UNIVERSIDAD PRIVADA FRANKLIN

ROOSEVELT
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

TEMA

REACCIONES DE CARACTERIZACION DE LAS

CTEDRA:

QUIMICA ORGANICA II

CATEDRTICO

Q.F. SALDER FLORES

INTEGRANTES
APELLIDOS Y NOMBRES
1

CICL

LILIAN CASTRO TRASLAVIA

INDICE
HUANCAYO PER
2016

INTRODUCCIN

1. LAS PROTEINAS.Las protenas constituyen uno de

los grupos de molculas de gran
trascendencia en los seres vivos.
Todas

las

polipptidos

protenas
de

peso

son

molecular

elevado.
Una protena simple es aqulla que contiene slo aminocidos; una
protena compleja contiene, adems, otras molculas diferentes como
el hemo (de la hemoglobina), vitaminas, lpidos, carbohidratos o
elementos minerales (metaloenzimas).
1.1. Importancia Biomdica.Las protenas desempean una amplia variedad de funciones que
pueden agruparse en dos clases: dinmicas y estructurales. De las
funciones dinmicas, la ms importante es la funcin cataltica. De
hecho, la mayor parte de las reacciones qumicas celulares son
catalizadas por enzimas, casi todas ellas de naturaleza proteica. Otras
funciones

son:

de

(inmunoglobulinas), etc.
1.2. Clasificacin.-

transporte

(hemoglobina),

protectoras

En la actualidad no existe un sistema de clasificacin de las protenas

universalmente aceptado. Durante mucho tiempo se dividieron en
simples y conjugadas. Sin embargo, en todas las protenas, aun las
ms simples, casi siempre estn asociadas otras molculas llamadas
grupo prosttico.
1.2.1.

Clasificacin basada en su solubilidad.-

Un sistema de clasificacin basado en la solubilidad todava est en

uso, en particular en bioqumica clnica. Sin embargo en esta
clasificacin, no se puede hacer una distincin entre albminas y
globulinas nicamente en base a sus solubilidades en agua o en
soluciones salinas. As, se subdividieron en seudoglobulinas (solubles
al agua) y euglobulinas (insolubles en agua exenta de sales).

1.2.2.

Clasificacin basada en la forma.-

Se basa en la forma (relacin entre longitud y amplitud) y en sta se

consideran

las

globulares,

protenas

de

forma

esfrica, solubles en agua,

dentro de las cuales se
encuentran
albmina

la
y

insulina,
globulinas

plasmticas y numerosas
enzimas.

Las protenas fibrosas, son de forma alargada, baja solubilidad en

agua, resistentes a la traccin, dentro de las cuales tenemos la
queratina, miosina, colgeno y fibrina.
1.2.3.

Basada en sus funciones.-

Las protenas se pueden clasificar de acuerdo a sus funciones en

protenas

estructurales,

catalticas

(enzimas),

protectoras (inmunoglobulinas), de transporte, etc.

1.3. ESTRUCTURALES DE UNA PROTENA.-

reguladoras,

1.4. RELACIN ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIN.La actividad biolgica de una protena depende del ordenamiento
tridimensional apropiado de sus grupos funcionales. De este modo,
las protenas slo funcionan cuando estn plegadas en su estructura
original o conformacin nativa. Debido a que las conformaciones
nativas de la mayor parte de las protenas estn estabilizadas slo
por enlaces no covalentes, el plegamiento puede ser alterado por
condiciones como alta temperatura, pH extremo o presencia de
solventes orgnicos que debilitan las interacciones no covalentes.

CAPITULO II
AISLAMIENTO DE PROTEINAS.-

Cuando se trata de materiales biolgicos, se deben evitar condiciones

extremas para aislar protenas y se aconseja el uso de mtodos
fsicos en vez de qumicos para este propsito. En general, se
recomienda el uso de concentraciones altas de protena, baja
temperatura y pH alrededor de la neutralidad, pues de lo contrario, la
protena puede desnaturalizarse.

