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UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA

MINISTERIO DE EDUCACIN NACIONAL


NIT:891.190.346-1

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS


PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICAS DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL
1.

FUNDAMENTOS

Las prcticas propuestas estn adaptadas para el estudio de especies


promisorias amaznicas, aunque cumplen con los requerimientos de
un curso general en fisiologa vegetal. Alguna informacin como la
cantidad de semillas, el nmero de hojas o el nmero de plntulas a
usar, pueden ser modificados para mejorar la calidad de los
resultados; en nuestro caso, es bien conocido que la disponibilidad de
material proveniente de especies promisorias amaznicas no siempre
es ptima.
La gua consta de 49 ensayos, de los cuales la mayora son aplicables
a la especie problema que va a trabajar cada grupo y deben
desarrollarse en forma obligatoria (sin asterisco) en las horas
programadas de laboratorio o en horas de dedicacin adicionales del
estudiante

Existen

otros

ensayos

sencillos,

que

surgen

como

opcionales (marcadas en el contenido con un asterisco) para que el


estudiante tenga la oportunidad de experimentar en relacin a algn
proceso fisiolgico vegetal, aunque carezca en el momento de
material vegetal de su especie de trabajo.

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Para un ptimo rendimiento y apreciacin de la materia en su forma


experimental, recomiendo al estudiante leer las prcticas con una
semana de anticipacin y hacer el correspondiente ejercicio grupal
previo para la organizacin, entendimiento y articulacin terica de
cada prctica. Los ejercicios de anlisis y discusin para la realizacin
de informes de laboratorio, debern ser apoyados con bibliografa
universitaria especializada (revisar el programa de la asignatura). Los
objetivos especficos en cada informe de laboratorio debern ser
propuestos por los estudiantes, con el fin de reafirmar el para qu de
un determinado experimento de fisiologa vegetal.
Finalmente, se espera que el estudiante mantenga un conocimiento
constante de las fechas de entrega de informes, ya sea por
informacin publicada en el programa de la asignatura, o por
confirmacin hablada del docente.
2. OBJETIVOS
- Obtener la mayor informacin posible, sobre la fisiologa de
diferentes especies vegetales amaznicas.
- Conocer las metodologas ms comunes para el estudio de la
fisiologa de plantas.
- Ampliar el conocimiento existente sobre las especies problema,
aunando informacin preliminar sobre las estrategias adaptativas
- Promover la creacin de un grupo de investigacin en fisiologa
vegetal.

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3. PROCEDIMIENTO
3.1 SEMILLAS
- Siembra de semillas en germinadores
- Curva de Imbibicin
- Prueba de Vigor
- Prueba de viabilidad
- Procesos de escarificacin
- Efecto de la temperatura sobre la germinacin
- Efecto de la luz sobre la germinacin
- Porcentaje de germinacin
- Caracterizacin general de la semilla
3.2 BALANCE HDRICO
- Contenido de agua en la planta
- Agua actual y agua de saturacin
- Suculencia
- Relacin entre la cantidad de agua en biomasa y el estado de
- desarrollo
- Agua de saturacin
- Capacidad de campo
- Punto de marchitez permanente
- Mtodo de coloracin de Shardakov
3.3 NUTRICIN
- Caracterizacin fsica del suelo
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- Medicin de pH del suelo


- Efecto del NaCl y el CaCl2 en las clulas
- Efecto de la eficiencia de macro y micronutrientes en los
indicadores
- de salud de una planta
3.4 CRECIMIENTO Y DESARROLLO
- Establecimiento, mantenimiento y muestreo de un cultivo
- Determinacin del rea foliar
- Cambios en las ratas de crecimiento
- Efecto de la luz sobre el desarrollo de la plntula
3.5 TRANSPORTE Y TRANSPIRACIN
- Observacin y cuantificacin de estomas
- Determinacin de la transpiracin estomtica usando un papel
- impregnado en CoCl2
- Capilaridad
- Velocidad de transporte de fluidos a travs del xilema
- Flujo de fluidos a travs del xilema
- Marchitez y transpiracin
3.6 FOTOSNTESIS
- Caracterizacin del tejido foliar
- Cuantificacin de Clorofilas
- Determinacin del espectro de absorcin de la planta problema
- Determinacin del Punto de compensacin de luz

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3.7 RESPIRACIN
- Absorcin de oxgeno en semillas
- Mtodo de Sach para medir fotosntesis y / o respiracin
- Produccin de CO2 por las races
- Influencia del oxgeno en la respiracin
- Cuantificacin de la respiracin aerobia por el mtodo
colorimtrico
3.8 REGULACIN HORMONAL Y EFECTO DE HERBICIDAS
- Dominancia apical y abscisin de hojas
- Papel de las Giberelinas en la germinacin
- Hormonas y crecimiento en el cultivo
- Hormonas y crecimiento en la especie problema
- Efecto de 2,6 diclorofenolindol en el transporte de electrones
- durante la fase luminosa de la fotosntesis
3.9 ESTRATEGIAS ADAPTATIVAS
- Reconocimiento de la heterogeneidad ambiental
- Informacin de las adaptaciones por ambiente
- Medicin de algunas variables en campo
- Trabajo en laboratorio

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL
1.

FUNDAMENTOS

SOBRE

SEMILLAS:

GERMINACIN

MORTANDAD
La semilla es la estructura de la cual depende una planta superior
para sobrevivir. Para cada especie, los requerimientos mnimos para
que sus semillas germinen son distintos, y por la misma razn el
conocimiento de los patrones de germinacin, las respuestas a
diferentes factores y los recursos de los cuales dispone la semilla, es
necesario para llegar a una caracterizacin fisiolgica de las especies.
Al caracterizar la semilla de acuerdo a estos aspectos, es posible
conocer los patrones regenerativos de las especies, y de cierto modo,
la adaptabilidad que han tenido que desarrollar para germinar y
sobrevivir bajo las condiciones en las que la planta normalmente
crece. Para determinar a cual tipo pertenece la semilla de una
determinada planta, se requiere de informacin comprobada, de
viabilidad, de vigor, y las respuestas a procesos de escarificacin,
entre otros.

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2. OBJETIVO GENERAL
Establecer, por diferentes mtodos, cunto potencial regenerativo
presentan las semillas de diferentes especies de la Amazona, en
condiciones estndar.
3. MATERIALES Y REACTIVOS

Semillas

de

diferentes

especies**
Hipoclorito

de

decol**
Cloruro

de

tetrazolium
Acido sulfrico

10% y 5%
Sudan III en gotas
Lugol
Reactivo de Biuret
Agua destilada
Termmetro
Balanza
Fuentes de luz

Estereoscopios

Vasos de plstico o icopor**

Pipetas de 10 ml

trifenil

Vasos de precipitados de 100 o 20

ml
Papel aluminio**

Un royo de papel toalla**


Papel celofn**
Tierra de buena calidad
Lija**
Alfileres**
Estuche de diseccin**
Cajas de Petri, bandejas

Sodio

al

20%,

plstico o cubetas de plstico

microscopios
**a cargo del estudiante

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4. PROCEDIMIENTO
Programacin para 2 sesiones de laboratorio
4.1 Mtodos de asepsia
En todos los ensayos de semillas debern tomarse las medidas ms
aspticas posibles; limpiar previamente los mesones, las cajas de
Petri y bandejas para sembrar, con hipoclorito de sodio. Este mismo
compuesto, en disoluciones bajas (1% y 2% durante 5 a 10 minutos),
pueden emplearse para esterilizar las semillas. Permanentemente el
estudiante deber usar toallas de papel limpias, y fsforos o
encendedor para encender mecheros (en el caso de semillas
altamente frgiles al ataque microbiano). Si se minimiza el error
potencial por manejo de las muestras, se obtendrn mejores
resultados.
4.2

Almacenamiento de semillas

Si las semillas deben conservarse durante un tiempo antes de la


prctica, intentar mantenerlas lo mas secas posible; debern usarse
sobres de papel limpio, seco y grueso (en condiciones de Florencia es
posible secarlo un poco con calor antes de usar), no llenar los sobres
con

demasiadas

semillas,

asegurarse

que

stas

estn

razonablemente secas antes de almacenarlas en un sitio oscuro y


resguardado de cambios fuertes de temperatura (preferiblemente a
bajas temperaturas, para evitar la proliferacin microbiana).

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Tabla 1. Diferentes tipos de clasificacin de semilla


CARCTERSTICA

PROPIEDAD DE LA SEMILLA
La semilla puede vivir muy poco
tiempo, unas pocas semanas o

1. Tiempo de vida de
una semilla

TIPO
EFMERA

incluso das.
La semilla est dotada para
mantenerse por un tiempo de
varias semanas, meses, o incluso
aos.
Los cotiledones y el hipoctilo

PERSISTENTE

DE GERMINACIN

2. Posicin del hipoctilo

permanecen por debajo de la

y los primordios
cotiledonares durante la

superficie del suelo


El hipoctilo sobresale del suelo o

germinacin

permanece a ras y los cotiledones

3. Capacidad de las

dan lugar a las primeras hojas


Semillas con poca capacidad

NO DORMANTES

Semillas con alta capacidad

DORMANTES

HIPGEA
DE GERMINACIN
EPGEA

semillas de permanecer
latentes durante
perodos prolongados de
tiempo
La germinacin de la semilla
responde a seales de cantidad de
4. Respuestas a la luz

luz (fotones), o de tipos de luz


(longitudes de onda)
La semilla germina igual en

5.Capacidad de

diferentes condiciones de luz


La semilla es incapaz de germinar,

regenerar la especie

porque se ha degenerado durante

FOTOSENSIBLES

NO FOTOSENSIBLES
RUDIMENTO SEMINAL

el proceso evolutivo de la especie.

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La semilla tiene potencial para

NORMAL O ACTIVA

regenerar la especie

4.3

Seguimiento cronolgico

Siempre llevar un registro escrupuloso de fechas, tratamientos,


tiempos, y datos, mediciones u observaciones hechas.
Siembra de semillas en germinadores
Sembrar un lote de 50 a 150 semillas de la especie problema en una
bandeja o cubeta de plstico, en tierra de buena calidad. La capa de
suelo deber tener entre 3 y 7 cm de profundidad, dependiendo de la
especie a sembrar. Regar peridicamente, con las mismas cantidades
de agua, anotar cada 2 o tres das, tanto los tratamientos como los
eventos de germinacin, salud de la plntula, mortandad de semillas,
etc. Los individuos de esta siembra sern usados para las prcticas de
crecimiento, porcentaje de germinacin, vigor de la semilla, y efecto
hormonal, entre otras.
Curva de Imbibicin
Pesar 30 a 50 semillas, sembrar en cajas de Petri, previamente
acondicionadas con papel filtro o toalla humedecido con 10 a 20 ml
de agua destilada (dependiendo del tamao de la semilla). Pesar las
semillas cada hora, hasta que la biomasa llegue a ser constante.
Prueba de vigor
Usar un grupo de 30 a 50 semillas (tambin pueden usarse las
semillas del numeral anterior) para registrar el nmero de semillas
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germinadas, haciendo observaciones cada 2 o 3 das, hasta el


momento en que ya no se registren germinaciones. Retirar las
semillas

que

muestren

procesos

de

pudricin,

humedecer

peridicamente con cantidades iguales de agua. Obtener as la


velocidad de germinacin en # de semillas/da. Deber medirse con
cuidado la biomasa de las semillas germinadas, y transplantadas en
tierra. Los datos de vigor debern compararse con los registrados en
las semillas del ensayo 1.1.
Prueba de viabilidad
Poner en imbibicin un lote de 20 semillas, escogidas al azar, 18 a 24
horas antes de la prctica. En laboratorio se debern hacer cortes
longitudinales de las semillas, que dejen al embrin expuesto. Verter
en una caja de Petri 10 20 ml de cloruro de trifenil tetrazolium 1%, y
colocar en esta una de las mitades de cada semilla, teniendo en
cuenta que los embriones estn en contacto continuo con el reactivo.
Envolver la caja de Petri y guardar en un sitio oscuro durante 4 a 6
horas, al cabo de las cuales se observarn los embriones y contar el
nmero de mitades con tincin roja total, con tincin parcial, y sin
tincin. Obtener el porcentaje correspondiente.
Procesos de escarificacin
Someter un lote de 30 a 50 semillas a cada uno de los siguientes
tratamientos durante dos minutos: H2SO4 20%, H2SO4 10%, y H2SO4
5%. Posteriormente se debe lavar las semillas con abundante agua,
sembrar en suelo o en cajas de Petri, y registrar cada 2 o tres das la
germinacin.
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Efecto de la temperatura sobre la germinacin


Sembrar un lote de 30 a 50 semillas en las condiciones estndar en
caja de Petri, y colocarlo en nevera a temperaturas alrededor de 5C.
Realizar observaciones y seguimiento de germinacin, cada dos o tres
das.
Efecto de la luz sobre la germinacin
Sembrar tres lotes de 30 a 50 semillas en vasos o recipientes de
icopor, bajo alguno de estos tres tratamientos:
- bajo luz constante
- en fotoperodo con papel celofn rojo
- en fotoperodo con papel celofn azul
-

en condiciones de oscuridad o en fotoperodo con otro color de

papel.
- *En luz continua.
Porcentaje de germinacin
El porcentaje de germinacin, corresponde a: proporcin definitiva de
semillas germinadas X 100. Deber determinarse tanto para las
semillas del germinador en suelo, como para las semillas usadas en
otros ensayos. Cada semilla germinada deber ser transferida a
tierra, (no sin antes hallar la biomasa de la plntula) en bandeja o en
vasos anchos, rotulando siempre la historia o el origen de cada grupo
de semillas. Comparar los diferentes resultados.
*

opcional

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j
Caracterizacin general de la semilla
Cada grupo de trabajo deber usar las mitades de semilla restantes
del ensayo 1.4, para hacer una caracterizacin fsica (medicin),
morfolgica (forma de la semilla y del embrin,
(diferenciacin

de los

tejidos

anatmica

celulares) y bioqumica

(usando

colorantes que evalen la presencia de almidones, lpidos o protenas)


de

la

especie

problema.

