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Dr. Pablo Anaya Rivera Secretario de Salud y Director General de los Servicios de Salud de

Dr. Pablo Anaya Rivera

Secretario de Salud y Director General de los

Servicios de Salud de Veracruz

Dra. Minerva Junco González

Subsecretaria de Salud

Dra. Irasema A. Guerrero Lagunes

Directora de Salud de Pública

Dr. Alejandro Escobar Mesa

Subdirector de Prevención y Control de

Enfermedades

Dra. Rosa Aguilar y Meza

Jefa del Departamento de Salud Reproductiva

Dra. Martha Lilia Flores Guzmán

Coordinadora Estatal del Programa de Salud de la Mujer

LA TINCIÓN DE PAPANICOLAOU

Bases y prácticaJICA

Yoshikuni

Taira

Dr. Pablo Anaya Rivera Secretario de Salud y Director General de los Servicios de Salud de

PRIMERO

  • El diagnóstico citológico de alta confiabilidad se puede lograr con la observación exacta de las muestras elaboradas adecuadamente y con la interpretación correcta.

H

FALTA DE TRANSPARENCIA

Posibles causas

  • 1. Deshidratación inadecuada el alcohol está mezclado con agua

  • 2. Aclaramiento(xilol de baja pureza Material inadecuado para el montaje.no es transparente

  • Se logra obtener una muestra de buena calidad y con uniformidad, realizando el procedimiento de tinción adecuado.

PRIMERO  El diagnóstico citológico de alta confiabilidad se puede lograr con la observación exacta de
PRIMERO  El diagnóstico citológico de alta confiabilidad se puede lograr con la observación exacta de

E

LA TINCIÓN INADECUADA DEL CITOPLASMA. ROSADONARANJA TENUE

Posibles causas

  • 1. Sequedad antes de la fijación.

  • 2. Tiempo Insuficiente para la fijación.

  • 3. Deficiencia del líquido de EA-50.

E LA TINCIÓN INADECUADA DEL CITOPLASMA. ( ROSADO ~ NARANJA TENUE ) Posibles causas 1. Sequedad
PRINCIPIO DE LA TINCIÓN
PRINCIPIO DE LA TINCIÓN

3 REGLAS DE LA TINCIÓNDE PAPANICOLAOU

1) Afinididad química.

Unificacion de los colorantes y el radical funcional quimico en componentes celulares.

Ejemploenlace ionico del quelato de hematin aluminio y radical fosforico del ADN.

2) Concentración.

Densidad del radical funcional quimico en componente celular con el cual une con los colorantes.

3) Permeabilidad.

Relacion del tamaño de las moleculas de los colorantes y densidad de la estructura celular.

EjemploDiferentes tamaños de las moleculas de los colorantes acidos (OG, EosinY, Verde Claro), penetran en diferentes estructuras celulares y logran teñir.

E LA TINCIÓN INADECUADA DEL CITOPLASMA. ( ROSADO ~ NARANJA TENUE ) Posibles causas 1. Sequedad
PRINCIPIO DE LA TINCIÓN DEL NÚCLEO
PRINCIPIO DE LA TINCIÓN DEL NÚCLEO
  • D TINCIÓN INADECUADA DEL

CITOPLASMA (OSCURA).

  • La cromatina es una sustancia nuclear que se

tiñe de obscuro con el colorante básico

(hematoxilina).

  • Cromatina está constituída por finas cadenas de ácido desoxirribonucleico unidas a una proteína base, por lo general histona; contiene la proteína no- histona y poca cantidad de ARN.

PRINCIPIO DE LA TINCIÓN DEL NÚCLEO D TINCIÓN INADECUADA DEL CITOPLASMA (OSCURA).  La cromatina es

Posibles causas

  • 1. Exceso del tiempo de tinción.

  • 2. Falta de fraccionamiento

  • 3. Concentración de los líquidos de tinción.

PRINCIPIO DE LA TINCIÓN DEL NÚCLEO D TINCIÓN INADECUADA DEL CITOPLASMA (OSCURA).  La cromatina es
PRINCIPIO DE LA TINCIÓN DEL NÚCLEO D TINCIÓN INADECUADA DEL CITOPLASMA (OSCURA).  La cromatina es
CAMBIO DEL NÚCLEO POR LA FIJACIÓN  Por la fijación del núcleo, hay cambio en la
CAMBIO DEL NÚCLEO POR LA FIJACIÓN
CAMBIO DEL NÚCLEO POR LA FIJACIÓN
  • Por la fijación del núcleo, hay cambio en la histona del mismo, produciéndose la disolución del radical fosfórico del ADN, el cual tiene carga negativa.