2. REACCIONES DE DESNATURALIZACIN DE LAS PROTEINAS:

Se conoce como desnaturalizacin a la Perdida por parte de las
protenas de su estructura de orden superior (Secundaria, Terciaria,
cuaternaria), y queda una cadena

polipeptidica reducida a un

polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija. En una

protena cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada solo
tienen en comn la estructura primaria, es decir la secuencia de
aminocidos que la componen, los dems niveles de organizacin
estructural

desaparecen

en

la

estructura

desnaturalizada.

La

desnaturalizacin trae diversas consecuencias como: el cambio en las

propiedades hidrodinmicas es decir el aumento de la viscosidad, a la
vez que disminuye el coeficiente de difusin, por otro lado se produce
una disminucin de su solubilidad

, debido a que los residuos

hidrofbicos del interior aparecen en la superficie, y finalmente se

produce la perdida de las propiedades biolgicas . Una protena

desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria, por

este motivo, en muchos casos el proceso de desnaturalizacin es
reversible, ya que es la estructura primaria la que contiene la
informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de
estructuracin.

Tambin se entiende por desnaturalizacin a la alteracin de una

protena

que

modifique

su

conformacin

nativa

se

denomina

desnaturalizacin; este cambio provoca la consiguiente alteracin o

desaparicin de sus funciones. En una protena se produce la
desnaturalizacin al perder su estructura secundaria, terciaria y
cuaternaria, conservndose
desnaturalizado

los

la primaria (covalente). En el estado

niveles

de

estructuracin

superior

de

la

conformacin nativa se encuentran al azar, es decir la protena

altamente ordenada queda reducida a un polmero estadstico
formado por una cadena de aminocidos. La existencia de enlaces
disulfuro

en

una

protena

aumenta

desnaturalizacin.
2.1. Agentes desnaturalizantes.-

su

resistencia

la

Todos aquellos agentes capaces de romper o alterar los enlaces que

mantienen las estructuras de orden superior de una protena pueden
desnaturalizarla.
Un agente desnaturalizante muy comn es el calor, esto tiene
aplicacin cotidiana en el laboratorio de bioqumica. Otros agentes
fsicos (radiaciones, tensoactividad, altas presiones) o qumicos
(cidos,

lcalis,

urea,

detergentes)

capaces

de

alterar

las

interacciones dbiles pueden llegar a desnaturalizar las protenas. En

protenas cuya estructura tridimensional est determinada por
enlaces

disulfuro,

pueden

ser

desnaturalizadas

por

agentes

reductores como el mercaptoetanol o el ditiotreitol. En ocasiones esta

alteracin es reversible cuando se elimina el agente agresivo. En
otros casos la desnaturalizacin es irreversible. Una consecuencia de
la desnaturalizacin es la prdida drstica de solubilidad. Otras
alteraciones incluyen disminucin de la viscosidad, velocidad de
difusin y facilidad con que cristalizan. Siendo la conformacin de la
molcula

protenica

la

base

principal

de

su

funcin,

al

desnaturalizarse la protena, se altera su actividad fisiolgica. Por

ejemplo, las globulinas plasmticas desnaturalizadas pierden sus
funciones de anticuerpos.
2.2. FACTORES DESNATURALIZANTES:
2.2.1.

El calor:

Afecta principalmente a los enlaces de puente de hidrogeno y

produce una desnaturalizacin de las protenas suele ocurrir de forma
brusca al alcanzar una determinada temperatura.

2.2.2.

El PH:

La unin covalente de los aminocidos para formar

las protenas

hace que los grupos funcionales amino y carboxilo de todos los

aminocidos, excepto el primero y el ltimo, se vean modificados

debido a la formacin del enlace peptdico. Por este motivo, en los

polipptidos, la naturaleza qumica de la cadena lateral de los
aminocidos es la que va a condicionar su solubilidad en agua, su
reaccin

y el tipo de interacciones no covalentes que se pueden

establecer. Las cadenas laterales de los diferentes aminocidos

pueden ser de naturaleza Hidrofobica (Apolar),

polar sin carga, o

pueden presentar carga a determinados valores de PH.

Los aminocidos presentan un grupo amino con carcter bsico
(aceptor de protones) y un grupo carboxlico con carcter acido
(dador de protones). Como a PH fisiolgico

los aminocidos se

encuentran en su forma ion dipolar, en realidad el carcter acido lo

presenta el grupo amino protonado y el carcter bsico el grupo
carboxilo ionizado.
El estado de ionizacin de las cadenas laterales de los aminocidos
(monmeros de las protenas), cambia con el PH. Por este motivo, un
cambio de PH puede alterar las interacciones electrostticas que
participan en el mantenimiento de la estructura de la protena.
2.2.3.