Se

recomienda

hacer

cortes

finos

longitudinales y hacer montajes al microscopio con diferentes


colorantes:
a) La tincin de los tejidos con azul de lactofenol permite evidenciar
diferencias

generales

entre

las

clulas

del

embrin

el

endospermo.
b) Al aplicar 2 o 3 gotas de sudan III, una coloracin roja del
endospermo indica almacenamiento de lpidos.
c) Una coloracin oscura del endospermo al aplicar 1 o dos gotas de
lugol, indica presencia de almidn.
d) Prueba de Biuret: Macerar el endospermo de 1 a 5 semillas
(dependiendo del tamao) en solucin de NaCl 5%, agitar por 5
minutos y llevar a volumen de 10 ml. Centrifugar a 2500 rpm
durante 5 minutos, guardar el sobrenadante y repetir el proceso
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una vez ms con el residuo. Mezclar las dos extracciones obtenidas


y aplicar poco a poco reactivo de Biuret recin preparado; si se
presenta un cambio de color a violeta o azul oscuro se comprueba
la presencia de protenas como albminas y globulinas. El residuo
final puede ser centrifugado de nuevo una o dos veces con NaOH
al 0.25% y si el sobrenadante reacciona positivo al Biuret, se
comprobar la presencia de glutelinas.
5.

PREGUNTAS

- Qu otras clasificaciones de semilla se han propuesto?


- Qu otros colorantes vegetales sirven para determinar la
presencia de grasas, azcares simples, polisacridos y protenas
en los tejidos de la semilla?
- Identifique el tipo de embrin de la especie problema de su grupo
de trabajo, de acuerdo a la clasificacin de Martin (1946; en Baskin
y Baskin, 2001).
- Proponga uno o dos ejemplos (ojal de la Amazona) de cada tipo
de semilla planteado en la tabla 1.

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL
1. FUNDAMENTOS SOBRE BALANCE HDRICO
Los contenidos de agua en el suelo dependen del tipo de suelo y de
sus estructura. Las molculas de agua que son retenidas en el suelo,
permanecen adheridas a la superficie de las partculas que lo
conforman, por lo tanto entre mayor superficie ofrezcan las fracciones
del suelo, mayor retencin de agua. El agua en exceso, drena por los
espacios intersticiales de la matriz coloidal formada por suelo y agua.
Tabla 2. Caractersticas fsicas de diferentes suelos (Taiz y
Zeiger, 1998):
SUELO
Arena
gruesa
Arena fina
Limo
Arcilla

PARTCULA

AREA SUPERFICIAL /gr

(m)
2000-200

(m2)
<1-10

200-20
20-2
<2

10-100
100-1000

El agua es la sustancia esencial para el funcionamiento de las


plantas. Es usada durante el transporte de molculas desde la raz
hacia las hojas, y posteriormente, desde las hojas a cualquier parte
de la planta; de las cantidades en las que el agua est presente en el
suelo, dependen la turgencia de los tejidos, las tasas de transpiracin

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y fotosntesis, la disponibilidad de nutrientes, y por ltimo, el


potencial de germinacin de las semillas.
Sin embargo, esta sustancia resulta estar en cantidades fluctuantes
en la naturaleza; la planta, por lo tanto, deber regular sus procesos
fisiolgicos, dependiendo de los contenidos de humedad en el suelo o
en el aire, y del buen uso que haga de ellos, depender su
sobrevivencia.

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Algunos conceptos importantes en el estudio del manejo hdrico son


los siguientes:
Humedad relativa: Porcentaje de vapor de agua en la atmsfera, el
cual vara dependiendo del rgimen climtico, de la hora del da y de
la altitud en un sitio determinado.
Suculencia: Es la cantidad de agua que se puede almacenar en la
unidad de rea (generalmente es de 1cm2) de tejido foliar.
Punto de marchitez permanente: porcentaje de agua en el suelo
por debajo de la cual ninguna planta marchita se recupera.
Saturacin de agua: estado en el cual se ha sometido al suelo o a
un tejido a mas cantidades de agua de las que puede retener.
Capacidad de campo del suelo: es la mxima cantidad de agua
(%) que puede retener el suelo.
Potencial de agua ( H2O): es un estimador indirecto de la cantidad
de agua libre para realizar un trabajo, es decir, para desplazarse.

2. OBJETIVO GENERAL

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Conocer los mtodos ms comunes por los cuales es posible


cuantificar el balance hdrico del sistema suelo-planta-ambiente.
3. MATERIALES

Cajas de Petri

altura**
Vasos de precipitados (1000 ml) Ramas de adultos vegetativos y

Soporte universal con aro

5 plntulas de 20 40 cm de

de adultos en
flor o en fruto**
Cubetas de plstico
Bandas de caucho**
Malla plstica o tul

Decol**
Agua destilada
Cilindros para suelo

Papel filtro

ancho**
Matera con tierra y malla de

Balanza
Bistur**
Estufa
Calculadora**
Papel toalla**

de

fondo**
Tijeras**
Papel aluminio**
Papel peridico**
Marcadores indelebles**
Cinta de enmascarar**
Metro**

Papel milimetrado**
** a cargo del estudiante

4. PROCEDIMIENTO
Programacin para una sesin de laboratorio

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Manejo del material vegetal


En la realizacin de todos los ensayos, ser fundamental la correcta
manipulacin del material vegetal. Se deber evitar al mximo
someter a la planta a presin, doblamiento o movimiento drstico de
las planta o de sus estructuras. Cualquiera de estas actividades
podra afectar la estabilidad de los tejidos de la planta, ablandando
los tejidos o induciendo a estrs fisiolgico.
Manejo del suelo
La acumulacin de agua en el suelo depende de su estructura.
Propiedades como la porosidad pueden afectarse al comprimir las
muestras de suelo en los cilindros, y como consecuencia los valores
resultantes en cuanto a porcentajes de agua de saturacin y
capacidad de campo, podran presentar un margen de error superior
al 10%.
Contenido de agua en los rganos de la planta
Usar dos plntulas de la especie problema (menores a 40 cm), hacer
mediciones del eje caulinar y de la raz, contar el nmero de hojas y
hacer la correspondiente separacin de las diferentes partes. Hallar el
rea foliar de 3 hojas en cada planta, elegidas al azar.
Hallar la biomasa de los diferentes rganos (raz, tallo, hojas),
envolverlos en papel peridico y ponerlos en estufa a 80C durante
24 horas. Hallar la biomasa seca y calcular el % de humedad por
separado y en general para toda la planta.

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Evaluar si existe alguna relacin entre la longitud e la planta y los


contenidos de agua.

Agua en las hojas


Agua actual y agua de saturacin
Usar 5 hojas pecioladas de la planta problema, para hallar el rea
foliar y la biomasa fresca. Llevarlas a una cmara hmeda, en un sito
de baja iluminacin,

y acomodarlas de tal modo que los pecolos

permanezcan sumergidos durante dos o tres horas. Posteriormente,


retirar las hojas y hallar de nuevo la biomasa.
Empacar las hojas en papel peridico, secar en estufa a 80 C durante
24 horas y
hallar la biomasa seca.
biomasa fresca inicial - biomasa seca

% agua actual = * 100


biomasa fresca inicial

biomasa fresca final - biomasa seca

% agua de saturacin = *100


biomasa fresca final

masa de agua actual

% agua relativamasa
=
*100
de agua de saturacin

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1. Suculencia
Usar varias hojas de la especie problema para extraer fracciones de
hoja de 1 cm2 de superficie, manipulando el material con delicadeza,
para evitar daos en los tejidos. Luego de hallar la biomasa de 15 a
20 de estas fracciones, colocarlas en una caja de Petri con agua
destilada durante 1 a 2 horas.
Secar las fracciones a 80C hasta peso constante, hallar la biomasa
seca y calcular la suculencia como cantidad de agua de saturacin /
cm2.
2. *Relacin entre la cantidad de agua en biomasa y el estado
de desarrollo
Repetir los procedimientos 2.2 y 2.3, para hojas del rbol adulto y
para rboles en reproduccin. Comparar los resultados obtenidos.
Agua en el suelo
Elegir antes de la prctica un sitio en campo para tomar las muestras
de suelo, preferiblemente en lugares en donde crece la especie
problema. Usar cilindros metlicos con tapa, pesarlos previamente y
tomar muestras de suelo superficial y a 20 cm de profundidad. La
muestra deber ser lo menos manipulada posible, antes de hallar la
masa total de la misma (m1).

3. Agua de Saturacin:

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Cubrir la base de las muestras anteriormente descritas con papel


filtro, y fijar en el fondo del cilindro un trozo de malla plstica, de tal
modo que el suelo permanezca dentro del cilindro pero pueda
absorber humedad. Posteriormente colocar el cilindro con suelo en
una bandeja o recipiente ancho con agua en el fondo. Dejar el
montaje durante dos horas, al cabo de las cuales se retirar el papel y
la malla, para hallar la biomasa final con tapa (m2).
4. Capacidad de campo:
Colocar posteriormente los cilindros con suelo sobre una malla de
plstico apoyada en un soporte universal, de tal modo que se
precipite el agua en exceso. Hallar el peso de la muestra una vez se
haya detenido la cada de agua (m3).
Finalmente, llevar los cilindros con suelo a un horno a 80 90 C
hasta que las muestras presenten una masa constante; determinar
entonces el peso seco (m4).
m2 m4

% agua de saturacin =m2


*100
m1 m4

% agua actual en el suelo =


m1*100
m3 m4

% agua en capacidad de campo =m3


*100

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Comparar los resultados entre suelo superficial y suelo profundo.


Punto de marchitez permanente
Usar una planta sembrada con anterioridad, en una matera (que
presente salidas de agua en el fondo) con el suelo evaluado en el
numeral 3 y regar con abundante agua. Dejar el sistema en reposo
sobre

malla

en

soporte

universal,

hasta

que

se

detenga

la

precipitacin de agua (4-6 horas); hallar la masa del sistema en


capacidad de campo.
Posteriormente, deber taparse la superficie del suelo con papel
aluminio, de tal modo que el agua que escape lo haga casi
exclusivamente a travs de la planta (transpiracin); hallar la
biomasa cada hora, durante 8 horas, al cabo de los cuales se
proceder a quitar el papel y esperar hasta los primeros indicios de
marchitez en la planta.
A partir de ese momento, se deber transferir la matera a una
cmara hmeda, para averiguar si la planta an puede recuperarse.
Si la planta se recupera, podr ser llevada de nuevo a un semillero en
ausencia de agua, hasta que se reinicien los sntomas de marchitez.
La cantidad de agua en el suelo a la cual ya no es posible que la
planta problema se recupere de la marchitez, es conocido como punto
de marchitez permanente. Para conocer este valor, se necesitar
conocer la masa seca final del sistema.