  • Lograr la tinción por la unión del ADN con el radical fosfórico (-) y con hematoxilina().

TINCION DEL NUCLEO
TINCION DEL NUCLEO
  • La hematixilina tiene color transparente o blanco, se oxida por medio de un oxidante quimico para unirse fuertemente con los componentes vitales.

  • Si se agrega aluminio el cual es mordente, forma el quelato y hace enlace ionico con la parte que tiene carga negativa de los componentes vitales, por consiguiente tiñe a esa parte con azul morado a azul.

CAMBIO DEL NÚCLEO POR LA FIJACIÓN  Por la fijación del núcleo, hay cambio en la
CAMBIO DEL NÚCLEO POR LA FIJACIÓN  Por la fijación del núcleo, hay cambio en la

ELPHDE LA HEMATOXILINA Y LA TINCIÓN

LOS RADICALES FUNCIONALES ANIÓNICOS.

  • 1. El radical ácido sulfúrico(-SO4)mucosidad, cartílago, etc.

  • 2. El radical fosfórico(=PO4)núcleo, etc.

  • 3. El radical carboxilo(-COOcitoplasma, etc.

EL 「 PH 」 DE LA HEMATOXILINA Y LA TINCIÓN LOS RADICALES FUNCIONALES ANIÓNICOS. 1. El

Dependiendo del pH de la solucion de hematoxilina, cambia la disolucion del radical funcional del anion.

El radical funcional del anion de la celula, el cual se une con la

hematoxilina, esta mostrado en la diapositiva izquierda.

Hasta

pH 3.0, la hematoxilina se une con los tres radicales funcionales

y tiñe en forma general.

La hematoxilina de Harris de pH 2.7 2.8 se une con el nucleo que contiene el radical fosforico y con el citoplasma que contiene el radical carboxilo( COO), por esa razon, es necesario hacer el fraccionamiento.

  • C TINCIÓN DEFECTOSA DEL CITOPLASMA (TENUE

Posibles causas

  • 1. Líquidos de tinción deficientes.

  • 2. Deterioro del líquido de tinción por dilución.

  • 3. Tiempo insuficiente de tinción.

  • 4. Exceso de fraccionamiento.

  • 5. Deshidratación y aclaramiento inadecuado.

EL 「 PH 」 DE LA HEMATOXILINA Y LA TINCIÓN LOS RADICALES FUNCIONALES ANIÓNICOS. 1. El
EL 「 PH 」 DE LA HEMATOXILINA Y LA TINCIÓN LOS RADICALES FUNCIONALES ANIÓNICOS. 1. El
B LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES FUERTE Y LA ESTRUCTURA DEL NÚCLEO QUEDA AMBIGUA.
B LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES FUERTE Y
LA ESTRUCTURA DEL NÚCLEO QUEDA
AMBIGUA.

CLASE

DE

TINCIÓN

HEMATOXILINA

Y

LA

  • 1. Tinción progresiva la hematoxilina de Mayer contenido de la hematoxilina:1 G/L pH:2,4~2,5

POSIBLES CAUSAS

  • 2. Tinción regresiva la hematoxilina de Harris contenido de la hematoxilina:5 G/L pH:2,7~2,8

  • 1. Uso de alcohol de alta concentración.

  • 2. Exceso de tiempo para la tinción del núcleo.

  • 3. Falta de fraccionamiento.

Después de teñir con la hematoxilina, el núcleo y el citoplasma se tiñen conjuntamente.

B LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES FUERTE Y LA ESTRUCTURA DEL NÚCLEO QUEDA AMBIGUA. CLASE DE
B LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES FUERTE Y LA ESTRUCTURA DEL NÚCLEO QUEDA AMBIGUA. CLASE DE
B LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES FUERTE Y LA ESTRUCTURA DEL NÚCLEO QUEDA AMBIGUA. CLASE DE

Comparando con el numero absoluto del radical anion de la celula, con una mayor cantidad de colorante de hematoxilina, se tiñe

mas fuerte el nucleo, si embargo, al mismo tiempo, tiñe en forma

general.

La utilizacion de la hematoxilina de

Harris

o

Gill

de

alta

concentracion en la citologia , es para uniformizar el grado de tincion del extendido el cual no es uniforme, si no que presenta areas gruesas. Caso particular en la citologia. Si se utiliza el liquido colorante con menos densidad (Mayer), dependiendo del extendido de la laminilla, se tiñe irregularmente.

B LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES FUERTE Y LA ESTRUCTURA DEL NÚCLEO QUEDA AMBIGUA. CLASE DE

PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO

A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE
A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE

Despues

de

la

tincion

con

hematoxilina,

el

nucleo

y

el

citoplasma estan teñidos conjuntamente. Despues de teñir fuerte a toda la celula se sumerge en el acido(H )clohidrico, el

quelato de hematin aluminio que se unio con el citoplasma, se intercambia con el ion hidrogeno y por este resultado, se

decolora la parte del citoplasma. esta teñido conjuntamente.

PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE Despues de la tincion con hematoxilina,

La diapositiva señala que

PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE Despues de la tincion con hematoxilina,

se señala que esta sumergida en el liquido para fraccionar. Se señala el intercambio del quelato de hematin aluminio que se unio con el citoplasma, con el ion hidrogeno. Sin embargo, hay que tener cuidado porque si se deja mucho tiempo el quelato que se ha unido con el nucleo, tambien intercambia con el ion hidrogeno y lo decolora. Dependiendo de la densidad del alcohol de acido clorhidrico, cambia tambien la intensidad del fraccionamiento. El liquido de hematoxilina es acido, por esa razon, si se deja como esta, las partes teñidas cambian a color pardo rojo y ademas tienden a decolorarse.

PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE Despues de la tincion con hematoxilina,
PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE Despues de la tincion con hematoxilina,

POSIBLES CAUSAS

  • 1. Líquido de tinción deficiente.

  • 2. Sequedad antes de la fijación.

  • 3. Tiempo insuficiente para la fijación.

  • 4. Tiempo insuficiente para la tinción del núcleo.

  • 5. Deterioro de la hematoxilina por dilución.

  • 6. Exceso de fraccionamiento con alcohol de ácido clorhídrico.

  • 7. Blanqueado por el cloro del agua de la llave.

  • 8. Mezcla con el líquido de citospray para la fijación.

PRINCIPIO DEL FRACCIONAMIENTO A LA TINCIÓN DEL NÚCLEO ES TENUE Despues de la tincion con hematoxilina,
CAUSAS DE UNA TINCIÓN INADECUADA
CAUSAS DE UNA TINCIÓN INADECUADA
  • El diagnóstico citológico de alta confiabilidad se puede lograr con las muestras elaboradas adecuadamente. Así que todos nosotros, quienes nos dedicamos al examen de citología, siempre debemos tratar de elaborar muestras de buena calidad.

PRINCIPIO DE LA COLORACIÓN (VIRAJE)
PRINCIPIO DE LA COLORACIÓN
(VIRAJE)
  • Disolución acuosa de hematoxilina

  • pH4~5: amarillo

  • Para esto, no hay que ignorar las muestras inadecuadas, sino buscar la causa y mejorarlas.

  • pH6~7: rojomorado

  • pH7~8: azul

La tinción recibe influencia del pH del agua, densidad del cloro y temperatura del

líquido colorante.

DESHIDRATACIÓN

  • Deshidratar bien con alcohol de 96%~alcohol absoluto. Si no se hace bien la deshidratación, las laminillas se vuelven color blanquecido y no se logra obtener una muestra adecuada. Los colorantes tienden a disolverse en el agua o

en alcohol, y ésta es la causa de la decoloración.

CAUSAS DE UNA TINCIÓN INADECUADA  El diagnóstico citológico de alta confiabilidad se puede lograr con
CAUSAS DE UNA TINCIÓN INADECUADA  El diagnóstico citológico de alta confiabilidad se puede lograr con
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3)
OrangeーG
OG‐6
contiene
el
radical
sulfito(SO3)

que

tiende

a

disociarse. Si baja el pH, aumenta la intensidad de la tinción. Cerca de la neutralización, se debilita la intensidad de la tinción.

Con esto puede pensarse que el radical sulfito es bastante

fácil de disociarse y dificulta la unión de la proteína con el colorante.

Principio de la tinción del citoplasma.

Los colorantes OG6 (orange G) y EA 50 (eoginY, verde palido) son colorantes acidos que tienen el radical funcional acido, y carga negativa. Los componentes principales del citoplasma son azucar, lipidos y proteinas antoferas que contiene RNA y tiene la caracteristica de tener carga negativa y positiva. Sin embargo, dependiendo de las condiciones de la tincion(pH), cambian estas cargas. Cuando el pH es neutro, muchas veces tiene carga negativa y cada vez que tiende a la acidez, el radical amino se ioniza y toma carga positiva y por esa razon se mejora la tincion.

OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la

ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN COMPLETO) MONTAJE

OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
OrangeーG OG‐6 contiene el radical sulfito(SO3) que tiende a disociarse. Si baja el pH, aumenta la
ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN COMPLETO) ・MONTAJE
ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN
COMPLETO) ・MONTAJE
  • Realizar bien la desalcoholización con xilol.

  • En la última etapa de la elaboración de la laminilla, sino se hace bien la deshidratación y desalcoholización, después del montaje, los colorantes, los cuales están en las células, se disuelven en el material para montar.

  • Es importante utilizar alcohol y xilol para evitar la disolución.

ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN COMPLETO) ・MONTAJE  Realizar bien la desalcoholización con xilol.  En la última etapa de
ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN COMPLETO) ・MONTAJE  Realizar bien la desalcoholización con xilol.  En la última etapa de
ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN COMPLETO) ・MONTAJE  Realizar bien la desalcoholización con xilol.  En la última etapa de
Eosin Y
Eosin Y

contiene el radical carboxilo(COOH), el cual tiene tendencia a

no disociarse; con pH 5

6 se tiñe más fuerte y cada vez

que baja el pH, tiende a bajar la intensidad de la tinción.

Si

baja

el

pH,

se

reduce

la

ionización

del radical

carboxilo(COOH) de eosin Y y es frenado, por esa razón no se puede combinar con las proteínas.

Light green SF yellowish
Light green SF yellowish
  • Es un colorante antófero que tiene el radical funcional ácido el radical sulfitoy el radical funcional básicoel radical amino), sin embargo, contiene más radical funcional ácido, por lo que se califica como colorante ácido.

  • Como contiene el radical sulfito(SO 3) el cual tiende a disociarse, con pH2 tiene la intensidad más fuerte de tinción y cerca del pH neutro, la intensidad de la tinción se debilita. Igual que en el OG 6.

ACLARAMIENTO(PENETRACIÓN COMPLETO) ・MONTAJE  Realizar bien la desalcoholización con xilol.  En la última etapa de
Ahora vamos a ver desde el punto de vista de la estructura del citoplasma. En la
Ahora vamos a ver desde el punto de vista de la estructura del citoplasma. En la

Ahora vamos a ver desde el punto de vista de la estructura del citoplasma. En la tincion del citoplasma se tiene mucha relacion del tamaño de las moleculas de los colorantes con la densidad de la estructura celular. El tamaño comparativo de las moleculas de los colorantes es Orange G es menor que Eosina Y es menor que Light Green yellow

En la imagen de la izquierda señala la estructura de la celula no teñida. En la imagen de la derecha señala la estructura de la celula teñida con diferentes colorantes. (con imaginacion)

DESHIDRATACIÓN
DESHIDRATACIÓN
  • En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.

  • En la última caja, se debe usar alcohol limpio. Para eliminar el agua, si es posible, agregar un desecante como el Molecular Sheave.

Aclaramiento(Penetración completa)
Aclaramiento(Penetración completa)
Ahora vamos a ver desde el punto de vista de la estructura del citoplasma. En la

En cada caja se sumergen diez veces despacio, deben escurrirse lo más posible. El líquido para el

aclaramiento, se utiliza el que no contenga (agregar un desecante como el Molecular Sheave).

agua

Ahora vamos a ver desde el punto de vista de la estructura del citoplasma. En la
DESHIDRATACIÓN
DESHIDRATACIÓN
  • En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.

 En la última caja, se debe usar alcohol limpio. EA-50  3 minutos
En la última caja, se debe usar alcohol limpio.
EA-50
3 minutos
  • La eosin Y y Verde claro SF amarillo, los cuales estan contenidos en EA-50, son colorantes ácidos y tienen carga negativa.

  • Por eso se unen con las proteínas que tienen características de carga positiva.

DESHIDRATACIÓN  En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.
DESHIDRATACIÓN  En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.
DESHIDRATACIÓN  En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.

En

la

imagen de la izquierda

señala

una celula que esta

sumergida en OG 6,parece que el colorante tiñe a toda la celula,

sin embargo, por fraccionamiento tincion selectiva.

con

el alcohol,

se

hece

la

En la imagen de la derecha señala la tincion de EA 50, y se muestra como tiñe cada colorante. Tambien señala hasta el ultimo proceso de deshidratacion y fraccionamiento con alcohol.

De esta manera se lleva a cabo el proceso de la hermosa tincion del Papanicolaou.

DESHIDRATACIÓN  En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.
DESHIDRATACIÓN  En cada caja se sumergen diez veces despacio y deben escurrirse lo más posible.