PRESENCIA DE SALES:

La presencia de sales o agentes como el ion guanidino tambin

pueden afectar a las interacciones electrostticas ya que los iones
disueltos

compiten

la

hora

de

establecer

interacciones

electrostticas de este tipo. Uno de los agentes desnaturalizantes que

se utiliza con ms frecuencia es la urea puesto que compite en la
formacin de enlaces de puentes de hidrogeno. Las interacciones
hidrofobicas se vern alteradas por sustancias que puedan establecer
interacciones de la misma naturaleza con los residuos, como lo son
los disolventes apolares y los detergentes.
En algunos casos, si se establecen las condiciones fisiolgicas la
protena recupera su conformacin nativa y su funcin en un proceso
denominado re naturalizacin este hecho demuestra que toda la

conformacin necesaria para que se produzca el plegamiento se

encuentra en la secuencia de aminocidos de la protena.
2.3. ENSAYO PRCTICO.
2.3.1.
COMPUES
TO

Clara de
huevo

DESNATURALIZACIN DE PROTEINAS POR PH EXTREMO.

pH
inici
al

pH
fina
l

OBSERVADO
Hay un desprendimiento de
calor y la desnaturalizacin de
las protenas, donde viro del
color original de clara de huevo
a un color amarillo as como
blanco y la solidificacin de la
misma.

9.38

1.2
2

5.14

1.2
0

La muestra presenta un viraje

de color blanco a una tonalidad
amarilla transparente.

0.9
6

La muestra presenta un viraje

de color blanco a una tonalidad
transparente ligeramente
amarilla.

1.1
0

Hay viraje de Color blanco a

amarillo con precipitado, es
decir hubo desnaturalizacin de
esta.

Gelatina

Casena

IMAGEN

Albumina

6.46

2.3.2.

DESNATURALIZACIN DE PROTEINAS POR CALOR.

COMPUESTO

OBSERVADO

Clara de
huevo

Presenta solidificacin de la muestra,

es decir la protena se desnaturalizo.

IMAGEN

Gelatina

Casena

Albumina

Hay cambio de textura as como el

viraje de color blanco a incoloro.

Se evidencia la desaparicin de la
tonalidad blanca existente antes de la
prueba. (Existi un viraje de Color en
la solucin de uno de tonalidad
blanco a uno de transparente).
No se evidencian cambios fsicos en
la solucin terminada la prueba,
respecto a las caractersticas fsicas
de la solucin antes de la prueba.

2.3.3. DESNATURALIZACIN DE PROTEINAS POR PRECIPITACIN DE

SOLVENTES ORGNICOS

ETANOL
COMPUESTO

Clara de
huevo

Gelatina

Casena

OBSERVADO
Presenta viraje a color blanco con
solidificacin de muestra, es decir
se desnaturalizo.

La muestra vira de una tonalidad

blanca a una incolora, este cambio
fsico
nos
indica
la
desnaturalizacin de la protena.

La muestra vira de una tonalidad

blanca a una incolora, este cambio
fsico
nos
indica
la
desnaturalizacin de la protena.

IMAGEN

Albumina

Se observa tres fases de color:

incoloro, blanco y un blanco con un
tono ms claro respectivamente.

ACETONA

Clara de
huevo

Se presencia un viraje a color

blanco
con
solidificacin
de
muestra, es decir se desnaturalizo.

Gelatina

Se
presencia
un
coloracin
incolora pero con la separacin de
una nube de color blanco en el
centro del tubo.

Casena

Hay presencia de un anillo de

color blanco en el centro del tubo.

Albumina

Se presencia tres fases de color

incoloro, blanco con un tono claro
y blanco respectivamente.

2.3.4. ANALISIS DE RESULTADOS.

2.3.4.1. ANLISIS DE RESULTADOS DE LA DESNATURALIZACIN DE

PROTENAS POR HP EXTREMO.

