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Laboratorio Clnico
UNIDAD DIDCTICA
FTAM
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MICOLOGA
II.
III.
IV.
Introduccin
a. Patgenos oportunistas
b. Dermatofitos
c. Mecanismos de patogenicidad
d. Clasificacin de las micosis segn su localizacin
Morfologa y estructura de los hongos
a. Estructura vegetativa
b. Crecimiento
Levaduras
Hongos filamentosos
Hongos dimrficos
Clasificacin de los hongos
a. Reproduccin asexual
Esporangiosporas
Artrosporas
Blastosporas
Clamidosporas
b. Reproduccin sexual
Zigosporas
Ascosporas
Basidiosporas
c. Clasificacin//Reproduccin asexual//Morfologa microscpica
Zigomicetos
Ascomicetos
Basidiomicetos
Deuteromicetos
Hongos oportunistas causantes de micosis profundas
a. Candida
Morfologa e identificacin
Patologa
Epidemiologa y control
b. Cryptococcus
Morfologa e identificacin
Patologa
Epidemiologa y control
c. Otras levaduras
d. Aspergillus
Morfologa e identificacin
Patologa
Epidemiologa y control
e. Zigomicetos
Morfologa e identificacin
V.
VI.
VII.
FTAM
Patologa
f. Otros hongos filamentosos oportunistas
Hongos productores de micosis cutneas y superficiales
a. Dermatofitos
Morfologa e identificacin
Patologa
Gneros
Microsporum
Trichophyton
Epidermophyton
Epidemiologa y control
b. Trichosporon, Malasezzia, Exophiala y Piedraia
Procesamiento de las muestras para el diagnstico de las principales
micosis
a. Toma de muestras
b. Exmen microscpico
c. Cultivo
d. Identificacin de levaduras
Pruebas morfolgicas
Pruebas fisiolgicas
Auxograma
Zimograma
Aspecto macroscpico de las colonias
Morfologa microscpica de los cultivos
e. Identificacin de dermatofitos
Aspecto macroscpico de las colonias
Morfologa microscpica de los cultivos
Microcultivos o cultivos en portaobjetos
f. Identificacin de Aspergillus
Aspecto macroscpico de las colonias
Morfologa microscpica de los cultivos
Tratamiento de las micosis
FTAM
I.- INTRODUCCIN
La micologa es el estudio de los hongos. Existen muchas especies de
hongos y la mayor parte son benficos para la humanidad. Se encuentran
en la naturaleza y son imprescindibles para descomponer y reciclar la
materia orgnica. Algunos aumentan nuestra calidad de vida pues
contribuyen a la produccin de alimentos y bebidas, otros han servido como
medicamentos. Ejercen su mayor impacto econmico como fitopatgenos
(enfermedades causadas por hongos en las plantas). Solo unas pocas
especies participan en enfermedades humanas y originan las llamadas
micosis.
Los hongos causantes de procesos patolgicos se pueden dividir en tres
grupos:
Levaduras,
aspergillus
(patgenos
oportunistas)
y
dermatofitos.
La mayora de los hongos de inters clnico se comportan como patgenos
oportunistas y la infeccin se origina por una alteracin del equilibrio normal
entre su presencia y el husped. Los mecanismos de patogenicidad por
parte del hongo son reducidos: variaciones fenotpicas, produccin de
enzimas proteolticas, produccin de toxinas y poder de adherencia; por
parte de husped, los factores que favorecen la adquisicin de micosis son
diversos: nutricin inapropiada, falta de higiene, enfermedades graves,
contacto con animales y personas enfermas, etc.
Durante la infeccin, la mayor parte de los pacientes desarrollan una
respuesta inmunitaria significativa a los antgenos del hongo.
Hasta hace pocos aos las micosis constituan una parte de la patologa
infecciosa a la que se daba poca importancia, pero en el ltimo decenio se
ha incrementado la incidencia de infecciones micticas y han aparecido
nuevos procesos que han impulsado a un estudio ms profundo. La mayor
parte de las micosis son difciles de tratar.
