta 2 semanas).Nutrición y Medios de cultivo Para pruebas bioquímicas Utilizados en la identificación del fenotipo bioquímico del microorganismo. conserva a los microorganismos por mas de diez años. Medios de conservación Se usan viales con microorganismos y se almacenan a temperaturas inferiores a cero grados centígrados.

• Ajustar el pH. Revisar si es un medio para hidratar o para preparar por componentes.Nutrición y Medios de cultivo ¡¡Necesitamos un descanso!! FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA PREPARACIÓN • • • El medio está en función del microorganismo (s) en estudio y de la composición química de la célula. FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA PREPARACIÓN Usar material de vidrio limpio y seco. Ver el procedimiento.2015-I AGM . • Emplear agua destilada. que es reflejo de los nutrientes que necesita. • Contar con equipo adecuado. • Distribuir el medio en recipientes adecuados • CONTROL DE CALIDAD Mg .

pureza de reactivos y suplementos. Hidratar antes de disolver. Agitar el medio mientras se disuelve. presencia de inhibidores. Ajustar y registrar el pH (utilizar instrumental adecuado y calibrado) Disolver completamente el medio. etc. Pesar exactamente la cantidad solicitada. cajas.) Seleccionar material adecuado: matraces. fecha.) Utilizar agua destilada de calidad apropiada.2015-I AGM .Nutrición y Medios de cultivo PREPARACIÓN EN DIFERENTES AMBIENTES DURANTE LA PREPARACIÓN I       Seleccionar materias primas: medios de cultivo deshidratados. Verificar la calidad del agua empleada (carga bacteriana. etc. Tener cuidado de no sobrecalentar el medio. Uso de probetas adecuadas. tubos. aplicar calor si contiene agar. operador. Esterilizar *** Mg . Usar matraces de por lo menos 2 veces más del volumen del medio a preparar DURANTE LA PREPARACIÓN II          Leer las instrucciones del marbete. volumen. Registrar todos los detalles de la preparación (peso.

Parámetros que deben controlarse: 2+  Iones Cu  Conductividad = 15 mS  pH= ligeramente ácida (no menor a 5.2015-I pH AGM .5)  Cajas petri (<1 mg de óxido de etileno)  Cristalería de borosilicato de sodio  Aditivos o suplementos (sangre: la homogeneidad.Nutrición y Medios de cultivo CONTROL DE MATERIAS PRIMAS El agua es la materia prima más importante. precipitado Pérdida de agua por evaporación Recipiente Desviación del color sucio Sobrecalentamiento sucio Sobrecalentamiento Valor erróneo del Mg . la viscosidad y el color o certificado de calidad y esterilidad) ACTIVIDADES INCORRECTAS POSIBLES DEFECTOS EN LA PREPARACIÓN DEFECTO CAUSA Agua no Desvió de pH neutra cerrado Sobrecalentamiento Envase mal Recipiente Turbidez.

huevo y/o gelatina. • Factores de crecimiento: aa. • Agentes reductores : tioglicolato • Indicadores de oxido-reducción: resarzurina. • Ácidos orgánicos : ácido tartarico.2015-I AGM .Nutrición y Medios de cultivo SUSTANCIAS ADICIONALES Algunos medios deben tener. [NaCl] MICROSISTEMAS Mg . • Colorantes: eosina. además de los macroelementos. • Inhibidores: Antibióticos. microelementos y agua. • Agentes selectivos: cloruro de sodio en altas concentraciones. las siguientes sustancias. algunas de ellas se adicionan después de esterilizar. • Indicadores de pH: azul de bromotimol. vitaminas. • Agentes solidificantes: Agar. sangre. rojo neutro. Ejms.

lo que reduce costos y tiempo de preparación.2015-I AGM .html Medios cromogénicos y fluorogénicos Mg . El medio deshidratado contiene un componente que permite la gelificación en frio y colorantes para la tincion de las colonias desarrolladas.Nutrición y Medios de cultivo Sistema Petrifilm™ Son medios de cultivo deshidratados sobre películas plásticas de tamaño y grosor similar al de una tarjeta de crédito. La principal ventaja del metodo Petrifilm consiste en que no requiere la preparación previa de los medios de cultivo.com/cms/mx/es/0-253/kRecrFS/view.3m. http://www.facilitando su identificación y recuento.

se genera un color o fluorescencia. peptonas. Cuando son hidrolizados por enzimas presentes en las bacterias. OH OH O O OH OH O - + N O Mg . extracto de levadura.Nutrición y Medios de cultivo Medios cromogénicos y fluorogénicos   Mezcla de nutrientes (carbohidratos. etc) y sustratos cromogénicos y/o fluorogénicos que permiten la detección rápida de microorganismos (24 a 48 h). HO O Cl + N O OH Br - N H Los sustratos fluorogénicos son derivados de la cumarina (4-metilumbeliferona) H3C HO O O Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos Los sustratos cromogénicos o fluorogénicos estan unidos a un azúcar o aminoácido específico.2015-I AGM . Los sustratos cromogénicos son derivados del fenol (ONP) o del indol (5-bromo-4 cloro-3-indoxilo).

Farmacia.2015-I AGM . Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos Ventajas Desventajas Mg . etc.Nutrición y Medios de cultivo Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos Aplicaciones  Áreas: Clínica.    No se requieren pruebas bioquímicas adicionales Desventajas Costo Solubilidad del compuesto fluorescente Utilizan poco material Detectan varios microorganismos en una sola placa. Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos  Ventajas Sensibles (1 célula). Ecología.   Específicos. Alimentos.  Búsqueda de algunos microorganismos patógenos.  Cuantificación o búsqueda de bacterias.   Rápidos. hongos y levaduras.

2015-I AGM .Nutrición y Medios de cultivo MEDIO DE CULTIVO ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS Identificación Distribuidos en la naturaleza Reproducción Relaciones con otros seres Fisiología Efectos benéficos y/o perjudiciales Metabolismo Alteraciones físicas y químicas que provocan en su medio BIBLIOGRAFÍA **CONTROL DE CALIDAD NORMATIVIDAD: NOM-065-SSA1-1993 AGM/ agosto /2014. Ejercicio Mg .

Nutrición y Medios de cultivo Ejercicio          Lactosa Peptona de gelatina Peptona especial Cristal violeta sales biliares rojo neutro NaCl agua agar Mg .2015-I AGM .