El estado de ionizacin de las cadenas laterales de los aminocidos

(monmeros de las protenas), cambia con el PH. Por este motivo, un
cambio de PH puede alterar las interacciones electrostticas que
participan en el mantenimiento de la estructura de la protena. Al
agregar el HNO3 a las diferentes protenas, se produce una ruptura del
enlace peptdico (hidrlisis), lo cual genera la formacin del grupo
Amoniaco (NH3), en la parte hidrofobica de los aminocidos. El PH
final, de predominancia acida se debe

a que a PH acido, en los

aminocidos dominan las formas protonadas con carga positiva. El

viraje de color es producto de la reduccin de los aminocidos que
conforman la protena.

2.3.5. DESNATURALIZACIN

POR

PRECIPITACIN

DE

SOLVENTES

ORGNICOS.

La polaridad del disolvente en la solucin proteica

disminuyo

en

presencia de las protenas, Esto genero la disminucin del grado de

hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula
proteica, provocando la desnaturalizacin y

precipitacin de la

protena (estructura primaria).

La mezcla
produce

entre disolventes orgnicos y

la

una solucin proteica

interaccin del disolvente orgnico con el interior

hidrolgico de las protenas lo cual genera la desorganizacin de la

estructura

terciaria,

lo

cual

precipitacin de la protena.

produce

la

desnaturalizacin

2.3.6.
DESNATURALIZACIN
PROTENAS POR CALOR.

POR

DESNATURALIZACIN

DE

Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las

molculas,

lo cual genera una

desorganizacin de

la envoltura

acuosa de las protenas, dicha desorganizacin genera finalmente la

desnaturalizacin de la protenas. Asimismo, un aumento de la
temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la
estructura de la protena, de forma que el interior hidrfobo
interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y
precipitacin de la protena desnaturalizada.

3. REACCIONES DE COLORACION DE LAS PROTEINAS:

Las protenas son uno de los principales componentes de todas
nuestras clulas. Los aminocidos (compuestos orgnicos) son los
ladrillos de construccin de la protenas. Los aminocidos se agrupan
de acuerdo con su comportamiento qumico. La sntesis de las
protenas ocurre mediante la unin entre s de las cadenas de
aminocidos.

Los

distintos

aminocidos

imparten

diferentes

comportamientos qumicos en la estructura de las protenas. Debido

a la presencia de diferentes aminocidos en las uniones peptdicas las
protenas reaccionan con una variedad de compuestos formando
productos coloreados. Existen reacciones de coloracin que son

especficas para aminocidos de esas protenas y son

importantes

tanto para la deteccin como para el dopaje de aminocidos y

protenas. Existen tambin reacciones generales porque sirven para
caracterizar grupos comunes a todas las protenas como grupos
amino o uniones peptdicas (ninhidrina y biuret).

3.1. Anlisis de resultados:

Las pruebas y el reconocimiento en la prctica al ser positivas
indicaban un cambio de color o una reaccin esto se podra dar por la
desnaturalizacin de la protena o lo aminocidos que la componen
dependiendo tambin del reactivo. Mediante las pruebas realizadas
en laboratorio, se logr identificar la presencia de aminocidos; las
protenas estn constituidas por aminocidos, por lo cual estos
mtodos se basan en el reconocimiento de estos, en diferentes
muestras.

PRUEBA

Xantoprote
ica

Biuret

Ninhidri
na

Hopkins
-cole

Ehrlich

Albumina

+
violeta

+ rojo

Gelatina

+
violeta

+ rojo

Urea

+
violeta

amarillo

Fenilalani
na

amarillo

Asparagin
a

amarillo

Glicina

amarillo

Histidina

+
violeta

+ rojo

Agua

amarillo
Triptfan
o

+
naranja

+ rojo

3.2. PRUEBAS Y RESULTADOS.

3.2.1.

PRUEBA XANTOPROTEICA.