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Cutneas
Subcutneas
Enfermedad
Microorganismo causal
Pitiriasis versicolor
Piedra
Malasezia furfur
Trichosporum beigeii (blanca)
Piedraia hortai (negra)
Tia
del
cuero Dermatofitos
(Microsporum,
cabelludo, piel sin vello Trichophyton, Epidermophyton).
y uas.
Candidiasis de la piel, Candida albicans y especies relacionadas
membranas, mucosa y (levaduras).
uas.
Cromoblastomicosis.
Phialophora
verrucosa,
Fonsecea
pedrosoi y otros.
Micetoma.
Pseudalleschia
boydii,
Madurella
mycetomatis y otros.
Rinosporidiosis.
Rhinosporidium seeberi.
Esporotricosis.
Sporothrix schenckii.
Infecciones por hongos
patgenos:
Histoplasmosis.
Blastomicosis.
Paracoccidiodomicosis.
Coccidiodomicosis.
Sistmicas
Histoplasma capsulatum.
Blastomyces dermatitidis.
Paracoccidiodes brasiliensis.
Coccidiodes immitis.
Criptococosis.
Aspergilosis.
Mucormicosis.
Candidiasis sistmica.
Cryptococcus neoformans.
Aspergillus fumigatus.
Mucor y otros zigomicetos.
Candida albicans.
FTAM
FTAM
FTAM
FTAM
Reproduccin
asexual
Zigomicetos
Zigosporas
Rhizopus
Esporangios
poras dentro
de
esporangios
Ascomicetos
Ascosporas
en el
interior
de ascas
Estado
teleomorfo
de la gran
mayora de
hongos Ej.
Aspergillus
externas o
Basidiosporas en la
extremidad
de basidios
Estado
teleomorfo
de C. neo
formans
Esporas
externas o
conidias
Micelio con
tabiques
o
son
levaduras
Hongos
imperfectos
verdaderos
y estado
anamorfo de
todos los
hongos
Esporas
externas o
conidias
Micelio con
tabiques o
son
levaduras
Clase
Basidiomicetos
Deuteromicetos
Reproduccin
sexual
Desconocida
Esporas
conidias
Morfologa
microscpica
Micelio sin
tabiques
o septos
Micelio con
tabiques o
son
levaduras
IV.-
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PROFUNDAS.
Son el grupo de hongos ms importante en la actualidad tanto por la
gravedad como por la frecuencia de las infecciones que producen.
CANDIDA.
Las especies del gnero Candida son miembros de la flora normal de
la piel, las mucosas y del aparato gastrointestinal, colonizan las
superficies mucosas durante o poco despus del nacimiento, el riesgo
de infeccin endgena siempre est presente.
La especie ms virulenta y de mayor inters en patologa humana es
Candida albicans, pero tambin otras especies (C. tropicalis, C.
parapsilosis, C. glabrata, C. krusei) pueden producir infecciones
oportunistas.
Morfologa e Identificacin.
Las especies de Candida crecen como levaduras ovales en gemacin.
Tambin forman seudohifas. La C. albicans es dimrfica.
Sobre medio de agar, en las primeras 24 horas a 37C o temperatura
ambiente, las especies de Candida producen colonias blandas de color
cremoso con olor a levadura.
Dos pruebas morfolgicas diferencian la Candida albicans de otras
Candidas:
o La incubacin en suero durante 90 minutos a 37C forma
verdaderas hifas en la C. albicans (prueba de filamentacin)
o En medios nutricios insuficientes C. albicans produce
clamidosporas grandes y esfricas.
Se emplean las pruebas de fermentacin de carbohidratos para
confirmar la identidad y asignar especie a las Candidas ms comunes.
Las muestras para las pruebas diagnsticas de laboratorio incluyen
frotis y raspado de lesiones superficiales, sangre, lquido
cefalorraqudeo, biopsias de tejidos, orina, exudados y materiales de
catteres.
El examen microscpico se puede realizar mediante frotis teidos con
gram si las muestras son esputos, orinas, exudados, lquido
cefalorraqudeo, etc. La piel o el raspado de uas se examinan en una
gota de hidrxido de potasio al 10%.