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La

masa

inicial

de la

planta

podr

estimarse haciendo

una

extrapolacin de los datos obtenidos en el numeral 1.


*Mtodo de Coloracin de Shardakov (Fernndez, 2004)
Este mtodo consiste en sumergir muestras de tejido vegetal durante
algn tiempo en un gradiente de concentracin, de soluciones de
sacarosa, manitol o polietiln glicol. La soluciones ganarn o perdern
agua, esto depende del potencial de agua

) del tejido

H2O

(disminuye y aumenta su densidad respectivamente). Si la densidad


de la solucin no cambia, esto indica que el tejido y la solucin tienen
el mismo H2O.
5. MATERIALES:
Hojas de la especie problema
10 tubos de ensayo
Pipetas Pasteur
Cuchilla o bistur
Soluciones de sacarosa 0.1M, 0.2M, 0.3M, 0.4M y 0.5M
Pinzas
6. PROCEDIMIENTO:
Llenar dos tubos de ensayo con 15 ml de cada una de las 5 soluciones
de sacarosa; a uno delos tubos de cada pareja se le deber agregar 1
a 2 gotas de azul de metileno. Cortar cuadrados de 1 cm de lado del
tejido foliar y sumergir tres fragmentos en cada uno de los 5 tubos sin
colorante, tapar con papel parafilm y esperar hora y media.
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Una vez cumplido el tiempo, sacar con pinzas las muestras de tejido
foliar de cada uno de los tubos y desecharlas. Tomar una pipeta
Pasteur y colocar una gota de la correspondiente solucin coloreada a
unos 3 cm de profundidad en la solucin donde se sumergi el tejido.
Observar si la gota liberada se sumerge (la solucin patrn es mas
densa), flota (la solucin patrn es menos densa) o permanece
suspendida y tiende a difundirse (los valores H2O

tienden a ser

iguales).
Para la discusin de este ensayo, es necesario investigar el potencial
de agua de las diferentes soluciones de sacarosa.

7. PREGUNTAS
1. El pH en el suelo influye en el potencial hdrico del mismo?
cmo?
2. Cul es el papel de la edafofauna en la capacidad de
almacenamiento de agua del suelo?
3. Qu es y como se origina el agua subterrnea?
4. El agua subterrnea es usada por las plantas?

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL
1. FUNDAMENTOS DE NUTRICIN
El suelo es un reservorio de elementos libres y compuestos con carga,
denominados iones. Un vez se presenta la germinacin de una
semilla, la primera funcin fisiolgica que debe cumplir la nueva
plntula es la nutricin, proceso durante el cual la raz es capaz de
incorporar en sus tejidos los aniones (carga negativa) y cationes
(carga

positiva)

del

suelo,

transportarlos

desde

las

clulas

epidrmicas hasta el tejido conductor, y finalmente conducirlos a lo


largo del eje caulinar hasta las hojas.
Las cantidades de nutrimentos asimilados por la planta son decisivos
para su desarrollo y funcionamiento; la participacin de los elementos
qumicos de estos nutrimentos en el cuerpo fsico de una planta,
incluye desde la formacin misma de los tejidos fundamentales, hasta
la permanencia en su forma inica para mantener los gradientes de
osmorregulacin de las clulas (tabla 3).

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Tabla 3. Clasificacin bioqumica de los nutrientes vegetales


(de acuerdo a Taiz y Zeiger, 1998).

GRUPO 1

Funcin bioqumica
Nutrientes que forman los componentes

Elementos
N, S

biomoleculares de la planta
GRUPO 2

Nutrientes

que

almacenamiento
GRUPO 3
GRUPO 4

son
de

importantes

energa

la

para

el P, B, Si

integridad

estructural
Nutrientes que permanecen en forma inica
Nutrientes involucrados en la transferencia

K, Na, Mg, Ca, Mn, Cl


de Fe, Cu, Zn, Mo, Ni

electrones y actividad enzimtica.

Las formas inicas en las cuales estos elementos son absorbidos por
los vegetales, estn resumidas en la tabla 4. No en todos los casos la
forma en la cual los

elementos esenciales estn presentes en el

suelo, son compuestos qumicos que la planta pueda asimilar; siendo


muy comn la accin de microorganismos como los hongos vesiculoarbusculares y las bacterias nitrificantes como facilitadores del
proceso de toma de sustancias para la planta. esto se realiza gracias
a relaciones simbiticas microorganismo planta, en las cuales
generalmente los primeros reciben a cambio carbohidratos altamente
energticos.
Bajo condiciones experimentales, es posible reemplazar el reservorio
de nutrientes del suelo o la tierra por una solucin acuosa de
diferentes sales que contienen los elementos esenciales; esta tcnica
de cultivo vegetal es conocida como hidropona. La cantidad de los
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nutrientes presentes en la solucin debe estar en un rango acorde


con los ptimos de asimilacin de la planta, ya que si el elemento
est

en

concentraciones

demasiado

bajas,

no

suplir

requerimientos mnimos de nutricin; en contraposicin,

los

si las

concentraciones del elemento son demasiado altas, los niveles de la


sustancia pueden incluso alcanzar el grado de toxicidad para la
planta.
Tabla 4. Elementos esenciales para la mayora de las plantas
superiores y concentraciones internas que se consideran
adecuadas (Tomado de Salisbury, 1994).

ELEMENTO
Molibdeno
Nquel
Cobre
Cinc
Manganeso
Boro
Hierro
Cloro
Azufre
Fsforo
Magnesio
Calcio
Potasio
Nitrgeno
Oxgeno
Carbono
Hidrgeno

SMBOLO
Mo
Ni
Cu
Zn
Mn
B
Fe
Cl
S
P
Mg
Ca
K
Ni
O
C
H

FORMA

CONCENTRACIN EN MASA

DISPONIBLE

SECA

A LA PLANTA
MoO4-2
Ni2+
Cu+ Cu+2
Zn+220
Mn+2
H3Bo3
Fe+2 Fe+3
ClSO4-2
H2PO4- H2PO4-2
Mg+2
Ca+2
K+
NO3- NH4+
O2 H2O
CO2
H2O

Mg/Kg
0.1

6
20
50
20
100
100
1000
2000
2000
5000
10000
15000
450000
450000
60000

%
0.00001

0.0006
0.0020
0.0050
0.002
0.010
0.010
0.1
0.2
0.2
0.5
1.0
1.5
45
45
6

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2. OBJETIVO
2.1

OBJETIVO GENERAL

Determinar el efecto de la concentracin y deficiencia de algunos


elementos esenciales en las propiedades del suelo, la osmoregulacin celular, y en los indicadores de salud de una planta:
biomasa seca, rea foliar, longitud del eje caulinar, produccin de
hojas, marchitez y enfermedad
3.

MATERIALES

pH-metro
Vasos de precipitados de 250 ml
Agitadores de vidrio
Pipetas de 10 ml

Cuchillo de campo**
Metro**
Marcador**
7Frascos oscuros de 200

Cajas de Petri

ml**
7 plntulas menores de 15 cm de

Papel aluminio**

longitud de la

a 300

sp problema (lo mas homegneas


Tubos de ensayo
Gradilla
Vasos de precipitados de 1000 ml
Papel normal o milimetrado**
** a cargo del estudiante

posible)**
7 pitillos**
garrafas de plstico de1 galn**
Fsforos o encendedor**
pala pequea de jardinera**

REACTIVOS
Agua destilada
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Hipoclorito de Sodio** al 2%
Soluciones de

NaCl 0.75M (80 ml)


CaCl2 0.75M (80 ml)

Soluciones de

KNO3 1M (150ml)
Ca(NO3)24H2O 1M (100 ml)
NH4H2PO4 1M (50 ml)
MgSO47H2O 1M (50 ml)
Na2SO4 1M (30 ml)

Micronutrientes: Para 250 ml de solucin: 0,05 gr de KCl


0,16 gr de B(OH)3
0,10 gr de MnCl4H2O
0,02 gr de ZnSO4
0,02 gr de CuCO 45H2O (o de
CuSO45H2O)
0.01 gr de H2MoO4 (o 0,08 mM)
0.6g de Fe (en EDTA o algn
quelato de Fe)
0.02 de Al2SO4)3
0.12 de Co(NO3)26H2O
0.02 gr. de NiSO47H2O

4.

PROCEDIMIENTO

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Programacin para una sesin de laboratorio


4.1

Caracterizacin y pH del suelo

En sitios donde se halla registrado precipitacin 24 horas antes,


extraer cubos de 5 cm X 5 cm de superficie) de 4 tipos de suelo, de
origen, coloracin y textura diferentes, incluyendo, si es posible, el
suelo en el cual crecen las especies problema que se han
caracterizado en las prcticas anteriores. Marcar los sitios donde se
realiz el muestreo, para repetirlo en das de lluvia.
Caracterizacin fsica del suelo:
El suelo deber ser conducido en el menor tiempo posible al
laboratorio para la evaluacin del pH. Inicialmente, deber tomarse
un poco de suelo entre los dedos para hacer una caracterizacin de la
textura del suelo, del siguiente modo:
- Si al palpar la muestra no es posible distinguir ninguna partcula, el
material

se

mantequilla)

extiende
y

tiende

suavemente
a

teir

sobre
los

los

dedos,

dedos
el

(como

suelo

es

predominantemente arcilloso.
- Si la prueba de tacto no es positiva o es muy dbil y el material al
ser comprimido entre los dedos se vuelve pegajoso (como la
greda), posiblemente hay presencia de limos es mas del 25%

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- Si las partculas son notorias al tacto, de consistencia gruesa y hay


desmoronamiento

al

comprimir

la

muestra,

el

suelo

es

predominantemente arenoso.
- Es posible establecer textura de suelo intermedio de acuerdo a los
criterios anteriores.
Realizar anotaciones adicionales, como presencia de macroporos y
microporos (a simple vista y en estereoscopio, respectivamente),
color de las muestras y dureza o compactacin.
Medicin del pH
Colocar el cubo de suelo en un vaso de precipitados de 250ml y
agregar agua

destilada hasta donde se completen fracciones

aproximadas de 1:1. Homogenizar la mezcla y medir el pH. Hacer el


proceso en todas las muestras, y finalmente, medir el pH del agua
destilada. Repetir la prueba con muestras de suelo con precipitacin
reciente.
Resumir en una tabla los resultados obtenidos, tanto en muestras
secas como en muestras de lluvia. En estas ltimas no es necesario
repetir la caracterizacin fsica.
4.2

Efecto del NaCl y el CaCl2 en las clulas* (3.3)

Cortar 4 trozos de remolacha de 2 cm de largo y lavar con agua


destilada hasta eliminar el colorante, colocar cada trozo en un tubo
de ensayo, y agregar soluciones as:
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Primer tubo: 8 ml de NaCl 0.75 M


Segundo tubo: 8 ml de CaCl2 0.75 M
Tercer tubo: 4 ml de NaCl 0.75 M y 4 ml de CaCl2 0.75 M
Cuarto tubo: 8 ml de agua destilada
Observar y anotar las coloraciones de la solucin y del tejido vegetal:
al inicio del ensayo, 30 minutos despus, hora y media despus y 24
horas despus.
4.3

Efecto de la deficiencia de macro y micronutrientes en

los indicadores de salud de una planta (UNAL, 1997)


Cada grupo de trabajo deber preparar 5 litros de alguna de las 7
soluciones propuestas en la tabla 5.