Los compuestos que presentan bencenos sustituidos (con grupos

unidos

al anillo bencnico), al reaccionar con el cido ntrico

concentrado forman compuestos nitrados de color amarillo, el cual se

intensifica en medio alcalino.De los resultados obtenidos presentados
en la Tabla 1 las muestras que tuvieron error experimental fueron:
Glicina, Asparagina y Gelatina, puesto que al no tener en su
estructura anillos aromtico, no se debe presentar la coloracin
amarilla.
El aminocido fenilalanina tambin tiene en su estructura un anillo
aromtico pero no est activado, por lo tanto el proceso de nitracin
no se da fcilmente y no se puede percibir
entonces la coloracin amarilla.
Las

muestras

de

Triptfano,

Histidina

Albumina al reaccionar con HNO3 y las gotas

de solucin al 40% de NaOH reaccionaron de
forma correcta y el resultado obtenido fue igual
al terico. El agua no presento tincin alguna
puesto que su composicin no presenta ningn
tipo de aminocido presente estructuralmente.

3.2.2.

PRUEBA BIURET.

Es un mtodo general para la determinacin de protenas o pptidos.

Se basa en la reaccin del sulfato de cobre con compuestos que

tengan dos o ms enlaces peptdicos, en un

medio alcalino. El

producto es un complejo color violeta cuya intensidad de color

depende de la cantidad de enlaces peptdicos presentes.
Los resultados obtenidos, indican que la Albumina, la Gelatina.
Histidina

y la Urea presentan enlaces

peptdicos por lo que se

observ un color violeta, esto confirma lo establecido en la teora.

Las dems muestras en excepcin
con la Asparagina al igual que la
glicina,histidinay triptfano, que al
l no tener enlaces peptdicos sus
resultados

fueron los esperados

(no coloracin violeta). La prueba

con el triptfano no la realizo el
grupo al que le corresponda, por
esta

razn

no

se

obtuvo

un

resultado
3.2.3.

PRUEBA

DE

NINHIDRINA:
Esta

reaccin

importante,

bastante

pues

universalmente
detectar

es

empleada

cualitativamente

es
para
y

cuantitativamente a los aminocidos. Para los aminocidos estas es la

nica reaccin de color, verdaderamente importante. La Ninhidirna es
una agente oxidante de los grupos alfa-amino, liberando amoniaco,
CO2 y el correspondiente aldehdo, as como la forma reducida de la
Ninhidrina. Una coloracin violeta determina positiva la prueba y para
este caso tambin un color Vino tinto la determinara como positiva.
En esta prueba se obtienen los resultados esperados para casi todas
las muestras en excepcin para la Urea, la gelatina y el agua ya que a
diferencia de las dems muestras estas no es un alfa- aminocido Ej.
Glicina, Asparagina, Triptfano, Fenilalanina, Albumina, Histidina y

Alanina

(contienen

alfa-amino),

tampoco contiene alfa(Ej.

Gelatina).

El

ni

aminocidos

resultado

para

la

muestra de Agua confirma que esta no

contiene alfa- aminocidos.

3.2.4.

PRUEBA HOPKINS COLE:

Los derivados indol dan productos de

condensacin cuando se tratan con
aldehdos aromticos en presencia de
cido sulfrico o clorhdrico. El aminocido triptfano

contiene un

grupo indol y por eso la reaccin es especfica para triptfano. El

resultado positivo de esta prueba se puede evidenciar con el anillo
indolico que degrada el aminocido triptfano a Indol produciendo
compuestos de color rojizo-anaranjado.
Los resultados obtenidos para esta prueba resultado son correctos ya
que en ninguna muestra a

excepcin del

Triptfano hay presencia de este, todas las

dems

muestras

estn

libres

en

su

estructura de este aminocido (Triptfano)

por

ende

dio

un

resultado

(rojizo-

anaranjado).
3.2.5.

PRUEBA DE EHRLICH:

La presencia de anillos aromticos fenlicos

o nitrogenados en la cadena lateral de los
aminocidos se puede identificar mediante
la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de
Sodio por formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas
permitiendo as detectar la presencia de Histidina libres o formando

pptidos y protenas. El resultado positivo de esta prueba se puede

evidenciar con un color rojo o Vino tinto.
Los resultados se interpretan as: las muestras de Urea, Agua, Glicina,
y