Patologa.
La candidiasis superficial se establece a consecuencia de un
incremento en la poblacin local de Candida y del dao a la piel, o al
epitelio, que permite la invasin por la levadura y las seudohifas. La
candidiasis sistmica se presenta cuando la cndida penetra al
torrente sanguneo y las defensas del husped son inadecuadas para
contener su crecimiento y diseminacin. Desde la circulacin puede
infectar los riones, fijarse a las prtesis cardiacas y producir
infeccin candidisica en cualquier parte.
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Epidemiologa y control.
La medida preventiva ms importante es evitar alteraciones del
balance normal entre la flora microbiana y las defensas intactas del
husped. La candidiasis no es transmisible.
CRYPTOCOCCUS.
El Cryptococcus neoformans es una levadura caracterizada por una
cpsula polisacrida gruesa.
Se encuentra en todo el mundo y es muy abundante en las heces
secas de palomas.
Generalmente se relaciona con inmunodeficiencia, SIDA o un proceso
maligno, pero tambin puede aparecer en huspedes aparentemente
normales.
Morfologa e Identificacin.
En estado teleomorfo C. neoformans pertenece a los basidiomicetes.
Existen varias especies no patgenas de Cryptococcus, el C.
neoformans difiere de estas por su capacidad para crecer a 37C y
por la produccin de fenoloxidasa. En medio de Saboraud, a los 5-7
das las colonias adquieren un tono amarillo marrn, debido a la
produccin de este pigmento.
Es sensible a la actidiona.
Hidroliza la urea, no fermenta azcares, y asimila el inositol, entre
otros carbohidratos.
La cpsula se pone de manifiesto en el examen microscpico en
fresco mezclando una suspensin de clulas con una gota de tinta
china.
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Patologa.
Epidemiologa y control.
Las excretas de las aves son el reservorio de dicha infeccin.
Adems de los pacientes con SIDA o con enfermedades malignas, los
sometidos a tratamiento con corticosteroides son muy susceptibles a
la criptococosis.
OTRAS LEVADURAS.
Existen otras muchas levaduras consideradas menos virulentas que
tambin pueden causar infeccin diseminada en los enfermos
inmunocomprometidos.
Se aslan con menos frecuencia de las muestras clnicas y pertenecen
a los gneros Rhodotorula, Saccharomyces, Hansenula, etc.
ASPERGILLUS.
Estn ampliamente distribuidos en la naturaleza y se diseminan por
va area. El aire contiene esporas en casi todo el mundo, aunque
existen diferencias cuantitativas y cualitativas segn el clima, la
regin y la poca del ao.
Se distinguen cuatro especies patgenas: A. niger, A. flavus, A.
fumigatus y A. nidulans. El A. fumigatus es el patgeno humano ms
comn.
Los procesos infecciosos que originan son raramente contagiosos
debido sobre todo a la estimulacin antignica. Afectan a individuos
inicialmente sanos o a inmunodeprimidos. El desarrollo de la infeccin
est condicionado por diversos factores: ingestin de alimentos
contaminados con micotoxinas, contacto frecuente y abundante con
esporas (campesinos, cosechadores, etc.), colonizacin de cavidades,
invasin de tejidos e inoculacin traumtica de esporas. La va
respiratoria constituye la principal va de penetracin.
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Morfologa e Identificacin.
Los Aspergillus son hongos filamentosos, crecen con rapidez,
producen hifas areas que poseen estructuras conidiales
caractersticas: conidiforos alargados con vesculas terminales. Las
conidias varan segn la especie, en forma, tamao y color.
Las especies del gnero Aspergillus se identifican por el aspecto
macroscpico de sus colonias y por su morfologa microscpica.
Las muestras para las pruebas diagnsticas de laboratorio son los
esputos, otras muestras del aparato respiratorio o el tejido de biopsia
de pulmn.
En el examen directo de esputo con KOH, o en los cortes histolgicos,
las hifas de las especies de Aspergillus son hialinas, septadas, de
anchura uniforme y con ramificaciones dicotomizadas.
Patologa.