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Tabla 5. Componentes y cantidades correspondientes (en ml)


para preparar 1 Lt de solucin
REACTIVO

[ ] SOL 1

SOL 2

SOL 3

complet

- K y - Na 4

Micronuts
6.0
4.2

KNO3
1M
Ca(NO3)24H2 1M

6.0
4.2

O
NH4H2PO4
1M
MgSO47H2O 1M
Na2SO4
1M
Micronut.
Micronut sin

1.5
1.5
0.2
2.0

1.5
1.5
0.2

SOL

SOL

SOL

SOL 7

- Fe

4.2

-P
6.0
4.2

- Mg
6.0
4.2

- Ca
6.0

6.0
4.2

1.5
1.7

2.0

1.5
0.2
2.0

1.5

1.7
2.0

1.5
1.5
0.2
2.0

1.5
1.5
0.2

2.0

Fe

Extraer las plantas sin daar la raz, lavarlas con agua destilada y con
solucin de hipoclorito al 2%; los frascos y pitillos debern ser
igualmente lavados y desinfectados preferiblemente antes de iniciar
la prctica.
Cada grupo deber someter sus plantas de trabajo a las soluciones;
en el caso de tener menos de 7 plntulas, la escogencia de las
soluciones se har dependiendo de la revisin bibliogrfica que se
tenga previamente sobre la especie problema. Todos los grupos
debern tener una planta bajo solucin control (solucin 1) y una bajo
deficiencia de micronutrientes (solucin 2). La cantidad de nutriente

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agregado deber oscilar entre 100 y 200 ml, dependiendo del tamao
de las plntulas y en particular, de la raz.
Sellar el frasco en la parte superior con papel aluminio, para que no
escapen nutrientes ni se oxiden, dejando slo espacio para la plntula
y el pitillo. Cada frasco deber ser marcado con su respectivo
tratamiento, y cada tres das deber airearse la solucin (soplar a
travs del pitillo durante unos minutos); cada semana debern ser
registrados los siguientes datos:
- rea foliar de una o dos hojas (las mismas en todas las revisiones):
esta medicin debe hacerse con mucho cuidado para no daar las
hojas, usando plantillas en papel de rea conocida.
- Crecimiento en longitud del tallo: marcar desde el primer da un
punto del tallo de la plntula, con marcador indeleble; esto
permitir medir en cada observacin la longitud desde ese punto
hasta el pice terminal de la plntula.
- Nmero de hojas
- Longitud de los entrenudos: Medir los dos ltimos entrenudos de la
planta
- Apariencia fsica de la planta. - Hacer un formato de apoyo (tabla
6) para el registro de datos generales que evalen el estado de
salud de la planta.
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El seguimiento de la salud de las plntulas podr prolongarse hasta 2


meses, dependiendo de la resistencia de las plantas a las condiciones
de deficiencia de nutrientes.

5. PREGUNTAS

Cules son las deficiencias de elementos esenciales ms comunes


de los suelos del piedemonte amaznico?
Cules son los tratamientos ms comunes para nivelar el pH de un
suelo cido?
Cul es el efecto de la aplicacin desmedida de fertilizantes en el
suelo?

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Tabla 6. Ejemplo de un formato para los registros de apariencia fsica.


SOLUCIN 1: COMPLETO
CARACTERSTICAS
Coloracin
Hojas
Venas
de
foliares
Tallo
Firmeza del Dbil
Rgido
tallo
Manchado de Hojas
Tallo
Necrosis
En las hojas
margen de

Margen
las hojas

Abril 10 Abril 25
Normal
Normal
Normal
X

En una

las hojas
hoja
En el tallo
de Normal
X
Enrollamient

o
Yema foliar
Normal
X
Anormal
Marchitamien General
De las hojas
to

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
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1. FUNDAMENTOS SOBRE CRECIMIENTO Y DESARROLLO
En el ciclo de vida de una planta, llegar a la adultez es un triunfo que
pocos individuos de una misma cohorte de descendientes puede
lograr. Los ritmos de crecimiento de un individuo son fundamentales
durante la competencia para llegar a ocupar una cobertura de los
espacios de luz que se ofrecen en un ecosistema determinado.
El crecimiento est influenciado profundamente por 4 factores:

La cantidad de luz que llega al sitio donde la planta est

establecida

El estatus nutricional del suelo

Los efectos intra e Inter- especficos como la predacin y la

competencia

La temperatura

La herencia

Existen numerosos evaluadores de las tasas de crecimiento de una


planta. A continuacin se enumeran las variables mas usadas en
fisiologa vegetal (Fernndez, 2004).
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AFE Area foliar especfica


Relacin entre el rea foliar y la biomasa foliar de la planta

CAF Cociente de rea foliar


Relacin entre el rea foliar y el peso total de la planta, expresando
as cunta es la proporcin de rea foliar cuya fotosntesis mantiene a
todo el individuo

CPF Cociente de peso foliar


Es una relacin entre el peso seco de la fitomasa y el peso total de la
planta

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DAF Duracin del rea foliar


ndice que se refiere a la duracin del funcionamiento de la fitomasa,
y es necesario para entender el costo energtico de la formacin de

la unidad de superficie foliar de la planta y su

rendimiento en

produccin de asimilados.
IAF Indice de rea foliar
Relaciona la extensin de la superficie asimilatoria con la superficie
del suelo sobre la cual se proyecta. Es un estimador de la magnitud
del rea fotosintetizante expuesta por el cultivo a la radiacin solar
incidente.

TAN Tasa de asimilacin neta


Parmetro que representa el incremento del peso en gramos por rea
foliar (en m2), por perodo de tiempo. La tasa de asimilacin neta es
una medida directa de la eficiencia productiva de la planta.
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TFU
Tasa foliar unitaria
Relaciona el incremento de material vegetal por unidad de material
asimilatorio por unidad de tiempo. Este estimador, al igual que la TAN
son usados con frecuencia para medir el aumento neto en el peso
seco de la planta por rea foliar unitaria.

TC Tasa de crecimiento y TRC Tasa neta de crecimiento


Parmetros que representan el incremento en peso del individuo en
funcin del peso alcanzado en un momento dado.

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v/r Relacin vstago / raz


Parmetro que expresa la proporcin de asimilados que entran en la
formacin de los rganos areos y subterrneos.

2. OBJETIVO GENERAL
Conocer y aplicar los mtodos que permiten estimar el crecimiento de
una especie vegetal.

3. MATERIALES

Parcela experimental

Horno de secado

Tijeras podadoras

Bolsas de papel

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Balanza

Papel peridico

Cartulina

Papel milimetrado

Metro o regla

4.

PROCEDIMIENTO

Programacin para una salida de campo


Efecto de un tratamiento en el crecimiento de un cultivo
Establecimiento, mantenimiento y muestreo del cultivo
El curso deber obtener como mnimo 400 semillas de una
especie en cosecha. Estas se sembrarn en una parcela (en finca
experimental de UNIAMAZONA) de 20X20 m, a distancia de 1m
entre semilla y semilla; cada una de ellas deber numerarse o
nombrarse con un cdigo para facilitar el registro de informacin.
Debern tomarse datos como la fecha de siembra, la calidad del
suelo, el rgimen climtico. Una parte de la parcela deber
reservarse para la aplicacin de algn tratamiento, como efecto
de herbicidas o efecto de hormonas (prcticas del numeral 8) en
el crecimiento.

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Cada 8 das los grupos se turnarn para atender la parcela, revisar


la humedad y registrar el comienzo de la germinacin. A partir del
momento en que las plntulas tengan 3 a 4 hojas, comenzar la
colecta de los siguientes datos, para 6 individuos escogidos al
azar:

Longitud total (desde el pice de la raz principal hasta la yema

terminal)

rea foliar de 3 a 5 hojas, dependiendo del tamao de la planta,

elegidas al azar (debe haber representacin de hojas nuevas y


hojas antiguas).

Peso seco total y peso seco de cada parte de la planta: hojas,

tallo y raz.
Para reducir el rango de error, nunca incluir en el muestreo la
plntula mas pequea ni la mas alta. Al final se deber obtener un
nico valor de incremento en biomasa, en rea foliar o
longitud.

Comentarios

importantes

del

desarrollo,

como

en
la

formacin de renuevos, ramificaciones, cambios en la morfologa


de las hojas, floracin, etc., al igual que anotaciones sobre alguna
planta en particular, tambin deben ser registrados. La ficha en la
tabla 7 deber ser llenada a lo largo del seguimiento.
Determinacin del rea foliar
El curso deber buscar previamente plntulas, juveniles y adultos
de la especie que se sembr en la parcela, y cada grupo colectar
10 tamaos de hoja diferentes. Calcarn la hojas sobre papel
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milimetrado y determinarn el rea foliar en cm 2; posteriormente


se recortar la silueta de la hoja en cartulina, escribiendo en ella
el rea foliar. Todos los grupos aportarn sus plantillas en
cartulina, las cuales servirn para la estimacin del rea foliar en
las plantas del cultivo.
Resultados
Cada grupo de trabajo deber mostrar la tabla de resultados final y
realizar los clculos de AFE, CPF, TRC, v/r y ln del incremento en
longitud total, y realizar grficas de esas variables en relacin al
tiempo de seguimiento. La documentacin fotogrfica del proceso de
crecimiento y desarrollo tambin ser de mucha utilidad.
Anlisis
Este deber enfocarse en el estudio del desarrollo de la especie
problema, en la comparacin de las grficas con los patrones tericos
de crecimiento vegetal, y en la comparacin con reportes publicados
para especies de alta domesticacin (maz, trigo, etc.)
Cambios en las ratas de crecimiento
5. OBJETIVO
Obtener un patrn logartmico de crecimiento usando germinados de
la especie problema
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Tabla 7. Ficha que todo grupo de trabajo debe llenar para el


seguimiento de crecimiento y desarrollo

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Fecha

14-10-04 21-10-

Grupo de trabajo Grupo 2

28-10-

04
04
Grupo Grupo 4
3

Plantas

A2,

D5,

muestreada

D8,

E1,
G9,

rea foliar
Longitud total
Biomasa seca

J4
36.7 cm2
49.3 cm
39.6 gr

hojas
Biomasa seca

21.1 gr

raz
Biomasa seca

15.8 gr

tallo
Biomasa seca

76.5 gr

total
Comentarios

Aparici
n
de
ye
mas
axil
ares
en
G9

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6. MATERIALES

3 a 5 semillas recin germinadas

Marcador indeleble

Metro o regla

7.

PROCEDIMIENTO

Marcar un punto por detrs del gancho del hipoctilo en crecimiento,


y medir la distancia desde ese punto hasta el suelo. Graficar las
distancias a las cuales el punto se desplaza en cada intervalo de
tiempo de 3 das, durante 3 semanas.
Efecto de la luz sobre el desarrollo de la plntula (Fernndez,
2004)
8. OBJETIVO
Comprobar que la luz incide notablemente en la morfognesis de las
plntulas
9. MATERIALES

Plntulas de maz o de frjol germinadas en : Luz normal


Luz deficiente
Oscuridad.

Regla

10. METODOLOGA

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Examine las plntulas de maz y frjol que han sido germinadas en luz
normal,

luz deficiente y oscuridad. Observe su coloracin y haga

mediciones del tallo, hojas, etc. segn el cuadro siguiente para cada
especie.
Tabla 8. Formato para la coleccin de datos
Especi Parte de la plantula

Luz

Luz

normal

deficiente

Oscuridad

Grosor del tallo (mm)


Largo
promedio
de
hojas (cm)
Ancho promedio
hojas (cm)
Largo del
Maz

de

mesocotilo

(cm)
Color de las hojas
Consistencia
General
Grosor del tallo (mm)
Largo
promedio
de
hojas (cm)
Ancho promedio
hojas (cm)
Largo del

Frijol

de

mesocotilo

(cm)
Color de las hojas
Consistencia
General
Rompimiento del
"gancho" cotiledonar

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Largo

del

Hipocotilo

(cm)
Largo del epictilo (cm)
Color
Haga una discusin de cmo afecta la luz la morfognesis de

la

plntula.

11. PREGUNTAS
Cules son las especies que menor ritmo de crecimiento tienen y
cules las de mayor?
Qu importancia tiene la distancia de siembra en el desarrollo de la
planta en relacin al uso de la luz?
Qu diferencia (ventajas y desventajas) existe entre el crecimiento
de una planta domstica, que es subsidiada por el hombre, y una que
est sometida a competencia en su ambiente natura?