PRÁCTICA

DE LA

TINCIÓN

PRÁCTICA DE LA TINCIÓN DESHIDRATACIÓN  Después de hacer bien la coloración, realizar la deshidratación con
DESHIDRATACIÓN
DESHIDRATACIÓN
 Después de hacer bien la coloración, realizar la deshidratación con alcohol.  En cada caja
Después de hacer bien la coloración, realizar la deshidratación
con alcohol.
En cada caja se sumergen diez veces despacio y se deben
escurrir lo más posible.
En la última caja , se debe usar alcohol limpio.
OG-6
  • 2~3 minutos

  • El OG 6 contiene el radical sulfito que tiende a disociarse, si baja el pH, aumenta la intensidad de la tinción. debilita la intensidad de tinción.

Cerca de la neutralización, se

  • Las moléculas de OG-6 son pequeñas, tiñen a los citoplasmas queratinizados de color amarillo a naranja

PRÁCTICA DE LA TINCIÓN DESHIDRATACIÓN  Después de hacer bien la coloración, realizar la deshidratación con
PRÁCTICA DE LA TINCIÓN DESHIDRATACIÓN  Después de hacer bien la coloración, realizar la deshidratación con

Para obtener el color óptimo, se deberá hacer el paso de la coloración viendo posteriormente al microscopio para evitar una posible equivocación del resultado por la diferencia de la tinción (tomando como pauta los leucocitos polimorfonucleares.)

Para obtener el color óptimo, se deberá hacer el paso de la coloración viendo posteriormente al

COLORACIÓN

Para obtener el color óptimo, se deberá hacer el paso de la coloración viendo posteriormente al
Para obtener el color óptimo, se deberá hacer el paso de la coloración viendo posteriormente al

PARA OBTENER UNA BUENA TINCIÓN

  • 1. Después del extendido, sumergir inmediatamente(en menos de 5 segundosen alcohol de 96%(durante más de 15minutos

  • 2. Evitar la sequedad en lo absoluto. Si hay sequedad no se observa claramente la estructura del núcleo.

  • 3. Cambiar los líquidos de tinción deficientes.

  • 4. Obedecer exactamente el procedimiento de la tinción. Fraccionamiento coloraciónviraje deshidratación aclaramiento

EL PROCESO DE LA TINCIÓN.

Para obtener el color óptimo, se deberá hacer el paso de la coloración viendo posteriormente al
Para obtener el color óptimo, se deberá hacer el paso de la coloración viendo posteriormente al

TINCIÓN DEL NÚCLEO CON HEMATOXILINA

Fraccionamiento
Fraccionamiento
TINCIÓN DEL NÚCLEO CON HEMATOXILINA Fraccionamiento LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN) Se lava con agua para eliminar de
TINCIÓN DEL NÚCLEO CON HEMATOXILINA Fraccionamiento LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN) Se lava con agua para eliminar de
LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN) Se lava con agua para eliminar de la muestra el líquido de
LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN)
Se lava
con agua para eliminar de la muestra
el
líquido de

hematoxilina sobrante.

LAVADO CON AGUA Disolución acuosa de la hematoxilina pH4~5:amarillo pH6~7:rojo~morado Por elevación del pH con lavado
LAVADO CON AGUA
Disolución acuosa de la hematoxilina
pH4~5:amarillo
pH6~7:rojo~morado
Por elevación del pH con lavado de agua o neutralización, el núcleo
cambia a color azul.

COLORACIÓN VIRAJE

Después del fraccionamiento y lavado con agua, vira con el agua de la llave, si contiene nivel de cloro alto, es mejor usar agua tibia o un alcali débil( solución de carbonato de litio, solución de amonia)

Se fracciona con alcohol de ácido clorhídrico a 0.5para eliminar la hematoxilina sobrante que ha teñdo conjuntamente tanto el núcleo como el citoplasma.

Se debe tener cuidado porque dependiendo de la densidad,

tiempo

de

sumersión

temperatura,

cambia

el

grado

de

TINCIÓN DEL NÚCLEO CON HEMATOXILINA Fraccionamiento LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN) Se lava con agua para eliminar de

y

fraccionamiento.

Después de fraccionar en alcohol de ácido clohídrico, si se deja tal como está, las partes teñidas cambian a color pardo-rojo y además tienden a decolorarse.

TINCIÓN DEL NÚCLEO CON HEMATOXILINA Fraccionamiento LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN) Se lava con agua para eliminar de
TINCIÓN DEL NÚCLEO CON HEMATOXILINA Fraccionamiento LAVADO CON AGUA(DECOLORACIÓN) Se lava con agua para eliminar de