Fenilalanina

(contiene

anillo

aromtico

bencnico)

tuvieron

resultados correctos (negativos) ya que ninguna de estas muestras

contiene anillos aromticos fenlicos y/o nitrogenados.
Las

muestra

albumina

de

Gelatina

tambin

arrojaron

un

resultado correcto (presento color

rojo o Vino tinto) ya que este si
contiene

anillos

fenlicos

y/o

nitrogenados. Por el contrario de

las muestras de Histidina (contiene
anillo

aromtico

nitrogenado),

Triptfano

(contiene

aromtico

nitrogenado)

obtuvieron
Finalmente
Asparagina

resultados
la

anillo
se

positivos.

muestra

tambin

arrojo

de
un

resultado negativo, ya que presento una coloracin amarillenta

cuando verdaderamente al este aminocido no tener ningn anillo
aromtico fenlicos y/o nitrogenado en su estructura no tena por qu
presentar dicho cambio de color.

4. REACCIONES DE PRECIPITACIN DE LAS PROTEINAS.

La precipitacin de las protenas es uno de los procedimientos ms
empleados en los procesos metodolgicos de la bioqumica moderna.
De ah que sea necesario tener claros los principios en que se basan
los diversos tipos de precipitaciones.
Por lo general, la solubilidad de las protenas es variable. La mayora
de las protenas globulares es soluble en agua, sea total o
coloidalmente soluble, cuando estn en su estado nativo. Cuando
estn desnaturalizadas las protenas pierden su solubilidad. Cuando
se dice que una protena es coloidalmente soluble, se quiere indicar, o
bien que las molculas proteicas son de tamao tan grande, que
incluso, dispersas en solucin tienen el tamao y superficie que
caracteriza las partculas coloidales, o que hay alguna fuerza que las
hace formar agregados de tamao coloidal.

De las protenas globulares, las albminas son solubles en agua pura,

pero tambin solubles en soluciones salinas. Las globulinas son

insolubles en agua pura, pero se disuelven en soluciones neutras de

sales como el cloruro de sodio, y para permanecer en solucin las
globulinas necesitan una cierta concentracin de sal, precipitando
cuando el contenido de sal disminuye. Las protenas coaguladas son
insolubles en agua, soluciones salinas, cidos y lcalis diluidos. Se
disuelven en los cidos minerales y lcalis fuertes, los que las
hidrolizan, desdoblndolas a sus correspondientes aminocidos.
El punto clave para entender la precipitacin de las protenas es que
la

protena

es

una

molcula

cargada

tanto

positiva

como

negativamente, y que por consiguiente, pueden reaccionar se entre s

y con iones de cargas opuestas o con el agua. Podemos, por tanto,
sealar tres tipos de interpretaciones de una protena en solucin.
A) Protena- protena
B) Protena- agua
C) Protena- iones pequeos.
Si la interpretacin protena- protena es grande y la interpretacin
protena- agua es pequea, la protena tender a ser insoluble. Si la
situacin es la contraria, o sea que predomina las interacciones
protena- agua, entonces las protenas tienden a ser solubles. Por
consiguiente,

cualquier

cosa

que

aumente

favorezca

la

interpretacin protena- protena o disminuya la interaccin protenaagua, disminuir la solubilidad de la protena, favoreciendo su
precipitacin y cualquier cosa que disminuya la interaccin protenaprotena y aumente la protena- agua, aumentar la solubilidad de la
protena.

4.1. PRECIPITACIN POR SOLVENTES ORGNICOS.

La adicin de solventes orgnicos neutros miscibles con el agua,
tales como: metanol, etanol o acetona, disminuye la solubilidad en
agua de la mayor parte de las protenas globulares de tal manera que

precipitan de la solucin. La
solubilidad de una protena a un
pH y fuerza inica determinados
est en funcin de la constante
dielctrica del medio.
El

agua

dielctrica

tiene

constante

relativamente

alta

(=80 a 20 C) por lo cual en solucin acuosa disminuye la

interaccin entre las molculas proteicas (debido a sus grupos
cargados) mientras aumenta la interaccin entre las protenas y el
agua, esto favorece la solubilidad de las protenas. Los solventes
orgnicos tales como el metanol, etanol, acetona, tienen constantes
dielctricos bajas (32, 25 y 19 respectivamente a 20 C) de modo que
al agregarlos a una solucin acuosa de protenas baja la constante
dielctrica del medio, lo que favorece la interaccin de los grupos con
carga elctrica de la protenas y por lo tanto de su precipitacin. La
precipitacin proteica por los solventes no solo se explica en base a la
constante dielctrica, tambin, hay que considerar la deshidratacin
de las protenas. Las molculas del solvente no acuoso forman
hidratos compitiendo por el agua con las molculas proteicas
producindose la precipitacin por deshidratacin de las protenas.
Los solventes pueden llegar a distorsionar la estructura de las
protenas,