Existen tres tipos de aspergilosis pulmonar:
o Aspergilosis pulmonar alrgica: produce asma, eosinofilia y
elevacin del ttulo de IgE.
o Aspergiloma: el hongo crece en una cavidad preexistente
(cavidad tuberculosa, seno paranasal) formando una bola
fngica. No hay invasin pulmonar.
o Aspergilosis invasiva: el hongo se extiende invadiendo el
pulmn y dando lugar a neumona cicatrizante, hemoptisis y
diseminacin secundaria a otros rganos. Ocurre sobre todo en
individuos inmunocomprometidos.
Epidemiologa y control.
Las personas con riesgo de enfermedad alrgica o de aspergilosis
invasora deben evitar la exposicin a los conidios de Aspergillus.
En la mayor parte de las unidades de trasplante de mdula sea se
emplean sistemas de aire acondicionado filtrado, vigilancia de la
contaminacin atmosfrica en la habitacin de los pacientes,
restriccin de visitas y diferentes medidas para aislar a los pacientes
y reducir el riesgo de exposicin a los Aspergillus y a otros hongos.
ZIGOMICETOS.
Los principales patgenos de este grupo son las especies de los
gneros Rhizopus, Absidia y Mucor, aunque cada vez se describen
con mayor frecuencia infecciones producidas por otros zigomicetos de
los gneros Cunninghamella, etc.
Las micosis causadas por estos hongos se conocen como
mucormicosis.
Son hongos filamentosos saprofitos termotolerantes.
Morfologa e Identificacin.
Poseen grandes hifas, sin tabiques, muy caractersticas; con esporas
asexuadas en el interior de vesculas especiales-esporangios.
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Patologa.
V.-
SUPERFICIALES.
DERMATOFITOS.
Son hongos filamentosos que slo infectan las porciones
queratinizadas de la piel (estrato crneo, uas y pelo) y que
pertenecen a los gneros Trichophyton (cualquier localizacin),
Microsporum (rara vez en pliegues y uas) y Epidermophyton (pies,
ingles y axilas).
Las dermatofitosis son las micosis ms frecuentes en el mundo,
pueden ser persistentes y problemticas pero no son debilitantes ni
ponen en riesgo la vida.
Morfologa e Identificacin.
Todos los dermatofitos poseen una morfologa similar en su estado
parasitario. Cuando se observan con KOH los pelos, uas o escamas
de la piel infectada, aparecen como filamentos ramificados y
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Patologa.
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Localizacin
de las
lesiones
Tinea corporis
(circinada)
Piel lisa
lampia
Tinea pedis
(pie de atleta)
Espacios
interdigitales
de los pies
Tinea cruris
Ingle
Tinea capitis
Cuero
cabelludo,cejas
y pestaas.
Tinea barbae
Vello
de
barba.
Tinea
unguium.
(onicomicosis)
Ua
Aspecto clnico
la
Hongos causantes ms
frecuentes
Trichophyton rubrum,
Epidermophyton floccosum.
Trichophyton
rubrum,
T.mentagrophytes,
Epidermophyton floccosum.
T.rubrum,T.mentagrophytes,
E. floccosum.
T.mentagrophytes,
M.canis.
Uas
distalmente
engrosadas
o
quebradizas;alteraciones
del color.Habitualmente
acompaada de tinea
pedis.
T.rubrom,T.mentagrophytes
E.floccosum.
T. mentagrophytes.
Epidemiologa y control.
La prevalencia de las dermatofitosis en los distintos pases varia, no
slo con la distribucin geogrfica y ecolgica de las especies, sino
tambin con el clima y con el estado inmunolgico, nutricin y
condiciones higinicas de la poblacin.
Las infecciones se inician en la piel despus de un traumatismo y por
contacto.
La susceptibilidad del husped puede ser incrementada por la
humedad, el calor, la composicin de la grasa y de la piel, la edad, la
exposicin intensa y la predisposicin gentica.
La fuente de infeccin es el suelo o un animal infectado en el caso de
los dermatofitos gefilos y zofilos. Las especies antropfilas se
pueden transmitir por contacto directo o a travs de fmites como
toallas o ropa contaminada, compartir duchas, piscinas, etc.