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL

1. FUNDAMENTOS SOBRE TRANSPORTE Y TRANSPIRACIN


VEGETAL
Actualmente, se considera que por cada gramo de carbono fijado
durante la fotosntesis, una sola planta pierde entre 250 y 400
gramos de agua. Este fenmeno se produce por la necesidad de la
planta de abrir los estomas para tomar el CO2 atmosfrico.
La

planta

resulta

ser

una

fbrica

altamente

eficiente

en

la

construccin de sustancias carbonadas, pero su funcionamiento est


limitado por las cantidades de agua de las que dispone: durante la
sequa, la cantidad de sales disueltas en el suelo disminuye, la
diferencia de presin de vapor de agua entre el aire y el suelo
aumenta y la planta est presionada a fotosintetizar a costa de la
transpiracin. Bajo esas condiciones de estrs hdrico, cada especie
vegetal deber desarrollar una estrategia de balance mximo, o
escoger entre morir de hambre (reducir la fotosntesis y cerrar
estomas) y morir de sed (sintetizar carbohidratos y perder agua).
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Los tejidos vegetales, a diferencia de los tejidos animales, no realizan


un reciclaje del agua interna. El ascenso de agua es un proceso
constante, donde el agua evacuada asciende en forma de vapor a la
atmsfera; en ecosistemas donde la biomasa total es elevada, como
el bosque tropical lluvioso, las cantidades de agua que se mueven en
el ciclo hdrico suelo - planta -atmsfera se miden en toneladas / ao,
y estas masas son decisivas en el rgimen climtico de grandes
extensiones continentales.
El agua es transportada en sentido vertical y en contra de la
gravedad a travs de los tejidos conductores, mediante el fenmeno
conocido como capilaridad, gracias al cual las molculas de agua se
adhieren a las paredes del capilar, movindose a una velocidad que
depende del radio del capilar, del material del capilar, y de la
presencia de solutos en el agua.
Sin embargo, la capilaridad no es el nico mecanismo que favorece el
transporte de sustancias a travs del tallo de la planta. Se podran
mencionar otros 4 factores igual de importantes:
El gradiente de potencial de agua (H2O): La presin del agua es
mayor en el suelo que en la planta, y mayor en la planta que en
el aire. Este gradiente impulsa las molculas libres de agua en
sentido suelo planta- aire.

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La presencia de macroporos y microporos en el suelo: Estos


espacios son un reservorio de gases, que al expandirse empujan las
molculas de agua hacia las plantas.
El

calentamiento

diurno

estimula

un

proceso

continuo

de

evaporacin de agua en la superficie foliar, haciendo a su vez que la


planta transfiera agua hacia sus hojas para mantenerlas a una
temperatura mas baja y ptima para los ritmos metablicos.
El gradiente de solutos: la concentracin de solutos es mayor
dentro de los tejidos de la planta, por lo tanto el agua del suelo tiende
a entrar para diluirlos.
2. OBJETIVO GENERAL
Caracterizar

las

estructuras

directamente

relacionadas

con

la

transpiracin y el transporte de sustancias a travs de una planta


problema, y cuantificar en cuanto sea posible estos procesos, para
llegar a un diagnstico final del manejo hdrico de la planta.
3.

MATERIALES Y REACTIVOS

Dos plntulas de la especie problema (una en matera)**

Hojas frescas de un adulto de la especie problema**

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Hojas frescas de un competidor de la especie problema A


**

Esmalte transparente**

Cinta adhesiva transparente**

Cuchillas **

Tijeras**

Clips**

Pinzas de diseccin y bistur**

Cinta de enmascarar**

Papel aluminio **

Vidrio de reloj

Incubadora

Vaso de precipitados de 250 ml

Vaso de precipitados de 50 ml

Solucin de CoCl2 al 5%;

Solucin de NaCl al 10%

Azul de lactofenol

Capilares

Papel filtro

Balanza

** a cargo del estudiante

En caso de que la planta problema se encuentre en sitio abierto, las especies vecinas, que generalmente
deben usar los mismos recursos, resultan ser sus competidores.

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4.

PROCEDIMIENTO

Programacin para 2 sesiones de laboratorio


Observacin y cuantificacin de estomas
Extraer muestras de la epidermis de tres tipos de hoja: de la
especie problema en estado adulto, de una plntula de la misma
especie y de un competidor natural de la especie problema.
La extraccin puede realizarse de tres formas distintas:
- Una impresin en esmalte transparente
- Una impresin en cinta adhesiva transparente
- Un corte fino superficial de la hoja
En todos los casos, deber hacerse una cuantificacin del nmero
de estomas en el rea del campo visual del microscopio, para
hacer posteriormente una estimacin del nmero de estomas /
cm2 en el haz y en el envs. Tambin deber hacerse una
caracterizacin del estoma de la planta problema y el dibujo
correspondiente a 40X.

Determinacin de la transpiracin estomtica usando papel

impregnado en CoCl2
Usando pinzas, sumergir tiras de papel

filtro (el tamao

depender del tamao de las hojas) en una solucin de CoCl 2 al


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5%; las tiras se pondrn a secar sobre un vidrio de reloj a 80C.


Una vez secas, ponerlas en contacto directo con el haz y el envs
de por lo menos dos hojas de una planta (especie problema) en
matera. Medir el tiempo que gasta el papel en tornar de color.
Comparar y analizar los resultados.
1. Capilaridad
Colocar en un vaso de precipitados 10 ml de agua destilada. Poner
en contacto superficial un extremo de un capilar de dimetro
conocido, registrar la altura a la que sube la columna de agua, y si
es posible, el tiempo en el cual se da este ascenso. Repetir el
mismo procedimiento para una solucin de NaCl al 10%. Tomar un
vstago de la planta problema, cortar en un punto medio del tallo,
esperar que suba la savia de la planta a la superficie, y repetir el
contacto con el capilar. Realice una tabla de los resultados,
comparndolos con la frmula

1.49 x 10-6 m2
C=
r

Donde C: altura de la columna


r: radio del capilar

2. Velocidad de transporte de fluidos a travs del xilema


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En una plntula sembrada o en agua, deber realizar un corte


diagonal o en forma de cua (puede ser la misma a la cual realiz
el ensayo de capilaridad en el numeral anterior); separar las
partes. A la parte inferior se le debe poner una o dos gotas de
cristal violeta, tiendo la savia; posteriormente se deber acoplar
de nuevo las partes de la planta, ajustndolas con cinta, y se
esperar

1 minuto, al cabo del cual deben hacerse diferentes

cortes, a diferentes niveles de la plntula, para identificar la altura


hasta la cual ascendi el colorante por los vasos conductores.
Determinar la velocidad a la cual ascendi la sustancia, en cm /
seg.
3. Flujo de fluidos a travs del xilema
Hacer diferentes cortes transversales finos del tallo de la plntula
del ensayo anterior, para

cuantificar los vasos del xilema y

estimar el dimetro promedio de estos vasos haciendo la


correspondiente medicin a por lo menos tres de ellos.
Con estos datos y los del numeral anterior, es posible conocer el
flujo de la savia a travs de la planta problema, el cual se puede
medir en cm3 / seg.
4. Marchitez y transpiracin

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Usar un planta sembrada con anterioridad, en una matera que


presente salidas de agua en el fondo; regar hasta capacidad de
campo y hallar el peso del sistema. Posteriormente, deber
taparse la superficie del suelo con papel aluminio, de tal modo
que el agua que escape lo haga casi exclusivamente a travs de la
planta; dejar el sistema en reposo, bajo la influencia de una fuente
de luz constante y hallar la biomasa cada hora, durante 8 - 24
horas, registrando adems la temperatura a la cual est sometida
la planta.
Comparar los resultados con la informacin obtenida para la
misma especie, en el ensayo 4 de la prctica de balance hdrico.
5.

PREGUNTAS

Investigue

alguna

forma

de

clasificacin

de

los

estomas

(morfolgica o fisiolgica), y ubiquen su planta problema en el tipo


indicado.
- Porqu la fotorrespiracin est relacionada con la apertura
estomtica?

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL

1. FUNDAMENTOS SOBRE FOTOSNTESIS


Los organismos fotosintticos

resultan ser los nicos con la

capacidad de fabricar compuestos carbonados a partir de fuentes


inorgnicas. Este proceso debe cumplir con diferentes reacciones
bioqumicas, desde la obtencin gratuita de energa qumica usando
agua y fotones de la luz solar, hasta la fijacin de molculas de CO 2
en compuestos tricarbonados.
Para la realizacin de esta ruta anablica son necesarios varios
componentes, presentes en el cloroplasto (aunque algunos otros son
transportados desde el citoplasma, por ej: el ortofosfato) como la
presencia de pigmentos, el complejo transportador de electrones o
complejo citocromo, las protenas de membrana interna, un gradiente
electroqumico y las enzimas del ciclo de Calvin (figura 1).
En el caso particular de los pigmentos fotosintticos, es posible
identificar las cantidades en las cuales estn presentes y su espectro
de

absorcin,

determinando

los

valores

de

absorbancia

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transmitancia, usando un espectrofotmetro. La relacin entre las dos


variables, puede observarse en la Tabla 7
2. OBJETIVO GENERAL
Realizar la cuantificacin de diferentes variables relacionadas con la
cantidad de luz absorbida, y el rendimiento fotosinttico de la planta
problema, mediante la aplicacin de mtodos de espectrofotometra y
fisiologa vegetal

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Tabla 9. Relacin entre transmitancia (%T) y absorbancia o


Densidad ptica (D) en fotocolorimetra (tomado de Wawk, et
al., en: Meja, 2002)
T(%

T(%

T(%

T(%

)
100

)
0.00 75

)
0.12 50

)
0.30 25

0.60

99

0
0.00 74

5
0.13 49

1
0.31 24

2
0.62

98

4
0.00 73

1
0.13 48

0
0.31 23

0
0.63

97

9
0.01 72

7
0.14 47

9
0.32 22

8
0.65

96

3
0.01 71

3
0.14 46

8
0.33 21

8
0.67

95

8
0.02 70

9
0.15 45

7
0.34 20

8
0.69

94

2
0.02 69

5
0.16 44

7
0.35 19

9
0.72

93

7
0.03 68

1
0.16 43

7
0.36 18

1
0.74

92

2
0.03 67

8
0.17 42

7
0.37 17

5
0.77

91

6
0.04 66

4
0.18 41

7
0.38 16

0
0.79

90

1
0.04 65

1
0.18 40

7
0.39 15

6
0.82

89

6
0.05 64

7
0.19 39

8
0.40 14

4
0.85

4
9
4
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88

0.05 63

0.20 38

0.42 13

0.88

87

6
0.06 62

1
0.20 37

0
0.43 12

6
0.92

86

1
0.06 61

8
0.21 36

2
0.44 11

1
0.95

85

6
0.07 60

5
0.22 35

4
0.45 10

9
1.00

84

1
0.07 59

2
0.22 34

6
0.46 9

0
1.04

83

6
0.08 58

9
0.23 33

9
0.48 8

6
1.09

82

1
0.08 57

7
0.24 32

2
0.49 7

7
1.15

81

6
0.09 56

4
0.25 31

5
0.50 6

5
1.22

80

2
0.09 55

2
0.26 30

9
0.52 5

2
1.30

79

7
0.10 54

0
0.26 29

3
0.53 4

1
1.39

78

2
0.10 53

8
0.27 28

8
0.55 3

8
1.52

77

8
0.11 52

6
0.28 27

2
0.56 2

3
1.69

76

4
0.11 51

4
0.29 26

9
0.58 1

9
2.00

Nota: En fotmetros equipados con escala lineal de 0 a 100, D


corresponde

los

valores

de

2-log

G,

siendo

la

lectura

galvanomtrica a la marca de 100 como posicin inicial.

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Figura 1. Resumen de las molculas

que participan en el

proceso fotosinttico. Entre parntesis, los picos de absorcin ( en


longitudes de onda) de diferentes pigmentos. Al lado derecho, las
etapas del proceso fotosinttico en el cual participan dichas

clorofilas
1. PIGMENTOS
Pigmentos
accesorios

clorofila a (440 y 690 nm)


clorofila b (470 y 670 nm)
bacterioclorofila (350 y 780 nm)
carotenoides
(400 a 500 nm)

ficobilinas
(500 a 580 nm)

carotenos
Xantinas

anteraxantina
violaxantina
zeaxantina

ficoeritrina
ficocianina

plastoquinonas
plastocianinas
feofitina
protenas hierro-azufre
citocromos
flavoprotenas (ferredoxina)

Lmen

H+ estroma

2. CADENA TRANSPORTADORA
Subunidad F0: entrada de protones a favor del gradiente
DE ELECTRONES (FS 1 y 2)
Subunidad F1: salida de protones y reaccin ADP + Pi

ATP

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concentraciones
de CO2
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luz
Plantas
C3 - Caquet
Florencia
Activacin
la
ferredoxina reducida
Plantas C4
por
Plantas CAM
presencia de Mg++
pH

FIJACIN DE CO2

fase oscura.