posiblemente

por

accin

nivel

de

los

enlaces

hidrofbicos, determinando la desnaturalizacin de las protenas. Este

fenmeno disminuye a bajas temperaturas ya que el calor por s
mismo es un agente desnaturalizante.

4.2. PRECIPITACIN DE PROTENAS POR FOMACION DE SALES

INSOLUBLE.
Las protenas precipitan por la accin de ciertos cidos como el cido
Tricloroactico, cido tnqstico, cido molbdico y otros; tambin las
protenas pueden precipitar por la accin de ciertos iones metales

pesados como Hg, Zn, Cd, Cu, y Pb. Todos estos agentes hacen
precipitar las protenas por que forman con ellas sales insolubles. El
mecanismo de accin de estos agentes es la siguiente: los
precipitantes cidos forman sales insolubles con las formas catinicas
(+) de la protena, siendo necesario efectuar el proceso de un pH ms
cido que el punto isoelctrico. A su vez los metales 4 pesados
forman sales insolubles con las formas aninicas (-) de la protena
necesitndose entonces un pH ms alcalino que el punto isoelctrico.
4.2.1.

REACCION CON LOS METALES PESADOS.-

En un tubo de ensayo se agrega albmina y luego se le echa AgNO3 a

otro tubo de ensayo albmina y CuSO4 de esta forma observa.

b) Con el Nitrato de Plata,

AgNO3 - ALBUMINA.

1.3. PRECIPITACION

POR

SAL.Cuando se aade sal a una

solucionde proteinas ocurre
un incremento en la solubilidad y esto se conocecon elnombre de
solubilizacion por salado. Este inctremento inicial en la solubilidad se

dede ala estabilizacion de la proteina efectuada por un descenso en el

coeficiente de actividades de los grupos ionegenicos. A medida que
se aumenta la fuerza ionica, que se conoce como insolubilizacion por
salado.

Durante

la

insolubulizacion

por

salado,

ocurre

probabablemente una competencia entre la proteina y la solucion

salina por las moleculas de agua disponibles para su solvatacion, y
entonces las interacciones proteina proteina se hacen mas
importantes.
La relacion entre la solubilidad (S) y la fuerza ionica (l) en la region de
la insolubilizacion por salado
es:
Donde es el logaritmo de la
solubilidad hipotetica cuando I
= 0 y Ks es el coeficiente de
insolubilizacion. Un pequeo
cambio en I puede, por lo
tanto

causar

un

cambio

considerable en S. El valor Ks
es semejante para la mayoria
de las proteinas en una solucion salina dada mientras que es
depenciente de cada proteina en particular. Por lo tanto, las cuatro
proteinas de una mexcla, pueden ser separadas recogiendo los
precipitados que se forman en diferentes intervalos de fuerza ionica.
En lapractica no ocurre la separacion completa de las proteinas
puesto que hay siempre alguna superposicion de las curvas de
solubilidad de las proteinas en una mexcla. Son embargo, la
precipitacion por sal constituye un metodo muy valioso cuando se usa
conjuntamente con otros metodos.
El sulfato de amonio tienen una solubilizacion muy alta y es la sal que
se usa mas frecuente mente para el fraccionamiento de proteinas.
Reacciones de precipitacin: que a su vez, pueden subdividirse en dos
grupos: Precipitacin de protenas sin desnaturalizacin, por ejemplo

utilizando sulfato de amonio ((NH4)2SO4), cloruro de amonio (NH4Cl)

o

sulfato

de

sodio

(Na2SO4)

Precipitacin

de

protenas

con

desnaturalizacin que utilizan sales de metales pesados (sales de

plomo, de cobre, de mercurio y otras), o la temperatura mayor a
80C, cidos inorgnicos y orgnicos

CONCLUSION