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VI.-
PROCESAMIENTO
DE
LAS
MUESTRAS
PARA
EL
TOMA DE MUESTRAS.
La metodologa para la toma de muestras es diferente segn la localizacin
de la lesin:
Las escamas se recogen despus de pasar un algodn empapado en
alcohol al 70% sobre el rea de la lesin, para eliminar detritus y
bacterias contaminantes.
o Si la lesin es seca se recogen sobre una placa de Petri o un
frasco de boca ancha, mediante raspado suave con un
portaobjetos, bistur o esptula, procurando desprender las del
borde de la lesin. Tambin se puede efectuar la toma
mediante almohadillas de lana, terciopelo o cinta adhesiva
transparente.
o Si la lesin es hmeda se suele utilizar un escobilln para la
recogida.
Los pelos se arrancan con pinzas o se cortan con tijeras, eligiendo los
ms cortos, ms frgiles o los deteriorados.
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EXAMEN MICROSCPICO.
La identificacin en una muestra clnica comienza por el examen
microscpico directo. Este permite poner en evidencia las estructuras
fngicas: clulas levaduriformes, elementos del micelio y esporas. Un
estudio ms detallado, a partir del cultivo, establecer la especie; por lo
tanto la morfologa microscpica ser la primera observacin a tener en
cuenta para la diferenciacin de los hongos levaduriformes y filamentosos.
En los pelos se diferencia la infeccin por esporas ectotrix, que
forman una vaina alrededor del pelo o masas irregulares sobre su
superficie, y la infeccin endotrix, en la que aparece el pelo
engrosado y lleno de esporas.
La observacin en fresco de pelos, escamas y uas se facilita
aadiendo aclarantes: hidrxido potsico glicerinado al 20%, azul de
lactofenol y otros.
La adicin de tinta china o nigrosina posibilita la observacin de la
cpsula de Cryptococcus en muestras como el lquido cefalorraqudeo.
La tincin de gram es til para la identificacin de levaduras gram
positivas. Otras tinciones como la de hematoxilina-eosina, Giemsa,
azul de metileno, metanamina de plata o la de PAS (perydico
Schiff), son tambin apropiadas para confirmar la morfologa
levaduriforme en biopsias tisulares. Si se usa la tincin de blanco de
calcoflor, los hongos se observarn de color verde fluorescente en el
microscopio de fluorescencia.
CULTIVO.
La mayora de los hongos, a excepcin de Malasezia furfur (se cultiva en
agar glucosa peptona con lanolina o cido oleico), se desarrollan bien en los
medios comunes, a temperaturas de 25-35C, y algunos productores de
micosis profundas se desarrollan tambin a 35-37C. Los medios deben de
contener los suficientes nutrientes para asegurar su desarrollo: fuentes de
carbono, nitrgeno, vitaminas y oligoelementos. El pH debe ser ligeramente
cido para inhibir el crecimiento de otros microorganismos. El medio ms
utilizado en microbiologa es el Saboraud a pH 5,6.
Es aconsejable la adicin a los medios de antibiticos, tales como el
cloranfenicol y la gentamicina, para evitar la proliferacin de
bacterias; y actidiona para impedir la contaminacin por hongos
ambientales.
La inoculacin se realiza raspando las escamas y uas directamente
sobre el medio de cultivo, o bien depositando la muestra sobre la
superficie del medio e introduciendo los fragmentos con la ayuda de
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IDENTIFICACIN DE LEVADURAS.
Existen numerosas pruebas para la identificacin de levaduras, la eleccin
de la combinacin adecuada depende de las caractersticas de cada
laboratorio, bastara con realizar unas 15-20 pruebas para llegar a una
buena identificacin.
Las pruebas de identificacin pueden agruparse en dos categoras:
1. Pruebas morfolgicas:
a. Aspecto de las colonias.
b. Observacin microscpica de los cultivos.
c. Presencia de blastosporas.