CONVERSIN DE NADP

NADPH+
H
ABSORCIN
DE LUZ

molculas y la regla de iluminacin mostrando la fase lumnica y la

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3. GRADIENTE ELECTROQUMICO

4. ATP SINTETASA

5. ENZIMAS DEL
CICLO DE CALVIN

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3. MATERIALES

8 Hojas frescas de un adulto de la especie problema**


A

Hojas de sombra y hojas de luz de la especie problema**

5 hojas frescas de un competidor de la especie problema**

2 hojas de sol y 2 hojas de sombra de una especie arbrea**

Hojas de pasto**

4 a 6 frascos de vidrio con tapn (debe caber una hoja de las

especies de trabajo)**

Aguja fina de coser e hilo delgado.**

Mortero

Embudo Buchner de decantacin

Discos de papel filtro, watman 1

Cuarzo o arena fina

Matraz aforado de 100 ml

2 celdas de espectrofotmetro

Probeta de 100 ml.

1 tubo de ensayo

1 caja de Petri

1 vaso de precipitados de 50 ml

Acetona comercial 80%

1 pipeta de 5ml

Microscopio

Opcional

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Espectrofotmetro

Lminas y laminillas

Lmpara fluorescente

1 termmetro

Solucin indicadora de CO2

Tionina

** A cargo del estudiante

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4. PROCEDIMIENTO
Programacin para 2 sesiones de laboratorio

Caracterizacin del tejido foliar


Corte una franja longitudinal en la hoja de la especie problema,
que incluya la nervadura central. Realice posteriormente diferentes
cortes finos transversales, adicione 1 o 2 gotas de tionina y
complete el micropreparado. Observar a menor y mayor aumento.
Deber hacerse un reconocimiento de los diferentes tejidos,
haciendo especial caracterizacin de las clulas del mesfilo y de
la vaina del haz. Para esto pueden usarse fotografas o bibliografa
de histologa consultada previamente. Realice los esquemas
correspondientes.
Repetir el mismo proceso con las hojas de pasto y las hojas de sol
y de sombra de la especie arbrea, o diferenciando hojas de sol y
de sombra de la especie problema.
1. Cuantificacin de clorofilas (UNAL, 1997)
Macere 1 gr de hojas frescas sin venas de la especie problema,
cortadas en trozos. Agregar cuarzo y 5 ml de acetona. Moler el
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tejido hasta obtener una pasta fina,

incorporar 30 ml mas de

acetona.
Filtrar la mezcla en un embudo buchner con papel filtro. Agregar
25 ml. mas de acetona a la pulpa y realizar un segundo filtrado,
incorporando este extracto al primero. La pulpa debe quedar
prcticamente de apariencia transparente, por lo tanto es posible
realizar un tercer macerado y filtrado hasta completar 100 ml de
filtrado de clorofila.
Llenar la celda de espectrofotmetro con el filtrado, y leer la
densidad ptica (D) a valores de 645, 652 y 663 nm. Como blanco
puede usarse agua destilada o acetona pura. Si es posible, realizar
este proceso para hojas de sol y de sombra.
2. Determinacin del espectro de absorcin de la planta
problema (UNAL, 1997)
Colocar 0.1 gr de hojas frescas (sin venas) de

la especie

problema, cortadas en trozos. Agregar cuarzo y macerar el tejido


vegetal, adicionando 4 ml de acetona. Una vez se obtenga una
pasta fina, adicionar 10 ml mas de acetona.
Transferir cuidadosamente la mezcla a un embudo buchner con
papel filtro. Agregar 4 ml mas de acetona a la pulpa, macerar de
nuevo e incorporar el segundo filtrado al primero. De igual modo
que en el ensayo anterior, la pulpa deber retener la mnima
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coloracin posible; para relavar los remanentes de pigmento en


embudo y mortero, usar 2 ml de acetona adicionales. En todo el
procedimiento no deber usarse mas de 20 ml de acetona.
Llenar la celda del espectrofotmetro con el extracto y leer la
densidad ptica (D) a intervalos de 10 nm desde 400 nm hasta
720 nm. Como blanco puede usarse acetona pura o agua
destilada. Repetir todo el proceso para la especie competidora.
3. *Determinacin del Punto de compensacin de luz
De acuerdo al tamao de los frascos a usar, adicionar de 3 a 6 ml
de la solucin indicadora de CO2 en cada uno. Atravesar finamente
la parte apical de una hoja de la especie problema con hilo, e
introducirla en el frasco de tal modo que no toque la solucin y
quede suspendida dentro del frasco; tapar el frasco, sosteniendo el
extremo del hilo. Reservar uno de los frascos para el montaje
blanco, agregando la solucin pero dejando el frasco vaco.
Rotular los frascos con hojas 1, 2, 3 y 4, sometindolos a los
siguientes tratamientos durante tres horas (ubicar los frascos en el
ambiente correspondiente, en el menor tiempo posible):
Tabla 10. Tratamientos para determinar el punto de compensacin
de luz de la especie problema
FRASCO

TRATAMIENTO

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1
2
3
4
BLANCO

Oscuridad total
Semisombra constante
A 40 cm de una lmpara o fuente de luz de nen
A 10 cm de una lmpara o fuente de luz de nen
A40 cm de una lmpara o fuente de luz de nen

Antes de desmontar el sistema, registrar la temperatura externa a


la cual estaba sometida cada frasco durante el tratamiento.

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5.

RESULTADOS Y ANALISIS

Ensayo 6.1. Comparar los patrones de la forma y caractersticas


de los tejidos foliares entre las especies, para detectar la posible
adaptacin anatmica de las plantas CAM, y evaluar si se dan
caractersticas importantes que diferencien las hojas de sombra y
las hojas de luz de nuestra especie problema o de una especie
distinta.
Ensayo 6.2. Calcular la cantidad de clorofila presente en el
extracto, expresndola como mg de clorofila por g de tejido foliar,
de acuerdo con las siguientes frmulas:
mg de clorofila a/g de tejido = [12.7(D663) - 2.69(D645)]

x V/

(1000x mf)
mg de clorofila b/g de tejido = [22.8(D645) -4.48(D663)]

x V/

(1000x mf)
mg de clorofila total /g de tejido

[1000(D552)]/34.5

V/

(1000x mf)
Donde D: densidad ptica del filtrado leda a la longitud denotada
por el subndice
V: volumen final del extracto de clorofila en acetona al 80%
mf: masa fresca en gramos del tejido foliar

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Realice un anlisis de los resultados obtenidos, incluyendo las


razones por las cuales una planta puede variar su radio clorofila
a / clorofila b, e integrar estos resultados de cuantificacin de
clorofilas con el estudio anatmico de los tejidos foliares.
Comparar los resultados obtenidos para hojas de sol y hojas de
sombra, determinando las posibles estrategias de la planta en
relacin al uso de la clorofila.
Ensayo 6.3. Construir el espectro de absorcin de la planta
problema (absorbancia en Y, longitud de onda en nm, en X),
incorporando los picos de absorcin obtenidos en el anlisis de su
potencial fotosinttico. Si los picos son anchos, este potencial es
muy alto, pero si son muy angostos, la planta se restringe.
Relacionar esto con la variedad de pigmentos que la planta puede
tener.
Comparar los resultados con los de la planta competidora.
Ensayo 6.4. Comparar las coloraciones finales de las soluciones,
primero con el blanco y luego entre frascos con hoja, y determinar
a partir de qu tratamiento el viraje de color tiende a permanecer
constante.

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6. PREGUNTAS
Investigue si existe un factor de conversin, que permita cambiar los
valores de cantidad de luz, dados en Vatios de una lmpara
(conociendo la distancia a la fuente de luz) a lux o DFF (densidad de
flujo de fotones). Estas conversiones permitiran un mejor anlisis de
los datos en el ensayo 3.4 de esta prctica.
Busque listados o datos publicados de los puntos de compensacin de
especies conocidas, indique cual es la medida mas comn para medir
esta variable y compare estos datos con los de la especie problema.

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FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS


PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL

1. FUNDAMENTOS SOBRE RESPIRACIN


Al igual que cualquier organismo hetertrofo, una planta requiere de
procesos internos de oxidacin que permitan elaborar ATP a partir de
molculas

energticas

como

los

carbohidratos.

Este

proceso,

conocido como respiracin, es requerido tanto durante el da como en


la noche y degrada gran parte de las molculas de azcar que la
planta fabric durante la fotosntesis.
La respiracin celular es la base para un gran nmero de rutas
metablicas alternas, a partir de las cuales la planta es capaz de
fabricar

precursores

hormonales

vitamnicos,

metabolitos

secundarios o sustancias alelopticas, protenas, lpidos y molculas


transportadoras de electrones.

2. MATERIALES Y REACTIVOS

10 a 20 semillas pre- imbibidas**

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6 plntulas etioladasA

de la sp. problema, con un mnimo de 4

hojas.**

2 plntulas con 4 hojas**

Sacabocados o bistur**

Corcho y algodn**

Papel aluminio**

Lpiz de cera o marcador**

Cinta de enmascarar**

Bombillo de 100 watts

Balanza analtica

Horno para 105C

1 vaso de precipitados de 100 ml

5 vasos de precipitados de 50 ml

5 tubos de ensayo iguales o frascos angostos**

2 cajas de Petri

Varilla de agitacin

agua destilada

Bureta con soporte

Gotero

Gradilla

Solucin de K2CO3 al 2%

Solucin de fenolftalena

Solucin de NaOH 0.01N


solucin de NaOH al 20%

deben haber estado un da en oscuridad absoluta


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3. OBJETIVO GENERAL
Comprobar la respiracin celular en diferentes partes vegetales y
evaluar cmo se relaciona con el pH en el medio y con la biomasa de
los tejidos.
4. PROCEDIMIENTO
Programacin para una sesin de laboratorio.
PRACTICA 1.

ABSORCIN DE OXGENO EN SEMILLAS (UNAL,

1997)
En 2 tubos de ensayo colocar semillas previamente imbibidas (por lo
menos 24 horas antes). Insertar luego una mota de algodn hmedo.
Agregar 20 ml de NaOH al 20% en 2 vasos de precipitados de 50 ml,
agregando al tercero agua en igual cantidad.
Invertir uno de los tubos en uno de los vasos que contenga NaOH y el
otro en el vaso con agua; el tubo sin semillas deber colocarse en el
vaso restante, que contiene NaOH. Marcar el nivel de lquido en el
vaso de precipitados con un lpiz de cera. Los tubos deben quedar en
posicin vertical, y el nivel del lquido ser registrado de nuevo en 24
horas.
PRACTICA 2. METODO DE SACH PARA MEDIR FOTOSNTESIS Y
/ O RESPIRACIN (RVALO, 1993)
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Extraer con mucho cuidado 5 discos de una hoja en cada una de las
plantas etioladas, de un sitio sin nervaduras notorias. Etiquetar el
material de cada plntula y poner a secar durante 1 hora a 105C.
Obtener la biomasa seca.
Durante el secado del proceso anterior, iluminar la mitad de las
plntulas por 90 minutos (evitando el sobrecalentamiento), y
simultneamente mantener la otra mitad en oscuridad durante el
mismo tiempo. Al final de ese tiempo, extraer otros 5 crculos de cada
planta y repetir el proceso de secado. Hallar la biomasa.

Figura 2. Respiracin celular y rutas alternas en plantas. (Tomado


de Taiz y Zeiger, 1998)

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PRACTICA 3. PRODUCCIN DE CO 2 POR LAS RACES (UNAL, 1


997)
Agregar dos gotas de fenolftalena a un vaso con 100 ml de agua de
grifo. Aadir enseguida gota a gota una solucin de K 2CO3 hasta que
aparezca una leve coloracin rosada. Evitar excesos.
Con esta agua llenar dos tubos de ensayo, tapar uno de ellos con un
corcho y colocar en el otro una plntula sostenindola en el borde con
papel aluminio o con algodn. Finalmente cubrir ambos tubos con
papel aluminio, para oscurecer la zona de las races, y dejarlos en un
sitio iluminado durante una semana.
Transcurrido ese tiempo, tomar 15 ml de solucin de cada tubo por
separado, agregando primero unas gotas de fenolftalena como
indicador del cambio de color; titular con NaOH 0.01N para valorar el
CO2 que contiene. Registrar el NaOH gastado para cada tubo.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Ensayo 1. Explicar las diferencias que se obtengan en el nivel de
solucin de los vasos de precipitados.
Ensayo 2. Los datos obtenidos se pueden organizar en el siguiente
cuadro:
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Tabla 11. Ficha para la ganancia o prdida de biomasa bajo los


tratamientos.
MUESTRA

TIEMPO
inicial: 0
final: 90

ILUMINACIN
BIOMASA

OSCURIDAD
BIOMASA BIOMASA

BIOMAS
A

PLANTA 1

0
90
PLANTA 2
0
90
PLANTA 3
0
90
PROMEDIO BIOMASA
BIOMASA: Peso seco de las plntulas sin haberlas sometido a ningn
tratamiento (tiempo 0) y luego del tratamiento (tiempo 90)
BIOMASA: Biomasa seca final biomasa seca inicial
Comparar los resultados de los tratamientos y analizar.
Ensayo 7.3. Investigar la ecuacin de la reaccin realizada durante
la titulacin, para determinar la cantidad de CO2 en cada muestra.
PRACTICA 4.

*INFLUENCIA DEL OXGENO EN LA RESPIRACIN

(MEJA, 2002)
OBJETIVO
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Comprobar la importancia del oxgeno en la germinacin


MATERIALES
Semillas de rbano
Tres Frascos de boca ancha
Crisoles de porcelana o beakers de 50 ml
Papel filtro
Solucin de KOH al 15%
Solucin de cido proglico al 7%
Agua destilada
Bandas de caucho
Papel de aluminio
Pinzas de laboratorio
Algodn
PROCEDIMIENTO
Utilizando los crisoles y el papel de filtro haga tres germinadores y
coloque en cada uno 10 semillas de rbano. Tomo tres frascos de
boca ancha y proceda en la forma siguiente:
Frasco 1:
Vierta 15 ml de KOH al 25% y 8 ml de cido piroglico al 7%, luego
coloque dentro un crisol (germinador) teniendo el cuidado que no le

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entre solucin y tpelo hermticamente con papel de aluminio doble,


ajustando con unas bandas de caucho.
Frasco 2:
Vierta 15 ml de agua destilada, coloque dentro de otro crisol y tpelo
hermticamente con papel aluminio.
Frasco 3:
Vierta 15 ml de agua destilada, coloque dentro un crisol y tape el
frasco con algodn
Deje dos frascos en el ambiente del laboratorio.

RESULTADOS
Luego de 3 das observe la germinacin de las semillas en cada frasco
Explique la razn de los resultados.
PREGUNTAS
Porqu es importante el oxgeno en la fisiologa vegetal de las planas?
Porqu razn una plntula que crece en un suelo con poco oxgeno
(encharcado o endurecido) no crece bien?.
PRACTICA 5.

CUANTIFICACIN DE LA RESPIRACIN AEROBIA

POR EL MTODO COLORIMTRICO (RVALO, 1993)

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MATERIALES
4 frascos de 500 cc con tapn de caucho
4 vasos de precipitados de 50 ml
1 probeta de 25 ml
1 bureta de 25 ml.
2 pipetas de 10 ml.
Refrigerador
Estufa
Termmetro
Gasa o tul
Cordn de camo o hilo
30 gr. De semillas de la sp. problema
BaCl2 1 M
NaOH 0.2N
HCL 0.2N
Fenolftalena 1% en etanol al 60%
PROCEDIMIENTO
Poner 50 ml de NaOH en cada uno de los frascos de 500 ml, tapar
provisionalmente mientras se empacan 15 gr. de semillas en un
envoltorio sencillo de gasa o de tul, firmemente cerrado con cuerda.
Destapar dos de los frascos e introducir la bolsa de semillas en cada
uno, dejndola suspendida del cordel, el cual debe ir fijo al tapn; los

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otros dos frascos no deben contener semillas. En ningn caso las


semillas pueden estar en contacto con el NaOH.
Dejar un frasco con semillas y otro sin semillas en un ambiente a
temperaturas menores de 25 C, y la otra pareja de frascos en un
lugar con mas de 35 C, durante 36 horas, al final de las cuales se
debe extraer 10 ml del NaOH de cada frasco, pasarlos a un vaso de
precipitados de 50 ml, aadir 5ml de solucin de BaCl 2 para precipitar
el CO2, aadir luego 3 gotas de fenolftalena (deber dar un color
rosa-violceo), y finalmente titular con HCl hasta que desapareza el
color (pH 8.5), anotando la cantidad de cido que se emple.
RESULTADOS
La cantidad de CO2 que queda atrapado en los frascos es medida con
la titulacin de los tratamientos sin semillas, por lo tanto para
conocer cunto CO2 proviene de la respiracin, debe restarse ese
valor (el volumen titulado de HCl) del de los frascos con semillas, en
sus respectivas temperaturas. Al multiplicar por 5 el volumen final
obtenido de HCl, se habr conocido la produccin respiratoria de CO 2.
5. PREGUNTAS
Qu consecuencias tiene la liberacin de CO 2

en el ambiente

edfico?
Justificar el uso del NaOH en varios de estos ensayos.
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Porqu el test de viabilidad de semillas con tetrazolium podra ser


tambin un ensayo experimental para respiracin celular?

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PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL

1. FUNDAMENTOS SOBRE REGULACIN HORMONAL Y EFECTO


DE HERBICIDAS
Las

hormonas

son

sustancias

orgnicas

importantes

para

el

crecimiento, desarrollo, reproduccin y otras funciones de las plantas,


que pueden estimular o inhibir procesos en relacin a diferentes
aspectos de su desarrollo (Meja, 2002). Se caracterizan por:

Algunas son producidas en un tejido y transportados a otros y all

actan o se utilizan en sitio en que son producidos.

Se sintetizan y usan en cantidades mnimas.

No

tienen

funciones

especificadas

como

las

hormonas

de

animales.

Sus efectos pueden variar dependiendo de las concentraciones en

las que estn presentes.

Existen cinco grupos: Auxinas, Giberelinas Citocininas, Etileno, y

Acido abscsico. Sus funciones se resumen en la Tabla 8.


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Tabla 12. Principales actividades en las cuales participan los 5


grandes grupos hormonales. (Basado en Salisbury , 1996; Taiz &
Zeiger, 1998; Meja, 2002).
HORMON

RAZ -TALLO

HOJAS

FLORES Y
FRUTOS

Diferenciacin

Regeneracin

Promueven la

Control de

celular

de tejidos

sntesis del

malezas

heridos

etileno

(efecto

Regeneracin de
tejidos heridos
Elongacin de
Auxinas

OTROS

herbicida)
Evitan la cada

Demoran el

de hojas

marchitamiento
del pednculo

las clulas
Formacin de
Crecimiento de

frutos

races

partenocrpicos

adventicias
(estacas)
Inhibicin del
crecimiento de
la raz
Control de la
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dominancia
apical
Estimula la

Aumento del

Promueve la

Acelera la

divisin

rea foliar

floracin

germinacin

Formacin de

Rompe la

frutos

dormancia de

elongacin
celular
GIberelina

partenocrpicos semillas

Estimula el crecimiento
generalizado de la planta,
aumentando la plasticidad de la
pared celular.
Renovacin del cambium en
plantas leosas

Inhiben la

Induce el

sntesis de

almacenamien

etileno,

to de protenas

retardando la

en semillas

senescencia de
ptalos y

Elongacin del

pecolos

hipoctilo

Incrementan el
tamao de los
botones

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HORMON

RAZ -TALLO

HOJAS

FLORES Y

OTROS

FRUTOS
Produce

Retardan la

Inhiben la

Expansin de

desarrollo de

senescencia

sntesis de

los cotiledones

etileno,

durante la

Implicadas en

retardando la

germinacin

Produce

el

senescencia de

Citocinina

formacin de

mantenimiento frutos

Incremento

yemas en

de clorofilas

general de las

yemas laterales

tejidos callosos.

tasas de
Expansin de

respiracin y

Reduce las tasas hojas de las

del potencial

de crecimiento

yemas

enzimtico

radicular

terminales
A nivel

Acortamiento de

general,

los entrenudos

regulan el ciclo
celular y la
movilizacin
de nutrientes

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Interviene en

Senescencia

procesos de
crecimiento

Induce la

En general

floracin

Promueve la

Absicin

Etileno

expansin
Senescencia

celular lateral.

dormancia de

Maduracin de

Puede romper

yemas y otras

frutos

la dormancia

Puede romper la

estructuras

de semillas

como bulbos o

Abscisin

tubrculos
En altas cantidades, es capaz de generar races y
pelos radicales a partir de tejido de races, tallo u
hojas.
Dormancia de

Estimula el

Control de la

Tolerancia a la

yemas

cierre de

embriognesis

desecacin del

estomas

embrin.

Promueve la

Promueve la

senescencia de

dormancia de

hojas

semillas

Acido
abscico

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Es responsable de todas las regulaciones


fisiolgicas para enfrentar el estrs hdrico:
Acelerar el crecimiento de raz e inhibir el del tallo,
incrementar la conductividad hidrulica y el flujo
de iones en la raz.
Herbicidas
Durante la fase lumnica de la fotosntesis, se obtienen electrones a
partir de la fotlisis de las molculas de agua; posteriormente se
realiza el transporte de los electrones desde donadores de tipo
quinonas y ciitocromos, hasta un aceptor final conocido como nicotn
adenn dinucletido fosfato (NADP). Esta molcula se reduce a la
forma

NADPH +H+, la cual es responsable de reducir a su vez

diferentes compuestos intermedios durante el ciclo de Calvin. Por otra


parte, el ATP generado en forma paralela durante el proceso,
proveer la energa necesaria para la realizacin de dicho ciclo
(Fernndez, 2004).
Dentro de las sustancias conocidas como herbicidas, es posible
encontrar aquellas que al asperjarse sobre la planta interrumpen el
flujo

de

electrones

en

cualquiera

de las

siguientes

formas

(Fernndez, 2004):
1.) Inhibidores del transporte de electrones, como el Diurn.

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2.) Agentes que impiden la formacin de ATP. Como ejemplos estn


el

perfluidone,

dinoseb,

v-fenilcarbamatos,

acylanilidas,

imidazoles y bensymidoles sustituidos, entre otros.


3.) Aceptores de electrones, como Diquay y Paraquat
4.) Molculas

que

roban

los

electrones,

como

el

diclorofenolindolfenol (DCPIP)

2. OBJETIVO PRINCIPAL
Determinar el efecto de sustancias hormonales como las Giberelinas,
el cido indol-butrico y de herbicidas

como el DCPIP (2,6

diclorofenolindolfenol) en el desarrollo de la especie problema.

3. MATERIALES Y REACTIVOS

7 plntulas de la especie

problema
sembradas en matera**

15 semillas imbibidas de la

sp. problema**

Materas de icopor** o cajas

de petri

Balanza analtica

Lmpara

Centrfuga

Tubos de centrfuga

Tubos de ensayo

Buffer fosfato Hielo

Pipetas de 5ml pH 6.5 (fro)

Embudo y gasa**

Sacarosa 0.5M (fro)

Papel aluminio**

Mortero y pistilo

Envase aspersor**

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Vaso de precipitados de 25

ml.

2,6 diclorofenolindolfenol

(0.004 g/100 ml de
H2O)

Solucin de cido giberlico

1000 p.p.m.

Solucin

de

cido

Pasta de lanolina**

Esptula

Vaso de precipitados de 1 lt.

Agitador

Agua destilada

Bistur o cuchilla

Etanol

indol-

actico 50 p.p.m.

4.

PROCEDIMIENTO

Programacin para una sesin de laboratorio


Cuidados previos
Durante el seguimiento de los tratamiento hormonales, es esencial
que las plantas usadas permanezcan en ptimas condiciones de
luz, humedad y temperatura, de tal modo que se garantice que
cualquier cambio importante en la morfologa y desarrollo tenga
relacin con el tratamiento.
Es necesario mantener hbitos de asepsia durante los procesos de
corte y aplicacin de la hormona.
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Dominancia apical y abscisin de hojas


De la poblacin en crecimiento, usar 4 plntulas de la especie
problema; a todas se les deber hacer una marca 3 a 5 cm por
debajo del pice terminal: la primera (planta 1) funcionar como
testigo; la segunda (planta 2) se cortar de 0.3 a 1 cm debajo del
pice caulinar (debajo de la yema de crecimiento, antes de llegar
a las hojas mas jvenes) la tercera (planta 3) se cortar al mismo
nivel del anterior y a la ltima (planta 4) se har corte del tallo a
nivel de los pecolos de las hojas jvenes. Mezclar 5 ml de la
solucin de cido indol-actico con pasta de lanolina y aplicar a
las plantas 3 y 4 en el sitio donde se hizo el corte.