2. Pruebas fisiolgicas:
a. Temperatura mxima de crecimiento.
b. Crecimiento en presencia de actidiona.
c. Capacidad de utilizacin de diversos hidratos de carbono como
fuente nica de carbono en condiciones de aerobiosis
(auxograma).
d. Capacidad
de
fermentacin
de
diferentes
azcares
(zimograma)
e. Actividad ureasa
f. Capacidad de crecimiento con altas concentraciones de
glucosa.
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Especie
Candida albicans
Candida krusei
Candida parapsilosis
Candida pseudotropicalis
Candida tropicalis
Torulopsis glabrata
Cryptococcus spp
Rhodotorula spp
Trichosporon spp
Caractersticas morfolgicas
Colonias blancas ,lisas y brillantes, con
variantes secas,y de aspecto ms o menos
creo.
Colonias secas,planas y muy extendidas
sobre la superficie.
Colonias brillantes,de cremosas a
amarillentas,de aspecto hmedo y liso,o
plegadas.
Colonias blancas y brillantes o bien de
aspecto mate y con pliegues.
Colonias
mates,secas,blancas,cremosas,lisas o
plegadas.
Tamao variable,pequeas o grandes y
aplanadas,cremosas,lisas y brillantes.
Colonias ms o menos mucoides,secas y
lisas brillantes,mates con el pase del
tiempo.
Colonias rosas,anaranjadas o
asalmonadas,mucoides y lisas,o secas y
plegadas.
Colonias de blanco a cremoso,lisas y
mucosas,o bien de aspecto seco muy
plegadas.
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IDENTIFICACIN DE DERMATOFITOS.
Todos los dermatofitos son resistentes a la actidiona y se desarrollan bien a
25-30C. La diferencia primaria entre las especies es esencialmente
morfolgica, por el tipo de colonia, la velocidad de crecimiento y las
caractersticas microscpicas de las macroconidias.
Trichophyton rubrum
Trichophyton tonsurans
Trichophyton verrucosum
Trichophyton violaceum
Microsporum audouinii
Microsporum canis
Microsporum gypseum
Epidermophyton floccosum
Caractersticas morfolgicas
Crecimiento rpido.Colonia blanca
algodonosa,pulverulenta al envejecer,a
veces con botn central y estras
radiadas.envs amarillo.
Crecimiento lento.Colonia plana o
elevada,superficie blanca que pasa a crema
o rosada,vellosay a veces
pulverulenta.Envs de rojo a prpura.
Desarrollo lento.Colonia crema o
canela.Envs amarillento o rojizo.
Crecimiento muy lento.Colonia pequea al
principio,lisa y de consistencia dura,color
blanco grisceo o amarillo tostado, y de
vieja pulverulenta y blanquecina.
Crecimiento muy lento.Colonia de superficie
lisa,elevada y verrucosa,al principio crema y
ms tarde prpura intenso.
Crecimiento lento.Colonia plana con hifas
areas cortas,superficie gris, crema o
tostada.Envs rosa salmn o marrn rojizo.
Crecimiento rpido.Colonia blanca
pulverulenta o algodonosa,con un botn
central y anillos concntricos,micelio
areo.Envs amarillo claro.
Crecimiento rpido.Colonia plana con borde
dentado y superficie pulverulenta.Envs
amarillo.
Crecimiento lento.Colonia de superficie
algodonosa,color tostado que se vuelve
pulverulenta.Envs amarillo
22
la
en
las
En
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IDENTIFICACIN DE ASPERGILLUS.
Debido a que los aspergillus son contaminantes frecuentes de los cultivos
en el laboratorio y a que sus esporas pueden colonizar las vas respiratorias
altas en condiciones normales, los cultivos slo tienen valor si son
reiteradamente positivos.
Los Aspergillus se inhiben en los medios que contienen actidiona, lo
que los diferencia de los dermatofitos.
Caractersticas morfolgicas
Color marrn oscuro a negro y reverso
incoloro o amarillo plido.
Color verde a azulado o grs,a veces
blanco;reverso de incoloro a amarillo o rojo
oscuro.
Color de amarillento a verde y reverso de
incoloro a amarillo o marrn.
Color de verde a castao rojizo y reverso
rojo oscuro.
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