Hacer una

segunda aplicacin en la semana siguiente.


Se deber hacer observaciones dos veces por semana durante
dos a 4 semanas, y el anlisis debe incluir la morfologa de la
parte terminal de la planta, la medida desde la marca hasta el
pice y la apariencia general del tejido.
Calcular adems la concentracin hormonal final usada en el
experimento.
Papel de las Giberelinas en la germinacin.
Usar 30 semillas imbibidas previamente, de los germinadores que
permanezcan en buenas condiciones; debern ser esterilizadas,
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divididas en dos grupos y puestas sobre cajas de Petri o materas


de icopor con papel toalla. El primer grupo de semillas se
humedecer con 20 ml de agua destilada, mientras al segundo
grupo se le aplicar 5 ml de solucin con cido giberlico y 15 de
agua destilada. Si se dispone de suficientes semillas para realizar
uno o dos tratamientos mas, adicionar respectivamente 10 y 15 ml
de solucin de hormona, completando a volumen de 20 ml.
Evaluar las semillas dos veces por semana durante mnimo 3
semanas, y resumir los resultados obtenidos en una tabla. Calcular
adems la disolucin final aplicada de hormona
Hormonas y crecimiento
*En el cultivo
(en base a Romero et. al., 1996)
Usar la parte de la parcela destinada para la aplicacin de
tratamiento. Asperjar una dosis de 1000 p.p.m. de cigo giberlico
AG3- en forma homognea para todas las plntulas y evaluar
resultados del mismo modo que se registra el crecimiento. Hacer
un mximo de dos aplicaciones en 10 semanas.
Si hay disponibilidad de plantas, puede hacerse un tercer ensayo
con cido Indol- actico en solucin de 50 p.p.m
Con la especie problema
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Limpiar cuidadosamente y en corto tiempo 4 plntulas mayores


de 8 cm y hallar la masa fresca antes de sembrar en germinadores
con tierra negra; posteriormente medir la longitud desde las hojas
mas jvenes hasta el pice caulinar y tomar una plantilla de las
hojas jvenes. Aplicar los tratamientos respectivos as: la planta 1
funcionar como control; la planta 2 deber ser asperjada con la
solucin de cido giberlico cada 2 das durante una semana; la
planta 3 ser asperjada 4 veces en la semana y la planta 4 ser
asperjada cada 2 das durante 2 semanas.
Al final del tiempo de seguimiento (3 a 4 semanas desde el primer
da de aplicacin de la hormona), hacer las mediciones finales y
secar las plantas hasta peso constante para hallar la biomasa
seca. Hacer una comparacin de los resultados, evaluando el
efecto de la hormona. Estimar las cantidades aproximadas de
hormona total que se adicion en cada tratamiento.
*El efecto de 2,6 diclorofenolindolfenol en el transporte
de electrones durante la fase luminosa de la fotosntesis.
Moler en el mortero los 5 g de hojas con 30 ml de sacarosa 0.5M y
filtrar con la gasa. Centrifugar el filtrado a 2000 rpm durante 10
minutos, desechar el sobrenadante; y suspender el residuo con 10
ml de buffer fro. Reunir todo el residuo obtenido en un solo tubo y
colocarlo en un vaso de precipitados con hielo, mientras se rotulan
tres tubos y se organizan los siguientes tratamientos:
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TUB

SOLUCIN DE

DCPI DIURON

CLOROPLASTO

1
2
3

S
2 ml (tapado)
2 ml
2 ml

3 ml
3 ml
3 ml

0
0
3 ml

BUFFER

VOLUMEN

DE

FINAL

FOSFATOS
5 ml
5 ml
2 ml

10 ml
10 ml
10 ml

El tubo 1 deber cubrirse con papel aluminio, mientras los tubos 2


y 3 permanecern a la luz. Colocar los tres tubos en un vaso de
precipitado con agua suficiente para cubrirlos (sin que penetre) y
acerque todo a una lmpara encendida durante 8 horas, haciendo
observaciones a intervalos de 2 horas.
Haga una revisin de los estados de color desde el tiempo 0 hasta
la ltima observacin. Se espera un viraje de color verde a
azulado.

5. PREGUNTAS
En cuanto al efecto hormonal, cules son las hormonas que
muestran efectos en el menor tiempo?
Cmo son los cambios fisiolgicos de una planta, desde que se
aplica un herbicida hasta la fase de mortandad?

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Cules son los efectos de aplicar exageradas cantidades de hormona


a una planta en crecimiento?

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FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS


PROGRAMA DE BIOLOGA
PRACTICA DE LABORATORIO
FISIOLOGIA VEGETAL
1. FUNDAMENTOS SOBRE ESTRATEGIAS ADAPTATIVAS
Las plantas necesitan desarrollar de forma diferencial sus clulas,
rganos y estructuras especializadas. Este fenmeno es evidente
ante la necesidad de ocupar el hbitat especfico al cual la especie se
ha adaptado a lo largo de su historia evolutiva, cumplindose as las
leyes ecolgicas que indican que bajo sus propias condiciones
ptimas de vida, dicha especie ser mas exitosa que las dems; pero
si la planta germina bajo un ambiente diferente, otras plantas sern
mas competitivas que ella, y entonces su sobrevivencia ser mas
reducida.
Dentro de los factores que influyen u obligan a las especies a
desarrollar estrategias adaptativas, pueden contarse las siguientes:
Predacin: el desarrollo de sustancias como toxinas, aromticos,
entre

otras,

permite

una

defensa

efectiva

de

los

herbvoros

invertebrados, como orugas y gasterpodos. Otras sustancias de mal

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sabor tambin pueden ayudar a controlar los herbvoros de mayor


tamao.
Luz: Mientras las especies que reciben suficiente cantidades de luz
crecen a ritmos ptimos, las plantas que reciben menos luz se ven
obligadas incluso a suprimir el crecimiento por ciertos perodos.
Humedad: las deficiencias de agua en el suelo, o en contraposicin,
el exceso de ellas, inducen a modificaciones en la estrategia
metablica y en la estructura radicular.
Espacio: todas las especies vegetales compiten por espacio, ya que
existe un rea mnima de recursos que debe defender para su
subsistencia; los mas importantes son los nutrientes del suelo, y el
agua.
Intervencin: mientras algunas plantas soportan y se adecuan a la
intervencin fsica, sea de tipo natural (viento, lluvia directa, paso de
animales) o antropognica (ganadera, cultivos, construccin, etc.)
otras son menos tolerantes, o suelen mostrar algunas modificaciones
en relacin con otros individuos de la misma especie en ecosistemas
conservados.
Existen formas muy variadas en las plantas de adaptarse a los macro
y microambientes en los cuales viven:

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Tipo de enraizamiento; dispersin de races en forma vertical


y horizontal

Tamao, coloracin y forma de las hojas

Hbitos de crecimiento: normal, rastrero, en clonacin,


parasitismo, epifitismo.

Estructura del cuerpo de planta: arrosetado, envolvente, con


almacenamiento de necromasa, sencillo.

Desarrollo de estructuras especializadas: Pelos, glndulas,


agallas, bolsas de aire, zarcillos, lenticelas, espinas, etc.

Tipo fundamental: Hierba, arbusto, rbol

Tipo de ramificacin o arquitectura de la planta: forma y


distribucin de la cobertura foliar

Respuesta a seales fsicas: cierre y apertura de hojas, y


flores, giro de las hojas, movimiento del tallo en relacin a la
luz, gravedad u otros.

Formacin

de

estructuras

de

almacenamiento:

Bulbos,

tubrculos, rganos suculentos, entre otras.

Distribucin

de

recursos:

Patrones

diferenciales

en

la

produccin de flores, frutos y semillas.

2. OBJETIVO GENERAL
Realizar el anlisis de los patrones de adaptacin anatmicos,
morfolgicos y ecolgicos de diferentes especies vegetales en un
ecosistema natural o seminatural, explicndolos y en otros casos
complementndolos con herramientas de la fisiologa vegetal.
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3.

MATERIALES

EN CAMPO:

EN LABORATORIO:

Cilindros de suelo

Microscopio

Cuchillo de campo

Cuchillas

Recipiente trmico con hielo


Metro

Lminas y laminillas
Agua destilada

Pala de jardinera

Papel filtro

Bolsas plsticas

Papel peridico

Papel peridico

Estufa o incubadora

PH-metro

Balanza

Termo-higrmetro

Tionina

Frascos o vasos de precipitados


Agua destilada
Cortarramas
Lupa de 20X
Calculadora
Papel seco de CoCl2
5.

PROCEDIMIENTO

Programacin para una salida de campo y una sesin de laboratorio


Reconocimiento de la heterogeneidad ambiental.

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Se har un recorrido en la zona de estudio de por lo menos 1 Km,


para diferenciar algunos de los ecotipos mas evidentes: Se espera
diferenciar por lo menos 4 ambientes o ecotipos, con ayuda de los
siguientes criterios:

Color, estructura y humedad del suelo. Suelos duros o

blandos, texturas arcillosas, arenosas o balanceadas

Acumulacin de agua superficial. Zonas inundables, secas o

fluctuantes

Estratos predominantes de la vegetacin. Herbceo, arbustivo

o Boscoso

Presencia de hojarasca. Alta o baja

Cantidad de luz directa sobre el suelo. Total, intermedia o

escasa

Grado de intervencin. Alto, bajo o nulo

Pendiente. de 0 -20, de 20 - 45 o mayor de 45

Informacin de las adaptaciones por ambientes


Escoger 5 especies de plantas de cada ambiente (las mas
frecuentes), y caracterizarlas llenando un formato, que puede ser
similar al siguiente cuadro:
Medicin de algunas variables en campo
Se podr medir algunas variables directamente en el sitio de
muestreo de cada ecotipo, como las siguientes:
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Caracterizacin textural y estructural de una muestra de suelo

representativa.

pH de una muestra representativa.

Medicin de los entrenudos de plntulas.

Temperatura y humedad promedio.

Copias de rea foliar de especies arbreas

Comparacin de la transpiracin

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Tabla 13. Registro de los hbitos adaptativos de las especies


en su ambiente.
AMBIENTE

1: PASTIZALES

O PRADERAS CON ALTO GRADO DE

INTERVENCIN
PATRON
TIPO
Tipo de
Vertical
Horizontal
enraizamien
Disperso
to
Otro
Color de las Verde oscuro
Verde claro
hojas
Otro
Hbito de
Normal
Rastrero
crecimiento
En clonacin
Otro
Estrato
Hiebas
Arbustos
vegetal
Arboles
predominan Todos

SP 1

SP 2

n
semillas

de pocas
Pequeas

Dispersin

muchas
Barocoria
Zoocoria
Anemocoria
Otro

SP 5
X

X
manchas
X

X
X

y X

te
Floracin

Homognea
Heterognea
Fructificaci Homognea
Heterognea
n
Diseminaci Grandes

SP 3 SP 4
X
X

X
X
y

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Estructuras

Pelos
Espinas
especializad
Agallas
as
De

X
X

almacenamient
o
Otros

bulbos

ninguna

ningun
a

Trabajo en laboratorio
En laboratorio se deber complementar la informacin de las
diferentes estrategias adaptativas de las plantas, realizando
ensayos ya conocidos por el estudiante como los siguientes:
Corte transversal de hoja de 1 especie representativa de cada
ambiente, para diferenciar los tejidos del mesfilo y de la vaina del
haz.
Cuantificacin y tipificacin de estomas
Valoracin de la capacidad de campo de una muestra de suelo
para cada ambiente.
Abundancia, tipificacin y fisiotipos de semillas en los bancos de
suelo.

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Determinacin de la masa foliar de hojas de tamao similar pero


ambientes distintos.

4.

BIBLIOGRAFA

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BASKIN, C. y BASKIN, J. M. 2001 Seeds: Ecology, Biogeography,


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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA (UNAL). 1997. Prcticas de


laboratorio para el curso de Fisiologa Vegetal.

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